金黄色葡萄球菌检验PPT
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实验十二金黄色葡萄球菌(共40张PPT)
4
公式二
A1B1/C1=155×3÷5=93 A2B2/C2=17×4÷5=14
T=(93+14)/1.1d=127÷1.1÷0.1=970
结果报告
单位:cfu/g或cfu/mL 如T值为0，报告 ＜1× d cfu/mL
（g）。
检样
检样25g(mL)+ 225ml灭菌生理盐水，均质。
取新鲜配置兔血浆 0.
长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比 3 mL，振荡摇匀，置 36 ±1 ℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积
大于原体积的一半，被判定为阳性结果。
典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙 并干燥。
典型菌落计数和确认
品匀液接种到10%NaCl 胰蛋白胨大豆肉汤管，每个稀释度接种3管，将上述接种物36℃±1℃培养，45h～48h。
平板和血平板， 血平板 36 ℃±1 ℃培养 18 h A2B2/C2=17×4÷5=14
Baird-Parker平板
～24 h。Baird-Parker平板 36 ℃±1 ℃培养 18 Baird-Parker平板，血平板
B-P平板18h~24h或45h~48h 也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。 用于做血浆凝固酶的菌落数
将上述培养物， 分别划线接种到 Baird-Parker 取新鲜配置兔血浆 0.
根据对样品污染状况的估计，选择3个适宜稀释度 的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1mL样
3.9 革兰氏染色液：见附录 A中 。 3.10 无菌生理盐水：见附录 A中 。
四、实验内容及操作
金黄色葡萄球菌定性检验程序见图
公式二
A1B1/C1=155×3÷5=93 A2B2/C2=17×4÷5=14
T=(93+14)/1.1d=127÷1.1÷0.1=970
结果报告
单位:cfu/g或cfu/mL 如T值为0，报告 ＜1× d cfu/mL
（g）。
检样
检样25g(mL)+ 225ml灭菌生理盐水，均质。
取新鲜配置兔血浆 0.
长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比 3 mL，振荡摇匀，置 36 ±1 ℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积
大于原体积的一半，被判定为阳性结果。
典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙 并干燥。
典型菌落计数和确认
品匀液接种到10%NaCl 胰蛋白胨大豆肉汤管，每个稀释度接种3管，将上述接种物36℃±1℃培养，45h～48h。
平板和血平板， 血平板 36 ℃±1 ℃培养 18 h A2B2/C2=17×4÷5=14
Baird-Parker平板
～24 h。Baird-Parker平板 36 ℃±1 ℃培养 18 Baird-Parker平板，血平板
B-P平板18h~24h或45h~48h 也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。 用于做血浆凝固酶的菌落数
将上述培养物， 分别划线接种到 Baird-Parker 取新鲜配置兔血浆 0.
根据对样品污染状况的估计，选择3个适宜稀释度 的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1mL样
3.9 革兰氏染色液：见附录 A中 。 3.10 无菌生理盐水：见附录 A中 。
四、实验内容及操作
金黄色葡萄球菌定性检验程序见图
微生物-金黄色葡萄球菌ppt课件
增菌培养方法
Baird-parker（贝尔德- 帕克） 0.3ml、0.3ml、0.4ml
36± 1℃ 24hr
血平板
36± 1℃ 24hr
涂片染色
观察溶血
7．5％氯化钠肉汤或 胰酪胨大豆肉汤 36± 1℃ 24hr
血平板 ，Baird-parker
血浆凝固酶试验
报告 ;.
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
方法一：试管法 吸取1:4新鲜兔血浆0.5mL，放入小试管中，再加入培养24h的金黄色葡萄球肉浸液
肉汤培养物0.5mL，振荡摇匀，放36±1℃恒温箱或水浴内，每半小时观察一次，观察 6h，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块者，被认为阳性结果。
;.
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
二、检验程序与操作方法 根据中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准： 《食 品 卫 生 微 生 物 学 检 验》 GB 4789.10-94
金黄色葡萄球菌检验
;.
食品安全检验技术（微生物部分检）样 金色葡萄球菌检验
25g(ml)+225ml灭菌生理盐水
国标：金黄色葡萄 球菌检验程序
直接计数方法
葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的疾病，可引发不同程度的急性胃 肠炎症状，恶心、呕吐最为突出而且普遍，腹痛、腹泻次之。
当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等， 在温度条件适宜时，经8-10小时即可相当数量的肠毒素。
;.
