《化妆品微生物标准检验方法》
化妆品微生物检验标准
化妆品微生物检验标准一、菌落总数菌落总数是指化妆品中可培养的微生物总数，包括细菌、霉菌和酵母菌等。
这些微生物可能来自原料、生产过程、包装材料、运输和贮存等环节。
菌落总数是评价化妆品卫生质量的重要指标之一，可以反映化妆品受污染的程度。
二、霉菌和酵母菌总数霉菌和酵母菌是常见的真菌，在化妆品中可能污染原料或生产过程中。
霉菌和酵母菌大量繁殖会导致产品变质，对皮肤产生不良影响。
因此，对霉菌和酵母菌总数的检测是化妆品卫生质量检测的重要内容之一。
三、耐热大肠菌群耐热大肠菌群是指一群嗜热、不产气的革兰氏阴性杆菌，其中包括埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属等。
在大肠杆菌中，有一种不耐热的“大肠菌群”是食品污染的指示菌。
耐热大肠菌群可以反映肠道致病菌污染的可能性。
四、金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌是一种常见的革兰氏阳性球菌，是一种常见的细菌性病菌。
耐热性较强，对食品和化妆品的污染具有一定危险性。
因此，对金黄色葡萄球菌的检测也是化妆品卫生质量检测的重要内容之一。
五、铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌是一种常见的革兰氏阴性杆菌，是一种条件致病菌，可引起皮肤感染和败血症等。
铜绿假单胞菌在化妆品中是一种常见的污染菌，对化妆品的卫生质量有一定影响。
因此，对铜绿假单胞菌的检测也是化妆品卫生质量检测的重要内容之一。
六、细菌总数细菌总数是指化妆品中可培养的细菌总数，包括革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌等。
这些细菌可能来自原料、生产过程、包装材料、运输和贮存等环节。
细菌总数可以反映化妆品受污染的程度。
七、粪大肠菌群粪大肠菌群是指一群能够产气的肠杆菌科细菌，主要分布于动物粪便和自然界中。
在化妆品中，粪大肠菌群的检出可能提示产品受到肠道致病菌的污染，具有潜在的危险性。
因此，对粪大肠菌群的检测也是化妆品卫生质量检测的重要内容之一。
化妆品 cma 微生物 认证检测项目
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化妆品生产产品检测标准
产品(半成品和成品)的检验包括理化指标检验和微生物检验。
1.1产品(半成品和成品)理化指标的标准
批准
审核
编制
文件名称
化妆水标准
版本
文件编号
ZJBZ-02-01
制定部门
质检部
页次
1、目的：保证所的生产的产品符合公司规定，满足客户品质要求，确保我公司才产品质量，保证消费者；
2、范围：所有生产产品；
耐寒
（-8±2）℃保持24h，恢复至室温后与试验前无分层现象
pH（25℃）
4.0～8.5（直测法）（α、β羟基酸类产品可按企标执行）
-
离心实验
2000r/min,30min不分层（添加不溶性颗粒或不溶粉末的产品除外）
微生
物指
标
细菌总数/(CFU/g)
≤1000（儿童用产品≤500）
霉菌和酵母菌总数/(CFU/g)
4.检测内容
项目
要求
膏（乳）状面膜
啫喱面膜
面膜贴
粉状面膜
感官
指标
香气
符合规定香型
外观
均匀膏体或乳液
透明或半透明凝胶
润湿的纤维贴膜或胶状成形面膜贴
均匀粉末
理
化
指
标
耐热
（40±1）℃保持24h，恢复至室温后与试验前无明显差异
-
-
耐寒
（-5～-10）℃保持24h，恢复至室温与试验前无差异
-
-
pH（25℃）
检验员：负责对包材进行验收检验；
4.检测内容
项目
要求
乳化型（Ⅰ型）
非乳化型（Ⅱ型）
感官
指标
质感
均匀一致（含颗粒或灌装成特定外观的产品除外）
化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解
化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解中华人民共和国国家标准化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定 UDC 668：576 .85.07(GB7918.2－87)Standard methods of microbiological examination for cosmeticsStandard plate count细菌总数系指1g或1ml化妆品中所含的活菌，数量。
