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实验三高效苯酚降解菌的筛选及其性能测定
一、实验目的
1、掌握微生物分离纯化的基本操作；
2、掌握用选择性培养基从环境中分离苯酚降解菌的原理和方法；
3、掌握微生物对酚降解能力的测定方法；
4、掌握4-氨基安替比林法测定苯酚含量的方法。
二、实验原理
在工业废水的生物处理中，对污染成分单一的有毒废水，可以选育特定的高效菌株进行处理。
这些高效菌株以有机污染物作为其生长所需的能源、碳源或氮源，从而使有机污染物得以降解，具有处理效率高、耐受毒性强等优点。
苯酚是一种在自然条件下难降解的有机物，其长期残留于空气、水体、土壤中，会造成严重的环境污染，对人体、动物有较高毒性。
本实验通过筛选苯酚降
解菌来处理含酚废水，将苯酚降解为为二氧化碳和水，消除对环境的污染。
+ COOHCH2CH2COOH CH3COOH
C O2+H2O
从环境中采样后，在以苯酚为唯一碳源的培养基中，经富集培养、分离纯化、降解实验和性能测定，可筛选出高效酚降解菌。
三、实验器材与试剂
1、样品
实验土样采自校园污水处理厂。
2、器材
恒温培养箱、恒温摇床、分光光度计、比色皿、试管、250mL三角瓶、100mL 容量瓶、培养皿、涂布玻棒、量筒、天平、灭菌锅、酒精灯、接种环、棉花、棉
线、牛皮纸、pH 试纸。
3、试剂
葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨、苯酚、四硼酸钠（Na2B4O7）、4-氨基安替比林、过硫酸铵（（NH4）2S2O8）、K2HPO4、KH2PO4、MgSO4、琼脂。
苯酚标准溶液：称取分析纯苯酚 1.0g，溶于蒸馏水中，稀释至1000mL，摇
匀。
此溶液溶度为1000mg/L。
测定标准曲线时将苯酚浓度稀释至100mg/L。
Na2B4O7 饱和溶液：称取N a2B4O7 40g，溶于1L 蒸馏水中，冷却后使用，此
溶液的pH值为10.1。
3% 4-氨基安替比林溶液：称取分析纯4-氨基安替比林3g，溶于蒸馏水中，
并稀释至100mL，置于棕色瓶中，冰箱保存，可用两周。
2% （NH4）2S2O8 溶液：称取分析出（NH4）2S2O8 2g，溶于蒸馏水中，并稀
释至100mL，置于棕色瓶中，冰箱保存，可用两周。
4、培养基
富集培养基：蛋白胨0.5g，K2HPO4 0.1g，MgSO4 0.05g，水1000mL，调节pH 7.2-7.4，高压蒸汽灭菌，冷却后视需要添加适量的苯酚。
基础培养基：K2HPO4 0.6g，KH2PO4 0.4g，NH4NO3 0.5g，MgSO4 0.2g，CaC2l 0.025g，水1000mL，调节pH 7.0-7.5，高压蒸汽灭菌，冷却后视需要添加适量的苯酚。
四、实验步骤
（一）富集培养和驯化
采集活性污泥或土样，接种于装有100mL 富集培养基和玻璃珠并加有适量
苯酚（50mg/L）的三角瓶中，30℃振荡培养。
待菌生长后，用无菌移液管吸取
1mL 转至另一个装有100mL 富集培养基和玻璃珠并加有适量苯酚的三角瓶中，
如此连续转接2-3 次，每次所加的苯酚量适当增加，最后可得酚降解菌占绝对优
势的混合培养物。
