饲料学课件实验三、四 饲料粗蛋白质测定
饲料中粗蛋白的测定-凯氏定氮法
凯氏定氮仪测定步骤
影响因素分析
1.取样
试样粉碎后一般过40 目筛，且一定要把粉碎后的试样及粉碎机中残留的部分清扫后充 分混合均匀，避免粉碎的试样分级而影响分析结果的准确性。
2.催化剂及其用量
国标为0.4g 硫酸铜和6g 无水硫酸钾( 或无水硫酸钠)。若 添加量大，消化液容易结晶； 添加量减少，会延长消化时间或消化不完全。
仪器设备及试剂
样品粉碎机 40目分析筛 分析天平 消化炉 消化管 凯氏蒸馏装臵 滴定管
98%浓硫酸 硫酸钾 硫酸铜 硼酸溶液 标准盐酸溶液 混合指示剂
凯氏定氮仪测定步骤
1.试样的消化 称取0.3~0.4g试样，准确至0.0001g，放入消化管中， 加入催化剂，与试样混合均匀，再加浓硫酸12ml， 将消化管放臵在消化炉上加热，温度420 ℃ （此装臵需 安装在通风橱内），直至溶液呈透明的蓝绿色。将试样 消化液冷却，冷却后加入蒸馏水20ml稀释，摇匀，则为 试样分解液。
3.消化温度
刚开始时以低温(200 ～ 300℃ ) 加热，待试样焦化泡沫消失后，逐步缓慢提高温度 (360～410℃ )。起初低温加热是为防止试样起泡沫，而溢出烧瓶外或碳化后的颗粒 附于烧瓶壁，导致消化不完全，所测结果偏低。
4.消化时间
可根据试样的重量、蛋白含量的多少以及消化的难易程度而适当调整消化液澄清后的 消化时间。对于所称试样质量较多、蛋白含量高于蚕蛹或者难消化的试样，消化液澄 清后继续消化的时间可控制在45m i n ～ 2h 不等，具体时间化验工作者可根据自己的 工作经验而自行定夺。
饲料中粗蛋白质含量的测定
凯氏定氮法
目录
1. 适用范围
2. 测定原理Biblioteka 3. 仪器设备及试剂4. 测定步骤
饲料中粗蛋白测定方法
饲料中粗蛋白测定方法??1、?原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。
加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。
??2??2.1?—920）—1220）0.5入注入????2.7?蔗糖（HG?3—1001）：分析纯。
????2.8?硫酸铵（GB?1396）：分析纯，干燥。
????2.9?硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1?000mL，加入0.1％溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1％甲基红乙醇溶液7mL，4％氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。
???3、?仪器设备???3.1?实验室用样品粉碎机或研钵。
????3.2?分样筛：孔径0.45mm（40目）。
???3.3?分析天平：感量0.0001g。
????3.4?消煮炉或电炉。
??3.6???4、?装于密???5?6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将?凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力?（360～410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。
????5.1.2?氨的蒸馏：将试样消煮液冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。
将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。
蒸汽发生器?的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。
准确移取试样分解液10～20mL注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口再蒸馏氮量为盐酸标0.3mL。
????粗蛋白质（％）=（V2-V1）·c×0.0140×6.25/（m×V＇/V）?×100?????式中：V2──?滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL；?????V1──?滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL；?????c──?盐酸标准溶液浓度，mol/L；?????m──?试样质量，g；?????V──?试样分解液总体积，mL；?????V──?试样分解液蒸馏用体积，mL；?????0.0140──?与1.00mL盐酸标准溶液〔c（HCl）=1.000mol/L〕相当的、以克表示的氮的质量。