测定细菌总数可用来判明化妆品被细菌污染的程度，以及生产单位所用的原料、工具设备、工艺流程、操作者的卫生状况，是对化妆品进行卫生学评价的综合依据。
本标准采用标准平板计数法。
1 方法提要化妆品中污染的细菌种类不同，每种细菌都有它一定的生理物质性，培养时对营养要求，培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等均有所不同。
在实际工作中，不可能做到满足所有菌的要求，因此所测定的结果，只包括在本方法所使用的条件下（在卵磷脂、吐温80营养琼脂上，于37℃培养48h)生长的一群嗜中温的需氯及兼性厌氧的细菌总数。
2 培养基和试剂2.1 生理盐水：见GB 7918-87《化妆品微生物标准检验方法总则》。
2.2 卵磷脂、吐温80-营养琼脂培养基成分：蛋白胨 20g牛肉膏 3g氯化钠 5g琼脂 15g卵磷脂 1g吐温80 7g蒸馏水 1000ml制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80将其他成分(除琼脂外)加到其余蒸馏水中，溶解。
加入已溶解的卵磷脂、吐温80，混匀，调pH值为7.1～7.2，加入琼脂，121℃(15 1b)20min高压灭菌，储存于冷暗处备用。
3 仪器3.1 锥形烧瓶。
3.2 量筒。
3.3 pH计或精密pH试纸。
3.4 高压消毒锅。
3.5 试管。
3.6 灭菌平皿：直径9cm。
3.7 灭菌刻度吸管：10ml、2ml、1ml。
3.8 酒精灯。
3.9 恒温培养箱。
3.10 放大镜。
4 操作步骤4.1 用灭菌吸管吸取1:10稀释的检样2ml，分别注入到两个灭菌平甲内，每皿1ml。
化妆品原料微生物检验标准
化妆品原料微生物检验标准一、细菌总数1.目的：评估化妆品原料的细菌污染程度，反映化妆品生产过程中的卫生状况。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行细菌总数的测定。
3.判定标准：细菌总数小于或等于1000 CFU/g（CFU/ml）为合格，超过此标准为不合格。
二、霉菌和酵母菌总数1.目的：评估化妆品原料的霉菌和酵母菌污染程度，反映原料的卫生状况。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行霉菌和酵母菌总数的测定。
3.判定标准：霉菌和酵母菌总数小于或等于100 CFU/g（CFU/ml）为合格，超过此标准为不合格。
三、耐热大肠菌群1.目的：检测化妆品原料中是否存在耐热大肠菌群，反映原料的卫生状况。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行耐热大肠菌群的测定。
3.判定标准：未检出耐热大肠菌群为合格，检出耐热大肠菌群为不合格。
四、金黄色葡萄球菌1.目的：检测化妆品原料中是否存在金黄色葡萄球菌，预防感染性疾病的发生。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行金黄色葡萄球菌的测定。
3.判定标准：未检出金黄色葡萄球菌为合格，检出金黄色葡萄球菌为不合格。
五、铜绿假单胞菌1.目的：检测化妆品原料中是否存在铜绿假单胞菌，预防感染性疾病的发生。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行铜绿假单胞菌的测定。
3.判定标准：未检出铜绿假单胞菌为合格，检出铜绿假单胞菌为不合格。
六、沙门氏菌1.目的：检测化妆品原料中是否存在沙门氏菌，预防感染性疾病的发生。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行沙门氏菌的测定。
3.判定标准：未检出沙门氏菌为合格，检出沙门氏菌为不合格。
七、志贺氏菌1.目的：检测化妆品原料中是否存在志贺氏菌，预防感染性疾病的发生。
2.采样方法：随机取样，按照标准程序进行志贺氏菌的测定。
3.判定标准：未检出志贺氏菌为合格，检出志贺氏菌为不合格。
八、大肠埃希氏菌O157:H71.目的：检测化妆品原料中是否存在大肠埃希氏菌O157:H7，预防感染性疾病的发生。
《化妆品微生物》
03 化妆品微生物检测方法与 标准
传统检测方法
菌落总数测定
通过培养菌落并计数，评 估化妆品中的微生物污染 程度。
大肠菌群测定
检测化妆品中是否存在大 肠菌群，以判断产品的卫 生质量。
致病菌检测
针对化妆品中可能存在的 致病菌，如金黄色葡萄球 菌、铜绿假单胞菌等进行 检测。
《化妆品微生物》
contents
目录