（二）平板分离和纯化
1、用无菌移液管吸取经富集培养的混合液10mL，注入90mL无菌水中，充
分混匀，并继续稀释到适当浓度。
2、取适当浓度的稀释菌液，加一滴于固体平板（由富集培养基加入2%的琼
脂组成，倒平板时添加适量的苯酚，浓度达到200 mg/L。
）中央，用无菌玻璃涂
棒把滴加在平板上的菌液涂平，盖好皿盖，每个稀释度做2-3 个重复。
3、室温放置一段时间，待接种菌液被培养基吸收后，倒置于30℃恒温箱中
培养2-3d。
4、挑选不同菌落形态，在含适量苯酚的固体平板上划线纯化。
平板倒置于
30℃恒温箱中培养2-3d。
（三）转接斜面
将纯化后的单菌落转接至补加适量酚的试管斜面，30℃恒温箱中培养2-3d。
（四）降解实验
用接种环取斜面菌苔一环，接种于100mL基础培养基中，添加适量的苯酚，30℃震荡培养2-3d。
（五）酚含量的测定
1、标准曲线的绘制：取100mL容量瓶7 只，分别加入100mg/L 苯酚标准溶
液0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL，于每只容量瓶中加入Na2B4O7 饱和溶液10mL，3% 4-氨基安替比林溶液1mL，再加入Na2B4O7 和溶液10mL，2%（NH4）
S2O8 1mL，然后用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
放置10min 后将溶液转至比色皿中，
2
在560nm 处测定吸光度，根据吸光度和苯酚的量绘制标准曲线。
2、培养液中苯酚含量的测定：取经降解的培养液30 mL，离心，取上清液
10 mL于100 mL容量瓶中，加入N a2B4O7 饱和溶液10mL，3% 4-氨基安替比林溶
液1 mL，再加入N a2B4O7 饱和溶液10mL，2%（NH4）2S2O8 1mL，然后用蒸馏水
稀释至刻度，摇匀。
放置10min 后将溶液转至比色皿中，在560nm 处测定吸光度，从标准曲线上查得苯酚的量。
（六）、计算
C（苯酚，mg/L）=查得的苯酚毫克数/10×1000
苯酚脱除率=（C1-C2）/C1×100%
式中：
C1----降解前溶液中的苯酚浓度；
C2----降解后溶液中的苯酚浓度；
五、注意事项
1、各种培养基的配制应严格按配方的要求完成，尤其是苯酚的称量和pH；
2、涂布平板的菌悬液只作适度稀释，菌浓度不必过低；
3、涂布平板的菌悬液不要过多或过少，0.2mL为宜；
4、平板上挑取菌落时，要挑取单菌落；
5、单碳源实验的培养基和培养条件一定要严格把握。
六、思考题
1、如何从环境中分离高效苯酚降解菌株？
七、参考文献
1、张清敏. 环境生物学实验技术，化学工业出版社，2005
2、王兰. 环境微生物学实验方法与技术，化学工业出版社，2009
3、刘娜等. 环境生物技术实验，清华大学出版社，2012
4、孔志明等. 现代环境生物学实验技术与方法，2005。
苯酚降解菌的分离和鉴定
