关于血清的一些问题
细胞常见问题
1.血清中可能出现的沉淀物是什么？基于多年的实验研究，用于细胞培养的胎牛血清以及其它血清中可能会存在以下种类的沉淀物：：（1）纤维蛋白，它是经常出现的较大的沉淀物，可以达到1-2mm，可以用肉眼观察到。
因为血清都是在低温下进行收集和快速处理的，一些纤维蛋白原（可溶性的形成絮状纤维蛋白的前体）在处理过程中仍然处于溶解状态，当经过最后的过滤分装后，就会在瓶中凝结出现纤维蛋白沉淀。
（2）磷酸钙，它也是常见的一种沉淀物，通常会使血清出现浑浊，并且在37℃培养的时候会增加。
这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点，这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动，因此经常被误认为是微生物污染。
（3）胆固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白质。
他们也是血清中出现沉淀物的常见原因。
2.血清中的沉淀物对细胞培养有什么影响？（1）细胞生长，我们的试验以及经验表明沉淀物不会影响细胞培养，我们的客户以及其它血清生产商也证明了这一点。
（2）过滤，如果血清中出现大量的沉淀物，血清将很难过滤。
一般说来，因为在血清生产时最后已经经过100nm或者40nm的过滤处理，并且经过了严格的无菌检测，因此不推荐再过滤用于细胞培养的血清。
在实验室中没有必要再过滤处理血清，在大规模的细胞培养中往往将血清直接加到培养基中一起过滤。
（3）污染，磷酸钙往往被误认为微生物污染而引起争端。
研究者可能会在血清中观察到一些絮状的沉淀，因此就会比较警觉的去做无菌试验，将血清放在培养箱中培养几天，结果可能会观察到更多的絮状沉淀，因此就断定血清被污染了。
并且当研究者将血清样品放在倒置显微镜下观察时往往可以看到一些可以运动的小黑点，因此就更加确认是血清被污染了。
于是，研究者就会花费更多的时间和精力来和生产商确认，但最终确定血清没有被污染而只是沉淀。
为了避免这些问题的发生，我们建议不要直接将血清放在培养箱中培养观察是否有菌，而是将血清加到琼脂板上进行培养以观察是否有细菌生长。
另外，也可以进行革兰氏染色，在油镜下观察，以确认是否有污染。
中药血清体外药效研究存在的问题与对策
·研究生园地·中药血清体外药效研究是近年来中药研究新的发展趋向，它模拟中药在体的吸收、转化、代谢的过程，通过采集动物含药血清，进行相关的体外药效学研究。
近年来的研究取得了一定进展，也日益引起人们关注。
但由于处于探索阶段，其理论体系和操作规范还有待完善。
本文就中药血清体外药效研究中关于中药制剂质控与含药血清药效稳定性、血清供体动物选择、给药方案与量时效、含药血清采集与处理等方面研究存在的问题与当前相应的处理对策进行概述，并抛砖引玉提出几点建议。
1中药制剂质控与含药血清药效稳定性中药制剂的质控与药效稳定性是血清药效研究的前提与基础。
体外试验反应灵敏，如果中药成分含量变化过大，则药效重复性差，难以准确地反映其药理机制。
受试药物的质控包括药材与制备工艺两个方面。
药材的质控包括种属、产地、药用部位、采收加工与含量测定等，其中成分含量测定是核心。
虽然中药成分繁多、含量低微，检测困难，但是这些化学物质成分是决定药效的重要物质基础，体外试验用量少、敏感性强，成分含量的相对稳定对于血清药理实验具有重大意义。
尽管难以弄清楚每种成分，但应尽可能对复方中各药物的主要成分建立检测质控标准。
且制备工艺必须稳定，尽量“纯化”复方粗提物，减少杂质等的影响［1］。
2血清供体动物选择不同种属、年龄、性别的血清供体动物对药物敏感程度不一样，这些因素都可能影响供体动物对中药制剂中不同组分的吸收、转化、作用靶点的相异［2］。
因此实验动物的种属和年龄性别的选择有待规范。
目前中药血清学研究的文献报告中，几乎都是选用家免、大鼠等成年正常动物来制备含药血清。
家免、大鼠存在单只血清采集量少，近年来有文献报道及我们的研究采用比格犬制备含药血清。
该动物较温顺，灌胃给药饲养方便，单只血清采集量多，血清成分与小牛血清相近，因而可能也是血清供体动物较好的选择。
但是，无论选择何种动物，用异种动物血清加入异种来源的细胞，可能会因免疫反应而影响实验结果。
梅毒血清学检测方法存在的问题