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
试管法
;.
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
阴性反应
阳性反应
项目四 金黄色葡萄球菌检测-革兰氏染色ppt课件
阴性反应
阳性反应
不凝固
少量、零 散凝固
明显的块 状凝固
巨大块 凝固
完全凝固， 倒置不流动
项目四 金黄色葡萄球菌检验 革兰氏染色
一、革兰氏染色步骤 涂片
热固定
初染
媒染
脱色
复染
革兰氏染色阴性
革兰氏染色阳性
细菌涂片
乙醇(或丙酮) 脱色
草酸铵结晶紫初 染
卢哥氏碘液媒 染
番红复染 番红复染
菌体呈红色者为G
－
菌体仍呈深紫色者 为G+
二、革兰氏染色原理 G＋菌细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障 ，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留 结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。 Gˉ菌肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结 构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结 晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。
77阳性反应阳性反应阴性反应阴性反应少量少量零散凝零散凝明显的明显的块状凝块状凝巨大巨大完全凝固完全凝固倒置不流倒置不流动动88项目四项目四金黄色葡萄球菌检验金黄色葡萄球菌检验革兰氏染色革兰氏染色1010一革兰氏染色步骤一革兰氏染色步骤涂片涂片1111热固定热固定121213131414脱色脱色1515复染复染1616革兰氏染色阴性革兰氏染色阴性革兰氏染色阳性革兰氏染色阳性1717菌体呈红色者菌体呈红色者为为gg番红复番红复番红复番红复菌体仍呈深紫菌体仍呈深紫乙醇乙醇或丙酮酮脱色脱色细菌涂细菌涂片片草酸铵结晶草酸铵结晶1818二革兰氏染色原理二革兰氏染色原理gg菌细胞壁厚肽聚糖网状分子形成一种透性障菌细胞壁厚肽聚糖网状分子形成一种透性障当乙醇脱色时肽聚糖脱水而孔障缩小故保留当乙醇脱色时肽聚糖脱水而孔障缩小故保留结晶紫结晶紫碘复合物在细胞膜上
金黄色葡萄球菌ppt课件
肠毒素是一种可溶性蛋白质，耐热，经100℃煮沸30分 钟不被破坏，也不受胰蛋白酶的影响（破坏食物中存在 的肠毒素须加热至100℃，并持续2h），且具有"超抗 原"(superantigen)特性 ，故误食污染肠毒素的食物后 ，在肠道作用于内脂神经受体，传入中枢，刺激呕吐中 枢，引起呕吐，并产生急性胃肠炎症状。
• 菌落直径2-3mm，颜色从灰色到黑色，边缘为 淡色，周围有一浑浊带，其外层有一透明圈， 用接种针触碰有奶油树脂的硬度。
3种葡萄球菌鉴别的主要性状
主要性状 色素
血浆凝固酶 甘露醇发酵
溶血性 耐热核酸酶活性 磷壁酸核糖醇型 磷壁酸甘油型 蛋白A（SPA）
致病性
金黄色葡萄球菌 金黄色 ＋（－） ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ 强
（表皮/腐生性葡萄球菌）
白色/柠檬色 － － － － － ＋ －
弱或无
三 、生化特性
1.可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不 产气。甲基红反应阳性，V-P反应弱阳性。
2.许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸 盐，液化明胶。
3.具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低， 但对青霉素、红霉素等高度敏感。
4.表皮溶解毒素（Epidermolytic toxin）
表皮溶解毒素也称表皮剥脱毒素（Exfoliatin)，可引 起人类或新生小鼠的表皮剥脱性病变、烫伤样皮肤综 合征（剥脱性皮炎），多见于新生儿、婴幼儿及免疫 功能低下者。它主要是由噬菌体Ⅱ型金葡菌产生的一 种蛋白质，分子量24000，具有抗原性，可被甲醛脱 毒成类毒素。
