基因工程专题
2025年高考生物复习新题速递之基因工程(2024年9月)
2025年高考生物复习新题速递之基因工程（2024年9月）一．选择题（共18小题）1．关于“DNA的粗提取与鉴定”实验，下列说法错误的是（）A．过滤液沉淀过程在4℃冰箱中进行是为了防止DNA降解B．DNA既溶于2mol/LNaCl溶液也溶于蒸馏水C．粗提取的DNA中含有核蛋白、多糖等杂质D．将粗提取的DNA溶于2mol/LNaCl溶液中，加入二苯胺试剂DNA被染成蓝色2．大肠杆菌经溶菌酶和洗涤剂处理后，拟核DNA就会缠绕在细胞壁碎片上，静置一段时间，质粒分布在上清液中，利用上述原理可初步获得质粒DNA。
用三种限制酶处理提取的产物，电泳结果如图所示。
下列关于质粒的粗提取和鉴定的叙述不正确的是（）A．提取DNA时可加入酒精，使溶于酒精的蛋白质等物质溶解B．将提取的DNA溶于2mol/LNaCl溶液后；可用二苯胺试剂进行鉴定C．电泳鉴定DNA利用了DNA在电场中会向着它所带电荷相反的电极移动的原理D．根据电泳结果，质粒上一定没有限制酶Ⅰ和Ⅱ的切割位点，而有限制酶Ⅲ的切割位点3．某同学拟用限制酶（酶1、酶2、酶3和酶4）、DNA连接酶为工具，将目的基因（两端含相应限制酶的识别序列和切割位点）和质粒进行切割、连接，以构建重组表达载体。
限制酶的切割位点如图所示，下列分析合理的是（）A．可选择酶3切割质粒和目的基因，再用E.coliDNA连接酶连接B．可选择酶2和酶4切割质粒和目的基因，再用E.coliDNA连接酶连接C．可选择酶2切割质粒、酶4切割目的基因，再用E.coliDNA连接酶连接，连接后的片段仍能被酶2和酶4切割D．为了让重组表达载体的构建合理且高效，可用酶1和酶2切割质粒和目的基因，再用T4DNA连接酶连接4．将马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因PinⅡ导入杨树细胞，培育成了抗虫杨树。
如图表示含目的基因的DNA 分子和农杆菌质粒，图中Amp r表示氨苄青霉素抗性基因，Neo r表示新霉素抗性基因，箭头表示识别序列完全不同的几种限制酶的切割位点。
专题13 基因工程-2024年高考生物一模试题分类汇编(广东专用)(原卷版)
专题13 基因工程（基础题+提升题+创新题三位一体）1.（2024届·广东深圳·一模）基因工程的发展离不开理论的突破和技术的创新。
下列科学研究体现了基因工程正式问世的是（）A．艾弗里等人通过肺炎链球菌的体外转化实验证明DNA可以转移B．沃森和克里克建立了DNA双螺旋结构模型并提出自我复制假说C．科学家利用质粒构建重组DNA载体并导入受体细胞中成功表达D．科学家发现了多种限制性内切核酸酶、DNA连接酶和逆转录酶2.（2024届·广东汕头·一模）下列选项中相关“反应”与“反应条件”不一致的是（）A．A B．3.（2024届·广东江门·一模）在构建基因表达载体时，传统方法常受限于限制酶识别序列。
科研人员研发了新的DNA重组方法: In-Fusion技术。
该技术关键是要在目的基因两端构建与线性化质粒末端相同的DNA序列（即同源序列），然后用In-Fusion酶处理，使同源序列形成黏性末端，最终形成的重组质粒会在受体细胞内形成完整的重组序列。
主要操作过程如图示。
下列叙述错误的是（）A．推测In-Fusion酶的作用是识别同源序列、形成黏性末端、连接磷酸二酯键B．载体A端和B端的序列不同，可防止目的基因与质粒反向连接及自身环化C．形成重组质粒时，如果温度远高于50℃，黏性末端的碱基不容易互补配对D．该技术无需识别特定切割位点，需识别目的基因与线性质粒任意同源序列4.（2024届·广东汕头·一模）镉（Cd）是重金属污染物，具有极强毒性。
烟草作为重要的经济作物，在生长过程中容易富集Cd，Cd通过烟气进入人体，长期积累可能会引发疾病。
N1NRAMP3是定位于液泡膜参与Cd转运的蛋白，研究人员以普通烟草为材料，通过转基因技术研究NINRAMP基因的功能，为研究烟草在Cd胁迫中的适应机制提供理论基础。
回答下列问题：(1)从数据库获得NtNRAMP基因的序列，设计引物F和R后利用技术扩增得到NtNRAMP基因的cDNA 片段，测序鉴定。
专题一基因工程知识点汇总
专题一基因工程知识点汇总1．1 DNA重组技术的基本工具一、基因工程的原理：基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外和，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
由于基因工程是在水平上进行设计和施工的，因此又叫做。
1.“分子手术刀”——（1）来源：主要是从中分离纯化出来的。
（2）功能：能够识别双链DNA分子的，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的断开，因此具有性。
（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：和。