• 化妆品微生物概述 • 化妆品中微生物的来源与污染途径 • 化妆品微生物检测方法与标准 • 化妆品微生物控制策略与技术 • 化妆品微生物风险评估与预警 • 未来展望与挑战
01 化妆品微生物概述
微生物定义与分类
微生物定义
微生物是一类形体微小、结构简单、 必须借助显微镜才能看到的生物。 它们广泛存在于自然界中，包括细 菌、真菌、病毒等。
使用效果下降
微生物的代谢产物和死亡细胞残骸 可能导致化妆品的质地、气味等发 生改变，影响使用效果。
02 化妆品中微生物的来源与 污染途径
原料带入
原料本身含有微生物
化妆品原料，如植物提取物、动物源 性成分等，在采集、加工、储存过程 中可能受到微生物污染。
原料处理不当
原料在加工前若未经充分清洗、消毒或 存放时间过长，都可能导致微生物滋生。
快速检测方法
ATP生物发光法
01
利用微生物体内ATP与荧光素酶反应产生荧光的原理，快速检测
化妆品中的微生物数量。
酶联免疫吸附法（ELISA）
02
通过特异性抗体与待测微生物结合，实现快速、灵敏的检测。
分子生物学方法
03
利用PCR、基因芯片等技术，对化妆品中的微生物进行快速、
化妆品微生物检测标准
化妆品微生物检测标准化妆品是人们日常生活中不可或缺的一部分，而微生物污染是化妆品生产中一个不容忽视的问题。
微生物的存在可能会导致化妆品的变质，甚至对人体健康造成危害。
因此，制定和执行化妆品微生物检测标准至关重要。
首先，化妆品微生物检测标准应包括对微生物的种类和数量的要求。
常见的微生物种类包括大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌等。
对于不同种类的化妆品，其微生物种类和数量的标准也有所不同。
比如，对于水基化妆品，其微生物种类和数量的要求可能会更为严格，因为水是微生物生长的良好环境。
因此，制定标准时需要充分考虑到不同种类化妆品的特点。
其次，化妆品微生物检测标准还应包括对微生物检测方法的要求。
目前，常见的微生物检测方法包括菌落总数检测、霉菌和酵母菌检测、大肠埃希氏菌检测等。
这些方法各有优劣，应根据化妆品的特点和实际情况选择合适的检测方法。
此外，还应规定检测的样品数量、检测的频率以及检测结果的评定标准等细节问题，以确保检测结果的准确性和可靠性。
最后，化妆品微生物检测标准还应包括对微生物检测实验室的要求。
实验室应具备一定的技术能力和设备条件，能够进行各种微生物检测方法，并且能够保证检测结果的准确性和可靠性。
此外，实验室还应建立健全的质量管理体系，确保检测过程的可追溯性和可控性。
在制定化妆品微生物检测标准时，应充分考虑到化妆品生产的实际情况和技术水平，避免标准过高导致生产成本的增加，也要避免标准过低导致产品质量无法保证。
同时，还应加强对生产企业的监督检查，确保其严格执行微生物检测标准，保障消费者的安全和权益。
综上所述，化妆品微生物检测标准对于保障化妆品质量和消费者健康至关重要。
只有制定科学合理的标准，并加强监督检查，才能有效地防止化妆品微生物污染问题的发生，为消费者提供安全放心的化妆品产品。
化妆品微生物检验标准
化妆品微生物检验标准化妆品在现代社会中扮演着重要的角色，不仅用于美化外观，还有保养皮肤的功效。
然而，如果化妆品中存在微生物污染，可能会对使用者的健康造成潜在的威胁。
因此，制定和执行化妆品微生物检验标准是确保产品安全性、有效性和质量的关键。
一、什么是化妆品微生物检验标准是指制定和执行用于评估化妆品产品中微生物污染和控制的规范和方法。
这些标准通常由监管机构、行业组织和国际标准化组织确定。
标准的目的是为了保证化妆品的安全性，确保产品在生产、运输和使用过程中不会受到细菌、真菌和其他病原微生物的污染。
二、为什么需要化妆品作为与人体直接接触的产品，其微生物安全性非常重要。
微生物污染可能会导致使用者发生过敏反应、感染或其他健康问题。
此外，微生物的生长还可能导致产品质量恶化，出现异味或腐败现象。
因此，制定和执行化妆品微生物检验标准是确保产品安全、有效和高质量的关键。
三、化妆品微生物检验标准的内容化妆品微生物检验标准通常包括以下内容：1. 产品分类和适用范围：根据产品类型，将不同的化妆品划分为不同的类别。
每个类别都有相应的微生物检验标准适用范围。
2. 抽样和检验方法：确定在何种情况下进行抽样，并选择适当的检验方法。
常见的方法包括培养法、快速检测法和分子生物学技术。
3. 微生物指标：制定可接受的微生物指标，例如总菌落计数、霉菌和酵母菌计数、大肠菌群、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌等。