饲料中粗蛋白的测定(教学课件)
相当的、以g表示
样品中含氮量用以下的回归方程计算： y=9.2918x-0.2852 式中： x—为DD法测定所得到的含氮量；
y—为样品的实际含氮量。
精品 PPT
双氧水法测定
试剂 • 硫酸：化学纯，含量为98%，无氮； • 双氧水：分析纯，含量为30%； • 氢氧化钠：双氧水：分析纯，含量为40%（m/v）； • 硼酸：化学纯， 2% 水溶液（m/v）； • 混合指示剂；盐酸标准溶液； • 邻苯二甲酸氢钾法标定液； • C（HCl）=0.1mol/L、 8.3mL 盐酸（分析纯）注入 1000mL
蒸馏水中； • 蔗糖：分析纯； • 硫酸铵（GB1396）：分析纯，干燥。
精品 PPT
仪器
实验室用样品粉碎机或研钵; 分样筛孔径 0.45mm（40 目）; 分析天平（感量 0.0001g）; 消煮炉或电炉; 10mL、25mL 酸式滴定管；250mL 消化管；150mL ； 250mL 锥形瓶 ；定氮仪（以凯氏原理制造 的各类型半自动蛋白质测定仪）。
精品 PPT
试验步骤
• 消化 称量5.000g样品，粉碎经40目筛后放 500mL 凯氏烧瓶中，加 50mL 蒸馏水（边 加边摇），使充分混合。
精品 PPT
蒸馏
向凯氏烧瓶中加入 25mL 10% 氯化钡溶液， 振荡摇匀，再加120mL 40% 的氢氧化钠溶 液，立即连接蒸馏装置进行蒸馏。把蒸馏 装置冷凝管的末端浸入盛有 50mL 2% 的硼 酸溶液和 2 滴混合指示剂的锥形瓶中，轻 轻摇动凯氏烧瓶使溶液混匀，然后加热进 行蒸馏，待蒸馏出的液体体积达到100mL （总体积达到150mL）时停止蒸馏。
•
16、业余生活要有意义，不要越轨。2020年10月18日星期 日8时9分52秒20:09:5218 October 2020
饲料学课件实验三、四 饲料粗蛋白质测定
7. 滴 定：蒸馏后的硼酸吸收液立即用0.01M盐酸 标准溶液进行滴定，当溶液由蓝色变为灰白色 或灰红色时即为滴定终点。
8. 结果计算：
粗蛋白质(%) = (V2－V1 )×N×0.014×6.25 ×100 W×V’/V
蓝色
灰白或灰红色
二、主要仪器
凯氏微量定氮蒸馏仪
凯氏半微量定氮蒸馏仪(改良式)
三、测定步骤
1. 试样的消化： 1)准确称取试样0.5-1gபைடு நூலகம்含N 5-80mg)，无损地放入凯氏
烧瓶或消煮管中； 2)加入硫酸铜0.9g，无水硫酸钠15g，并与试样混合均
匀；加入浓硫酸25ml(勿混摇)； 3)在消煮炉上先用小火小心加热(约180℃)，待样品焦
化、泡沫消失后，再加强火力360-410℃消化，直至 溶液变澄清(天蓝色)后，再继续加热消化1.5hr-2hr；
4. 先关闭加样口，加入饱和NaOH溶液5~10ml；小心打 开加样口使之流入反应室中，立即关闭加样口，再用 少量蒸馏水冲洗加样口；关好加样口防止漏气；
5. 通入蒸气蒸馏，此时反应室液体应呈棕褐色(否则需 补加碱液)；待硼酸溶液变蓝后再继续蒸馏4~5min， 然后使冷凝管末端离开液面，再蒸馏1min，并用少量 蒸馏水冲洗冷凝管末端。
实验三、(1)饲料粗蛋白质测定(消化)
一、原 理
RCHCOOH+
H2SO4
无水Na2SO4
CuSO4 ∆
(NH4)2SO4
+SO2↑+CO2↑+H2O
NH2
(NH4)2SO4+ NaOH(饱和) ∆ NH3↑+ Na2SO4+ H2O
饲料分析与检测实验：饲料中粗蛋白质的测定
实验三、饲料中粗蛋白质的测定【学习目标】掌握饲料中粗蛋白质的测定方法，并能用此方法测定饲料中粗蛋白质的含量。
一、原理饲料中纯蛋白质和非蛋白氮总称粗蛋白质。
凯氏法的基本原理是用浓H2SO4在催化剂(CuSO4、K2SO4、Na2SO4等)的催化作用下消化饲料样本，使其中的蛋白质和非蛋白氮都转变为 (NH4)2SO4，(NH4)2SO4在浓碱作用下放出NH3，通过蒸馏，氨气随水蒸汽沿冷凝管流入硼酸吸收液被硼酸吸收并与之结合成为四硼酸铵，然后以甲基红、溴甲酚绿作指示剂，用标准HCL溶液滴定，求出氮含量，根据氮含量再乘以系数(通常为 6.25)，即为粗蛋白质的含量。
上述原理的主要化学反应如下：催化剂1.2CH3CHNH2COOH+13H2SO (NH4)2SO4+6CO2↑+12SO2↑+16H2O加热2.(NH4)2SO4+2NaOH 2NH3↑+2H2O+Na2SO43.4H3BO3+NH3 NH4HB4O7+5H2O4.NH4HB4O7+5H2O+HCL NH4CL+4H3BO3系数6.25是根据饲料蛋白质平均含氮量为16.0%而来的，而实际上，各种样本的蛋白质种类不同，含氮量有差异，变动为14.7～19.5%之间，故一般饲料换算系数用6.25，已确定的最好用实际系数。