（4）这类酶在生物体内能将外来的DNA切断，即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力，但对自己的DNA却无损害作用，这样可以保持细胞原有的遗传信息。
2.“分子缝合针”——(1)两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：①相同点：都缝合。
②区别：E·coliDNA连接酶来源于，只能将双链DNA片段互补的末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合，但连接的之间的效率较低。
(2)与DNA聚合酶作用的异同: DNA聚合酶只能将加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。
DNA连接酶是连接的末端，形成磷酸二酯键。
3.“分子运输车”——载体（1）基因操作过程中使用载体两个目的：一是用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去；二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制。
（2）现在通常使用的载体是，它是一种相对分子质量较小、独立于之外，并具有自我复制能力的 DNA分子的环状DNA，有的细菌中有一个，有的细菌中有多个。
（3）质粒通过细菌间的接合由一个细菌向另一个细菌转移，可以复制，也可整合细菌拟核DNA中，随着拟核DNA的复制而复制。
（4）其他载体还有和等。
（5）作为载体必须具备以下条件：①能够在宿主细胞中；②具有多个，以便与外源基因连接；③具有某些，便于进行筛选，如对抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。
高考生物基因工程专题训练
高考生物基因工程专题训练在高考生物中，基因工程是一个重要且具有一定难度的专题。
基因工程作为现代生物技术的核心领域之一，不仅在科学研究中发挥着关键作用，也是高考中的重点考查内容。
基因工程，又称为重组 DNA 技术，是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外 DNA 重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
基因工程的操作工具，包括限制性核酸内切酶、DNA 连接酶和运载体。
限制性核酸内切酶能够识别特定的核苷酸序列，并在特定的切点上切割 DNA 分子。
DNA 连接酶则能将切割后的 DNA 片段连接起来，形成重组 DNA 分子。
而运载体，常见的有质粒、噬菌体和动植物病毒等，它们能够将目的基因导入受体细胞。
在基因工程的操作步骤中，首先要获取目的基因。
这可以通过从基因文库中获取、利用PCR 技术扩增，或者通过人工合成等方法来实现。
获取目的基因后，需要构建基因表达载体。
这是基因工程的核心步骤，目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在并表达。
接下来是将基因表达载体导入受体细胞。
根据受体细胞的不同，导入的方法也有所不同。
例如，将目的基因导入植物细胞可以采用农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；导入动物细胞常用的方法是显微注射法；而导入微生物细胞则通常用感受态细胞法。
导入受体细胞后，还需要对目的基因进行检测与鉴定。
这包括检测转基因生物染色体的 DNA 上是否插入了目的基因，检测目的基因是否转录出了 mRNA，以及检测目的基因是否翻译成蛋白质等。
基因工程在农业、医药、环境保护等领域都有着广泛的应用。
在农业方面，通过基因工程可以培育出抗虫、抗病、抗逆的农作物新品种，提高农作物的产量和品质。
例如，抗虫棉就是通过基因工程技术将苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因导入棉花细胞中培育而成的。
在医药领域，基因工程可以用来生产胰岛素、生长激素、干扰素等药物。
利用基因工程生产的药物具有成本低、效率高、质量好等优点。
专题10 生物工程 微专题2 基因工程
专题10 生物工程微专题2 基因工程(含PCR技术)1.基因工程的基本工具①基因工程中的载体与细胞膜上的载体不同。
②若用两种不同的限制酶同时切割目的基因和同时切割载体，则可使基因和载体定向连接，避免自身环化和反向连接，提高连接的有效性。
2.基因工程的四个操作步骤(1)目的基因的筛选与获取①目的基因主要是指编码蛋白质的基因。
②在已有mRNA前提下，可通过逆转录法获取目的基因。
③当基因较小且序列已知时，可采用化学合成法进行人工合成。
(2)基因表达载体的构建——重组质粒的构建①启动子、终止子a.启动子(DNA片段)≠起始密码子(位于mRNA上)。
b.终止子(DNA片段)≠终止密码子(位于mRNA上)。
②目的基因插入位置：启动子与终止子之间。