4. 检测限度：确定微生物指标的最大接受限度。
这些限度通常由相关法规或标准设定。
5. 产品评估：根据检验结果，对产品的微生物安全性进行评估，并采取相应的措施，如改进生产工艺、消灭细菌或重新设计包装。
6. 结果解释：描述如何解释检验结果，包括阳性、阴性和可接受范围的定义。
7. 工厂环境检验：确保生产过程中的卫生条件和环境符合微生物控制的要求，在工厂内进行定期检验。
四、化妆品微生物检验标准的执行和应用化妆品微生物检验标准的执行是由化妆品生产者和监管机构共同负责的。
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一、总则General Principle1 范围本规范规定了化妆品微生物学检验总则。
本规范适用于化妆品样品的采集、保存、供检样品制备。
2 仪器和设备2.1 天平。
2.2 高压灭菌器。
2.3 振荡器。
2.4 三角瓶。
2.5 玻璃珠。
2.6 玻璃棒。
2.7 刻度吸管。
2.8 研钵。
2.9 均质器。
2.10 恒温水浴箱。
2.11 采样用具：不锈钢勺，剪刀，开罐器等。
3 培养基和试剂3.1 生理盐水成分：氯化钠8.5g蒸馏水加至1000 mL溶解后，分装到加玻璃珠的三角瓶内，每瓶90mL，103.43kPa(15 lb)20min高压灭菌。
3.2 SCDLP液体培养基成分：酪蛋白胨17g大豆蛋白胨3g氯化钠5g磷酸氢二钾 2.5g葡萄糖 2.5g卵磷脂1g吐温80 7g蒸馏水1000mL制法：先将卵磷脂在少量蒸馏水中加温溶解后，再与其它成分混合，加热溶解，调pH为7.2～7.3，分装，103.43kPa(15lb)20min高压灭菌。
注意振荡，使沉淀于底层的吐温80充分混合，冷却至25℃左右使用。
注：如无酪蛋白胨和大豆蛋白胨，也可用多胨代替。
3.3 灭菌液体石蜡。
3.4灭菌吐温80。
4 样品的采集及注意事项4.1 所采集的样品，应具有代表性，一般视每批化妆品数量大小，随机抽取相应数量的包装单位。
检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10g或10mL。
包装量小于20g的样品，采样量应适量增加，其总量应大于16g。
4.2 供检验样品，应严格保持原有的包装状态，进口产品应为市售包装。
容器不应有破裂，在检验前不得打开，防止样品被污染。
4.3 接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。
如不能及时检验，样品应放在室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷冻。
4.4 若只有一份样品而同时需做多种分析，如微生物、毒理、化学等，应先做微生物检验，再将剩余样品做其它分析。
4.5 在检验过程中，从打开包装到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散，所用采样用具、器皿及材料均应事先灭菌，全部操作应在无菌室内进行，或在相应条件下，按无菌操作规定进行。
5 供检样品的制备5.1 液体样品5.1.1 水溶性的液体样品，量取10mL加到90mL灭菌生理盐水中，混匀后，制成1:10检液。
5.1.2 油性液体样品，取样品10mL，先加5mL灭菌液体石蜡混匀，再加10mL灭菌的吐温80，在40℃～44℃水浴中振荡混合10min，加入灭菌的生理盐水75mL(在40℃～44℃水浴中预温)，在40℃～44℃水浴中乳化，制成1:10的悬液。
5.2 膏、霜、乳剂半固体状样品5.2.1 亲水性的样品，称取10g，加到装有玻璃珠及90mL灭菌生理盐水的三角瓶中，充分振荡混匀，静置15min。
取其上清液作为1:10的检液。
5.2.2 疏水性样品，称取10g，放到灭菌的研钵中，加10mL灭菌液体石蜡，研磨成粘稠状，再加入10mL灭菌吐温80，研磨待溶解后，加70mL灭菌生理盐水，在40℃～44℃水浴中充分混合，制成1:10检液。
5.3 固体样品，称取10g，加到90mL灭菌生理盐水中，充分振荡混匀，使其分散混悬，静置后，取上清液作为1:10的检液。
如有均质器，上述水溶性膏、霜、粉剂等，可称10g样品加入90mL灭菌生理盐水，均质1min～2min；疏水性膏、霜及眉笔、口红等，称10g样品，加10mL灭菌液体石蜡，10mL灭菌吐温80，70mL灭菌生理盐水，均质3min～5min。
二、菌落总数Aerobic Bacterial Count1 范围本规范规定了化妆品中菌落总数的检验方法。
本规范适用于化妆品菌落总数的测定。
