DNA回收试剂盒原理
DNA凝胶回收试剂盒产品说明书
北京四正柏生物科技有限公司网站: 客服热线:400-7060-959技术支持:DNA 凝胶回收试剂盒产品编号规格MDN3066-5050次MDN3066-100100次保存条件及效期：常温运输和保存，保质期一年。
产品描述：本试剂盒用于从琼脂糖凝胶中或DNA 反应体系中(如PCR 反应)回收DNA 片段。
试剂盒采用可以高效、专一结合DNA 的硅胶膜和独特的溶胶体系，或DNA 反应体系中回收的单链、双链及环状DNA ，回收效率可达50-90%(跟片段大小相关)。
得到的DNA 可直接用于连接、转化、酶切、测序、杂交等分子生物学实验。
产品组分：使用方法：1.凝胶回收：切取含DNA 片段的琼脂糖凝胶(100mg 左右，尽可能多地把多余的胶切除，否则会影响回收效率)，放入一干净的1.5ml 塑料离心管(自备)中，用移液枪头捣碎，按重量比为1：3到1：5的比例加入通用溶胶液(100mg 琼脂糖凝胶需要加入300μl-500μl 通用溶胶液)。
PCR 产物回收：直接在PCR 反应管中加3-5倍体积的通用溶胶液，混匀，然后跳过第2步、直接从第3步做起。
如果PCR 反应中使用了石蜡，需要预先去除。
2.50℃保温使胶完全溶化(一般需要5分钟)，其间可以振荡数次以促进琼脂糖凝胶的溶化。
如果片段长度在300bp 成份50次包装100次包装通用溶胶液25ml 50ml 吸附柱活化液25ml 50ml 通用洗柱液50ml 100ml 离心吸附柱50套100套DNA 洗脱液10ml 10ml 说明书1份1份以下，建议不要加热，以免DNA变性，影响回收率。
3.在等待期间，活化离心吸附柱。
在离心吸附柱中加入0.5mL吸附柱活化液，套上收集管后室温放置2分钟，然后12,000rpm离心2分钟，倒弃穿透液，再将吸附柱套上收集管后待用。
活化后的离心吸附柱必须在当天使用。
4.在上柱前，在溶化的胶中加入相当于胶块体积1/2的异丙醇（对100mg胶块，加50uL），快速振荡10秒混匀。
AxyPrep DNA 凝胶回收试剂盒 说明书
AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒本试剂盒适合从各种琼脂糖凝胶中提取多至8 μg DNA（70bp-10Kb），回收率为60-85%。
琼脂糖凝胶在温和的缓冲液(DE-A溶液)中溶解，其中的保护剂能防止线状DNA在高温下降解，然后在DE-B溶液的作用下使DNA选择性结合到膜上。
纯化的DNA纯度高，并保持片断完整性和高生物活性，可直接用于连接、体外转录、PCR扩增、测序、微注射等分子生物学实验。
一、试剂盒组成、贮存、稳定性说明书，耗材：DNA制备管、2 ml离心管、1.5 ml离心管。
Buffer DE-A：凝胶熔化剂，含DNA保护剂，防止DNA在高温下降解。
室温密闭贮存。
Buffer DE-B：结合液（促使大于70 bp的DNA片段选择性结合到DNA制备膜上）。
室温密闭贮存。
若出现沉淀，应于70°C温育溶解并冷却至室温后再使用。
Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate：去盐液，使用前，根据瓶上数量加入乙醇，混合均匀，室温密闭贮存。
可用100%无水乙醇或95%乙醇。
Eluent：2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5，室温密闭贮存。
二、注意事项1. 在步骤1中，将凝胶切成细小的碎块可大大缩短凝胶熔化时间（线型DNA长时间暴露在高温条件下易于水解），从而提高回收率。
勿将含DNA的凝胶长时间地暴露在紫外灯下，减少紫外线对DNA 造成的损伤。
2. 在步骤2中凝胶必须完全熔化，否则将严重影响DNA回收率。
3. 将Eluent或水加热至65°C，有利于提高洗脱效率。
4. DNA分子呈酸性，建议在2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5洗脱液中保存。