目录目录 (1)摘要 (2)Abstract (3)第一章绪论 (4)1.1 苯酚降解菌的定义及分类 (4)1.2苯酚降解菌的性质及其用途 (4)1.3苯酚降解的研究现状 (5)1.4苯酚降解菌生产菌的筛选 (6)1.5本课题的研究思路及意义 (6)第二章材料与方法 (7)2.1试验材料 (7)2.2试验方法 (8)2.2.2苯酚降解菌的驯化 (8)2.2.3菌种在不同条件下的降解能力 (9)2.2.4最优菌种的鉴定 (9)3.1苯酚降解菌筛选结果及性状初步研究 (11)3.11筛选结果 (11)3.1.1.1初步筛选的结果 (11)3.1.1.2 菌种驯化中的结果 (11)3.1.2 H-1菌株的性状初步结果 (13)3.2 H-1菌株分类鉴定结果 (13)第四章结论 (14)4.1菌种的筛选结果 (14)4.2菌种的鉴定 (14)参考文献 (15)致谢.......................................................................................... 错误!未定义书签。
一株苯酚降解菌的分离和鉴定摘要为了寻找能高效降解苯酚的微生物, 从土壤中筛选得到了一株苯酚降解菌,通过逐渐增加苯酚的浓度,然后驯化出一株高效降解苯酚的细菌H-1. 当在30 ℃培养48h 时其降解率高达92.11%. 经理化特征测定及外观鉴定,将其初步鉴定为假单胞菌属.再经过对比实验测各种因素(碳源、温度、pH、通气) 对该菌生长及降解苯酚能力的影响,得知该菌能以苯酚作为唯一碳源,最适生长温度为32 ℃,最适pH 为7.0. 该菌为好氧菌,在空气充足的条件下可提高降解能力.该菌菌落较小，菌落呈微黄色。
菌体呈直或微弯的杆装，没有菌柄也没有鞘。
不产芽孢。
对该菌做生化鉴定，可知该菌革兰氏染色为阴性，可水解苯酚，生长温度为32℃，生长pH为pH 6.5～7.5。
苯酚高效降解菌的筛选及其降解特性研究
ｔａ ｉ ｎ ｙ Ｗ ｕ ｔＣ ｒ ｔｏ ｓ ｂ ｓ－
２ ４ 固 定 化 Ｗ ｕｔ ． ｓ Ｃ对 苯 酚 的 降解 效 果 －
通 过 比 较 采 用 ２ ５ １ 、 、 ０ ｍＬ 注 射 器 制 作 的 Ｗ ｕｔＣ固定 化 小球 （ 别 记 为 １ ２ ３ ｓ— 分 、 、 小 球 ）
８６ ４ 、 ９ ３ 、 ７． 、 １ 。 ． ５ 。 ４ ６ ４ ．７
茅醇假 单胞 菌 ） 降解 苯酚 的效 率 明显 高 于 其 他 菌
株 ， 选其 作为研 究 菌株 ， 故 其革 兰 氏染 色结 果为 阴
性。
通过 一系列 的降 解 条件 优 化 试 验 发现 ， 酚 含
经 反 复驯化 、 涂板 分离 ， 共得 到 ８株 以苯酚 为
惟 一碳 源 和能源 而高 效生 长 的菌株 。通过 比较 发 现其 中 ３号 菌 株 （ 名 为 Ｗ ｕｔ 初 步鉴 定 为香 命 ｓ Ｃ， —
降解 不 同浓度 的苯 酚 。初 始 苯 酚浓 度 越 低 ， 解 降
所需 时 间越短 。在 初始 苯酚 浓度 为 ３ ０ｍｇ Ｉ 和 ０ ／ ５ ０ｍｇ Ｌ的 试 样 中 ， 酚 完 全 降解 所 需 的 时 间 ０ ／ 苯 分别 为 ８ｈ和 １ ； 初始 苯酚浓 度 为 ｌ ０ ／ ２ｈ 在 ０ｍｇ ０ Ｌ的试样 中， 酚完 全降解 所需 的时 问为 ３ ； 苯 ２ｈ 在 初 始苯 酚浓度 为 １６ ０ｍｇ Ｌ的试样 中 ， ０ ／ 菌体 的生 长 速度和 苯 酚的 降解 速度 均 极 其缓 慢 。培 养 ４ ｈ 时 ， ｓ Ｃ 对 初 始 含 酚 浓 度 分 别 为 ３ ０ ５ ０ Ｗｕ ｔ — ０、 ０、 ８ ０ １０ ０ｍｇ Ｉ 试 样 中的 苯酚 降解 率 分 别 达 到 ０ 、 ０ ／
