抗体筛查试验室内质控品制备和日常检测典型案例分析
实验室内质量控制样品研制实例：药物质控样
附录E（资料性）案例5-药物质控样11）E.1 前言药物研发和商业化过程中建立质控样是一项非常复杂的任务，需要深入理解（整个过程）。
在此过程的起始阶段，制药企业需要考虑建立质控样以评估原材料、加工过程的杂质、中间产物、代谢产物、降解产物和活性药物成分（APIs）【25】等。
候选药物研发的每一个阶段都需要质控样，以保证最终的药物产品具有最高的品质。
如果没有官方的质控样，制药企业往往需要建立内部质控样。
用于质控样生产的原料采集和制备是一项非常艰巨的任务，有时需要的量非常大。
高品质的质控样要求苛刻、生产昂贵，因此如果通过其他渠道能够得到的话，实验室就不必自己去制备了。
然而，如有必要，可为非专业实验室提供指南，指导其制备质控样用于质量控制。
需要考虑的关键问题包括：原料的选择（适宜性，本地材料或混合材料，材料制备等）、可追溯性、测试结果、制备和包装（均匀匀性、受污染程度等），稳定性测试、价值分配活动、不确定性评估、文件记录、赋值审核机制、贮藏与分销等。
需要注意的是生物制剂（大分子）并不在该指南的范围内。
E.2 药厂建立质控样时总体的选择准则E.2.1 概述选择一个材料作为参考质控样的准则非常复杂，依赖于多种因素，目前为止并没有解决这个问题的妙法，每种情况都有差异。
以下是选择质控样的总体流程，以及一个药物企业选择标准的特定示例。
原材料收集之后需要经过大量的前处理过程，以保证材料具有合适的均匀性和稳定性以达到预期目标。
通过干燥去掉水分和溶剂是一些普遍的步骤，从而保证材料更容易处理并提高稳定性。
去掉水分同时能够降低微生物生长的可能性，尤其是对于生物材料尤其是一个特定的问题，通常会采取冷冻干燥的方式。
需要注意的是这篇文章的范畴仅局限于小的有机质控样。
磨样之后过筛是另外一个附加步骤，用于提高材料的均匀性。
大体积的固体材料需要通过彻底的混合以保证均匀。
有些分析物可能不太稳定，这需要加入合适的盐来稳定材料。
E.2.2 原料的规范质控样的制备过程须采用最常见的合成工艺，产生最高的纯度和最少的外部成分，如残留溶剂和重金属等。
免疫室室内质控方法分析
免疫室室内质控方法分析室内质控的目的是监测测定过程，当出现医学上重要的误差时，用适当的质控方法警告分析人员。
一般来说，实验室通过测定质控品来检查检验结果的质量，并将质控结果画在质控图上，观察质控结果是否超过质控限来决定是否失控。
实验室最常用的是Levey-Jennings质控图，由于样本数量和检验成本的限制也可采用“即刻法”质控图进行外部质量评价。
一、室内质控的实际操作步骤二、1 设定靶值1.1 稳定性较长的质控品在开始室内质控时，首先要设定质控品的靶值。
各实验室应对新批号的质控品的各个测定项目自行确定靶值。
靶值必须在实验室内使用自己现行的测定方法进行确定。
定值质控品的标定值只能做为确定靶值的参考。
1.1.1 暂定靶值的设定为了确定靶值，新批号的质控品应与当前使用的质控品一起进行测定。
根据20或更多独立批获得的至少20次质控测定结果，计算出平均数，作为暂定靶值。
以此暂定靶值作为下一个月室内质控图的靶值进行室内质控；一个月结束后，将该月的在控结果与前20个质控测定结果汇集在一起，计算累积平均数（第一个月），以此累积的平均数做为下一个月质控图的靶值。
重复上述操作过程，连续三至五个月。
1.1.2 常用靶值的设立以最初20个数据和三至五个月在控数据汇集的所有数据计算的累积平均数作为质控品有效期内的常用靶值，并以此作为以后室内质控图的平均数。
对个别在有效期内浓度水平不断变化的项目，则需不断调整靶值。
1.2 稳定性较短的质控品在3-4天内，每天分析每水平质控品3-4瓶，每瓶进行2-3次重复。