致病性与免疫性
烫伤样皮肤综合症
5.中毒性休克综合症毒素-Ⅰ（Toxic shock syndrome toxin-1,TTST-1）
金黄色葡萄球菌—ppt课件
金黄色葡萄球菌
Staphyloccocus aureus Rosenbach
• 食工1：黄婉玲、陈倩文、 陈诗妍、何渝、柯畅
• 食工3：林俊虹、黄桂愉、 李明芬、黄海波、罗锐波
金 黄
分类地位
色
葡 萄
生物学特性
球
菌
功能/危害
作用机理
最新研究进展
微生物
球 金黄色葡萄球菌
菌
细
杆
（个菌体形 菌
态）
螺旋
菌
蓼科植物抗金黄色葡萄球菌的研究现状简述
【 • 具有抗金黄色葡萄球菌的蓼科植物有5】蓼属植物何首乌、虎杖、
杠板归、拳参、抱茎花蓼和太白蓼等；还有药用大黄、掌叶 大黄、R. nervosus和R. abyssinicus等大黄属的植物及酸模 属植物。
• 蓼科植物大多具有清热解毒、散结消肿等功效，这与蓼科植 物具有抗菌杀毒作用息息相关，蓼科植物具有抗金黄色葡萄 球菌的主要化学成分为蒽醌衍生物和二苯乙烯苷类及挥发油 成分。
荧光定量PCR快速检测金黄色葡萄球菌
【6】 • 金黄色葡萄球菌( Staphy loco ccus aureus, 简称SAU) 广
泛分布于自然界, 可产生肠毒素, 误食被其污染的饮用水、 牛奶及奶制品等可引起急性胃肠炎, 导致以呕吐为主要症状 的食物中毒,至今已有多起牛奶及奶制品污染SAU 的事件被报 道。 • 为检测食品中的SAU, 国内外常用的微生物定量方法有平板计 数法、细菌磷酸酶活性定量法、MPN-PCR 法等, 这些方法耗 时费力、特异性不强、需要PCR后处理。 • 另一种定量方法是荧光定量PCR , 该方法能够定量测定DNA的 含量, 因此也具有对微生物进行计数的能力。但许多食品基 质、培养基等都可能对PCR 有抑制作用, 导致假阴性结果, 这是荧光定量PCR全面引入常规食品分析的一大障碍。
Staphyloccocus aureus Rosenbach
• 食工1：黄婉玲、陈倩文、 陈诗妍、何渝、柯畅
• 食工3：林俊虹、黄桂愉、 李明芬、黄海波、罗锐波
金 黄
分类地位
色
葡 萄
生物学特性
球
菌
功能/危害
作用机理
最新研究进展
微生物
球 金黄色葡萄球菌
菌
细
杆
（个菌体形 菌
态）
螺旋
菌
蓼科植物抗金黄色葡萄球菌的研究现状简述
【 • 具有抗金黄色葡萄球菌的蓼科植物有5】蓼属植物何首乌、虎杖、
杠板归、拳参、抱茎花蓼和太白蓼等；还有药用大黄、掌叶 大黄、R. nervosus和R. abyssinicus等大黄属的植物及酸模 属植物。
• 蓼科植物大多具有清热解毒、散结消肿等功效，这与蓼科植 物具有抗菌杀毒作用息息相关，蓼科植物具有抗金黄色葡萄 球菌的主要化学成分为蒽醌衍生物和二苯乙烯苷类及挥发油 成分。
荧光定量PCR快速检测金黄色葡萄球菌
【6】 • 金黄色葡萄球菌( Staphy loco ccus aureus, 简称SAU) 广
泛分布于自然界, 可产生肠毒素, 误食被其污染的饮用水、 牛奶及奶制品等可引起急性胃肠炎, 导致以呕吐为主要症状 的食物中毒,至今已有多起牛奶及奶制品污染SAU 的事件被报 道。 • 为检测食品中的SAU, 国内外常用的微生物定量方法有平板计 数法、细菌磷酸酶活性定量法、MPN-PCR 法等, 这些方法耗 时费力、特异性不强、需要PCR后处理。 • 另一种定量方法是荧光定量PCR , 该方法能够定量测定DNA的 含量, 因此也具有对微生物进行计数的能力。但许多食品基 质、培养基等都可能对PCR 有抑制作用, 导致假阴性结果, 这是荧光定量PCR全面引入常规食品分析的一大障碍。
金黄色葡萄球菌肺炎影像学表现PPT课件
•分布倾向。
• MRSA可分泌细胞毒素导致肺组织坏死和周围肺泡出 血，因而部分实变区与结节周围出现GGO，主要为肺 组织出血。
• 肺组织坏死多表现为实变内多个小泡状透光区，可逐 渐融合形成空洞。
• 脓毒性栓塞可形成楔形梗死灶或沿血管走形的结节影 ，结节中央可坏死液化形成空洞。
• 根据感染途径分为原发性(吸入性) 和继发性(血源性)SAP.