三、实验准备1. 第一次使用前，Buffer W2 concentrate中加入指定体积的无水乙醇。
2. 准备无核酸和核酸酶污染的Tip头、离心管。
3. 准备75°C水浴。
四、操作步骤1. 在紫外灯下切下含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面液体并切碎。
胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理
胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理首先，将含有目标DNA片段的琼脂糖凝胶切割出来。
这可以通过电泳将DNA片段从DNA混合物中分离出来，然后在紫外灯下观察到DNA片段的迁移带。
然后，将切割的琼脂糖凝胶用试剂盒提供的缓冲液进行均质化处理。
均质化后的琼脂糖凝胶中含有目标DNA片段。
接下来，使用离心机将均质化后的琼脂糖凝胶离心。
离心的目的是将琼脂糖凝胶上的DNA片段分离出来。
DNA片段会沉积到离心管底部的沉淀中。
上清液中则只含有琼脂糖凝胶、缓冲液和其他杂质。
然后，将离心管中的上清液去除。
去除上清液的目的是除去琼脂糖凝胶的残余和其他杂质，以便纯化DNA片段。
最后，向离心管中加入酶切缓冲液和蛋白酶。
酶切缓冲液包含酶切DNA片段所需的盐和缓冲成分，以及一些防止核酸降解的物质。
蛋白酶则会降解琼脂糖和与其结合的蛋白质。
在将酶切缓冲液和蛋白酶加入后，离心管需要在适当的温度下进行酶切反应。
酶切反应的目的是分解凝胶中的琼脂糖和与其结合的蛋白质，从而释放出目标DNA片段。
在酶切反应完成后，离心管需要再次进行离心，以将琼脂糖和其他残留物沉淀到离心管底部。
上清液中则含有纯化后的DNA片段。
最后，将离心管中的上清液转移至干燥消化DNA纯化膜（试剂盒中提供），并根据试剂盒的说明进行后续的DNA回收操作。
根据不同试剂盒的要求，DNA可以通过洗涤、低温离心或其他方法进行最终的回收。
总的来说，胶回收DNA试剂盒的原理是通过离心法和蛋白酶酶解法将凝胶上的目标DNA片段回收，以获得纯化后的DNA样品。
这一方法简单有效，可以应用于分子生物学和生物医学研究中的DNA分析和操作。
PCR产物的克隆(DNA的胶回收和连接)技术方案及实验原理
PCR产物的克隆(DNA的胶回收和连接)技术方案及实验原理【实验原理】1.DNA片段回收方法：DNA片段在适当浓度的琼脂糖凝胶中，通上一定电压进行电泳，不同大小的DNA分子由于迁移率的不同而分离开。
切下带有所需DNA 片段的凝胶，用冻融法、玻璃奶回收法或商品化胶回收试剂盒将目的片段回收纯化。
2.利用Taq酶能够在PCR产物的3’末端加上一个非模板依赖的A，而T载体是一种带有3’T突出端的载体，在连接酶作用下，可以把PCR产物插入到质粒载体的多克隆位点，可用于PCR产物的克隆和测序。
商品化的T载体有很多。
本实验采用TaKaRa公司的pMDTM18-T Simple Vector。
这个载体以pUC19载体为基础，消除了pUC18载体上的多克隆酶切位点，经EcoRⅤ酶切后在两侧的3＇端添上“T”制备而成（见附录1）。
由于本载体上消除了多克隆酶切位点，克隆后的PCR产物将无法使用载体上的限制酶切下，需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。
【试剂与器材】（一）试剂1.pMDTM18-T Simple Vector Kit（Takara公司）。
2.TAE电泳缓冲液3.琼脂糖（Agarose）4.6×电泳加样缓冲液：0.25％溴粉蓝，40％(w/v) 蔗糖水溶液，贮存于4℃。
2 / 95.溴化乙锭(EB)溶液母液：配制成10mg/mL，用铝箔或黑纸包裹容器，储于室温即可。
6.70%乙醇7.胶回收试剂盒（Omega公司）（二）器材水平式电泳装置,电泳仪,台式高速离心机, 恒温水浴锅, 微量移液枪, 微波炉或电炉,紫外透射仪, 凝胶成像系统或其它照相设备。