收集数据后，计算平均数、标准差和变异系数。
对数据进行异常值检验。
如果发现异常值，需重新计算余下数据的平均数和标准差。
以此均值作为质控图的靶值。
2 设定控制限对新批号质控品应确定控制限，控制限通常以标准差倍数表示。
2.1 稳定性较长的质控品2.1.1 暂定标准差的设定为了确定标准差，新批号的质控品应与当前使用的质控品一起进行测定。
临床免疫定性试验室内质量控制-郝崇华
三、临床免疫定性试验的性能指标
• CLSI文件规定：
– 1 灵敏度（分析和诊断） – 2 特异性（分析和诊断） – 3 符合率（诊断效率） – 4 重复性（总不精密度）
三、临床免疫定性试验的性能指标
(一)灵敏度(sensitivity )
（1）分析灵敏度（Analytical sensitivity）：一实验的测定反 应对待测物质浓度变化的改变。(即测量示值变化除以相应 的被测量值变化所得的商)。表述是指可以将样品中分析物 检出的最少分析物的量。
• 对于FDA等批准家庭使用的技术，只要求检测装置有内 对照，检测结果满足说明书规定即可；
• 对于需要经验来判定结果的技术仍需在实验室进行，均 有质控的要求，但国际上无具体操作的规定和资料。
• 根据显色或发光直接判定阴阳性的技术，如金标 试纸，美国CDC在“CLIA’88豁免的HIV抗体快 速检测的质量保证指南<2007年版> ”中要求：除 检测装置的内对照外，每检测日或分析批，应使 用弱阳性和阴性外对照作为质控。无判定标准， 一般理解为阴、阳性质控的检测结果分别为阴性 和阳性即表明在控，相反则为失控。
一、质控的目的
• 室内质控是由实验室的工作人员采用一 系列统计学的方法，连续地评价本实验室 测定工作的可靠程度。室内质控的目的是 检测、控制本实验室测定工作的精密度， 并检测其准确度的改变，提高常规测定工 作的批间、批内标本检测结果的一致性 ， 以确定检验报告是否可靠、能否发出的一 项工作。
二、临床免疫检测类型
Levey-Jennings设定靶值和控制限
稳定性较长（效期通常1年以上）的质控品 根据20次或更多次获得的质控测定结果，计 算出均值和标准差,进行离群值检验（剔除 超过3S外的数据），再计算出均值和标准差 ，作为暂定靶值和标准差。
HIV抗体筛查实验室质量控制
2020/8/14
宿迁市疾病预防控制中心
2020/8/14
宿迁市疾病预防控制中心
HIV抗体检测技术要求
建立标准操作程序
禁止肉眼判读！
保证酶标仪，洗板机正常运转 保证加样器准确 选择高质量的与加样器配套的TIP头 使用有效期内的试剂 保证样品质量
❖ 用两种试剂但是每种试剂检测只做一次
❖ 复检概念模糊（试剂A+试剂A+试剂B）
试剂A+试剂B+试剂A ×
试剂A+试剂B+试剂B ×
阴性标本复检
×
❖ 无批批检证书
❖ 临界值（CUTOFF值）计算错误
2020/8/14
宿迁市疾病预防控制中心
规范要求
❖《全国艾滋病检测技术规范》（2004年版） 第二章 HIV抗体检测〔第3－6页〕
2020/8/14
宿迁市疾病预防控制中心
影响ELISA测定的因素
❖ 试剂盒的因素： 妥善保存试剂，在有效期内使用
❖试验操作
形成良好的操作习惯：加样时应将所加物加在ELISA 板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出， 不可产生气泡。 严格按试剂说明书操作:空白孔不加样品和酶标试剂 操作过程中集中精力：避免加样错误
2020/8/14
宿迁市疾病预防控制中心
质控报告
❖ 封皮 ❖ 考评结果报告单 ❖ 原始记录（三次） ❖ 质控图框架数据（框架） ❖ 质控图（不同试剂分开做质控图） ❖ HIV抗体阴性报告 ❖ HIV抗体复检化验单 ❖ 试剂批批检证书、试剂说明书 ❖ 封底
