紫外可见分光光度法案例
紫外-可见分光光度法在药物检验中的应用
【主要内容】紫外可见分光光度法是通过被测物质在紫外光区的特定泼 长或一定泼长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。 被测物质的分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近 紫外区（200–400nm）或可见光区（400–760nm）产生吸收。在药品检 验中主要用于药品的性状. 鉴别. 检查和含量测定。 应用原理： ① 已知物质的吸收峰泼长或吸收度比值作为物质的定性鉴别; ② 当被测物质本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收, 或杂质的吸收峰处没有被测物质的吸收峰，则可用本法做杂质检查； ③ 可选择被测物质的最大吸收泼长处测出吸收度，再用对照品或吸收系数求 算出被测物质的含量测定。
药物检验论文 论文名称：紫外-可见分光光度法在药物检验中的应用
【摘要】:在药品检验中本法主要用于药品的性状. 鉴别. 检查和含量测定，具有灵敏度高、样品用量少
的优点，实用于微量和痕量物质的分析。测定
时,除另有规定外应以配制拱试品溶液的同批溶 剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池，在规定 的吸收峰泼长±2nm以内测试几个点的吸收度， 以核对供试品的吸收峰泼长位置是否正确,除另有 规定外，吸收峰泼长应在该药品项下规定的泼长
LIGHT SOURCE 出现ok！自检通过
SELFTESTING 狭缝宽度测试 SLIT＝2 OK! 自检通过
SELFTESTING 滤色片测试 FILTER OK! 自检通过
SELFTESTING 自检单色器 MONOCHROMATOR OK!自检通过
546.0 nm BLAKING
546.0 nm0.000A/100﹪T 自检完毕进入测试状态
例，草乌鉴别：取本品粉末0.5g，加乙 醚10ml与氨试液5ml,振摇10min，滤过， 滤液置于分液漏斗中，加0.25mon/l硫酸 溶液20ml，振摇提取，分别取酸液适量， 用水稀释后，照紫外-可见分光度法 （《中国药典》2005版一部附录VA）测 定，在231nm与275nm波长处有最大吸 收，
紫外可见分光光度法实验
紫外可见分光 光度法实验
实验2 鉴定和识别有机化合 物中的电子跃迁类型
实验3 紫外分光光度法同时测 定维生素C和维生素E
指导老师：马少妹
实验4 三氯苯酚存在时苯 酚含量的紫外分光 光度法测定
实验5 紫外可见吸收光谱法 测定双组分混合物
2020/9/30
仪器分析实验报告写法
1.每个实验于下个实验之前交，每人交一份。报告要书写整齐清楚。 2.报告不可剽窃或抄袭他人之作，更不可造假数据。 3.报告以A4大小纸张撰写，格式如下: 封面 : 记载实验序号、实验项目、实验日期及报告人姓名。 內容 : 按“前言→实验方法及步骤→实验結果→ 讨论→结语→参考文献→ 附录”等。 (I)在“前言”(或“绪论”)部份，扼要敘述实验目的，所使用之仪器的特 性，分析的基本原理，理论背景等，并用几句话归纳所作的实验项目及所 获得的结果。
2020/9/30
（6）气态苯和溶液中苯的吸收曲线有何个同？为什么？ （7）助色团—NH2将如何影响苯胺？质子化作用后，产高等教育出版社 赵文宽等编，《仪器分析实验》）
2020/9/30
实验3 同时测定维生素C和维生素E 2．实验目的 掌握在紫外区中同时测定—个双组分体系[抗坏血酸(维生素C) 和α-生育酚(维生索E)的实验方法。 2．仪器和试剂 916型紫外-可见分光光度计； ，石英比色皿2只，容量瓶移和 液管若干。抗坏血酸（AR）：0.0132g／L在无水乙醇中(7.50 ×l0-5mol/L)；α-生育酚(维生素E)：0.0488g/L在无水乙醇中； 无水乙醇；未知溶液：在无水乙醇中含有抗杯血酸和α-生育酚 溶液。
2020/9/30
为292nm)，以吸光度对浓度作图。
（2）计算抗坏血酸和α-生育酚在最大吸收波长（246nm和 292nm）时的摩尔吸光系数：即标准曲线图的斜率。
紫外可见分光光度法测定药物含量的计算实例.