【操作方法】（一）胶回收试剂盒回收PCR产物（以Omega公司Gel Extraction Kit为例）1.当目的片段DNA完全分离时，转移凝胶至紫外灯上尽可能快地切下目的片段。
2.凝胶块转移至1.5ml离心管(离心管已经称重了)中，称重得出凝胶块的重量。
从琼脂糖凝胶中回收DNA
五、实验结果与讨论
1. 实验结果 2. 讨论
附I： TaKaRa Agrose Gel DNA Purification Kit Ver2.0回收DNA 的操作步骤
1. 使用TAE或TBE缓冲液制作琼脂糖 凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖 凝胶电泳。 2. 在紫外灯下切出含有目的DNA的琼 脂糖凝胶。应注意尽量切除不含目 的DNA部分的凝胶，尽量减少凝胶 体积，提高DNA回收率。 注: 切胶时不要将DNA长时间暴露 于紫外灯下，以防DNA损失。
五、注意事项
切胶时不要将DNA长时间暴露于紫外灯下， 以防DNA损失。 胶块一定要充分融化,否则会严重影响 DNA的回收率。 混合振荡操作不要过于剧烈。 灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60゜C 使用时有利于提高洗脱效率。 DNA需长期保存时，建议使用Elution Buffer。 纯化的DNA用于序列分析时，最好使用灭 菌的双蒸水进行DNA的洗脱。
四、百泰克DNA回收试剂盒 回收DNA的操作步骤
1. UV下切下DNA条带，尽量切除不含 DNA的凝胶； 2. 将切下的胶块放入1.5ml EP 管中，称 重； 3. 加2倍体积的溶胶/结合液DB(如凝胶重 0.1g，加200μl DB溶胶液)； 4. 56℃水浴4-6 min 至胶完全溶解，每2 min涡旋震荡一次帮助加速溶解 ； （每100mg最初的凝胶重量加150ul的异 丙醇，震荡混匀）
3. 切碎胶块，可加快步骤6的胶块 融化时间，提高DNA回收率。
4. 称量胶块重量，计算胶块体积。 以1mg=1µ L进行计算。
5. 向胶块（1%）中加入3个凝胶体 积量的胶块融化液DR-1 Buffer。 6. 混合均匀后75゜C加热融化胶块。 并间断振荡混合，使胶块充分融 化（约6-10分钟）。
PH0208 琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒实验操作步骤原理
片段未回收或回收率低
凝胶体系 pH 太高
太高，DNA 不能与吸附柱有效结合，用少量 NaAc pH2.5 将溶液颜色调至黄色 吸附柱上的 DNA 在低盐和高 PH 条件下被有
洗脱缓冲液 pH 不合适
效洗脱。其最大洗脱率 PH 在 7.0-8.5 之间。 如用灭菌水洗脱，保证 PH 在其范围内 洗脱体积不能低于 30ul，并保证洗脱液加到 吸附柱中间位置 紫外线对 DNA 的破坏会导致连接后的转化
使用参考
如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 1. 将单一的目的 DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的离心管中，称取重量。 2. 向胶块中加入 3 倍体积溶胶液 PN （如果凝胶重为 100mg，其体积可视为 100 ul，则加入 300 ul 溶胶液），55℃水浴放置 10 分钟， 其间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。
琼脂糖凝胶常见问题分析
常见问题
可能原因 漂洗液 PW 中未加入无水乙醇或加入的比例 不正确
建议 首次使用请严格按照标签说明加入无水乙 醇；用完后盖紧瓶盖，以防乙醇挥发 按照凝胶重量与溶液 PN 的体积比为 1:3 加
凝胶没有完全溶解
入溶胶液，并在融化过程中间歇混匀使凝胶 完全融化 如果凝胶体系变为粉红色， 说明溶胶体系 pH
试剂组分