2020/8/14
HIV抗体筛查试验室内质控品制备和日常检测典型案例分析20120414
批号
样本 ID
检测日期
初筛
复检1
WB带型
北京大学 人民医院
3月6日
雅培发光： 25
梅里埃、 万泰3代：
<0.1
未送检
人民医院 121176
3月13日
梅里埃3代: 1.6
万泰3代: 0.32
p17 gp120 gp160
地坛医院 121631
4月10日
梅里埃4代: 2.9
万泰4代: 0.66
p24 gp41 gp120 gp160
以发烧、腹泻住院治疗； 检验科雅培化学发光：S/CO值29；送肝病
研究所复核阴性（梅里埃、万泰，三代）； 主治医生比较负责任，采血继续送检，梅
里埃（1.9）、万泰（0.3），均阳性；CD4 细胞计数和CD4/CD8比值偏低； 地坛医院皮肤科就诊，送检确证。
化学发光试剂应用案例1（续）
北京大学人民医院&地坛医院 韩××，山东青岛人,19岁，MSM
121518 4月10日
万泰4代: 1.89
梅里埃4代： 2.05
p17 p24 p31 gp41 p51 p55 p66 gp120
gp160
雅培：2.51 万泰4：0.013
一个月后， 梅里埃4：1.81 万泰4：1.49
部分单位送检样本确证结果分析
初筛试剂
筛查阳 确证阳 性性
确证阴性 确证可疑 （%） （疑似感染）
➢ HIV 抗体阴性混合血清：筛查试验阴性；
➢ 用阴性血清稀释阳性混合血清，筛查试验确定最高 稀释度稀释倍数：103-105；
➢ -20℃保存；
李红星（商丘市卫生防疫站）； 河南预防医学杂志，2005；16:133-135.
ELISA检测HIV抗体室内质控血清的制备与应用分析
ELISA检测HIV抗体室内质控血清的制备与应用分析目的探讨分析ELISA检测HIV抗体室内质控血清的制备与临床应用。
方法应用ELISA对我血库收集的血液标本32000份进行HIV抗体检测；同时选择正常人群血清与试剂盒内HIV阳性血清混合稀释，混合恰当比例，冷藏保存使用；同时将自制的质控血清保存1～12个月，对其均匀性、精确性及稳定性进行评价。
结果ELISA法检测结果显示阳性115例，阳性率为0.36%，实际上HIV 抗体为阳性共120例，漏诊率为0.016%；研究结果显示正常人群的血清与试剂盒内HIV阳性血清以10：1的比例进行混合最为恰当；对自制的质控血清为期1～12个月的观察，发现其均匀性、S/CO值、准确性12个月的差异不显著（P＜0.05），无统计学意义。
结论ELISA在HIV抗体的检测中具有较高的准确度，且检测结果能够在短时间内反映，值得临床推广应用；同时发现自制质控血清经济方便，且具有稳定性高的优点，具有较大的应用前景。
标签：ELISA；HIV抗体；质控血清HIV指人类免疫缺陷病毒，HIV病毒对人体的免疫系统造成破坏进而削弱机体的免疫抵抗力，造成健康人群患上获得性免疫缺陷综合征，感染HIV的途径主要包括血液传染、性交、母婴传播。
现阶段，临床上对于艾滋病的治疗尚无显著进展，患者大都以死亡告终，其对人类的身体健康和生命安全产生极大的威脅，引起了国内外医学的高度重视[1]。
目前，艾滋病主要以早发现及早控制为主，ELISA法在HIV抗体的检测中作用显著，然而有诸多因素会导致其检测结果出现偏差，故进行室内控制十分有必要，本文旨在探讨分析ELISA检测HIV抗体室内质控血清的制备与临床应用，具体信息如下。
1 资料与方法1.1一般资料由上海纪宁实业有限公司提供的人抗人类免疫缺陷病毒抗体（HIV）酶联免疫试剂盒；由北京万泰生物药业有限公司提供的HIV抗体试剂盒，批准文号：国药准字S2*******；由卫生部临检中心提供的临界值质控血清，批号为NCCL 070049；由深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司提供的酶标仪。
