产毒真菌的检测方法
黄曲霉毒素国标检测方法
黄曲霉毒素国标检测方法
黄曲霉毒素（AF）是一种由黄曲霉属真菌产生的有毒代谢产物。
它们被广泛分布在食品、饲料和环境中，可能对人类和动物健康造成危害。
因此，对黄曲霉毒素的快速、准确检测成为了保障公众健康的关键。
国家标准委员会制定了黄曲霉毒素国标检测方法，以保证各个检验机构的检测质量和结果一致性。
1. 检测样品的制备
样品制备过程是检测过程的关键步骤。
样品必须被精确称量和混合，以确保最终检测结果的准确性和可重复性。
样品预处理的方法通常包括研磨、切碎、混合和抽样等步骤，具体方法取决于样品的特性，如水分含量、粘度和粒度分布等。
2. 样品提取
样品提取过程中，黄曲霉毒素从样品中被提取到适当的溶剂中。
提取的选择取决于样品的特性和黄曲霉毒素的特性。
一些常见的提取方法包括回收萃取、固相萃取和羧甲基纤维素柱萃取等。
3. 分离和净化
为了获得最终准确的结果，必须分离并净化提取的样品。
对于黄曲霉毒素的分离和纯化方法主要有和阳离子交换树脂和固相萃取等方法。
检测黄曲霉毒素的方法主要包括色谱检测法、酶联免疫检测法、毛细管电泳等方法。
其中酶联免疫检测法已成为广泛使用的检测方法之一。
该方法以特异性抗体为基础，利用抗原抗体相互作用，快速、敏感地检测黄曲霉毒素。
总的来说，黄曲霉毒素国标检测方法是一系列高效准确的方法，可以帮助检验机构检测食品或饲料中的黄曲霉毒素，保证公众健康。
2025版药典真菌毒素测定通用方法
2025版药典真菌毒素测定通用方法
根据2025版药典，以下是真菌毒素测定的通用方法：
1. 制备样品：将待测样品(例如食品、农产品或药品)制成合适体积的溶液。
根据所分析的真菌毒素的可溶性，选择合适的溶剂。
2. 固相萃取：将样品溶液经过固相萃取柱进行富集和纯化。
根据所要测定的真菌毒素的特性，选择适当的固相材料。
3. 色谱条件优化：在色谱条件下，包括色谱柱选择、流动相组成等方面进行优化，以达到最佳分离和分析效果。
常用的色谱方法有高效液相色谱(HPLC)、气相色谱(GC)等。
4. 检测仪器：使用合适的检测仪器进行真菌毒素的检测。
常用的仪器有质谱仪、紫外-可见光谱仪、荧光光谱仪等。
5. 标准曲线建立：根据已知浓度的真菌毒素标准品，建立标准曲线。
通过检测待测样品的峰面积或峰高，然后回归到标准曲线，计算真菌毒素的浓度。
6. 数据处理和结果分析：根据测定结果进行数据处理，计算出真菌毒素的含量，并进行结果的分析和解释。
最后，需要根据实际情况进行方法的优化和验证，以确保分析结果的准确性和可靠性。
粮食中常见的真菌毒素及其限量标准、检测方法
DOI：10.16675/14-1065/f.2019.06.075粮食中常见的真菌毒素及其限量标准、检测方法□王镱睿摘要：真菌毒素是真菌的有毒代谢产物，为确保国家粮食安全，不能忽视真菌毒素对人类健康、经济作物等造成的不利影响。
系统梳理了粮食中常见的真菌毒素种类及其限量标准、现行有效的检测标准，为相关检测机构提供科学依据。
关键词：真菌毒素；粮食；限量标准；检测方法文章编号：1004-7026（2019）06-0119-03中国图书分类号：TS210文献标志码：A（太原市粮食质量监督检测站山西太原030000）1真菌毒素真菌毒素（Mycotoxin）是指产毒真菌在适宜的环境条件下代谢产生的有毒物质[1]。
真菌毒素能够污染粮食谷物、水果蔬菜等植源性农产品，从而通过食物链的富集作用，对人类和其他经济动物产生致癌、致畸等不良后果，对人类健康和禽畜养殖的生产安全产生了严重威胁。
真菌毒素被世界卫生组织(WHO)和联合国粮农组织(FAO)视为食源性疾病的祸首。
据FAO调查显示，全球每年约有25％的粮食会受到真菌毒素的污染，约2％的农作物受到严重污染而失去食用和使用价值，造成经济损失。
我国是真菌毒素污染最严重的国家之一[2-3]。