梅毒血清学检测方法存在的问题1. 梅毒血清反应的假阳性(1)技术性假阳性:抗原敏感性过高,血清标本弄错或溶血或细菌污染,检查室技术不熟练.(2)生物学假阳性:非螺旋体抗原血清试验阳性率高于螺旋体抗原血清试验.前者是检测的病人的反应素,后者是检测抗梅毒螺旋体抗体.由于非螺旋体试验所用抗原也存在于其他组织,所以其他疾病甚至偶见正常人也出现反应素,因此在某些疾病中发生阳性反应,针对梅毒而言称为假阳性反应.①急性生物学假阳性:这些疾病在6个月内转阴.常见于麻疹,水痘,风疹,传染性单核细胞增多症,上呼吸道感染,猩红热,亚急性细菌性心内膜炎,肺炎球菌性肺炎,活动性肺结核,丝虫病,斑疹伤寒,锥虫病,回归热,钩端螺旋体,疟疾,但滴度很低,一般在 1:8以下,当用螺旋体抗原血清FTA-ABS或TPHA试验检测,血清反应阴性.PCR检测阴性.②慢性生物学假阳性,可持续6个月以上或数年,甚至终身,可分为两类:非螺旋体抗原血清试验假阳性:这些疾病常见于自身免疫性疾病,如系统性红斑狼疮,播散性盘状红斑狼疮,自身免疫性溶血性贫血,进行性系统性硬化症,类风湿性关节炎,风湿性心脏病,肝硬化,结节性多动脉炎,干燥综合征,慢性肾炎及海洛因成瘾,滴度可达1:64～1:128;少数孕妇,正常人群假阳性率为1%～2%.在70岁以上高龄老人中有1%出现假阳性.螺旋体抗原血清假阳性:发生率比非螺旋体抗原血清试验少,虽有部分其他病的患者出现FTA-ABS假阳性,其荧光染色常很弱或呈不典型的"串珠状".2. 梅毒血清反应的假阴性(1)一期梅毒硬下疳:一般硬下疳出现2～3周,机体才出现反应素,故早期血清反应常呈阴性.(2)感染梅毒立即治疗或晚期梅毒:由于血清反应素低,出现阴性.(3)二期梅毒假阴性;不到1%的二期梅毒患者其未稀释的血清VDRL试验呈阴性或弱阳性反应,而在高度稀释后反而为阳性,即前带现象(Pr ozone phenomenon),这是血清中抗心磷脂抗体过多,抑制阳性反应的结果.(4)技术操作或抗原敏感性低,出现血清试验阴性.。
血清血浆核酸提取实验常见问题解析
血清血浆核酸提取实验常见问题解析很多人在做血清DNA提取、血浆DNA提取时会对样本类型概念不清楚，什么是全血，什么是血清，什么是血浆，概念不清楚，在做核酸提取、核酸检测类的实验时，对提取试剂的选择也比较随意，导致实验结果往往不尽如人意。
那么全血、血浆、血清有什么区别，如何选择相应的核酸提取试剂呢？一、什么是外周血，什么是全血，什么是血清，什么是血浆？新鲜的血液（也叫全血，医学上称为外周血）加入抗凝剂（如柠檬酸钠，EDTA 等，一般医院采血都是用抗凝管采集），静置一段时间，会出现分层的现象。
上面淡黄色的半透明液体是血浆，约占55%，下面暗红色不透明的是红细胞，约占45%。
中间薄薄的一层白色物质是白细胞和血小板，不到1%。
红细胞、白细胞、血小板共同组成了血细胞。
血液不加抗凝剂会很快凝固，在凝血块周围出现的淡黄色的透明液体是血清，血清中不含纤维蛋白原。
简单来说，全血包括血浆和血细胞（红细胞、白细胞、血小板），血浆包括血清和纤维蛋白原。
如果要提取血细胞中的核酸，需要选择血细胞核酸提取试剂或全血核酸提取试剂；如果要从血清或血浆中提取游离核酸或游离肿瘤核酸则要选择血浆或血清核酸提取试剂；如果需要检测外周血中有无病毒或细菌感染，一般也是选择血浆或血清核酸提取试剂。
如果要提取DNA，需要选择DNA提取试剂，要提取RNA，则要选择RNA提取试剂。
如果目标基因丰度较低，需要较多的血浆或血清进行富集提取，则需要选择专门的血浆DNA、血清DNA富集提取试剂。
还有，如果核酸检测的结果要面向临床出具检验报告，选择的提取试剂盒要通过药监局审查，应有药监局备案号，这一点非常重要。
在进行核酸提取实验时，切不可选错了试剂盒，否则会影响实验效果和实验进度。
目前，国内应用较多的血液系列核酸提取试剂主要有Qiagen、Biog等，其血液系列核酸提取试剂均比较全面，包括血液DNA提取、血清DNA提取、血浆DNA提取、血液RNA提取、血浆RNA提取、血清RNA提取、小量提取试剂、中量富集提取试剂等，研究者可根据实验需要进行选择。
收集血清相关问题
如果是需要血清，采血后室温放置30-40min，然后全血离心，一般用4℃/ 4000 r离心，10min 就够了我们经常要采很多大鼠的血，一般我们用1万rpm离心3min,这样快，析出血清也比较清亮。