ELISA检测HIV抗体室内质控血清的制备与应用
［］壶垂亘！变垂蚴：ｉ墨墼！鳗生！亘塑圆亟匦画［］
由于很多因素都会影响到ＥＬＩＳＡ法检测结果的准确性． 所以每次检测都应进行室内质控【ｌｌ。我们试制了抗一ＨＩＶ室内 质控血清．并与卫生部临床检测中心生产的ＨＩＶ抗体室内质 控血清进行了对照．考核了其精密性、均匀性和稳定性。现报
告如下．
血清稀释成低值弱阳性．分别以每管０．５ｍ１分装，置一２０℃保 存备用。检测方法分别按照说明书操作步骤严格执行。 １．３统计学处理采用统计学软件ＳＰＳＳ １２．０建立数据库． 通过ｔ检验和卡方检验，以Ｐ＜Ｏ．０５差异有统计学意义。
近的弱阳性外部对照质控血清，反应强度的变化很容易观俨＞ｏ．０５）。提示自制质控血清和标准质控血清的准确性无明 测，并且能指示出改变的检测能力，即能显示半定最分析或 定性分析上的假阴性结果或误差。为了确保ＨＩＶ抗体检测的 显差异。通过两种试剂盒对随机抽取的ｌＯ支自制质控血清 进行测定，ＣＶ分别为１２．１％和１０．８％。与标准（下转第５６８页）
万方数据
・５６８・
第２７卷第５期
２００９年ｌＯ月
实
验
与
检
验
医
学
ＭＥＤＩＣＩＮＥ
Ｖ０１．２７ Ｎｏ．５ Ｏｃｔ．２００９
ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ
ＡＮＤ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ
正常的上呼吸道有许多常居菌寄生。如鼻咽部的大量甲 型溶血性链球菌、奈瑟氏菌属、类白喉棒状杆菌、卡他布兰汉 菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡葡球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈 瑟菌、流感嗜血杆菌及真菌等。在正常情况下．这些细菌是不 致病的。但是在机体全身或局部抵抗力减低或其他外因影响 下。它们可以致病，并可以侵入下呼吸道引起感染。另外，在 上呼吸道标本的微生物学检验中．几乎每一份日Ｉ！Ｉ拭子都是有 菌的．分离出来的病原微生物是否与疾病有关．需要临床医 生和微生物学检验人员共同根据病原微生物的特点及其检 出数量，病人的临床症状等各方匝综合分折．以作出正确判 断１１Ｉ。 新生儿由于本身的特点．非特异性免疫及特异性免疫功 能均有一定的缺陷。与成年人相比．新生儿的抵抗力较弱．对 细菌、病毒等医院感染不易局限．此诸多方面造成新生儿的 易感性。胎儿和新生儿对感染的高度易感性主要是免疫功能 发育不全１２ｌ：新生儿呼吸道管腔狭窄、黏膜柔软、衄管丰富、纤 毛运动差。易致气管阻塞、感染：呼吸困难及拒乳；同时皮肤 黏膜薄弱易损伤、脐残端未完全闭合．离血管近，细菌易进入
ELISA检测HIV抗体的实验室内质量控制
［ 关键词］ % C@9 抗体；获得性免疫缺陷综合征；质量控制 ［ 中图分类号］ % EDF# G DD% % ［ 文献标识码］ % B% % ［ 文章编号］ % !HI! G IIJD （ #$$" ） $! G $$II G $#