为了避免因为不了解真菌毒素的危害，而忽视粮食中的真菌毒素，本文系统梳理粮食中常见的真菌毒素种类，了解真菌毒素的限量标准和我国现行有效的定量检测方法，为相关检验检测机构掌握检测方法提供帮助。
2粮食中常见的真菌毒素及其限量标准、检测方法我国重点关注毒性强、高频污染的真菌毒素，在粮食领域主要包括黄曲霉毒素（主要是AFB1）、玉米赤酶烯酮（ZEN）、脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）等。
2.1黄曲霉毒素黄曲霉毒素(Aflatoxins)可以由曲霉菌黄曲霉、寄生曲霉、集峰曲霉和伪溜曲霉4种产生，其基本结构是二呋喃环和香豆素，可分为黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2等。
黄曲霉毒素毒性极强，会导致人和动物出现肝中毒、肠胃肾等脏器出血，甚至使人类和动物罹患肝癌，引起死亡。
微生物毒素的分析和检测技术
微生物毒素的分析和检测技术微生物毒素是由细菌、真菌或其他微生物产生的一种具有毒性的化学物质。
它们具有广泛的应用，可以用于制药、食品和化工等领域。
但是，微生物毒素也可能对人们的健康带来危害。
因此，正确的微生物毒素的分析和检测技术对于保障公共卫生至关重要。
微生物毒素分析的主要方法包括生物测试法、化学检测法和物理检测法。
生物测试法是一种常见的微生物毒素检测方法，它基于向动物饲料中添加微生物毒素并观察是否发生毒性反应来进行检测。
这种方法的优点在于检测结果准确，能够检测出微量的微生物毒素，但是缺点是需要大量的时间和金钱，而且动物也需要一定的处理和监控，因此，在现代化的工业化检测中，生物测试法并不是默认的首选。
化学检测法是另一种常见的微生物毒素检测方法，这种方法涉及到对微生物毒素的特征化学组成的分析。
这种方法常见的应用包括高效液相色谱法、质谱法和光谱法等。
在这些方法中，样品通常需要在一定时间内进行样品制备。
化学检测法的优点在于样品的制备和处理相对快速，而且能够实现较大规模的检测，不需要动物等生物实验。
物理检测法也是一种微生物毒素分析和检测的方法。
这种方法的主要缺点在于它需要对样品进行物理加工，以便检测出特定的微生物毒素。
因此，如果样品未得到适当的处理，该方法的准确度和可靠性都可能大打折扣。
在实际应用中，选择针对特定微生物毒素的特定检测方法，通常会通过分析样品中的化学组成来寻找可能存在的毒素。
一些公认权威的方法可用于检测目标微生物毒素的存在，这可能是基于与已知化学结构（例如四环素类合成物），或者特定细菌具有的毒素。
例如，拉曼光谱法是一种通过使用光学技术来检测微生物毒素的方法。
这种方法是非侵入性和非破坏性的，因此在检测环节对样品的影响非常小。
对于样品的处理准备也非常简单。
芗草羧琥珀酸酯盐酸盐（PAT）和四环素（TET）中毒株产生的毒素可以通过拉曼光谱检测 arotene环的特定振动模式而得到鉴定。
在实际应用中，选择适当的检测技术对于检测微生物毒素的存在非常关键。
腐霉利国标检测方法
腐霉利国标检测方法腐霉利是一种严重影响粮食质量和食品安全的真菌产毒物，对人体健康有潜在危害。
因此，发展快速、准确、灵敏的腐霉利国标检测方法对于粮食和食品的质量控制尤为重要。
下面将介绍几种常用的腐霉利国标检测方法。
1.高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是目前最常用的腐霉利检测方法之一、该方法基于萃取-净化-测定腐霉利的原理，通过高效液相色谱仪的检测，可以实现对样品中腐霉利含量的测定。
该方法具有灵敏度高、准确性好、适用范围广等优点，能够检测多种不同类型的腐霉利。
2.气相色谱法（GC）气相色谱法是另一种常用的腐霉利检测方法。
该方法利用样品中腐霉利的特性，通过气相色谱仪的检测，可以对腐霉利进行定性和定量分析。