2定义本规范采用下列定义菌落总数(aerobic bacterial count)是指化妆品检样经过处理，在一定条件下培养后(如培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等)，1g(1mL)检样中所含菌落的总数。
所得结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性菌落总数。
测定菌落总数便于判明样品被细菌污染的程度，是对样品进行卫生学总评价的综合依据。
3 仪器和设备3.1 三角瓶。
3.2 量筒。
3.3 pH计或精密pH试纸。
3.4 高压灭茵器。
3.5 试管。
3.6 平皿：直径9cm。
3.7 刻度吸管：10mL、2mL、1mL。
3.8 酒精灯。
3.9 恒温培养箱。
3.10 放大镜。
4 培养基和试剂4.1 生理盐水：见总则中3.1。
4.2 卵磷脂、吐温80—营养琼脂培养基4.2.1 成分：蛋白胨20g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15g卵磷脂1g吐温80 7g蒸馏水1000mL4.2.2 制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80，将其他成分(除琼脂外)加到其余的蒸馏水中，溶解。
加入已溶解的卵磷脂、吐温80，混匀，调pH值为7.1～7.4，加入琼脂，103.43kPa(15 lb)20min高压灭菌，储存于冷暗处备用。
4.3 0.5%氯化三苯四氮唑(2,3,5-triphenyl terazolium chloride,TTC)成分：TTC 0.5g蒸馏水100mL溶解后过滤，103.43kPa(15 lb)20min高压灭菌，装于棕色试剂瓶，置4℃冰箱备用。
5 操作步骤5.1 用灭菌吸管吸取1:10稀释的检液2mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1mL。
另取1mL注入到9mL灭菌生理盐水试管中(注意勿使吸管接触液面)，更换一支吸管，并充分混匀，制成1:100检液。
吸取2mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1mL。
如样品含菌量高，还可再稀释成1:1000，1:10000，……等，每种稀释度应换1支吸管。
5.2 将融化并冷至45℃～50℃的卵磷脂吐温80营养琼脂培养基倾注到平皿内，每皿约15mL，随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，待琼脂凝固后，翻转平皿，置37℃培养箱内培养48h。
另取一个不加样品的灭菌空平皿，加入约15mL卵磷脂吐温80营养琼脂培养基，待琼脂凝固后，翻转平皿，置37℃培养箱内培养48h，为空白对照。
5.3 为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每100mL卵磷脂吐温80营养琼脂中加入1mL0.5%的TTC溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。
6 菌落计数方法先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5～10倍的放大镜检查，以防遗漏。
记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。
若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜计数。
若片状菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘以2，以代表全皿菌落数。
7 菌落计数及报告方法7.1 首先选取平均菌落数在30～300个之间的平皿，作为菌落总数测定的范围。
当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数(见表1中例1)。
7.2 若有两个稀释度，其平均菌落数均在30～300个之间，则应求出两菌落总数之比值来决定，若其比值小于或等于2，应报告其平均数，若大于2则报告其中稀释度较低的平皿的菌落数(见表1中例2及例3)。
7.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300个，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例4)。