PPT
谢谢
主要内容
• 苯酚的性质与危害 • 苯酚降解方法 • 苯酚降解菌的筛选与鉴定
苯酚的性质与危害
• 苯酚(C6H5OH)是最简单的酚，外观为白色或无色结晶， 有特殊气味和一定的腐蚀性，显酸性，其分子量为94.11。 • 苯酚是原浆毒物，属于高毒物质。它可以通过与皮肤粘膜 的接触吸收和经口服而侵入体内，与细胞原浆质蛋白能形 成不溶物，使细胞失去活力，高浓度酚可使蛋白质凝固及 引起组织损伤、坏死；而且，酚还能继续向深部渗透，引 起深部组织损伤、坏死，直至全身中毒。
苯酚降解方法
• 物理法 • 化学法 • 生物法
苯酚降解菌的筛选与鉴定
• 苯酚降解菌的筛选：水样采集与处理、菌种的富集、菌种 分离及筛选（初筛和复筛） • 菌种的鉴定：16S rDNA 的 PCR 扩增、16S rDNA课程的学习，我对于如何检索文献尤 其是英文文献有了更全面的认识，了解到很多以 前不知道的东西，并且学会了以前检索文献所不 会的新的方法。 • 本次论文的编写，使我对苯酚的降解方法及苯酚 降解菌有了基本的了解。感谢老师及同学们对我 的帮助。
高效降酚菌的筛选与特性研究
侯蒙蒙 101610051045
背景
• 随经济的发展，石油化工、塑料、合成纤维和焦 化等工业的迅速发展，各种含酚废水也相应增多， 这是目前水体的主要污染源之一。苯酚属于高毒 性物质，直接排放到水体中会引起环境的污染， 大量动植物的死亡，而且对人类的健康构成极大 的威胁。尤其是今年12月22日中石化青岛爆炸事 件造成海水的污染，更加引起了国家以及广大人 民群众对海水排污、苯酚降解的关注，科学家致 力于研究一种生物治理苯酚的方法，在自然界中 筛选出能够降解苯酚的高效菌群，并应用于现实 生活中，减少苯酚对自然环境的污染。
苯酚降解菌的筛选、鉴定及其降解特性的研究
上海师范大学硕士学位论文苯酚降解菌的筛选、鉴定及其降解特性的研究姓名：何小丽申请学位级别：硕士专业：微生物学指导教师：肖明20090501上海师范大学硕士学位论文摘要论文题目：苯酚降解菌的筛选、鉴定及其降解特性的研究学校专业：微生物学学位申请人：何小丽指导教师：肖明摘要酚类化合物为细胞原浆毒物，属高毒性物质。
这类物质来源广泛，通常污染水源，毒死鱼虾，危害农作物，并严重威胁人类的健康。
含酚有机物的毒性还在于其只能被少数的微生物分解。
从自然界中筛选分离出能够降解特定污染物的高效菌种，有针对性的投加到已有的污水处理系统中的生物强化技术，能够快速提供大量具有特殊作用的微生物，在有毒有害污染物治理中显示出巨大的潜力。
1、本研究从胜利油田河口采油厂的飞雁滩油田土壤样品中分离得到10株能够利用并降解苯酚的菌株P1-P4、P7、P9-P13。
该10株苯酚降解菌能够在以苯酚为唯一碳源和能源的培养基上生长，经16S rDNA分子鉴定和生理生化检测，该10株降酚菌分别被鉴定到属或种。
其中降酚菌株P1、P3和P4这3株菌株分别属于劳尔氏菌属(Ralstonia)、贪噬菌属（Variovorax）和节杆菌属（Arthrobacter）里的种。