该方法具有分离度高、灵敏度好、分析速度快等优点，能够检测到非常低浓度的腐霉利。
3.酶联免疫吸附测定法（ELISA）酶联免疫吸附测定法是一种常用的腐霉利检测方法。
该方法是在试剂盒的指导下进行的，先将目标物免疫原固定在试剂盒中，再加入待测样品，样品中的腐霉利会与免疫原发生特异性结合反应，然后通过酶标记进行检测。
该方法具有快速、简便、灵敏度高等优点，适用于快速筛查和定量分析。
4.质谱法（MS）质谱法是一种高灵敏度的腐霉利检测方法。
该方法是先将样品分离，然后通过质谱仪的测定，可以准确测定样品中腐霉利的含量。
质谱法具有高灵敏度、高分辨率、可定量等优点，但同时也需要专业的操作和设备，并且需要对样品进行复杂的前处理。
以上是一些常用的腐霉利国标检测方法，每种方法都有自身的优势和适用范围。
在实际应用中，可以根据需求和实际情况选择合适的检测方法，以确保粮食和食品的质量和安全。
同时，还需要注意合理采样和样品处理，严格按照相应的操作规范进行，以确保检测结果的准确性和可靠性。
毒蘑菇鉴别方法
毒蘑菇鉴别方法引言蘑菇是一种广泛分布的真菌，具有丰富的营养价值和独特的风味，因此深受人们喜爱。
然而，有些蘑菇含有毒素，如果误食可能会导致中毒甚至危及生命。
了解和掌握毒蘑菇的鉴别方法对于人们的健康至关重要。
本文将介绍一些常用的毒蘑菇鉴别方法。
1. 外观特征鉴别外观特征是最常用也是最直观的鉴别方法之一。
以下是一些常见的外观特征：•菌盖形状：不同种类的蘑菇具有不同形状的菌盖，如伞状、球状、杯状等。
•菌盖颜色：毒蘑菇通常具有鲜艳而不寻常的颜色，如红色、紫色、橙色等。
•菌柄形态：毒蘑菇的菌柄可能会呈现扭曲、粗壮或被环带包围等异常形态。
•菌肉颜色：毒蘑菇的菌肉通常会呈现不寻常的颜色，如蓝色、绿色等。
根据外观特征进行初步鉴别时，需要参考专业图鉴和文献，并与已知的安全蘑菇进行比较。
2. 毒性试验毒性试验是一种常用的鉴别方法，可以通过观察实验结果来判断蘑菇是否具有毒性。
然而，这种方法存在一定的风险，因为直接接触或食用有毒蘑菇可能会导致中毒。
在进行毒性试验时必须采取严格的安全措施，并在专业人士的指导下进行。
常见的毒性试验包括：•动物试验：将有毒蘑菇喂养给小白鼠等实验动物，观察其反应和生理指标变化。
•细胞培养试验：将有毒蘑菇提取物加入细胞培养基中，观察细胞生长情况和细胞死亡率等。
•化学试剂测试：使用化学试剂对有毒蘑菇进行检测，以检测是否存在特定的毒素。
3. 化学成分分析化学成分分析是一种准确鉴别蘑菇毒性的方法，可以通过检测和分析蘑菇中的化学成分来确定其是否具有毒性。
常用的化学成分分析方法包括质谱法、核磁共振法等。
化学成分分析需要专业的实验设备和技术，并且对样本的处理和提取也要非常谨慎。
这种方法通常由专业机构或实验室进行。
4. DNA鉴定DNA鉴定是一种高度准确的鉴别方法，通过比较蘑菇样本中的DNA序列与已知蘑菇种类的DNA序列进行匹配，可以确定其种类和是否具有毒性。
DNA鉴定需要采集并提取蘑菇样本中的DNA，并通过PCR扩增和测序等技术进行分析。
常见产毒霉菌的形态学鉴定
二、各属真菌的形态特征及可能产生的真菌毒素
• 1.3 杂色曲霉 呈辐射形,直径(25~)75~125μm;分生孢梗茎直接生自基质 者(45~)150~300(~500)μm×4~8μm,生自气生菌丝者大都 很短,无色或稍带黄色,壁较厚,光滑;顶囊半球形、稍长形或 稍呈椭圆形,直径9~20μm,约3/4的表面可育,小顶囊仅分生 孢梗茎顶部稍加膨大而不明显;产孢结构双层:梗基一般 5~8μm×2~3μm,瓶梗6~8μm×1.5~2.5μm;分生孢子球形 或近球形,绿色,直径(2~)2.5~3.5(~4)μm,壁粗糙,具小刺;壳 细胞球形或近球形,直径11μm~20μm,大量形成时聚成淡黄 色的团块,见图4。杂色曲霉的某些菌株可产生杂色曲霉素。常见产毒霉菌的ຫໍສະໝຸດ 态学鉴定2017年6月2日
