实验一 鱼类饲料的总消化率及其

实验一 鱼类饲料的总消化率及其

蛋白质消化率的测定

一、 实验目的

掌握用外源指示剂Cr 2O 3间接测量鱼、虾饲料消化率的基本方法。

二、原 理

与饲料均匀混合的外源指示剂Cr 2O 3，完全不被动物吸收而随粪便排出。根据指示剂及蛋白质(或其他营养成分)在食物及粪便中的含量变化，饲料的总消化率和蛋白质的消化率由如下两式给出：

饲料总消化率：D(％)=[1－'B B

] ×100

蛋白质消化率：D(％)=[1－ 'A A ×'B B

] ×100

A 、A’分别为饲料粪便中的粗蛋白含量；

B 、B’分别为饲料和粪便中的Cr 2O 3 含量

三、实验材料

1．试验鱼 可根据实际情况选择实验鱼的种类。但用易驯化、习惯实验环境的鱼类(如金鱼、锦鲤、罗非鱼等)较好。体重20～25g ，每试验组10尾。

2．水族箱 每试验组配50～1001容积的水族箱2个，一个作投饲槽、一个作排泄槽。

3. 充氧设备 每水族箱配微型充气泵一台

4. 集粪工具 每组配虹吸管1支、漏斗2个及玻璃纤维若干

5. 小捞网1个

6. 100目分样筛1个

7. 100ml 凯式烧瓶2只

8. 100ml 容量瓶1个，10ml 容量瓶10个

9．刻度移液管l 套。

10．凯氏定氮装置1套。

11．分光光度计一台。

一、 试验饲料的制备

试验饲料的组成可用第二章表2—7的典型配方。但其中的酪蛋白和明胶用优质鱼粉代为简便起见，也可直接使用市售鱼用饲料，经重新粉碎后使用。

全部试验饲料要统—制作。所有干性原料要经粉碎，并通过100目筛。化学纯Cr 2O 3，也要经过100目筛。按每千克干饲料的1％准确称取Cr 2O 3，与少量的干性原料混合，分四级逐步扩大到全部干性饲料组分，充分混合均匀，混合操作可在大白搪瓷盆进行。因Cr 2O 3为绿色，所以从盆壁上是否留有团状绿色痕迹来判断混合的均匀程度，若有必要，可进行均匀度检查，变异系数要求小于5%。混合均匀程度决定试验的成败。平均每组制作200g 饲料。

二、 投饲与粪便采集

把试验鱼置于投饲槽、充气，用试验饲料暂养3天。每天清理粪便及残饵，并适量换水。停食数小时后，再一次投足量试验饲料让鱼群饱食。然后，用捞网把鱼捕到条件完全相同的排泄槽。开始观察排粪，排粪后及时用虹吸管收取，经玻璃纤维过滤，收集烘干，保存作分析用。虹吸过程尽量不要把条状粪便弄破。

为了获得可靠的结果，通常要同时作三个重复组，或把排粪后的鱼再移回投饲槽喂饱，再移到排泄槽，再收集粪便，如此重复两次。但这里仅为了掌握基本方法、收集足够供分析的粪便即可(约300mg 干品)。

三、样品分析

对干燥至恒重的饲料及粪便样品，进行粗蛋白及Cr2O3的定量分析。粗蛋白分析按生物化学实验中的凯氏定氮法进行。下面介绍Cr2O3的湿式灰化定量法。

精确称量样品50一l00mg（含Cr2O31—3mg)置于l00ml凯氏烧瓶中，加浓硝酸(比重1.42)5ml，加热氧化约20min，当溶液中产生白色固形物时，停止加热。放冷后，徐徐注入3ml过氯酸(70%)，加热使溶液从绿色经黄色而急变为褐色，再继续加热l0min放冷，以蒸馏水定容至l00ml。于波长350nm处测量光密度，以蒸馏水作对照。

标准曲线的制定：精确称量5mg分析纯Cr2O3，用与样品一样的方法消化，但最后以蒸馏水定容至10ml，作为母液。每毫升Cr2O3 0.5mg。从母液中分别吸取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8相0.9ml于10ml的容量瓶中，用蒸馏水分别定容至l0ml，便得到相当1：l00ml溶液中含Cr2O3为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0和4.5mg的浓度系列溶液。同样在350nm处测量其光密度。根据浓度和光密度值的关系制作标准曲线；并可用回归分析的方法把二者的相关关系建立起来。

根据样品的光密度值在标准曲线L或用回归方程获得样品中Cr2O3的含量。

四、消化率的计算及不同实验组间的结果比较

根据凯氏定氮法测得的饲料及粪便的蛋白质水平，以及以上获得的Cr2O3数据，用上述计算公式，便可靠出饲料的总消化率及蛋白质消化率。

因为不同试验组所用的试验饲料一样，试验鱼及试验条件相似，方法相同，所以其结果有很强的可比性。各试验组可将试验结果与其他组的结果进行比较，并予讨论。