③利用乳腺生物反应器生产药物时，应将目的基因与乳腺中特异表达的基因的启动子连接到一起，再通过显微注射的方法导入哺乳动物的受精卵中。
(3)将目的基因导入受体细胞辨析农杆菌转化法中的“两个两次”①两次拼接：第一次拼接是将目的基因拼接到Ti质粒的TDNA的中间部位；第二次拼接指被插入目的基因的TDNA被拼接到受体细胞染色体的DNA上。
②两次导入：第一次导入是将含目的基因的Ti质粒重新导入农杆菌；第二次导入是指将含目的基因的TDNA导入受体细胞。
(4)目的基因的检测与鉴定3.PCR技术及应用(1)PCR技术原理与条件(2)PCR技术的过程可通过引物控制PCR扩增的基因片段，并在基因两侧引入限制酶识别序列。
4.蛋白质工程高考重点训练1.(2021·辽宁卷，4)下列有关细胞内的DNA及其复制过程的叙述，正确的是()A.子链延伸时游离的脱氧核苷酸添加到3′端B.子链的合成过程不需要引物参与C.DNA每条链的5′端是羟基末端D.DNA聚合酶的作用是打开DNA双链答案A解析细胞内DNA复制时，子链延伸方向为5′→3′，故游离的脱氧核苷酸添加到3′端，A正确；子链的合成过程需要引物参与，B错误；DNA每条链的5′端是磷酸基团末端，3′端是羟基末端，C错误；解旋酶的作用是打开DNA双链，D错误。
《基因工程专题》课件
通过基因工程改造细胞和微生物，可 以用于药物生产、疾病治疗和疫苗研 发，提高治疗效果和降低成本。
人类社会面临的挑战和机遇
伦理和安全问题
基因工程技术的发展和应用涉及到伦理和安全问题，如基因编辑 技术的滥用、基因歧视和生态风险等。
法律和监管问题
随着基因工程技术的广泛应用，相关的法律和监管体系需要进行调 整和完善，以确保技术的合理应用和发展。
04
基因工程的伦理和社会问题
基因工程的伦理问题
基因工程的道德地位
基因工程涉及到对生命本质的干预，因此引发了关于其道 德地位的讨论。一些人认为这是对自然的一种干预，而另 一些人则认为这是科技进步的必然结果。
基因歧视
由于基因信息可能揭示个人健康、行为等方面的信息，因 此存在基因歧视的风险。这可能导致保险、就业等方面的 歧视。
03
基因工程的应用实例
农业基因工程
抗虫作物
通过基因工程技术，将抗虫基 因导入作物，使其具有抗虫能
力，减少农药使用。
抗病作物
通过基因工程技术，增强作物 的抗病能力，降低作物病害的 发生率。
高产作物
通过基因工程技术，提高作物 的产量和品质，满足不断增长 的食物需求。
转基因动物
通过基因工程技术，培育出具 有优良性状的转基因动物，如
基因工程专
contents
目录
• 基因工程概述 • 基因工程的基本技术 • 基因工程的应用实例 • 基因工程的伦理和社会问题 • 未来展望
01
基因工程概述
基因工程概述
基因工程是指通过人工操作对 生物体的基因进行修饰、改造 和重组的技术。
它利用现代分子生物学技术， 在分子水平上对基因进行操作 ，从而实现对生物性状的改变 。
基因工程知识点总结
基因工程知识点总结选修3易考知识点背诵专题1基因工程基因工程的概念基因工程的别名操作环境操作对象操作水平基本过程结果特点基因拼接技术或DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平剪切→拼接→导入→表达产生人类需要的基因产物打破种的界限，定向改造生物本质基因重组（一）基因工程的基本工具1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有特异性。
（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。
2.“分子缝合针”——DNA连接酶(1)两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较：①相同点：都缝合磷酸二酯键。
4噬菌体，只能将双链DNA片段互补的黏性末了之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。
(2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。
DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。
3.“分子运输车”——载体（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。
②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。
③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。
（2）最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、布局简朴的、自力于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。