胶冻状物质在进食后采血容易发生。
一般给老鼠空腹采血。
针对你的问题，我的建议是：1. 一般常温下至少放置30 min~2 h左右（已有足量血清析出），而4度也可过夜充分析出血清；2. 是等血清析出后，直接对含有的血清的全血进行离心；3. 离心的转速一般根据离心机的大小，主要是转孔到中轴的距离大小。
一般3000 r/min*10min即可。
你也可以与实验室以前的方法统一，每次不同组别用同样的转速和时间。
请问常温离心可以吗？常温离心可以，最好的办法是4度放置过夜后再离心，原因是大鼠血清在2小时内并不能完全析出，获得的血清量可能只有总体积的1/4左右，而过夜后可以达到1/3。
离心时间，4000-5000转/分，5分钟。
为什么常温离心后有时候上清液是一团胶冻状的物质，无法从中吸取血清呢？我是室温放置半小时以上后开始离心的，转速3000r/min, 10min。
只是有时候呈胶冻状，多数时候不是，实在不理解！盼有高人指点！同样问题！原因有很多，例如抽血过程时间太长，过快都会造成这样的问题foxer wrote:为什么常温离心后有时候上清液是一团胶冻状的物质，无法从中吸取血清呢？我是室温放置半小时以上后开始离心的，转速3000r/min, 10min。
只是有时候呈胶冻状，多数时候不是，实在不理解！盼有高人指点！我个人认为，这种胶冻状的物质可能是胶原蛋白或者纤维蛋白原，是在血液凝固过程中形成的。
同时，血液凝固时，会逐步释出血清，因此，有些时候就会在血清中掺杂着这种胶冻状的物质。
不仅给分装工作造成麻烦，而且也影响日后检测时血样的真实体积，所以在分装血清样品时，可以先用枪头小心将胶冻状的物质挑去，然后开始吸取血清样品分装。
血清醋酸纤维薄膜电泳实验常见的问题分析
乔 明 艳
（ 北 中 医药 高等 专 科 学 校 ， 北 荆 州 湖 湖 摘 要 ： 文 阐述 了血 清 醋 酸 纤 维 薄 膜 电 泳 实验 中 电 泳 本 图谱 常 见 的 问题 ， 对 产 生这 些 问题 的原 因进 行 了分 析 ， 期 并 以 为 生 物 化 学 实 验教 学提 供 参 考 。 关 键 词 ： 清醋 酸 纤 维 薄 膜 电 泳 生物 化 学 实验 血
的 自觉 行 动 。 三 、 心 理 健 康教 育 工作 很 好 地 融 入 高 校 课外 活 动 中 将 １ ． 生动 活 泼 、 富 多彩 的 文体 活动 ， 强学 生的 自信心 。 开展 丰 增 由于 学生 个 人 素 质 参 差 不 齐 ， 些 能 力 较 低 、 格 内 向 的 一 性 学 生 害怕 在 活 动 中展 现 自我 ，不 敢 参 与 活 动 或 在 活 动 中 敷衍 了 事 。 对 这 种 情况 ， 开 展 具 有 趣 味 意义 的大 学 生 趣 味 运 动 针 应 会 ， 用 学 生 优 势 的 活 动 内 容 或 趣 味性 的 活 动 内容 。 ： 球 采 如 拍 进 筐 、 绳 比赛 、 对 背 运 气 球 、 子 棋 大 赛 等 。 低 活 动 要 跳 背 五 降
发展。
３在 课 外 活 动 中有 计 划 、 目的 地 针 对 重 点 学 生 选 择 不 ． 有
同的 活 动 方 法 。
求 、 强引导 ， 加 给予 鼓 励 ， 助 学 生 的 力 量 ， 他 们 获 得 更 多 的 借 使 成 功 体验 ， 趣 味 活 动 中 成 长 。还 可 举 办 丰 富 多 彩 的 文 艺 、 在 体 育 活 动 ， ： 类 晚 会 、 手 大 赛 、 蹈 大赛 、 球 赛 等 ， 如 各 歌 舞 篮 营造 融 洽 轻 松 的活 动 气 氛 ， 相 尊 重 ， 相 帮 助 ， 每 个 学 生 在 活 动 互 互 使 中都 获 得 良好 的心 理 定 势 。 时要 运 用 激 励 机 制 ， 学 生 给 予 同 对 充 分 的 肯 定 和 一定 的奖 励 ， 增强 学生 的 自信 心 。 ２开展 各 类 竞 技 性 比赛 。 养 学 生 的 竞 争 意 识 、 ． 培 团体 意 识 和协作精神。 课 外 活 动 内容 的竞 赛 性 使 学 生有 机会 在课 外 体 验 胜 利 与 失 败 的情 感 ， 立 无 高 不 可 攀 、 坚 不 可摧 的 进 取 精 神 。 可举 树 无 行 辩 论 赛 、 理 知 识 竞 赛 、 学 生 运 动 会 等 多 种 形 式 和类 型 的 心 大 竞 赛 活 动 ， 赛 前 认 真组 织 ， 后 认 真 讲 评 ， 胜 者 不 骄 败 者 在 赛 使 不 馁 ， 学 生 树 立 敢 拼 的 决 心 和 信 心 。 绕 相应 活 动 开 展 主 题 使 围 班 会 和 主 题 团 日活 动 ， 班 会 、 日中对 活 动 情 况 进 行 评 价 ， 在 团 建立 激励 机制 ， 好 的学 生 能 百 尺 竿 头 更 进 一 步 ． 水 平 较 低 使 使 的 学 生产 生一 种 危 机 感 ， 而 努 力 进 取 ， 取 进 步 。各 类 集 体 从 争