其它7株降酚菌株P2、P7、P9-P13都属于假单胞菌属（Pseudomonas）里的种。
这4个属里的细菌在国内外都已被报道有降解苯酚的特性，其中有关假单胞菌降解环境有机物的报道较多。
2、培养液中的苯酚含量通过4-氨基安替比啉分光光度法测定，通过苯酚降解效率的比较，菌株P2降解苯酚的能力较其它9株菌株要强。
于是将菌株P2作为本研究中进一步研究的对象，研究了不同的环境条件下该菌株降解苯酚和菌体生长的情况。
3、通过苯酚羟化酶特异性引物的设计，从菌株P2扩增出苯酚羟化酶大亚基基因，该基因片段编码对苯酚有催化活性的多肽，催化苯酚代谢的第一步反应；表明菌株P2能降解苯酚是由于细胞具有降解苯酚的遗传基础。
苯酚降解菌的富集筛选及其降解条件分析研究
苯酚降解菌的富集筛选及其降解条件研究摘要：［目的］从炼油厂的活性污泥中分离高效苯酚降解菌，对其进行形态学鉴定，并研究其特性，为含酚废水的处理及环保工程菌株构建奠定基础，具有一定的理论和实际应用价值。
［方法］从南京金陵石化炼油厂的活性污泥中筛选、驯化得到1 株高效苯酚降解菌株P4。
通过形态学对其进行鉴定。
最后，对P4的苯酚降解特性进行研究。
［结果］P4为革兰氏阴性球菌，最适降解苯酚的温度为28℃，最适pH 为5.5。
36h 内对300mg/L的无机培养液苯酚降解率达到56.6%。
［结论］P4 具有较强的适应能力和苯酚降解能力，可用于高浓度含酚废水的生物处理，有较高的研究及应用前景。
关键词:苯酚降解菌。
筛选。
驯化。
最佳降解条件苯酚是有机合成的重要原料，是造纸、炼焦、炼油、塑料、农药和医药合成等行业生产的原料或中间体[1]，大量用于制造酚醛树脂以及其他高分子材料、药物、燃料和炸药等。
随着树脂、化工和高分子材料等企业对苯酚需求量的日益增加，各企业所排放的含苯酚废水量也日益增加[2]。
由于苯酚是一种原型质毒物，具有很强的毒性，对生态环境和人体健康构成巨大威胁[3, 4]。
在许多国家，苯酚已被环保部门列入优先控制污染物的黑名单之中[5, 6]。
结合国标GB8978-1996的实施，有关工作人员将每升1000毫克以上的含酚废水进行回收处理；每升1000毫克以下的含酚废水浓缩后回收处理；每升300毫克以下的含酚废水才允许采用某种方法清除废水中苯酚，处理达标后排放。
清除工业废水中苯酚的方法主要分为三大类：物理处理方法、高级氧化处理技术、生物治理方法。
常用的物理处理方法包括吸附法、溶剂萃取法、膜萃取技术和膜蒸馏技术等；常用的高级氧化处理技术包括湿式催化氧化技术、光催化氧化技术和电催化氧化技术等；常用的生物治理方法包括活性污泥法、酶处理技术和固定化微生物技术等[7]。
其中利用微生物降解苯酚不仅处理效率高、二次污染少，而且成本低廉、简单方便，因此生物降解法成为经济效益和环境效益俱佳的苯酚清除方法[8]。
高效苯酚降解菌的分离及降解性能的研究
高效苯酚降解菌的分离及降解性能的研究引言石油、化工、煤气、焦化及酚类等生产厂排放的废水当中含有大量的苯酚[1]。
未经净化的含酚废水可导致水源被污染，致使鱼类死亡，危害农作物，最终威胁人类的健康。
许多国家将苯酚列为重要的污染物之一。
目前，国内外处理含酚废水的方法主要有物理法、化学法、微生物法及各种结合法[2]。