（3）其它载体：噬菌体、动植物病毒(二)基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取1.目的基因是指：是人们所需要转移或改造的基因2.获取目的基因的方法____________ _________________ _____________3.原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。
人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。
4.PCR技术扩增目的基因（1）原理：DNA双链复制（2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物联合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。
【高中生物】2023届高三生物二轮复习课件基因工程微专题
。
• ⑷1985年，穆里斯等人发明了PCR,对于基因工程的诞生和发展的意
义 为获取目的基因提供了有效手段。
有关核酸的方向性问题：
①核苷酸：
5
1
4
3
2
1’碳连碱基
2’碳（脱氧核糖连无氧；核糖有氧）
3’碳连羟基（-OH）
5’碳连磷酸
②一条脱氧核苷酸链（DNA单链）:
第四轮循环即DNA复制4次，共形成24＝16个DNA分子，其中含有最初模板链的2个
DNA分子含有引物A或引物B，其余14个DNA分子均含有引物A和引物B，所以第四
轮循环产物中同时含有引物A和引物B的DNA片段所占的比例为14/16＝7/8
第四轮循环产物中含
有引物A的DNA片段
所占的比例为？
15/16
离出目的基因。 第三个循环，当以
第二个循环得到的新片段为模板时，
因为这个片段的长度就是需要扩増的
长度，所以当第三个循环完成时，这
个片段是需要的长度，且是双链DNA，
这就得到了需要的目的基因了。所以
至少要3个循环才能分离出目的基因。
PCR反应相关计算:
4．利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似(如下图所示)。
氨酸-甘氨酸），该发光基团可利用定点突变技术使第66位酪氨酸换成组氨酸，即
可发出更明亮的蓝光，成为蓝色荧光蛋白（图4）。
定点突变第一步得把突变位点设计在引物上，据图中信息人工合成短 DNA 引物
应包含的序列是 AGAGTGCTC 。
定点诱变技术是近年来生物工程研究中发展迅速的一个领域。经典的大引物PCR定
扩增，得到融合基因。 图中引物2或引物3设计的要求是
【专题】基因工程知识图解(全面)
展望
如果这些问题能逐一解决的话，基因治疗将推动21世纪的医学革命。
1.4蛋白质工程
产生
(崛起)
基础
基因工程
缘由
内容
基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质，这些天然蛋白质是生物在长期进化过程中形成的，它们的结构和功能符合特定物种生存的需要，却不一定完全符合人类生产和生活的需要。
用化学方法人工合成
适用范围
基因比较小，核苷酸序列已知的基因；
仪器
可用DNA合成仪人工合成。
基因表达体的构建（核心）
目的
使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可遗传给下一代；
使目的基因能够表达和发挥作用。
组成
启动子
位置
基因的首端
作用
是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA，最终获得所需蛋白质。
目的基因是否翻译成蛋白质
从转基因生物中提取蛋白质；用相应的抗体进行抗原─抗体杂交；有杂交带表明目的基因已形成蛋白质。
个体生物学水平鉴定：如抗虫或抗病性状的接种实验；与天然产品的的DNA全部提取出来，选用适当的限制酶，将DNA切成一定范围大小的DNA片段，分别与运载体连接，导入受体菌群体中储存，每个受体菌中都含有一段不同的DNA片段。
举例
利用蛋白质工程延长干扰素的保存时间；
利用蛋白质工程提高玉米中赖氨酸的含量；
许多工业用酶改变天然酶的特性后，使之适应生产和使用需要。
基本
原理
流程
预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因）→合成DNA→表达出蛋白质，参见教材图1-29。
内容
(概念)
高考生物专题复习题：基因工程
高考生物专题复习题：基因工程一、单项选择题（共6小题）1.PCR引物的3′端有结合模板DNA的关键碱基，5′端无严格限制，可用于添加限制酶切点等序列。
下列相关叙述错误的是（）A．图中两条子链合成一定都是从5′端向3′端延伸B．图示表示复性阶段，该过程的温度与引物的长短有关C．用图示引物扩增5次后，可以产生22个目标产物D．PCR每次循环都消耗引物和原料，在实验过程中需要及时补充2.CRISPR/Cas9基因编辑技术可简单、准确地进行基因定点编辑。
其原理是由一条单链向导RNA引导核酸内切酶Cas9到一个特定的基因位点进行切割。
通过设计向导RNA中20个碱基的识别序列，可人为选择DNA上的目标位点进行切割（如下图）。