一、常见产毒霉菌的形态学鉴定检验程序 检验程序
图1 常见产毒霉菌的形态学鉴定检验程 序
二、各属真菌的形态特征及可能产生的真菌毒素
1、曲霉属 本属的产毒真菌主要包括黄曲霉、寄生曲霉、杂色曲霉、构 巢曲霉、赭曲霉、黑曲霉、炭黑曲霉和棒曲霉等。这些真菌可 能产生黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、伏马菌素、展青霉素等次生 代谢产物。曲霉属的菌丝体无色透明或呈明亮的颜色 ,但不呈 暗污色 ;可育的分生孢梗茎以大体垂直的方向从特化的厚壁的 足细胞生出 ,光滑或粗糙 ,通常无横隔 ;顶端膨大形成顶囊 ,具不 同形状 ,从其表面形成瓶梗,或先产生梗基 ,再从梗基上形成瓶 梗 ,最后由瓶梗产生分生孢子。分生孢子单胞 ,具不同形状和各 种颜色 ,光滑或具纹饰 ,连接成不分枝的链。由顶囊到分生孢子 链构成不同形状的分生孢子头 ,显现不同颜色。有的种可形成 厚壁的壳细胞 ,形状因种而异 ;有的种则可形成菌核或类菌核结 构 ;还有的种产生有性阶段 ,形成闭囊壳 ,内含子囊和子囊孢子 , 子囊孢子大多透明或具不同颜色、形状和纹饰。
食品中真菌毒素的检测与分析方法研究
食品中真菌毒素的检测与分析方法研究随着人们对食品安全的关注不断增加，食品中的真菌毒素成为了一个备受关注的问题。
真菌毒素是由霉菌等真菌生产的有毒化合物，存在于许多食品中，如谷物、坚果、蔬菜和肉类等。
这些毒素对人体健康造成严重威胁，可以引发食物中毒，损害肝脏、肾脏和神经系统等。
因此，研究食品中真菌毒素的检测与分析方法十分重要。
食品中真菌毒素的检测与分析方法有许多种，其中最常用的包括基于色谱质谱联用技术的方法、免疫分析法和生物传感器等。
基于色谱质谱联用技术的方法是一种常见且有效的真菌毒素检测方法。
该方法利用气相色谱仪和质谱仪联用，通过分离和检测食品中真菌毒素的含量。
这种方法具有高灵敏度和高特异性的优点，能够同时检测多种真菌毒素。
但是，这种方法需要昂贵的设备和高技术水平的操作人员，成本较高，不适用于大规模的食品检测。
免疫分析法是另一种常用的真菌毒素检测方法。
该方法利用抗体与检测物之间的特异性结合，通过测定结合物的含量来判断食品中真菌毒素的存在。
免疫分析法具有操作简便、成本较低的特点，适用于大规模的食品检测。
目前，已经开发出许多基于免疫分析法的商业试剂盒，可以在实验室和现场进行真菌毒素的快速检测。
然而，免疫分析法也存在一些局限性，如特异性较低、可能出现假阳性或假阴性结果等。
生物传感器是一种新兴的真菌毒素检测方法。
生物传感器利用生物分子与检测物之间的特异性结合，通过测定检测物与传感器之间的信号变化来检测真菌毒素的存在。
这种方法具有快速、便携、实时监测的优点，并且可以在食品生产现场进行检测。
目前，已经研发出许多基于生物传感器的真菌毒素检测方法，如基于DNA、RNA、抗体和酶等的生物传感器。
这些生物传感器在真菌毒素的检测方面取得了一定的研究进展，但还需要进一步的优化和应用。
除了上述方法外，还有一些新的技术正在被研究用于食品中真菌毒素的检测与分析，如纳米材料和微流控技术等。
这些新技术具有高灵敏度、高特异性和低成本的优点，有望成为未来真菌毒素检测的重要方法。
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产毒真菌的检测方法
产毒真菌大部分属于曲霉菌、青霉菌属和镰刀菌属中的一些种，这些霉菌在自然界分布广泛，对储粮、动物饲料和食品侵染的机会较多，通过检测这些霉菌和毒素反映食品的安全性。
1、材料和试剂
（1）、器材：温箱（25—28℃）、目镜测微尺、物镜测微尺、显微镜、超净工作台、放大镜、三角瓶、试管、平皿、酒精灯、载物玻片、盖玻片等。
（2）、培养基和试剂：察氏培养基、马铃薯一葡萄糖琼脂培养基、马铃薯琼脂培养基、玉米粉琼脂培养基、灭菌蒸馏水、乙醇。