% % 艾滋病的流行给人类的健康、 生命安全以及经 济社会发展带来了严重影响， 要了解和掌握 C@9 的 感染情况， 关键就是实验室的检测技术， 而 C@9 抗 体的检测是目前获得性免疫缺陷综合征 （ 艾滋病） 诊断中最常用的方法， 因此， 提高实验室检测的准确 性， 减少假阳性和假阴性反应的发生， 对诊断艾滋病 十分重要。为了更准确、 更严谨地出示检测报告， 本 室进行了 >?@AB 检测 C@9 抗体的室内质量控制， 现 将质控过程报告如下。 !% 材料与方法 !: !% 材% 料 C@9 G ! K # 型抗体 >?@AB 诊断试剂盒： 丽珠集团 生物制品有限公司， 所用试剂盒及质控血清均在有 效期内。 质控标准血清： 包括内部对照质控血清和外部 对照质控血清。内部对照质控血清指试剂盒内提供 的阳性和阴性对照血清。内部对照是质控的基础。 外部对照质控血清是为了监控 C@9 抗体检测的重 复性和稳定性以及试剂盒批间差异而由实验室设置 的一个弱阳性对照血清， 以试剂盒临界值 （ 8(4L’-- ） 的 # M D 倍 为 宜。用 C@9 抗 体 阴 性 血 清 梯 度 稀 释 C@9 抗体强阳性血清 （ "HN D$ O.* 灭活） 并标定后 得到， 按一年使用量配制， 一周实验用量分装、 标记、 封口， G #$N 冷存。不可反复冻融， 一旦融化后应该 存放 # M JN ， 一周内使用。 !: #% 实验室设备标准 P.’83,, #$!$ 酶标仪： 本室根据质量手册的要求， 定 期进行期间检查， 并详细填写期间检查记录。P.’8.,, B*4Q’0 <,(.7’ !"I" 微孔洗板器： 本室严格按照作业指 导书操作规程进行自校准， 有自校准报告。恒温培养 箱： 调节并控制温度在 DIN 左右。微量加样器： 均经常 洲计量所检定合格， 并在检定周期 （! 年） 内使用。 !: D% 操% 作 严格按照作业指导书的操作规程进行操作。加
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
结论 HIV 抗体阳性血清梯度稀释系列可用于实验室 质控和试剂评价。但灵敏度的合适范围还需继续探 讨。
李红星（商丘市卫生防疫站）； 河南预防医学杂志，2005；16:133-135.
北京大学人民医院肝病研究所联 系电话：88325729
化学发光试剂应用案例1
韩××，山东青岛人,19岁，MSM 2012年3月初，到北京大学人民医院呼吸科，
备注
华信
罗氏化发 70
10
41（58)
19（3）
阴性，Max:21；可疑, Max:7.8；阳性,Min:171
望京 梅里埃4代 36 5 23（63) 8（3）
中日
金豪 58 30 14（24) 14（5）
罗氏化发 71 12 31（43) 28（4）
以发烧、腹泻住院治疗； 检验科雅培化学发光：S/CO值29；送肝病
研究所复核阴性（梅里埃、万泰，三代）； 主治医生比较负责任，采血继续送检，梅
里埃（1.9）、万泰（0.3），均阳性；CD4 细胞计数和CD4/CD8比值偏低； 地坛医院皮肤科就诊，送检确证。
化学发光试剂应用案例1（续）
北京大学人民医院&地坛医院 韩××，山东青岛人,19岁，MSM
调制针对生物梅里埃（3代）_1
材料 ➢ 抗-HIV阳性灭活血清（可IV阴性的血清（可用梅里埃试剂盒中的
阴性对照）或20%小牛血清； ➢ 2 mL冻存管； ➢ 生物安全柜； ➢ 酶免仪、微量进样器、15-50 mL离心管；
调制针对生物梅里埃（3代）_2
肝病研究所承担HIV抗体检测任务： 首选试剂：生物梅里埃（3代）；备用试剂：
万泰3代； 2011年检测样本量：筛查阳性样本数26例
（0.3‰）；其中，确证试验阳性样本13例， 不确定4例，阴性9例； 2012年1-4月，筛查阳性15（1 ‰ ），阳性9 例。 2012年，检验科开始用雅培化学发光进行初 筛，初筛阳性送肝病研究所进行复检。
结果 试剂盒内的阳性对照血清与健康人的血清 1：10左右混合比例比较适合。
结论 自制质控血清性能稳定，经济、方便，便 于推广使用。
韦雪芳（广西壮族自治区横县疾病预防控制中心HIV初筛实验室530300）； 检验医学与临床，2011；8:2527-2528.