其中微生物法主要利用微生物的代谢活动去除废水中的有毒物，处理方法无2次污染且安全、经济。
目前，已鉴定具有降解苯酚能力的微生物主要有假单胞菌（Pseudonomonas.sp）[3]、芽孢杆菌（Bacillus.sp）[4]、酵母菌（Yeast trichosporon）[5]、根瘤菌（Rhizobia）[6]、醋酸钙不动杆菌（A. calcoaceticus）[7]等，降酚菌株多存在于酚类污染物企业排放的废水、污泥和被废水污染的土壤中[8]。
本课题拟从被苯酚废水污染的污泥中进行菌株筛选，得到耐酚菌后在以苯酚为唯一碳源的无机盐培养上筛选降酚菌株，进一步测定苯酚降解的影响因素。
对特定菌株降解含酚废水的应用价值进行研究。
1 实验材料和方法1.1 菌株来源采集原黑龙江省佳木斯东郊黑龙农药化工集团废弃排污口处污泥进行菌株筛选。
1.2 培养基基础培养基：NaCl 5.0g/L，蛋白胨10g/L，琼脂15～20g/L，酵母浸膏5.0g/L，调节pH为7.0。
以苯酚为唯一碳源的无机盐培养基：CaCl2 0.1 g/L ，FeSO4.7H2O 0.01 g/L，K2HPO4 0.5g/L，MnSO4.7H2O 0.05 g/L，NaCl 0.2 g/L，KH2PO4 0.5g/L，MgSO4.H2O 0.01 g/L，NH4NO3 1.0 g/L苯酚按实验需要量添加，调节pH为7.0 [8]。
富集培养基：葡萄糖10.0g/L，营养琼脂33.0g/L，酵母浸粉10.0g/L，调节pH为7.5。
1.3 研究内容与方法1.3.1 菌株和的驯化和分离在超净工作台中，将10mL含0.1g/L苯酚的基础培养基倒入培养皿，取10 g污泥加90mL蒸馏水搅拌15min，静置5min后取上层清液为菌原液[8]。
高效苯酚降解菌的分离与降解特性
基金项 目：佳木斯大学学 生创新课题 （课题编号 ：Ｄｚ２０１１—０２１） ＊为通讯作者
· ２５· ２０１１年 ８月
农 业 与 技 术
Ｖｏ１．３１ Ｎｏ．４
荫 种 的甯 集 与驯 化 采用 一 次性 加入 大 剂昂 化 号 】、２、３、４、５、６、７。
合 物 的方法 ［８］。将菌 种在 无菌条 件 下接 种到 ２０ｍＬ
３．１ 结 果
大面积 农 作 物种 植 区 ，利 用 松 花 江 水 进 行 灌 溉 ，
３．１．１ 筛选 出 ７株降解能力强的菌株对苯酚都有 而含酚废水直接排入江中则将对农作物造成毒害 一 定 的点适应 性 ，且对苯 酚有很强的降解能力 ， 作用 ，同时人们适用后有毒物质 在人体 内富集 ，
达 ２５％，血酚浓度为 ０．７４ｍｍｏｌ／Ｌ，１０分钟死亡。 将浓度 为 ｌ０～，１０～，１０～，１０一，ｌ０一 的土样
酚类会对人类的身心健康造成危害，毒害其他生 溶液接种到富集培养基上 ，培养 ４８ｈ后观察。
物 ，破坏了生态系统 的稳定性 ，故我国及其他国
（２）选 择 培 养基［ ］：ＫＮｏ３４．０ｇ，ＮａＣ１ ５．０ｇ，
ｓｏｒｂｅｎｔｓ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ８Ｏｌ￣ Ｖｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｔｏｗａｎｔｓ ｐｈｅｎｏｌ ａｎｄｉｔｓ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ［Ｊ］．ＲＰ￣ｌｃｔｉｖｅ ａｎｄ ＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＰｏｌｙｍｅｒｓ，２００１，４６ （３）：