2、方法
（1）、采样采取有代表性的样品250—500g，尽快检验。
（2）、表面除杂菌如为粮粒样品，取样品10—20，放入灭菌的150ml三角瓶中，无菌条件下加入无菌水超过样面1—2cm左右，塞好塞子充分振摇1—2min；将水倒净后，再加水振荡，反复洗涤10次，弃去水后。
将粮粒倒于无菌平皿中备用；原粮样品应先用75%酒精浸泡1—2min，脱去粮粒表面蜡质，倾去酒精后，再用上法洗涤，备用。
（3）、接种与培养：用无菌镊子将已处理好的粮粒胚部向下，均匀地插种在高渗察氏平板上（粮粒的一部分插入培养基中）、，小粒样品如大米接种10粒/皿，大粒的样品如玉米、大豆等接种5粒/皿，每份样品须接种100粒。
将种有样品的平皿置25—28℃孵箱培养5—7d，培养后期应每天观察菌落生长情况，以免生长较快的霉菌将其他的菌覆盖，影响观察及检验结果。
（4）、计数：记录100粒粮食中长霉菌的数量，同时记录每一粒所生长的霉菌数，计算霉菌侵染的粒数和菌落生长的总数。
在计数时，只计数与粮粒相连接的菌落。
（5）、镜检与初分离：用接种钩在平皿上钩取一小块稍带少许培养基的培养物，放在已滴加1—2滴乳酸苯酚液的载玻片上，再用两支接种钩轻轻地将培养物分开，然后盖上盖玻片，先在低倍镜下找到培养物。
再将显微镜的聚光器位置降低，光圈调小，转至高倍镜下观察。
如为曲霉属可见典型的分生孢子头；青霉属的真菌镜下可见有鉴别意义的帚状枝；而镰刀菌属可见镰刀状的大分生孢子等。
将它们分别转种于相应的鉴别培养基平板和斜面，25—28℃孵箱培养5
中心以化工行业技术需求和科技进步为导向，以资源整合、技术共享为基础，分析测试、技术咨询为载体，致力于搭建产研结合的桥梁。
以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推动化工行业的发展。
—14d。
（6）、常见产毒霉菌鉴定：霉菌的鉴定主要依靠形态特征，包括菌落特征和镜下特征。
需观察的镜下特征包括霉菌的菌丝和孢子的形态和特征、孢子的排列等，并详细记录。
3、实验结果
常见真菌菌落特征如下：
（1）、菌落生长的速度：用培养一定天数的菌落直径大小来表示霉菌生长的速度，也可用局限生长表示生长速度慢，蔓延生长表示生长速度快。
（2）、菌落的颜色：霉菌菌落的颜色应包括菌落表面的颜色、菌落背面的颜色、菌落周围培养基的颜色，以及霉菌在不同生长阶段的颜色变化。
（3）、菌落的质地：根据菌丝的长短、疏密以及孢子的有无和多少，菌落的质地可为绒状、絮状、绳状和束状。
（4）、菌落的表面：疏松或致密，平坦、凹陷或隆起，有无皱褶，有无放射状或同心环状的沟纹，边缘是否整齐等。
（5）、渗出物：有的菌种常常在菌落表面出现带颜色的似液体物即为渗出物，记录其色调和分泌的量。
（6）、气味：是否出现除霉味以外的其他特殊的气味。
（7）、菌丝：由孢子在环境适合情况下长出的芽管延长而成，可长出许多分枝，形成交织成团状的菌丝体。
在显微镜下为或粗或细、有隔或无隔的、具分枝的结构。
有的皮肤感染的真菌会形成螺旋状、球拍状、结节状、鹿角状及梳状等具鉴别意义的特殊菌丝。
但粮食中真菌的菌丝一般无鉴别意义。
（8）、孢子：是真菌的繁殖器官，一条菌丝上可长出多个孢子，当环境条件适合时，孢子又发芽发育成菌丝。
根据产生孢子的方式不同，分为有性孢子和无性孢子两类。
有性孢子有接合孢子、卵孢子、担孢子和子囊孢子；无性孢子有分生孢子、孢子囊孢子、叶状孢子（包括芽生孢子、厚膜孢子和关节孢子）、。
在产毒霉菌鉴定中后者更有意义。
中心以化工行业技术需求和科技进步为导向，以资源整合、技术共享为基础，分析测试、技术咨询为载体，致力于搭建产研结合的桥梁。
以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推动化工行业的发展。