HIV抗体阳性血清梯度稀释系列用于实 验室质控和试剂评价探讨（1）
室内质控品
抗体检测的统计学室内质量控制
非试剂盒组份的外部质控品，是为了监控检测 的重复性而设置的，包括强阳性、弱阳性和阴 性质控血清；
只设置一个弱阳性质控，以该试剂盒临界值 （Cut-off）的2～3倍为宜。
外部质控品的作用是，判断该批临床样品检测 的有效性，因此，每次实验必须包含室内质控 品，其结果无效，必须重新试验。
121518 4月10日
万泰4代: 1.89
梅里埃4代： 2.05
p17 p24 p31 gp41 p51 p55 p66 gp120
gp160
雅培：2.51 万泰4：0.013
一个月后， 梅里埃4：1.81 万泰4：1.49
部分单位送检样本确证结果分析
初筛试剂
筛查阳 确证阳 性性
确证阴性 确证可疑 （%） （疑似感染）
化学发光试剂应用案例2
东直门医院&性艾所 贾××，33岁，MSM
单位 样本ID 检测日期 初筛
复检1
WB带型
东直门医 院
120740
2月21日
雅培发光： 万泰4代：
2.5
0.07
p24
性艾所 VCT
121214 3月20日
万泰4代: 梅里埃4代：
1.49
1.81
p24 p31 gp160
性艾所 VCT
2012年2月质控图
2011-2质控考评质控图
ELISA检测HIV抗体室内质控血清的制备
目的 实验室自制外部质控血清，绘制质控图， 满足《全国艾滋病检测技术规范》要求和考评要 求。
方法 利用试剂盒内的阳性对照血清，用健康人 的血清按一定量混合稀释成弱阳性，筛选出合适 混合比例，分装冷冻保存使用。
室内质控品可以是商品或实验室自行制备。
室内质控品的使用和质量要求
每一次实验必须使用室内质控品，以便监控 实验的重复性。
同时可以了解各批试剂盒的批间或孔间差异。 室内质控品的管间或瓶间变异必须小于监测
系统预期的变异（cv＜20%）；
并且质控品应稳定、无菌，且不含有影响试 剂反应的防腐剂。
北京大学人民医院
批号
样本 ID
检测日期
初筛
复检1
WB带型
北京大学 人民医院
3月6日
雅培发光： 25
梅里埃、 万泰3代：
<0.1
未送检
人民医院 121176
3月13日
梅里埃3代: 1.6
万泰3代: 0.32
p17 gp120 gp160
地坛医院 121631
4月10日
梅里埃4代: 2.9
万泰4代: 0.66
p24 gp41 gp120 gp160
➢ HIV 抗体阴性混合血清：筛查试验阴性；
➢ 用阴性血清稀释阳性混合血清，筛查试验确定最高 稀释度稀释倍数：103-105；
➢ -20℃保存；
李红星（商丘市卫生防疫站）； 河南预防医学杂志，2005；16:133-135.
HIV抗体阳性血清梯度稀释系列用于实 验室质控和试剂评价探讨（2）
结果 在一定稀释度范围内-log[稀释度]与OD 值呈 线性关系。实验系列用于质控，各实验室均正确报 出样品的阴阳性结果，但灵敏度（回归曲线斜率/ 残差标准差）不同，依此对实验室进行排序。
方法 用阴性血清梯度稀释HIV抗体确认阳性血清，用 第三代ELISA检测试剂进行检测，寻找稀释度与OD 值 间的关系，然后应用于实验室质控和试剂评价。
➢ HIV 抗体阳性混合血清：
➢ WB确证阳性样本：WB全条带（gp160、gp120、p66、 p55/p51、gp41、p31、p24、p17）；