２５９—２７１
高 浓度 含 酚污 水 的研 究 仍 有 深 度 可挖 ，因此 必 须 ［８］任源 ，吴超 飞，等 ．苯胺分离菌 的驯化筛选研究 ［Ｊ］．环 境
及不 同苯酚浓度下的生长和苯酚降解情况的考察 ，
苯酚降解菌的筛选及性能评价
少， 可分为单元酚 （ 如苯酚） 和多元酚 。按
其能 否与水蒸气 共沸而挥 发 ． 又分 为挥发
混凝 沉淀 和气浮 法 、 气提 及蒸 酚和不挥 发酚。 因此 ． 酚类不仅指 苯酚 ， 而 有盐析 法 、 馏法 、 吸 附法 、 萃取 法 、 离 子交换 法、 膜技 且还 包括邻位 和间位被烃基 、 卤素 、 烷基、 硝基、 亚硝 基 、 羧基 、 醛基、 苯 甲酞等 取 代
苯 酚 降 解 茵 的 筛 选 及 性 能 评 价
辽 宁阜 新 氟产 业 开发 区 高博
一Hale Waihona Puke 、引 言 苯酚是原生质毒 ， 属于高毒 物质。它 酚废水 。 但是 需要消耗大 量的能源 。离 子
吸收和经 口服 交换 法不 适 用于 处理 数万 毫克每 升的 高 随着石油化工、 塑料、 合成纤维、 焦化 可以通过皮肤粘膜 的接触 、 等 工业的迅速发 展 ． 各种 含酚废 水也相 应 而侵入人体 内部 ， 与细胞 原浆质蛋 白质能 浓度含酚废水 。 增多， 由于 含酚 废水 的毒 性较 大 。 而且 涉 及水 生生物 的生长和繁殖 ， 污染 饮用水 水 源。 因此对 含酚废水 的排 放必须 有严格 的 规定 。一般条 件下 ， 规定 饮用水 的含挥 发
性酚 的浓度为 ０ ． ０ ０ １ ｍｇ ／ Ｌ 。 水源 水体 中含
形成不溶性蛋 白质 ， 使 细胞失去活 力 ， 高 浓度酚可使蛋 白质凝 固及 引起组 织损伤 、
２ 、 含 酚废 水 的化学处理 法
化学处理法主要有化学沉淀法、 化学
酚最高容许浓 度为 ０ ． Ｏ ０ ２ ｍ ｇ ／ Ｌ ［ １ ］ 。 根 据这
（ 一） 、 含 酚 废 水 的 来 源
在水处理 中的利用率较低 。 且 臭氧生产 费 １ ９ ７ ２年 Ｆ ｕ ｊ ｉ ｓ ｈ ｉ ｍ ａ等发现 了 Ｏ ． 电极 上
高效苯酚降解菌的筛选及其特性的研究
鉴定该菌为球 菌， 兰氏染色阴性 。 实验结果表 明 ： 革 降解苯 酚的最佳条件为 ： 温度 ３ 、 Ｈ值 ７ ８ 葡 萄糖 浓度 １５０ｍｇ 、 ０ｏ ｐ Ｃ ～， ０ ／ 接 Ｌ
种 量 ｌ％、 液 量 ５ Ｌ Ｏ 装 ０ｍ 。 关键词 ： 酚 ； 化 ； 苯 驯 筛选 ； 响 因素 影
文章 编 号 ：６ ４ １２ （０ ０ ０ — ０ ５ ０ １ ７— ０ １ ２ １ ）９ ０４ — ３
长所 需 的各种 营 养物 质 。实 际工 业含 酚废 水 中可 能 苯 酚是 一种 重要 的有 机化 工 原料 ，是 丙烯 的重
要 衍 生物 之 一 ， 要用 于 生 产 酚醛 树 脂 、 主 己内酰 胺 、 双 酚 Ａ、 己二 酸苯胺 以及 水杨 酸 等 …， 成 为这 些 工 并