为方便使用，将已知几种饲料的系数介绍如下：肉类6.25，玉米6.00，小麦、燕麦、黑麦、大豆、箭舌豌豆、蚕豆5.70，牛奶及制品6.28，坚果及油饼类5.30。
二、仪器设备1.样品粉碎机 40目分样筛；2.分析天平感量0.0001g；3.电子天平感量0.0001g；4.工业天平感量0.01g；5.六联电炉 6×800-1000W；6.半微量凯氏定氮仪或改良式半微量凯氏定氮仪(图1、图2)；7.酸式滴定管 25.0ml或50.0ml；8.凯氏烧瓶 100.0ml；9.烧杯 250.0ml；10.三角瓶 150.0ml；11.容量瓶 100.0ml；12.移液管 10.0ml；13.量筒 10.0ml、25.0ml。
饲料粗蛋白实验报告
一、实验目的1. 掌握饲料粗蛋白测定的原理和方法；2. 熟悉实验操作步骤，提高实验技能；3. 了解饲料粗蛋白含量的重要性及其对动物营养的影响。
二、实验原理饲料粗蛋白是指饲料样品中含氮物质的总量，包括蛋白质和非蛋白质含氮化合物。
测定饲料粗蛋白含量，可以了解饲料的营养价值，为动物饲料配方提供依据。
凯氏定氮法是测定饲料粗蛋白的常用方法，其原理如下：1. 将饲料样品与浓硫酸、无水碳酸钠混合，加热消化，使蛋白质和氨态氮转化为硫酸铵；2. 消化液在浓碱的作用下进行蒸馏，释放出的氨随汽水顺着冷凝管流入硼酸吸收液中，并与其结合成硼酸铵；3. 用盐酸标准溶液滴定，求出氨的含量，再乘以一定的换算系数（6.25），即得出试样中粗蛋白的含量。
三、实验材料1. 饲料样品：玉米粉、豆粕、鱼粉等；2. 试剂：浓硫酸、无水碳酸钠、氢氧化钠、硼酸、盐酸标准溶液、甲基红-溴甲酚绿指示剂等；3. 仪器：凯氏瓶、消化炉、冷凝管、滴定管、分析天平等。
四、实验步骤1. 样品消化（1）称取0.5-1g饲料样品，置于凯氏瓶中；（2）加入0.4g无水硫酸铜、6g无水碳酸钠，与试样混合均匀；（3）加入10ml浓硫酸，摇匀；（4）将凯氏瓶置于消化炉上，加热消化，直至溶液呈透明蓝绿色。
2. 滴定（1）将消化液转移至500ml容量瓶中，用蒸馏水定容；（2）取25ml消化液于锥形瓶中，加入5ml氢氧化钠溶液、5ml硼酸溶液、1滴甲基红-溴甲酚绿指示剂；（3）用盐酸标准溶液滴定至溶液由蓝绿色变为灰绿色；（4）记录盐酸标准溶液的消耗体积。
3. 计算（1）根据滴定结果，计算氨的物质的量；（2）乘以换算系数（6.25），得出饲料样品中粗蛋白的含量。
五、实验结果与分析1. 实验数据样品名称 | 样品质量（g） | 盐酸标准溶液消耗体积（ml） | 粗蛋白含量（%）------- | -------- | ------------------- | --------玉米粉 | 0.5 | 25.00 | 9.20豆粕 | 0.5 | 30.00 | 38.40鱼粉 | 0.5 | 35.00 | 58.002. 结果分析通过实验，我们得到了玉米粉、豆粕、鱼粉的粗蛋白含量分别为9.20%、38.40%、58.00%。
饲料中粗蛋白质的测定课件(共25张PPT)《畜禽营养与饲料》
单元二 饲料中粗蛋白质的测定
一、适用范围
二、测定原理
凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破 坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨 逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘 以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。
三、所需试剂
1、硫酸（GB 625） 2、混合催化剂 3、氢氧化钠（GB 629） 4、硼酸（GB 628） 5、混合指示剂 6、0.02mol/l盐酸标准溶液 7、蔗糖（HG 3—1001） 8、硫酸铵（GB 1396） 9、硼酸吸收液
六、分析步骤
（1）试样的消毒： 称取试样0.5~1g(含氮量5~80 mg)准确至0. 0002 g，放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均 匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热， 开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力(360~410℃ ) 直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。