下列相关叙述错误的是（）A．合成Cas9蛋白需要mRNA、tRNA、rRNA参与B．向导RNA分子中不存在碱基互补配对C．Cas9蛋白通过作用于磷酸二酯键对目标DNA进行切割D．识别序列选择切割位点的原理是碱基互补配对原则3.下列有关基因工程技术的叙述，正确的是（）A．重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、DNA聚合酶和运载体B．基因工程是在细胞水平上进行设计和操作的C．只要目的基因进入受体细胞，就能成功实现稳定存在和表达D．选细菌为重组质粒受体细胞，是因为质粒易进入细菌，且繁殖快4.下列关于DNA片段扩增及电泳鉴定实验的说法，错误的是（）A．放入PCR仪前，需要对离心管进行离心，使反应液集中在底部B．配置琼脂糖溶液时，需要根据DNA片段的大小调节琼脂糖浓度C．电泳时需要的两种缓冲液分别含有核酸染料和指示剂D．电泳时，需要根据电泳槽阳极至阴极之间的距离设定电压5.下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是（）A．利用DNA不溶于酒精溶液，而某些蛋白质能溶于酒精溶液，可将DNA 与蛋白质分离B．将实验材料的研磨液倒入离心管中，离心后取沉淀物备用C．在用预冷的酒精沉淀DNA时，要用玻璃棒沿一个方向搅拌，防止DNA 断裂D．利用DNA能溶于2mol/LNaCl溶液的原理，可将提取的丝状物或沉淀物溶解于其中6.下列有关目的基因导入受体细胞和检测与鉴定的叙述，正确的是（）A．用Ca2+处理植物细胞有利于重组Ti质粒的导入B．对目的基因进行扩增时，通过荧光标记技术实时定量测定产物的量C．将某种药用蛋白基因导入动物乳腺细胞中可获得乳腺生物反应器D．验证转基因抗虫棉是否成功时，通过RNA分子标记检测目的基因是否表达二、多项选择题（共4小题）1.科学家将苏云金杆菌中的Bt 基因（抗虫基因）利用农杆菌转化法导入棉花的愈伤组织细胞，并进行组织培养获得棉花植株。
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基因工程专题检测B
一、选择题(共12小题，每小题4分，共48分)
1．在DNA连接酶的催化下形成的化学键和位置分别是()。
A．氢键碱基与脱氧核糖之间B．氢键碱基与碱基之间
C．磷酸二酯键磷酸与脱氧核糖之间D．磷酸二酯键脱氧核糖与碱基之间
2．从基因文库中获取目的基因的根据是()。
A．基因的核苷酸序列B．基因的功能
C．基因的转录产物mRNA D．以上都是
3．下列有关基因工程操作的叙述，正确的是()。
A．用同种限制性核酸内切酶切割载体与目的基因可获得相同的黏性末端
B．以蛋白质的氨基酸序列为依据合成的目的基因与原基因的碱基序列相同
C．检测到受体细胞含有目的基因就标志着基因工程操作的成功
D．用含抗生素抗性基因的质粒作为载体是因为其抗性基因便于与外源基因连接
4．下列关于基因文库的说法，错误的是()。
A．可分为基因组文库和部分基因文库
B．cDNA文库属于部分基因文库
C．基因组文库的基因在不同物种之间均可进行基因交流
D．同种生物的cDNA文库基因数量较基因组文库基因数量少
5．下列关于DNA连接酶的叙述正确的是()。
①催化相同黏性末端的DNA片段之间的连接②催化不同黏性末端的DNA片段之间的
连接③催化两个黏性末端互补碱基间氢键的形成④催化两个核苷酸之间的磷酸二酯键的形成
A．①③B．②④C．②③D．①④
6．科学家在培育抗虫棉时，经过了许多复杂的过程和不懈的努力，才获得成功。
起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。
之后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子(抗虫基因首端)，导入棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。
科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入终止子(抗虫基因末端)，导入棉花受精卵，结果长成的植株有了抗虫能力。
那么作为重组的载体应具备的结构是()。
A．目的基因、启动子、标记基因B．目的基因、终止子、标记基因C．目的基因、启动子、终止子、标记基因D．启动子、终止子、标记基因7．下列黏性末端属于同种限制性核酸内切酶切割而成的是()。
A．①②B．①③C．①④D．②③
8．某线性DNA分子含有3 000个碱基对(bp)，先用限制酶a切割，再把得到的产物用限制酶b切割，得到的DNA片段大小如下表。
限制酶a和b的识别序列和切割位点如图所示。
下列有关说法正确的是()。
A.在该DNA分子中，a酶与b酶的识别序列分别有
3
B．a酶与b酶切出的黏性末端不能相互连接
C．a酶与b酶切断的化学键分别为磷酸二酯键和氢键
D．用这两种酶和DNA连接酶对该DNA分子进行反复切割、连接操作，若干循环后，—AGATCC—
—TCTAGG—序列会明显增多