(二）分光光度法
对乙酰氨基酚原料药含量测定
A 1 V D
含量%
E 1% 1cm
100
100 %
m
0.582 1 250 100
715 100
5 100% 99.05%
0.0411
(二）分光光度法
甲氧苄啶注射液（规格2 ml：0.1g）含量测定
精密量取本品1ml，置25ml量瓶中，用稀醋酸稀释至刻度 ，摇匀，精密量取1ml置100ml量瓶中，用稀醋酸稀释至刻度， 摇匀。照紫外-可见分光光度法，在271nm波长处测定吸光度为 0.420。另取甲氧苄啶对照品适量0.05134g，置25ml量瓶中，用 稀醋酸稀释至刻度，精密量取1ml置100ml量瓶中，用稀醋酸稀 释至刻度，摇匀。在271nm波长处测定吸光度为0.416，计算甲 氧苄啶标示量百分含量。
Байду номын сангаас
(二）分光光度法
甲氧苄啶注射液（规格2 ml：0.1g）含量测定
标示量%
cR
Ax AR
D
每支容量
100%
S
0.05134 0.420 25 100 2 25100 0.416 1 1 100% 103.7%
0.1
药物分析/药物的含量测定
紫外可见分光光度 法测定药物含量的 计算实例
制作人：谭韬
(二）分光光度法
对乙酰氨基酚原料药含量测定
精密称取对乙酰氨基酚0.04110g，置250ml量瓶中，加 0.4%氢氧化钠溶液50ml，加水至刻度，摇匀，精密量取5ml， 置100ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇 匀。依照分光光度法，在257nm波长处测得吸收度为0.582。 按C8H9NO2的百分吸收系数为715计算对乙酰氨基酚的百分含 量
紫外可见分光光度法测定药物含量的计算实例(精)
(二）分光光度法
甲氧苄啶注射液（规格2 ml：0.1g）含量测定
标示量%
cR
Ax AR
D
每支容量
100%
S
0.05134 0.420 25 100 2 25100 0.416 1 1 100% 103.7%
0.1
(二）分光光度法
对乙酰氨基酚原料药含量测定
A 1 V D
含量%
E 1% 1cm
100
100 %
m
ห้องสมุดไป่ตู้
0.582 1 250 100
715 100
5 100% 99.05%
0.0411
(二）分光光度法
甲氧苄啶注射液（规格2 ml：0.1g）含量测定
精密量取本品1ml，置25ml量瓶中，用稀醋酸稀释至刻度 ，摇匀，精密量取1ml置100ml量瓶中，用稀醋酸稀释至刻度， 摇匀。照紫外-可见分光光度法，在271nm波长处测定吸光度为 0.420。另取甲氧苄啶对照品适量0.05134g，置25ml量瓶中，用 稀醋酸稀释至刻度，精密量取1ml置100ml量瓶中，用稀醋酸稀 释至刻度，摇匀。在271nm波长处测定吸光度为0.416，计算甲 氧苄啶标示量百分含量。
药物分析/药物的含量测定
紫外可见分光光度 法测定药物含量的 计算实例
制作人：谭韬
(二）分光光度法
对乙酰氨基酚原料药含量测定
精密称取对乙酰氨基酚0.04110g，置250ml量瓶中，加 0.4%氢氧化钠溶液50ml，加水至刻度，摇匀，精密量取5ml， 置100ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇 匀。依照分光光度法，在257nm波长处测得吸收度为0.582。 按C8H9NO2的百分吸收系数为715计算对乙酰氨基酚的百分含 量
实验四、紫外-可见分光光度法测苯甲酸含量
实验四、紫外-可见分光光度法测苯甲酸含量一、实验目的1．学会使用紫外-可见分光光度计，掌握标准对比法。
2．掌握标准对照法曲线的绘制和含量的计算。
二、实验原理在碱性条件下，苯甲酸形成苯甲酸盐，对紫外光有选择性吸收，其吸收光谱的最大吸收波长在225nm。
可采用紫外分光光度计测定物质在紫外光区的吸收光谱并进行定量分析。
三、实验器材试药：0.01mol/L、0.1mol/L氢氧化钠、苯甲酸仪器：量瓶、烧杯、紫外-可见分光光度计四、实验步骤1、苯甲酸标准储备液的制备精确称取苯甲酸100mg，用0.1mol/L氢氧化钠溶液100ml溶解后，再用蒸馏水稀释1000ml。
此溶液1ml含0.1mg苯甲酸。
2、苯甲酸吸收曲线的测量吸取苯甲酸贮备液4.00ml，放入50ml容量瓶中，用0.1mol/L氢氧化钠溶液定容，摇匀。
此溶液1ml含8μg苯甲酸。
测量条件光源：氢灯；参比液：0.01mol/L氢氧化钠；测量波长范围：210～240nm。
3、标准曲线的制备取标准储备液适量，置于50mL容量瓶中，加0.01mol/L氢氧化钠稀释，分别得到浓度为4、8、12、16、20、24μg.L-1的溶液，取各溶液于“2项”曲线中的最大吸收波长处测吸收度A，得回归方程和相关系数R2。