取蔗糖 0.5g，代替试样，按以上步骤进行空白测定，消耗 0.02mol/L的盐酸标准溶液体积不得超过 0.3ml。
（三）分析结果的表述
1、计算结果如下式
2、重复性
每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。 当粗蛋白质含量在25%以上时，允许相对偏差为 1%。 当粗蛋白质含量在10%-25%之间时，允许相对偏差为2%。 当粗蛋白质含量在10%以下时，允许相对偏差为3%。
混合催化剂氧化钠溶液
蒸馏水
四、仪器设备
电子天平
滴定筒
牧医工程学院精品在线课程
通风橱内电炉及消煮架
锥形瓶
容量瓶
凯氏烧瓶
洗瓶
刻度吸管
移液管
饲料中粗蛋白测定
• 9 标准滴定溶液的浓度小于或等于0.02mol/L时(除0.02mol/L乙二胺四乙酸二钠、 氯化锌标准滴定溶液外),应于临用前将浓度高的标准滴定溶液用煮沸并冷却的水稀释 (不含非水溶剂的标准滴定溶液),必要时重新标定。当需用本标准规定浓度以外的标 准滴定溶液时,可参考本标准中相应标准滴定溶液的制备方法进行配制和标定。 • 10 贮存: • a) 除另有规定外,标准滴定溶液在10℃~30 ℃下,密封保存时间一般不超过6个月;碘 标准滴定溶液、亚硝酸钠标准滴定溶液[c(NaNO2)=0.1mol/L]密封保存时间为4个 月;高氯酸标准滴定溶液、氢氧化钾-乙醇标准滴定溶液、硫酸铁(Ⅲ)铵标准滴定溶液 密封保存时间为2个月。超过保存时间的标准滴定溶液进行复标定后可以继续使用。 • b) 标准滴定溶液在10℃~30℃下,开封使用过的标准滴定溶液保存时间一般不超过2 个月(倾出溶液后立即盖紧);碘标准滴定溶液、氢氧化钾-乙醇标准滴定溶液一般不超 过1个月;亚硝酸钠标准滴定溶液[c(NaNO2)=0.1mol/L]一般不超过15d;高氯酸标准 滴定溶液开封后当天使用。
• NH4H2BO3+HCl=NH4Cl+H3BO3
仪器设备：
• 分析天平：感量0.0001g
• 消煮炉或电炉
• 酸式或通用滴定管：25mL，50mL
• 消化管或者凯氏烧瓶：250mL
• 开始蒸馏装置：常量直接蒸馏或半微量蒸馏式 • 三角瓶：150mL，250mL • 容量瓶：100mL • 定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动和全自动蛋白质测 定仪。
测定原理：
• ① 样品消化 • ② 氮的蒸馏
浓硫酸的脱水 性与强氧化性
• 2NH2(CH)2COOH ＋ 13H2SO4 ＝ (NH4)2SO4 ＋ 6CO2 ＋ 12SO2 ＋ 16H2O
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
粗蛋白质(%) = (V2－V1 )×N×0.014×6.25 ×100 W×V’/V
实验三、(1)饲料粗蛋白质测定(消化)
一、原 理
RCHCOOH+
H2SO4
无水Na2SO4
CuSO4 ∆
(NH4)2SO4
+SO2↑+CO2↑+H2O
NH2
(NH4)2SO4+ NaOH(饱和) ∆ NH3↑+ Na2SO4+ H2O
NH3↑+ H3BO3
(NH4)2B4O7
(NH4)2B4O7 + HCl (标准) 指示剂 NH4Cl + H3BO3
5. 通入蒸气蒸馏，此时反应室液体应呈棕褐色(否则需 补加碱液)；待硼酸溶液变蓝后再继续蒸馏4~5min， 然后使冷凝管末端离开液面，再蒸馏1min，并用少量 蒸馏水冲洗冷凝管末端。
6. 蒸馏结束，排净反应废液，洗净蒸馏室，开始新的蒸 馏过程。
7. 滴 定：蒸馏后的硼酸吸收液立即用0.01M盐酸 标准溶液进行滴定，当溶液由蓝色变为灰白色 或灰红色时即为滴定终点。
蓝色
灰白或灰红色
4)试样分解液制备：待试样消煮液稍冷却，慢 慢加入蒸馏水25-30ml、混匀，无损地转移至 200或250ml容量瓶中、混匀(勿倒置混)；
5) 待试样液冷却后，加蒸馏水至容量瓶刻度， 充分混匀，即为试样分解液。
实验四、饲料粗蛋白质测定(蒸馏)
1. 凯氏蒸馏仪安装、调试：气密性检查、清洗；蒸汽 发生瓶的蒸馏水中应加入甲基红指示剂数滴和硫酸 数滴，并保持此液为红色；
2. 取2%硼酸溶液20ml放入三角烧瓶，加入混合指示 剂1滴(显淡紫红色)，接至蒸馏仪的冷凝管末端，并 打开蒸气旁路开关；
3. 准确吸取试样分解液10~20ml(视含N量而定)，加入 蒸馏仪反应室中，并用少量蒸馏水冲洗加样口；
4. 先关闭加样口，加入饱和NaOH溶液5~10ml；小心打 开加样口使之流入反应室中，立即关闭加样口，再用 少量蒸馏水冲洗加样口；关好加样口防止漏气；