血清肿瘤标志物实验室检测中值得注意的问题
血清肿瘤标志物实验室检测中值得注意的问题发表时间：2020-01-09T14:44:34.997Z 来源：《中国医学人文》2019年9月9期作者：黄炳红[导读] 目前临床上肿瘤患者的早期诊断主要还是依赖影像学检查，生化学、细胞学和免疫学检验等，其中的免疫学检查对象就是患者血清当中的肿瘤标志物。
黄炳红（广汉市人民医院；四川广汉618300）目前临床上肿瘤患者的早期诊断主要还是依赖影像学检查，生化学、细胞学和免疫学检验等，其中的免疫学检查对象就是患者血清当中的肿瘤标志物。
在实际检验过程中，血清是最常用于检测肿瘤标志物的样本类型，这也是应用最广泛的一种。
用血清作为样本来检测肿瘤标志也称作是血清肿瘤标志物检测，其应用范围广泛，不仅可用于肿瘤的诊断方面，对肿瘤确诊者预后的评估、治疗方案的指导方面以及监测其肿瘤的进展情况，这种检验方式也是可以起到一定帮助作用的[1]。
相对于其他的检验方法来说，患者所需要承担的经济费用也较低。
由于操作简便快捷，病人在接受检查时承受的痛苦也是比较少的，这种检测方式非常适合大范围的肿瘤患者检测，很大程度上节约了人力物力，且提高了检验效率。
所以这种检验方式在临床治疗方面有非常重大的意义，免疫学检测方式逐渐显示出来的检测优势引起了大家的广泛关注，无论是临床研究还是广大患者都对这种快捷的检验方式抱有期望。
临床实验室检验工作中，部分工作人员由于对肿瘤标志物检验的知识掌握不足，或其重要性认识不足，导致肿瘤标志物检测效果不好。
对此我们就一些常见问题进行分析和探讨，尽可能的避免血清肿瘤标志物检测过程当中的一些误区，以寻求合理的解决方案。
目前肿瘤标志物实验室检测中常见的问题可从以下几方面总结：1、试剂和仪器科室人员应负责好室内质控和室间质评的工作，由于不同厂家提供的试剂原理不同，呈现结果也不同，所以无可比性。
检测过程中需要科室人员认真阅读各类试剂说明书，按照相关操作规范进行操作。
仪器的使用一定要按照规范，认识到保持仪器状态良好的重要性，并定期对仪器进行维护，否则很有可能会造成交叉污染。
蛋鸡问题血清调查及原因分析
调查报告
调 查报 告
蛋鸡 问题 血 清 调 查 及 原 因分 析
管凤 霞 黎 敏 刘 玲 温 纳相 （ 广东温氏食品集团有限公司研究院 ５７０） ２４０
中 图 分 类号 ：￥ ５ ． ８ ２５ 文献 标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ： １０ ．７ ３２ １）２０ ５ —２ ０ ７ １３ （０ ０ １－０ ３０ ２２ 临 床 症 状 、剖 检 变 化 ＿ 鸡 精 神 沉 郁 、鸡 冠 苍 白、 头
１ ． 组织病理观 察 ３ 分 别 取 心 、 肝 、脾 、肺 、 。 织 进 肾组
图３ 肝 脏 色黄 ，内 有出血 点 图４ 肝周 围有血 凝块
２３ 组 织 病 理 取 肝 脏 病 理 切 片 观 察 ， 可 见 肝 细 胞 质 内 ＿ 充 满 大 小 不 等 的 脂 肪 空 泡（ ） 图５ ，细 胞 核 位 于 中央 或 被 挤 到 一 侧 ，有 时 可 见 局 部 肝 细 胞 坏 死 ，肝 小 叶 中 弥 漫 分 布 脂 肪 滴 ，并 且 有 大 小 不 等 出 血 部 位 ；脂 肪 变 性 程 度 与 肝 脏 颜色 有 一 定相 关性 ，颜 色 越 黄 脂 肪 变 性 越 严 重 。
表 ｌ 肝脏 脂肪 含量