4、标准对比法测定样品液苯甲酸的含量取10.00ml样品液，放入50ml容量瓶中，用0.01mol/L氢氧化钠定容，摇匀。
在上述曲线中找出最大吸收波长，以此作定量分析的入射光。
以0.01mol/L氢氧化钠溶液为参比。
在完全相同的条件下测出标准苯甲酸溶液和稀释好的样品液的吸光度值。
5、按“3项”所得回归方程计算样品液中苯甲酸的浓度。
五、数据处理1）样品液中苯甲酸含量试样溶液的吸光度为,从标准曲线上可查得c= mg/ml。
六、思考题1、如果试液测得的吸光度不在标准曲线范围之内怎么办？2、从实验测出的吸光度求苯甲酸含量的根据是什么？如何求得？。
紫外可见分光光度法经典案例(2)
21
22
23
➢ 影响吸收带位置的因素： 1．溶剂效应： ➢ 对λmax影响：
n -π*跃迁：溶剂极性↑，λmax↓蓝移 π-π*跃迁：溶剂极性↑，λmax↑红移
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➢ 影响吸收带位置的因素： 1．溶剂效应：
➢ 对吸收光谱精细结构影响： 溶剂极性↑，苯环精细结构消失
2．pH值的影响：影响物质存 在型体，影响吸收波长
（一）光学因素 （二）化学因素
32
（一）光学因素
非单色光的影响： ✓ Beer定律应用的重要前提——入射光为单色光
• 照射物质的光经单色器分光后 并非真正单色光 • 其波长宽度由入射狭缝的宽度 和棱镜或光栅的分辨率决定 • 为了保证透过光对检测器的响 应，必须保证一定的狭缝宽度 • 这就使分离出来的光具一定的 谱带宽度
第四章 紫外-可见分光光度法
第一节 光学分析法概论
一、电磁辐射和电磁波谱 二、光学分析法及其分类 三、光谱法仪器-分光光度计
1
一、电磁辐射和电磁波谱
1．电磁辐射（电磁波，光） ：以巨大速度通过空间， 不需要任何物质作为传播媒介的一种能量。
2．电磁辐射的性质：具有波、粒二向性
波动性： c ， 1
粒子性E：h h c
42
2. 共轭体系的判断
• 共轭体系会产生很强的K吸收带，通过绘制吸收光谱， 可以判断化合物是否存在共轭体系或共轭的程度。
• 如果一化合物在210nm以上无强吸收带，可以认定该化 合物不存在共轭体系；若在215～250nm区域有强吸收 带，则该化合物可能有两至三个双键的共轭体系。
• 如1－3丁二烯， 为217nm， 为21,000；若260～ 350nm区域有很强的吸收带，则可能有三至五个双键的 共轭体系，如癸五烯有五个共轭双键， 为335nm， 为118,000。
实验三 紫外分光光度法测定色氨酸的含量
湖北工程学院生命科学技术学院实验报告课程：学号：姓名：分数：实验（三）紫外-可见分光光度计一．实验目的紫外可见分光光度计是一种历史悠久、覆盖面很广、在有机化学、生物化学、药品分析、食品检验、医药卫生、环境保护、生命科学等各个领域的科研、生产工作中都得到了极其广泛的应用。
因此通过此实验，可以了解UVPROBE仪器的实验结构和实验原理，简单操作步骤和注意事项，会用光度计仪器来分析样品镀膜的透射率，来达到工作上对镀膜性质分析的需要。
二．实验原理物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。
由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。
分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。
物质在光的照射下会产生对光的吸收效应，而且物质对光的吸收是具有选择性的。
各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱。
因此不同波长的单色光通过溶液时其光的能量就会被不同程度的吸收，光能量被吸收的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也就是紫外可见分光光度法的定量分析基础是朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律。
即物质在一定浓度的吸光度与它的吸收介质的厚度呈正比。
三．实验器材及试剂台式电脑，紫外-可见分光光度计，5ppm Cyadox溶液、5ppm邻苯二胺溶液、5ppm 2-硝基酚溶液置于棕色容量瓶中。
四．实验步骤1.首先打开电源的总开关，然后打开电脑，等电脑待机状态的时候再打开光度计仪器的开关。
2.要预热五到十分钟，然后打开软件，进入软件的操作界面。
3.然后初始化，点击菜单的“M”，在“测定”菜单中中的波长范围中改变参数，开始选择900，结束选择300。
T9-紫外可见分光光度计应用案例--普析