7.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30个，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1例5)。
7.5 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300个之间，其中一个稀释度大于300个，而相邻的另一稀释度小于30个时，则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例6)。
7.6 若所有的稀释度均无菌生长，报告数为每g或每mL小于10CFU。
7.7 菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告之，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，应以四舍五入法计算。
为了缩短数字后面零的个数，可用10的指数来表示(见表1报告方式栏)。
在报告菌落数为“不可计”时，应注明样品的稀释度。
表1 菌落计数结果及报告方式三、粪大肠菌群Fecal Coliforms1 范围本规范规定了化妆品中粪大肠菌群的检验方法。
本规范适用于化妆品中粪大肠菌群的检验。
2定义本规范采用下列定义粪大肠菌群(Fecal coliforms)系一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌，在44.5℃培养24h～48h能发酵乳糖产酸并产气。
该菌来自人和温血动物粪便，是重要的卫生指示菌。
3 仪器3.1 恒温水浴箱或隔水式恒温箱：44℃±0.5℃。
3.2 温度计。
3.3 显微镜。
3.4 载玻片。
3.5 接种环。
3.6 电炉。
3.7 三角瓶。
3.8 试管。
3.9 小倒管。
3.10 pH计或pH试纸。
3.11 高压灭茵器。
3.12 刻度吸管：10mL、2mL、1mL。
3.13 平皿。
4 培养基和试剂4.1 双倍乳糖胆盐培养基成分：蛋白胨40g猪胆盐10g乳糖10g0.4%溴甲酚紫水溶液5mL蒸馏水1000mL制法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶解于蒸馏水中，调pH到7.4，加入0.4%溴甲酚紫水溶液5mL，混匀，分装试管(每支试管中加一个小倒管)。
68.95kPa (10 lb)20min灭菌。
4.2 伊红美兰(EMB)琼脂成分：蛋白胨10g乳糖10g磷酸氢二钾2g琼脂20g2%伊红水溶液20mL0.5%美蓝水溶液13mL蒸馏水1000mL制法：先将琼脂加到900mL蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾、蛋白胨，混匀，使之溶解。
再以蒸馏水补足至1000mL。
校正pH值为7.2～7.4，分装于三角瓶内，103.43kPa(15 lb)15min高压灭菌备用。
临用时加入乳糖并加热融化琼脂。
冷至60℃左右无菌操作加入灭菌的伊红美蓝溶液，摇匀。
倾注平皿备用。
4.3 蛋白胨水(作靛基质试验用)成分：蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g氯化钠5g蒸馏水1000mL制法：将上述成分加热融化，调pH值为7.0～7.2，分装小试管，103.43kPa(15 lb)15min 高压灭菌。
4.4 靛基质试剂柯凡克试剂：将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中，然后缓慢加入浓盐酸25mL。
试验方法：接种细菌于蛋白胨水中，于44±0.5℃培养24h。
沿管壁加柯凡克试剂0.3～0.5mL，轻摇试管。
阳性者于试剂层显深玫瑰红色。
注：蛋白胨应含有丰富的色氨酸，每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种鉴定后方可使用。
4.5 革兰氏染色液：4.5.1 染液制备4.5.1.1 结晶紫染色液：结晶紫1g95%乙醇20mL1%草酸铵水溶液80mL将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
4.5.1.2 革兰氏碘液：碘1g碘化钾2g蒸馏水加至300mL将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300mL。