• 根据感染发生的场所和时间分为社区获得性SAP（约占全 部CAP的3%）和医院获得性SAP（占全部HAP的15%）。
• 确诊SAP需要病原学依据。气管分泌物、支气管肺泡灌洗 液培养阳性率常不高且可为假阳性。研究表明HAP血培 养的检出率仅为24%-36%，血培养对血源性SAP阳性率相 对较高，但对吸入性SAP的诊断阳性率不高(20%)。
• 金黄色葡萄球菌肺炎(SAP)是由SA所引起的急性化脓性肺部 感染，常发生于婴幼儿、儿童、老年人、皮肤脓疱、严重 烧伤、外伤、外科手术后、静脉插管、呼吸机治疗及吸毒 、恶性肿瘤、长期大量激素治疗等免疫功能受损等患者。
• 临床症状轻重不一，包括流感样前驱症状、畏寒高热、咳 嗽、胸痛、胃肠道症状、皮疹等，严重者可出现咯血、精 神萎靡甚至神志模糊、急性呼吸窘迫综合征、多器官衰竭 、休克等重症肺炎表现。
• 肺气囊数目、大小短期内可发生变化，可位于实 变或GGO区，或独立存在，边缘清晰或模糊，内 可见液平，经治疗多在6周内消失。
• 肺气囊并不是SAP独有，如PCP、肺炎链球菌肺炎 均可见。
• SAP，尤其是MRSA，影像学表现具有一些特点， 但特异性并不强，与其他化脓性肺炎、肺结核、 真菌肺炎甚至GPA等鉴别较困难，不能过分夸大影 像学的诊断尤其是早期诊断作用。须结合患者的 病史、临床表现、实验室检查、痰、BALF、血培 养、药敏实验甚至穿刺活检等综合考虑，短期复 查有一定必要。
• MRSA可分泌细胞毒素导致肺组织坏死和周围肺泡出 血，因而部分实变区与结节周围出现GGO，主要为肺 组织出血。
• 肺组织坏死多表现为实变内多个小泡状透光区，可逐 渐融合形成空洞。
• 脓毒性栓塞可形成楔形梗死灶或沿血管走形的结节影 ，结节中央可坏死液化形成空洞。
• 根据感染途径分为原发性(吸入性) 和继发性(血源性)SAP.
• 根据感染发生的场所和时间分为社区获得性SAP（约占全 部CAP的3%）和医院获得性SAP（占全部HAP的15%）。
• 确诊SAP需要病原学依据。气管分泌物、支气管肺泡灌洗 液培养阳性率常不高且可为假阳性。研究表明HAP血培 养的检出率仅为24%-36%，血培养对血源性SAP阳性率相 对较高，但对吸入性SAP的诊断阳性率不高(20%)。
• 金黄色葡萄球菌肺炎(SAP)是由SA所引起的急性化脓性肺部 感染，常发生于婴幼儿、儿童、老年人、皮肤脓疱、严重 烧伤、外伤、外科手术后、静脉插管、呼吸机治疗及吸毒 、恶性肿瘤、长期大量激素治疗等免疫功能受损等患者。
• 临床症状轻重不一，包括流感样前驱症状、畏寒高热、咳 嗽、胸痛、胃肠道症状、皮疹等，严重者可出现咯血、精 神萎靡甚至神志模糊、急性呼吸窘迫综合征、多器官衰竭 、休克等重症肺炎表现。
• 肺气囊数目、大小短期内可发生变化，可位于实 变或GGO区，或独立存在，边缘清晰或模糊，内 可见液平，经治疗多在6周内消失。
• 肺气囊并不是SAP独有，如PCP、肺炎链球菌肺炎 均可见。
• SAP，尤其是MRSA，影像学表现具有一些特点， 但特异性并不强，与其他化脓性肺炎、肺结核、 真菌肺炎甚至GPA等鉴别较困难，不能过分夸大影 像学的诊断尤其是早期诊断作用。须结合患者的 病史、临床表现、实验室检查、痰、BALF、血培 养、药敏实验甚至穿刺活检等综合考虑，短期复 查有一定必要。
金黄色葡萄球菌的生物学特性PPT课件
8.葡萄糖O/F试管操作步骤
从平板上挑取少量细菌，同时穿刺接种于2支O/F试管中 ，其中1支滴加液体石蜡，覆盖液面高度为0.3~0.5CM。 经37℃培养48小时后，观察结果。仅开放管产能为氧化 反应（O），两管都产能为发酵反应（F），两管均不变 为产碱性。
9.新生霉素敏感试验操作步骤：
将细菌制成0.5麦氏单位的菌液，用棉拭子沾取 菌液密封涂布于普通琼脂平板表面或M-H琼脂 平板，待菌液稍干，以无菌镊子搁置于含5ug/ 片的新生霉素纸片，35~37℃孵育16~20小时 观察结果。抑菌圈直径>16mm为敏感（S）， 抑菌圈直径≤16mm为耐药（R）。
10.甘露醇发酵试验操作步骤：
将纯培养的细菌用接种针接种至甘露醇生化管中，置 35℃~37℃孵育箱孵育。18~24小时后，观察结果。若细 菌能分解甘露醇者指示剂呈酸性变化。不分解者培养基无 变化。
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15
2019/10/30
16
试验腐生血浆凝固酶新生霉素敏感敏感s敏感s耐药rdna酶42试验葡萄球菌微球菌形态球型葡萄状以四联为主且菌体较呋喃唑酮敏感s耐药r43葡萄球菌链球菌排列以葡萄状为主以链状为主形态圆形椭圆形中间型家畜溶血葡萄糖发酵链球菌科血浆凝固酶微球菌金黄色葡萄球菌凝固酶阴性葡萄球菌临床和试验标准化研究所clsi简称nccls对mrsa的判定标准作了修改取消用苯唑西林对mrsa的检测
金黄色葡萄球菌的生物学特性 及鉴定要点
1
1.形态与染色：
革兰氏阳性，成单、双、短链接或不规则葡萄状排列。
2.培养特性：
金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色， 周围有明显的β溶血环，部分菌落也可呈灰白色或柠檬色 。在高盐甘露醇平板上呈淡黄色。
3.生化反应：
微生物检测技术金黄色葡萄球菌检测(共35张PPT)
近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起 的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。
++++金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由
金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的 33%，加拿大则更多，占45%，我国每年发生的此类中毒事件也 非常多。
4、GB 4789.10—2010食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验
❖ 丙酮酸钠
10.0 g
❖ 甘氨酸
12.0 g
❖ 氯化锂 ❖ 琼脂