紫外可见分光光度计应用案例案例1.肉制品中亚硝酸盐的测定前处理方法：称取5g(精确至0.01g)制成匀浆的试样，置于50mL烧杯中，加12.5mL饱和硼砂溶液，搅拌均匀，以70℃左右的水约300mL将试样洗入500mL容量瓶中，于沸水浴中加热15min取出置冷水浴中冷却，并放置至室温。
在振荡上述提取液时加入5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。
加水至刻度，摇匀，放置30min，除去上层脂肪，上清液用滤纸过滤，弃去初滤液30mL，滤液备用。
检测仪器：T9型紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）仪器条件（见表1）：表1 测量参数检测界面（见图1）：图1 肉制品中亚硝酸盐的检测界面上图标准曲线中，亚硝酸钠标准系列的质量依次为：0.0μg、2.0μg、4.0μg、6.0μg、8.0μg、10.0μg、15.0μg、20.0μg、25.0μg（100mL容量瓶中）。
方法检出限：该方法检出限为1mg/kg，能够满足《GB 5009.33-2010食品安全国家标准食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定第二法分光光度法》的检测要求。
参考标准：《GB 5009.33-2010食品安全国家标准食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定第二法分光光度法》案例2.啤酒中甲醛的测定前处理方法：吸取已除去二氧化碳的样品25.00mL移入500mL蒸馏瓶中，加200g/L磷酸溶液20.00mL于蒸馏瓶，接水蒸气蒸馏装置中蒸馏，收集馏出液于100mL容量瓶中（约100mL），冷却后加水稀释至刻度。
检测仪器：T9型紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）仪器条件（见表2）：表2 测量参数检测界面（见图2）：图2 啤酒中甲醛的检测界面上图标准曲线中，甲醛标准系列的质量依次为：0.0μg、0.5μg、1.0μg、2.0μg、3.0μg、4.0μg、8.0μg（25mL比色管中）。
方法检出限：该方法检出限为0.8μg，能够满足《GB/T 5009.49-2008 发酵酒及其配制酒卫生标准的分析方法（4.4甲醛）》的检测要求。
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第七章 紫外-可见分光光度法
分析化学（第2版） 谢庆娟 李维斌
◆学习目标⊙ ◆知识要求⊙ ◆能力要求⊙全国高职高专药品类来自业卫生部“十二五”规划教材
◆学习目标
分析化学（第2版） 谢庆娟 李维斌
通过学习光谱分析法概论、紫外-可见分光光度法 的基本原理、分光光度计的基本构造、降低测量误 差的方法、常用的定性、定量方法等知识，了解光 学分析法的知识体系，熟悉紫外-可见分光光度法 的实际应用，会用紫外-可见分光光度计测定溶液 的吸光度，并对有关物质进行定性定量分析，为学 习红外分光光度法、荧光分光光度法、核磁共振波 谱法及药物分析课中有关药品的定性鉴别、杂质检 查和含量测定方法奠定基础。
全国高职高专药品类专业卫生部“十二五”规划教
材
◆知识要求
分析化学（第2版） 谢庆娟 李维斌
1．掌握光的吸收定律概念、表达式及条件，吸光系数和 吸收光谱的意义，常用定量分析方法的原理和应用。
2．熟悉紫外-可见分光光度计的基本结构、吸光度测量 条件的选择、偏离光的吸收定律的主要因素。
3．了解光谱分析法的分类、紫外-可见吸收光谱的产生 机制、定性分析的依据和方法。
仪器简单
操作简便
价格低廉
测定快速
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第一节 概述
分析化学（第2版） 谢庆娟 李维斌
课堂活动
1．紫外-可见光的波长范围是
A．200~400nm
B．400~760nm
C．200~760nm
D．360~800nm
2．下列叙述错误的是
A．光的能量与其波长成反比
B．有色溶液越浓，对光的吸收也越强烈
利用光谱进行定性、定量和结构分析的方法称为光 谱分析法，简称光谱法。
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第一节 概述
分析化学（第2版） 谢庆娟 李维斌
一、物质对光的选择性吸收
单色光: 单一波长的光束 复色光: 含有多种波长的光束 电磁波谱: 以波长大小顺序排列的电磁波谱图
波长 10pm 300pm 200nm 400nm 800nm 500mm 1cm 1m
根据可见光、紫外光与物质分子的相互作用建立了 紫外-可见分光光度法，
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第一节 概述
分析化学（第2版） 谢庆娟 李维斌