ｄｏ ｅ１ ％ ，ｉ ｉ ｏ ｕ ｅ５ ｍ Ｌ ｓ ０ ｌｑｕ ｄｖ ｌ ｍ ０ Ｋｅ ｙ ｗｏｒ ｄｓ： ｈｅ ｏ ； ｃ ｌｍａｔ ａｉ ｎ ｓ ｒ ｅ ｎｇ ｆ ｃｏ ｓ ｐ ｎ ｌａ ｃ ｉ ｉ ｔｏ ； ｃ ｅ ｎｉ ； ａ ｔｒ ｚ
中 图分 类 号 Ａ
Ｋ２ ＨＰＯ４０． Ｌ， Ｓ ５ Ｍｇ Ｏ４‘ ７Ｈ２ ０． ／ Ｃａ ２０． ／ ０ ２ ｇ Ｌ， Ｃ１ １ ｇ Ｌ，
业废 水 中 的主要 污染 物 。 中国等 许多 国家 已将 其列
入重点污染物的名单之中［。 ２ 近年来 ， １ 国内外许多学 者在生物降解苯酚方面进行了广泛的研究 ，已筛选 出多种 降 酚微 生物 菌株 ， 如假 单 胞 菌 （ｓｕｏ ｏａ— Ｐｅｄｍ ｎｓ ｓ． 、 ｐ ） 真养 产碱菌 （ ａｉｅｅ ｕｒ ｈ ｓ …、 Ａｌ ｌ ｎ ｓ ｔ ｐ ｕ ） 醋酸 钙 ｃ ｇ ｅ ｏ
高效苯 酚降解菌 的筛选及其特性 的研究
实验三 高效苯酚降解菌的筛选及其性能测定
实验三高效苯酚降解菌的筛选及其性能测定一、实验目的1、掌握微生物分离纯化的基本操作；2、掌握用选择性培养基从环境中分离苯酚降解菌的原理和方法；3、掌握微生物对酚降解能力的测定方法；4、掌握4-氨基安替比林法测定苯酚含量的方法。
二、实验原理在工业废水的生物处理中，对污染成分单一的有毒废水，可以选育特定的高效菌株进行处理。
这些高效菌株以有机污染物作为其生长所需的能源、碳源或氮源，从而使有机污染物得以降解，具有处理效率高、耐受毒性强等优点。
苯酚是一种在自然条件下难降解的有机物，其长期残留于空气、水体、土壤中，会造成严重的环境污染，对人体、动物有较高毒性。
本实验通过筛选苯酚降解菌来处理含酚废水，将苯酚降解为为二氧化碳和水，消除对环境的污染。
+ COOHCH2CH2COOH CH3COOHCO2+H2O从环境中采样后，在以苯酚为唯一碳源的培养基中，经富集培养、分离纯化、降解实验和性能测定，可筛选出高效酚降解菌。
三、实验器材与试剂1、样品实验土样采自校园污水处理厂。
2、器材恒温培养箱、恒温摇床、分光光度计、比色皿、试管、250mL三角瓶、100mL 容量瓶、培养皿、涂布玻棒、量筒、天平、灭菌锅、酒精灯、接种环、棉花、棉线、牛皮纸、pH试纸。
3、试剂葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨、苯酚、四硼酸钠（Na2B4O7）、4-氨基安替比林、过硫酸铵（（NH4）2S2O8）、K2HPO4、KH2PO4、MgSO4、琼脂。
苯酚标准溶液：称取分析纯苯酚1.0g，溶于蒸馏水中，稀释至1000mL，摇匀。
此溶液溶度为1000mg/L。
测定标准曲线时将苯酚浓度稀释至100mg/L。
Na2B4O7饱和溶液：称取Na2B4O740g，溶于1L蒸馏水中，冷却后使用，此溶液的pH值为10.1。
3% 4-氨基安替比林溶液：称取分析纯4-氨基安替比林3g，溶于蒸馏水中，并稀释至100mL，置于棕色瓶中，冰箱保存，可用两周。
2% （NH4）2S2O8溶液：称取分析出（NH4）2S2O8 2g，溶于蒸馏水中，并稀释至100mL，置于棕色瓶中，冰箱保存，可用两周。