5.0 g
20.0 g
❖ 蒸馏水
950 mL
❖ 卵黄亚碲酸钾增菌剂 50 mL
检测步骤---分离
❖ BP平板：
❖ 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素和痕量矿物元 素
❖ 丙酮酸钠、甘氨酸和氯化锂是一种生长促进剂
❖ 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分解卵黄的菌株有毒性，并使菌
检验前准备工作
采集与送检 预处理
菌落总数
大肠菌群
致病菌
前增菌
分离培养
纯化 多项鉴定及检测实验
分析、报告
食品微生物检验的一般程序
检测步骤---增菌
❖ 利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（可耐受 15%的氯化钠），用含7.5%氯化钠肉汤
蛋白胨
牛肉膏 氯化钠
蒸馏水ห้องสมุดไป่ตู้
10.0 g
5.0 g 75 g
1 000 mL
型症状为呕吐和腹泻。 置 36±1℃温箱或水浴内，每半小时观察一次，观察6 h，如呈现凝固,即将试管倒置或 倾斜时，呈现凝块者，被认为阳性结果。
2．以下属于金黄色葡萄球菌的特点有——————
++++金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由
金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的 33%，加拿大则更多，占45%，我国每年发生的此类中毒事件也 非常多。
4、GB 4789.10—2010食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验
❖ 丙酮酸钠
10.0 g
❖ 甘氨酸
12.0 g
❖ 氯化锂 ❖ 琼脂
5.0 g
20.0 g
❖ 蒸馏水
950 mL
❖ 卵黄亚碲酸钾增菌剂 50 mL
检测步骤---分离
❖ BP平板：
❖ 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素和痕量矿物元 素
❖ 丙酮酸钠、甘氨酸和氯化锂是一种生长促进剂
❖ 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分解卵黄的菌株有毒性，并使菌
检验前准备工作
采集与送检 预处理
菌落总数
大肠菌群
致病菌
前增菌
分离培养
纯化 多项鉴定及检测实验
分析、报告
食品微生物检验的一般程序
检测步骤---增菌
❖ 利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（可耐受 15%的氯化钠），用含7.5%氯化钠肉汤
蛋白胨
牛肉膏 氯化钠
蒸馏水ห้องสมุดไป่ตู้
10.0 g
5.0 g 75 g
1 000 mL
型症状为呕吐和腹泻。 置 36±1℃温箱或水浴内，每半小时观察一次，观察6 h，如呈现凝固,即将试管倒置或 倾斜时，呈现凝块者，被认为阳性结果。
2．以下属于金黄色葡萄球菌的特点有——————
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菌落特征，凝固酶试验。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
新旧标准主要差异
• 增菌液统一改成了7.5%氯化钠肉汤 这个标准主要是因为2008版本参照美国FDA的方法增加了10%胰胨 大豆肉汤以来，发现该增菌液使用效果不好，目标菌生长差。
• 修改Baird-Parker平板的培养时间为24 h～48 h，原来是18 h～24 h 或45 h～48 h。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
金黄色葡萄球菌定性检验
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
学习目的与要求
1. 了解金黄色葡萄球菌生物学特性。 2. 掌握金黄色葡萄球菌定性检测程序和 检验方法。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
一、生物学特性——菌体形态及培养特征
Baird-parker平板，血平板
36± 1℃
BP平板 24h-48h 血平板 18h-24h
涂片染色
观察溶血
BHI肉汤和营养琼脂小斜面
36± 1℃ 18h- 24h
血浆凝固酶试验
报告
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检验程序 ——样品处理
称取25g（mL）样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉 汤的无菌均质杯内,8000r/min~10000r/min均质 1min~2min,或放入盛有225mL7.5%氯化钠肉汤无菌均 质袋中,用拍击式均质器拍打1 min~2min。
检验程序 ——确证鉴定2.血浆凝固酶试验
金黄色葡萄球菌可以产生血浆凝固酶，因此对其鉴别 的主要试验是测定其凝固酶。
试管法 挑取BP平板或血平板上至少5个可疑菌落（少于5个
全选，分别接种于BHI肉汤和营养琼脂小斜面， 36±1℃ 培养18h-24h。
取0.5mL无菌生理盐水加入瓶装冻干兔血浆中至完全 溶解，加入培养后的BHI肉汤培养物0.2-0.3mL，振荡摇 匀，放36±1℃恒温箱或水浴内，每半小时观察一次，观 察6h，如凝固体积大于原体积一半时，判定为阳性。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验 B-P平板
圆形、光滑、黑色有光泽, 周围绕以不透明圈,其外有清晰带
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验 检验程序 ——确证鉴定1.革兰氏染色镜检
革兰氏阳性，球形，葡萄状，无芽孢，无荚膜
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