根据待测物质（原子或分子）发射或吸收的电磁辐 射，以及待测物质与电磁辐射的相互作用而建立起 来的定性、定量和结构分析方法，统称为光学分析 法。
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第一节 概述
分析化学（第2版） 谢庆娟 李维斌
点滴积累 1．光的本质是电磁波；物质对光的吸收具有
选择性。 2．吸光度与透光率的关系是 :
3．吸收曲线是溶液在一定条件下的吸光度随 入射光波长变化而变化的曲线。
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光谱 射线 X射线 紫外光 可见光 红外光 微波 无线电波
方法 光谱法
分光光度法 光谱法
可见光
核磁共振
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第一节 概述
分析化学（第2版） 谢庆娟 李维斌
红光与绿光互补、紫光与黄光互补，等等。
白光的组成
白光的色散
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第二节 紫外-可见分光光度法的基本原理
一、光的吸收定律 当一束平行的单色光通过均匀、无散射的含有吸光性
物质的溶液时，在入射光的波长、强度及溶液的温度 等条件不变的情况下，该溶液的吸光度A与溶液的浓 度c及液层厚度L的乘积成正比，即： A＝K·L ·c 。 称为光的吸收定律（朗伯-比尔定律）。 光的吸收定律是定量分析的理论依据。
C．物质对光的吸收有选择性
D．光的能量与其频率成反比
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第一节 概述
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课堂活动
3．紫外-可见分光光度法属于 A．原子发射光谱法 B．原子吸收光谱法 C．分子发射光谱法 D．分子吸收光谱法
4．分子吸收可见-紫外光后，可发生哪种类型的分子能 级跃迁 A．转动能级跃迁 B．振动能级跃迁 C．电子能级跃迁 D．以上都能发生
第一节 概述
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二、透光率与吸光度
I0＝Ia + It + Ir I0＝Ia + It
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第一节 概述
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透射光强度It与入射光强度I0的比值称为透光率或透光度T 透光率的负对数为吸光度A
A lgT
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材
◆能力要求
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1.能够用光的吸收定律解决定量计算问题 。 2. 能 够 绘 制 吸 收 光 谱 曲 线 ， 找 出 被 测 组 分 的 最
大吸收波长。
3.能够绘制标准曲线，并能应用标准曲线对样品 进行定量分析。
4.会使用常见的紫外-可见分光光度计测定溶液的 吸光度。
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案例导入
分析化学（第2版） 谢庆娟 李维斌
在夏天参加户外活动时，如果天气晴朗，就应该注 意保护皮肤，否则，暴露在火辣辣太阳之下的皮肤， 数小时后就会出现红肿、瘙痒、发热、刺痛症状，数 日后出现蜕皮现象，这表明太阳光中有一种光线能伤 害生物细胞。科学家研究证实，这种光线是紫外线。
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第一节 概述
分析化学（第2版） 谢庆娟 李维斌
A
max=515
480
520
560nm
吸收光谱曲线示意图
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第一节 概述
分析化学（第2版） 谢庆娟 李维斌
四、紫外-可见分光光度的特点
特点
灵敏度高 准确度高 精密度好 选择性好 易于普及 应用广泛
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第一节 概述
分析化学（第2版） 谢庆娟 李维斌
三、吸收光谱曲线
概念：以波长λ为横坐标，吸光度A为纵坐标所描 绘的曲线，称为吸收光谱曲线，简称吸收光谱。
特点：在相同条件下，同一物质的不同浓度的溶 液，其吸收光谱曲线相似，且λmax相同。这是定 性分析的基础。