行 固定 ，石 蜡 切 片 ， 取病 变 组 织 观 察 。 １ 肝 脏 脂 肪 含 量 测 定 分 别 选 取 血 清 样 品 呈 高 血 脂 、 ． ４ 血 液 凝 固 不 良的 鸡 ２ 、 血 清 呈 胶 冻 状 的 鸡 ２ ， 眼 观 色 只 只 泽 正 常 的 １ ，共 ５ 鸡 剖 腹 ， 取 适 量 肝 脏 剪碎 ， １ ５ 只 只 ０ ℃烘 至 恒 重 后 研 成 粉 末 ， 称 取 ３ ， 放 入 索 氏提 取 器 中 无 水 乙 ｇ 醚 抽提 １ｈ ２ ，烘 至 恒 重 后 称 量 测 定 肝脏 脂 肪 含 量 。 １ ． 血 液 生 化 检 测 不 同 鸡 群 随 机 采 血 ３ 份 ， 制 备 血 ５ ０
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实验室里常会遇到的关于血清的问题1.保存血清最好的方法?我们建议血清应保存在-5℃至-2O℃。
然而，若存放于4℃时，请勿超过一个月。
若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。
2.培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗?一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。
因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。
3.如何解冻血清才不会使产品质量受损?我们建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。
但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。
长时间储存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。
因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。
解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。
请勿将血清置于37℃太久。
若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。
4.血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理?沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。
这是正常特性，不会影响产品性质。
血清中沉淀物的出现有许多种原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。
但这些絮状沉淀物，并不影响血清本身的质量。
若您欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g,1-2分钟稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。
我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞您的过滤膜。
大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。
所以，使用产品时要摇动并加热血清至37℃，沉淀会自然消失。
5.如何避免沉淀？按如下操作可避免沉淀的产生：(1)解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。
(2) 血清分装冻存时，须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一。
(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
(4) 勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。
(5) 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。
(6) 若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。
温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。
6.为什么要热灭活血清?加热可以灭活补体系统。