• 挑取Baird-Parker 平板或血平板上可疑菌落至少5个，2010版1个以 上。
板上产生明显的溶血环。
典型菌落：呈金黄色，有时也为白色，大而突起，圆形， 不透明，表面光滑，菌落周围有完全透明溶血环。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
大而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血环
阳性
阴性
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检验程序——分离培养
BP（贝尔德- 帕克）平板：
在BP平板上典型菌落为：圆形,表面光滑、凸起、湿 润、菌落直径为2mm~3mm, 颜色呈灰黑色至黑色,有光泽, 常有浅色(非白色)的边缘,周围绕以不透明圈(沉淀),其外常 有一清晰带。当用接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感。
有时可见到不分解脂肪的菌株,除没有不透明圈和清 晰带外,其他外观基本相同。
从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落,其黑色 常较典型菌落浅些, 且外观可能较粗糙,质地较干燥。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
二、检验程序与操作方法
食品安全国家标准GB 4789.10-2016 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验 第一法 金黄色葡萄球菌定性检验
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检样 25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质
36± 1℃ 18h- 24h
✓ 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素 和矿物元素
✓ 丙酮酸钠是一种生长促进剂 ✓ 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球菌外的其他能分解卵黄的菌株
有毒性，并使菌落产生黑色 ✓ 卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环 ✓ 甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制
作用。Βιβλιοθήκη 食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
结果报告
• 在25g(mL)样品中检出或未检出金黄色葡萄 球菌。
• 即：检出/ 25g(mL) 或 未检出/ 25g(mL)
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小结
• 了解金黄色葡萄球菌的生物学特性（耐盐， 能产毒素、凝固酶等）
• 掌握检验流程 • 知识点：增菌液，BP平板和血平板的典型
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
•葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的疾病， 可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、呕吐最为突 出而且普遍，腹痛、腹泻次之。 •当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如 牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经8-10 小时即可相当数量的肠毒素。
如结果可疑，从营养琼脂小斜面挑去菌落到BHI肉汤， 重复凝固酶试验。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
阴性
阳性
不凝固
少量、 零散凝
固
明显的块 状凝固
巨大块 凝固
完全凝固， 倒置不流动
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试管法
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
• 所有的毒株产生血浆凝固酶，人和动物来 源的菌株通常可凝固兔、人、马和猪的血 浆。
• 金黄色葡萄球菌产生磷脂酶、蛋白酶、脂 肪酶和溶菌酶等，大多数菌株可水解天然 的动物蛋白并释放脂肪酸。在BP平板产生 磷脂环。
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生物学特性 ——致 病 性
•金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强弱主要取 决于其产生的毒素和侵袭性酶： •a.溶血素：外毒素，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌 体局部缺血和坏死；在血平板培养出现溶血环。 •b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； •c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血 液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬 细胞的吞噬作用。 •d.耐热核酸酶 •e.肠毒素：引起急性胃肠炎。
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检验程序 ——增菌