9．检测转基因生物是否转录出mRNA，应通过何种分子杂交方法实现()。
A．DNA—DNA杂交B．DNA—RNA杂交
C．RNA—蛋白质杂交D．蛋白质—蛋白质杂交
10．在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是。
A．用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸
B．用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体
C．将重组DNA分子导入烟草原生质体
D．用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞
11．现有一长度为1000碱基对(bp)的DNA分子，用限制性核酸内切酶Eco RⅠ单独酶切后得到的DNA分子仍是1000 bp，用KpnⅠ单独酶切得到400 bp和600 bp两种长度的DNA
分子，用Eco R Ⅰ、KpnⅠ同时酶切后得到200 bp和600 bp两种长度的DNA分子，该DNA分子的酶切图谱(如图所示)正确的是()。
12．下列技术依据DNA分子杂交原理的是()。
①观察DNA在细胞中的分布②检测目的基因是否导入细胞③检测目的基因是否翻
译④检测目的基因是否进行转录
A．②③B．①③C．②④D．①④
二、非选择题(共3小题，共52分)
13．(16分)下图表示从苏云金芽孢杆菌分离出来的杀虫晶体蛋白质基因(简称Bt基因)及形成转基因抗虫棉的图解。
请据图回答下面的问题。
(1)图中a过程要用到的酶是_______________________________________。
(2)在进行图中b过程时，由我国科学家独创的十分简便经济的方法是________，此外，
也经常采用________法。
若要培育转基因绵羊，则此过程要用________的方法。
(3)为确定抗虫棉是否培育成功，既要用放射性同位素标记的________作探针进行分子杂
交测试，又要在个体水平上鉴定，后者具体过程是
_________________________________________________________________。
(4)活化的毒性物质应是一种________分子，可以全部或部分嵌合于昆虫的细胞膜上，使
细胞膜产生孔道，导致细胞由于渗透平衡的破坏而破裂。
(5)我国在“863”计划资助下开展Bt抗虫棉、抗虫水稻等研究，可以减少农药、杀虫剂的
使用。
这将对________起到重要作用。
14．(18分)科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。
下图是转基因抗冻番茄的培育过程示意图。
(1)若图中Ⅱ是科学家构建的鱼抗冻蛋白基因的表达载体，则该基因表达载体的组成通常
应包括____________________等。
(2)科学家常采用________法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。
通常采用________技术
检测目的基因是否插入番茄的基因组。
(3)多聚半乳糖醛酸酶(PG酶)可将成熟的番茄果实细胞壁中的多聚半乳糖醛酸降解为半
乳糖醛酸，从而导致果实软化。
抑制PG酶的活性可以延长番茄果实储藏期，请用文字描述采用蛋白质工程技术降低该酶活性的一般过程。
____________________________________________________________________________ ________________________________________________________
_________________________________________________________________。
15．(18分)(2012·福建理综)肺细胞中的let基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。
研究人员利用基因工程技术将let基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。
该基因工程技术基本流程如图1。
图1 图2 请回答有关问题。
(1)进行过程①时，需用________酶切开载体以插入let基因。
(2)进行过程②时，需用______酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。
(3)研究发现，let基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2。
据图分析，可
从细胞中提取______进行分子杂交，以直接检测let基因是否转录。
肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中______(RAS mRNA/RAS蛋白)含量减少引起的。