激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。
在免疫学研究，培养ES细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。
7.有必要做热灭活吗?实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。
经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。
而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。
因此我们建议您，若非必须，您可以不需要做热处理这一步。
如此一来，不但节省您宝贵的时间，更确保血清的质量!8.细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理？一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。
如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。
污染包括细菌污染、支原体污染等。
如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：(1)细胞生长过老，破碎的细胞残骸;(2)血清质量不好，反复冻融的结果;(3)配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长;(4)配制培养基的水质、容器不合格。
可应用离心、过滤的方法去除这些黑点;(5)培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。
9.细胞培养中如何防止黑点？(1) 尽可能地减少血清冻融次数。
(2) 培养基无需37℃水浴。
(3) 培养基保持最佳PH值7.0- 7.2。
(4) 严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。
(5) 掌握细胞传代的最佳时机，细胞切勿生长过老。
10.为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀?胎牛血清没有预老化，储存在2－8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。
这应该不会影响血清的质量。
推荐在－20℃储存胎牛血清，避免反复冻融。
11.如何避免沉淀物的产生?我们建议您在使用血清的时候，注意下列的操作: 解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃)，实验显示非常容易产生沉淀物。
血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。
若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。
温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。
12.牛血清对细胞及病毒滴度的影响血清是一种成分复杂的混合物，不同批次血清对细胞生长的促进作用不同。
大规模细胞培养中由血清引起的细胞生长状态不佳及病毒滴度的影响表现在以下几个方面：1、细胞生长速度缓慢，长满单层时间长；从同一细胞瓶中分出两瓶细胞，用同一种培养液，分别加入10％的对照血清和待检血清，在相同条件下培养72小时，会出现对照血清长满单层，而待检血清大约只有60～70％，这种血清就不适合用来大规模培养细胞。
2、细胞传代后形态不正常，细胞状态发生变化；由于血清的质量问题，使原本状态正常的细胞经传代后形态会变差；比如：细胞瓶里会出现一些蠕动的小黑点（并非污染），或者细胞表面形成一层油状覆盖物；细胞的轮廓变得模糊，细胞之间的间隙被血清中的蛋白颗粒填充，从而影响细胞向四周扩展生长。
3、细胞传几代后就出现脱壁现象，不能连续传代；质量较差的血清缺乏某种细胞的贴壁因子，会使细胞在传代过程中逐渐丧失贴壁的能力。
细胞会从正常的贴壁状态，边缘开始萎缩，上翘。
观察到的现象就是细胞表面不光滑，晃动细胞瓶会看到细胞表面有絮状物随培养液波动。