利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（最高可耐受 15%的氯化钠），用7.5%氯化钠肉汤增菌。
36±1℃培养18h~24h。
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检验程序 ——分离培养（血平板和BP平板）
血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血平
革兰氏阳性球菌，直径为0.5-1.0微米，镜检时呈单个、成 对、四联或不规则的簇群，如葡萄状，故称为葡萄球菌。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈现出深橙色 到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，故称金黄 色葡萄球菌(高盐甘露醇平板：金黄色葡萄球菌为淡黄 色菌落；其他葡萄球菌为白色菌落)。
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• 最适生长温度37℃，最适pH为7.4； • 兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好； • 可在高盐环境下生长，15%氯化钠环境下
还能生长； • 一般用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤增
菌或7.5%氯化钠肉汤增菌。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
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新旧标准主要差异
• 增菌液统一改成了7.5%氯化钠肉汤 这个标准主要是因为2008版本参照美国FDA的方法增加了10%胰胨 大豆肉汤以来，发现该增菌液使用效果不好，目标菌生长差。
• 修改Baird-Parker平板的培养时间为24 h～48 h，原来是18 h～24 h 或45 h～48 h。
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金黄色葡萄球菌定性检验
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学习目的与要求
1. 了解金黄色葡萄球菌生物学特性。 2. 掌握金黄色葡萄球菌定性检测程序和 检验方法。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
一、生物学特性——菌体形态及培养特征
Baird-parker平板，血平板
36± 1℃
BP平板 24h-48h 血平板 18h-24h
涂片染色
观察溶血
BHI肉汤和营养琼脂小斜面
36± 1℃ 18h- 24h
血浆凝固酶试验
报告
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检验程序 ——样品处理
称取25g（mL）样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉 汤的无菌均质杯内,8000r/min~10000r/min均质 1min~2min,或放入盛有225mL7.5%氯化钠肉汤无菌均 质袋中,用拍击式均质器拍打1 min~2min。
检验程序 ——确证鉴定2.血浆凝固酶试验
金黄色葡萄球菌可以产生血浆凝固酶，因此对其鉴别 的主要试验是测定其凝固酶。
试管法 挑取BP平板或血平板上至少5个可疑菌落（少于5个
全选，分别接种于BHI肉汤和营养琼脂小斜面， 36±1℃ 培养18h-24h。
取0.5mL无菌生理盐水加入瓶装冻干兔血浆中至完全 溶解，加入培养后的BHI肉汤培养物0.2-0.3mL，振荡摇 匀，放36±1℃恒温箱或水浴内，每半小时观察一次，观 察6h，如凝固体积大于原体积一半时，判定为阳性。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验 B-P平板
圆形、光滑、黑色有光泽, 周围绕以不透明圈,其外有清晰带
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验 检验程序 ——确证鉴定1.革兰氏染色镜检
革兰氏阳性，球形，葡萄状，无芽孢，无荚膜
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
• 挑取Baird-Parker 平板或血平板上可疑菌落至少5个，2010版1个以 上。
板上产生明显的溶血环。
典型菌落：呈金黄色，有时也为白色，大而突起，圆形， 不透明，表面光滑，菌落周围有完全透明溶血环。
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大而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血环
阳性
阴性
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检验程序——分离培养
BP（贝尔德- 帕克）平板：
在BP平板上典型菌落为：圆形,表面光滑、凸起、湿 润、菌落直径为2mm~3mm, 颜色呈灰黑色至黑色,有光泽, 常有浅色(非白色)的边缘,周围绕以不透明圈(沉淀),其外常 有一清晰带。当用接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感。
有时可见到不分解脂肪的菌株,除没有不透明圈和清 晰带外,其他外观基本相同。
从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落,其黑色 常较典型菌落浅些, 且外观可能较粗糙,质地较干燥。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
二、检验程序与操作方法