Componets 溶胶液 PN 3M NaAc pH5.2 漂洗液 PW 洗脱缓冲液 EB 吸附柱 CA1 收 mL 100 个 100 个 1份 200T 200 mL 500μl 2×25 mL 15 mL 2×100 个 2×100 个 1份
注意： a) 吸附柱 CA1 的有效容积为 700μl，如溶胶体系体积大于 700μl，分次上柱，保证全部溶液都加到吸附柱中。 b) <100bp 和>10kb 的片段请在室温放置 10 分钟，这将会提高回收效率。 5. 向吸附柱中加入 700μl 漂洗液 PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），13,000 rpm 离心 60 秒，倒掉废液，将吸附柱重新放入收 集管中。 6. 向吸附柱中加入 500μl 漂洗液 PW，13,000 rpm 离心 30-60 秒，倒掉废液。 7. 将离心吸附柱 CA1 放回收集管中，13,000 rpm 离心 2 分钟，尽量除去漂洗液。 注意：此步必不可少！如果漂洗液有残留会影响回收效率和 DNA 质量，进而影响下游实验；离心后将吸附柱盖子打开，室温放置 2 分钟， 这样将有助于彻底挥发残余乙醇。 8. 将吸附柱放到一个干净离心管中， 向吸附膜中间位置悬空滴加适量洗脱缓冲液 EB （一般不要少于 30μl） ， 室温放置 2 分钟。 13,000 rpm 离心 1 分钟收集 DNA 溶液。 注意： a) 可将洗脱缓冲液 EB 预热到 70℃后再加到吸附膜上，这样可以提高洗脱效率。 b) CA1 柱的洗脱体积不应少于 30 μl，体积过小将会降低回收效率。 c) 洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率 9. DNA 产物-20℃保存。
快速凝胶回收实验报告
一、实验目的本实验旨在通过快速凝胶回收方法，从琼脂糖凝胶中回收目的DNA片段，为后续的PCR扩增、酶切、连接等分子生物学实验提供高质量的模板DNA。
二、实验原理凝胶回收是分子生物学实验中常用的技术之一，主要用于从琼脂糖凝胶中回收目的DNA片段。
本实验采用的方法是利用琼脂糖凝胶中的DNA片段在低盐、高pH值条件下，可被特定的吸附剂（如硅胶膜、磁珠等）特异性吸附的特性，通过简单的操作步骤，将目的DNA片段从凝胶中分离、纯化。
三、实验材料1. 琼脂糖凝胶2. 目的DNA片段3. DNA回收试剂盒（含吸附剂、缓冲液等）4. 1.5 mL离心管5. 离心机6. 电泳仪7. 凝胶成像系统四、实验方法1. 准备琼脂糖凝胶电泳，将目的DNA片段与载体DNA混合，加入琼脂糖凝胶中，进行电泳分离。
2. 将电泳后的凝胶在紫外灯下观察，确定目的DNA片段的位置。
3. 使用DNA回收试剂盒中的吸头，将目的DNA片段从凝胶中剪下。
4. 将剪下的凝胶片段放入1.5 mL离心管中，加入适量的缓冲液，用吸头充分混匀。
5. 将混匀后的离心管置于离心机中，以12,000 rpm离心5分钟，使DNA片段吸附在吸附剂上。
6. 弃去上清液，用缓冲液洗涤吸附剂，重复洗涤步骤2次。
7. 将洗涤后的离心管置于离心机中，以12,000 rpm离心3分钟，使DNA片段充分沉淀。
8. 弃去上清液，加入适量的TE缓冲液，用吸头充分混匀，使DNA片段溶解。
9. 使用凝胶成像系统观察DNA片段的回收情况。
五、实验结果与分析1. 电泳结果显示，目的DNA片段成功从琼脂糖凝胶中回收。
2. 凝胶成像系统显示，回收的DNA片段大小与预期相符。
3. 回收的DNA片段纯度较高，可用于后续的PCR扩增、酶切、连接等分子生物学实验。
六、实验讨论1. 本实验采用快速凝胶回收方法，操作简便，节省时间，适用于大量样品的回收。
2. 实验过程中，应注意以下几点：a. 凝胶回收时，应确保目的DNA片段在凝胶中的位置准确。
胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理
胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理胶回收DNA试剂盒是一种常用的分子生物学实验工具，用于从琼脂糖凝胶中回收纯化DNA的方法。