随着传代次数增加，细胞萎缩的情况越来越严重，直到最终完全脱壁而死亡。
4、细胞长的很好，致密的单层，状态也很正常，但是接毒后细胞基本不发生病变，做滴度检测几乎测不出抗原滴度。
这种情况也许是因为血清中含有与接种的病毒有同源的特异性抗体。
比如血清中经常会存在乙脑抗体，牛腹泻病毒抗体等，如果存在这些抗体，就会把接进去的病毒给中和掉。
如果抗体滴度很高，病毒会被抗体完全中和，就没有病毒颗粒在细胞中增殖，所以会检测不到病毒滴度。
这种情况给疫苗企业造成的损失是相当大的，不产毒等于前面所做的那么多工作全部白费，浪费人力、物力，尤其是时间上的浪费，从培养细胞开始到接病毒，到收液至少需要一两个月，一旦出现不产毒的情况，那么这一两月时间就白白浪费掉了，这也是牛血清给疫苗企业造成的风险之一。
5、细胞生长的状态一般，产毒少，毒价低。
这种情况比较常见，细胞是病毒的载体，由于血清质量不好，导致细胞生长状态不好，病毒就无法进行正常的复制。
并非所有病毒都不能复制，所以就造成疫苗的效价不够，可能造成不合格产品。
13.牛血清给生物制品带来的问题对于使用传统培养基培养的大多数细胞来说，添加牛血清是必不可少的。
但是牛血清的使用也给细胞培养和生物制品的生产带来很多问题，并成为生物制品生产水平达到最优化和实现经济性目标的一大障碍。
1、批间差异血清是一种成分复杂而且不确定的混合物，不同来源的血清成分存在很大的差异，因此支持细胞生长的效果也有较大差别。
而每批血清的批量是有限的，所以换血清批号时要预先做大量的筛选实验，以确定对细胞生长影响最小的血清。
不但增加工作量,而且如果因为一时筛选不出合适的血清还会导致生产停滞。
2、动物来源成分因为来源于动物,所以有可能携带传染源,包括病毒和有毒物质,任何一种传染源都有可能对正在生长的细胞系或者制品带来风险；不同来源的血清存在某些特异性病毒抗体（比如：乙脑抗体、牛腹泻性病毒抗体等），直接影响接毒后病毒的复制，可能导致不产毒或毒价偏低，从而给疫苗生产造成巨大损失。
3、提高生产成本目前市场销售的血清平均价格约0.25元/ml，按10％添加量计算，1L培养液中血清所占的成本是25元，培养基及其他添加物的成本约为6元，每升培养液的成本中血清约占80％，由此可见血清在疫苗生产中占据了大量的生产成本。
4、行业竞争导致质量难以提高由于国内牛血清生产厂家增多，而用户的数量有限。
为了获得客户资源，很多血清厂家都在进行低价销售，行业内形成一种恶性的价格竞争。
低价格带来的结果就是低质量的血清。
目前很多血清厂家都处于维持生存的状态，因此难以投入大量资金和人力来提高血清的质量。
5、血清蛋白引起的疫苗纯化问题由于血清含有大量的不同分子量的未知蛋白和多肽类物质，势必会增加提取，分离，纯化的步骤，增加了下游纯化处理的难度，因此在疫苗纯化阶段给纯化工作带来很大的困难；疫苗产品中牛血清白蛋白残留量要求不高于50ng/剂，为达到纯化的目的，纯化工艺不得不添加新的仪器设备；在除去牛血清白蛋白残留的同时，也会损失大量的有效目的产物，从而降低了疫苗的产率；牛血清中的某些蛋白与目的产物的分子量接近，在纯化过程中不能完全被去除，由于血清残留而导致的生物制品不合格，或者因为杂蛋白含量大造成严重不良反应的情况时有出现.因此也会严重影响疫苗产品的质量。
6、改变培养液的pH值牛血清的pH理论值为7.0～8.0，培养基在加入规定量的碳酸氢钠后（即达到细胞生长所需要的渗透压），再加入10％的牛血清，一般会使培养液的pH值发生改变。
因此在使用过程中应注意pH的变化，如有必要可用1mol/L NaOH或1mol/L HCl调pH到所需值。
7、由于血清的营养成分丰富，非常适合细菌、真菌和支原体等生长。
国产血清大部分采用手工分装，因此容易把微生物带入而使得血清被污染。
使用前如果没有及时发现，将会把污染物带入正在培养的细胞中，而使得细胞不能正常生长。
8、血清在贮存解冻过程中会产生沉淀，这是由于血清中含有大量脂蛋白、纤维蛋白及多肽类物质，在-15℃冷冻保存解冻后就会自然形成沉淀，随着保存时间的延长，沉淀量会增加。
因此在融化血清时一般应先在4℃放置使之解冻，然后放在室温使血清完全融化，以避免沉淀的增加。
添加血清时应避免把沉淀加入培养液，否则由于沉淀的存在会使得所培养的细胞产生大量黑点，或者细胞表面将会覆盖一层油状物质，影响细胞的正常生长。