食品安全国家标准GB 4789.10-2016 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验 第一法 金黄色葡萄球菌定性检验
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检样 25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质
36± 1℃ 18h- 24h
✓ 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素 和矿物元素
✓ 丙酮酸钠是一种生长促进剂 ✓ 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球菌外的其他能分解卵黄的菌株
有毒性，并使菌落产生黑色 ✓ 卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环 ✓ 甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制
作用。Βιβλιοθήκη 食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
结果报告
• 在25g(mL)样品中检出或未检出金黄色葡萄 球菌。
• 即：检出/ 25g(mL) 或 未检出/ 25g(mL)
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
小结
• 了解金黄色葡萄球菌的生物学特性（耐盐， 能产毒素、凝固酶等）
• 掌握检验流程 • 知识点：增菌液，BP平板和血平板的典型
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
•葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的疾病， 可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、呕吐最为突 出而且普遍，腹痛、腹泻次之。 •当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如 牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经8-10 小时即可相当数量的肠毒素。
如结果可疑，从营养琼脂小斜面挑去菌落到BHI肉汤， 重复凝固酶试验。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
阴性
阳性
不凝固
少量、 零散凝
固
明显的块 状凝固
巨大块 凝固
完全凝固， 倒置不流动
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
试管法
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
• 所有的毒株产生血浆凝固酶，人和动物来 源的菌株通常可凝固兔、人、马和猪的血 浆。
• 金黄色葡萄球菌产生磷脂酶、蛋白酶、脂 肪酶和溶菌酶等，大多数菌株可水解天然 的动物蛋白并释放脂肪酸。在BP平板产生 磷脂环。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
生物学特性 ——致 病 性
•金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强弱主要取 决于其产生的毒素和侵袭性酶： •a.溶血素：外毒素，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌 体局部缺血和坏死；在血平板培养出现溶血环。 •b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； •c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血 液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬 细胞的吞噬作用。 •d.耐热核酸酶 •e.肠毒素：引起急性胃肠炎。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检验程序 ——增菌
利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（最高可耐受 15%的氯化钠），用7.5%氯化钠肉汤增菌。
36±1℃培养18h~24h。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检验程序 ——分离培养（血平板和BP平板）
血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血平
革兰氏阳性球菌，直径为0.5-1.0微米，镜检时呈单个、成 对、四联或不规则的簇群，如葡萄状，故称为葡萄球菌。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈现出深橙色 到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，故称金黄 色葡萄球菌(高盐甘露醇平板：金黄色葡萄球菌为淡黄 色菌落；其他葡萄球菌为白色菌落)。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
• 最适生长温度37℃，最适pH为7.4； • 兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好； • 可在高盐环境下生长，15%氯化钠环境下
还能生长； • 一般用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤增
菌或7.5%氯化钠肉汤增菌。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验