其原理主要基于琼脂糖凝胶电泳的分离特性和DNA与硅胶膜亲和吸附的原理。
下面将详细介绍胶回收DNA试剂盒的原理和方法。
1.原理：1.1琼脂糖凝胶电泳分离：首先，将DNA样品与琼脂糖混合并加热使其溶解后，将混合物加入琼脂糖凝胶槽中，随后进行电泳。
由于琼脂糖具有分子筛的特性，DNA分子根据大小被分离在凝胶中的不同位置。
1.2硅胶膜吸附：电泳结束后，将琼脂糖凝胶取出，然后将硅胶膜放置在凝胶表面，使其与DNA分子接触。
由于硅胶膜具有强烈的亲和吸附性，它能够有效地吸附DNA分子。
1.3洗脱纯化：在硅胶膜上吸附的DNA分子可以通过洗脱的方式从硅胶膜上释放出来。
一般情况下，通过使用适当的缓冲液可以将DNA洗脱出来，得到纯化的DNA样品。
2.方法：2.1样品制备：将待分离和纯化的DNA样品进行适当的制备处理，如酶切产生的片段、PCR扩增产生的产物等。
根据需要，可以使用酶切缓冲液、PCR停止液等添加剂来优化样品的制备。
2.2琼脂糖电泳：将样品加入琼脂糖凝胶槽中，通过电泳操作进行DNA分离。
根据需要，使用适当的电泳缓冲液和电泳条件来获得所需的分离效果。
2.3硅胶膜吸附：电泳结束后，取出琼脂糖凝胶，将硅胶膜放置在凝胶表面，使其与DNA分子接触。
根据实验要求，可以根据需要对硅胶膜进行预处理，如加热、孵育等。
2.4洗脱纯化：通过使用适当的洗脱缓冲液，将硅胶膜上吸附的DNA 洗脱出来。
通常，洗脱缓冲液中包含盐和其他成分，以提高DNA的纯度和回收率。
2.5最终保存：将洗脱的DNA样品进行适当的保存和处理。
根据实验需求，可以进行浓缩、冻干或直接用于后续实验。
总结：胶回收DNA试剂盒通过利用琼脂糖凝胶电泳分离DNA，并利用硅胶膜的亲和吸附性，实现了从琼脂糖凝胶中回收纯化DNA的目的。
这种方法简便易行，能够在短时间内获得高质量的DNA样品，广泛应用于分子生物学研究和实验室应用中。
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DNA回收试剂盒原理
摘要：回收试剂盒的原理是在特定溶液环境下（高盐、低pH)使核酸吸附在固相介
质（一般是硅胶膜）上，洗涤去除杂质后，洗脱得到纯的DNA片段。
回收试剂盒的原理是在特定溶液环境下（高盐、低pH)使核酸吸附在固相介质（一般是硅胶膜）上，洗涤去除杂质后，通过改变溶液环境使DNA溶解到纯水或TE（低盐、高pH）中进行洗脱，可去除PCR反应中的dNTPs、引物、矿物油和聚合酶等及DNA样本中的其它杂质，得到的DNA片段可用于酶切、连接、测序、PCR反应模版等后续操作。
目前的回收试剂盒主要有离心柱型和磁珠型两种，离心柱型主要是通过将硅胶膜固定在离心管中，让含有核酸的溶液用离心力或者负压让液体通过硅胶膜，使核酸在特定溶液环境中吸附在硅胶膜上，经过洗涤、洗脱等步骤得到纯的核酸。
目前大多数的生物试剂公司生产的回收试剂盒主要是采用该方法来回收核酸，这种方法操作简单、时间短。
目前也有很多公司采用磁珠法来提取，不需要离心，可以用于自动化操作。
回收试剂盒可以从琼脂糖凝胶（TAE、TBE）、聚丙烯酰胺凝胶或酶切、PCR等产物中回收DNA片段，根据DNAP片段来源，按照DNA来源上可以分为PCR纯化回收试剂盒、琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒和聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒这三类。
如果片段大小在50bp-50kb之间，且片段单一，可以采用 PCR纯化回收试剂盒，可以节约跑电泳的时间以及紫外对DNA的破坏，如果片段不是单一条带，可以采取琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒，可以切取单一的条带来进行DNA片段的回收。
如果需要回收片段更小的DNA片段，可以使用聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒来进行。