性病实验室梅毒SOP (1)资料
梅毒的实验室检测与技术规范标准[详]
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梅毒概述（三）
疑似病例、确证病例诊断依据： ➢ 病史 ➢ 症状 ➢ 实验室检查
梅毒的实验室检查结果对诊断有决定性意义
梅毒实验室检测技术
• 病原学检测 • 血清学检测
梅毒血清学检测方法
梅毒血清学检测分类
(1) 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 （非特异性梅毒抗体）
(2) 梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体）两类方法。
处理：将血清稀释后再进行试验。
耐血清性（血清固定）
指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验在一定时 期内不阴转。早期的耐血清性常与治疗量不足或不规则治 疗、复发、再感染或有神经系统梅毒等因素有关。
梅毒螺旋体抗原血清学试验
梅毒螺旋体抗原血清学试验方法
梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA) 梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA) 梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA） 梅毒免疫层析法-梅毒快速检测 (RT) 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS） 化学发光免疫分析法（CLIA） 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）
TPPA
TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒，此致敏颗 粒与人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可 见的凝集反应，具有较高的敏感性和特异性。
TPPA是目前WHO认可的梅毒抗原血清学试验的 “金标准”，常用于新方法、新试剂评价的参照 标准。
TPPA(TPHA)试验原理示意图
梅毒螺旋体抗原血清试验的临床意义
效观察、判愈、复发或再感染的指征。 • 为什么要做定量检测？
非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义
一期梅毒1年后转为阴性 二期梅毒2年后转为阴性。 晚期梅毒 治疗后血清滴度下降缓慢，2年
后约50%病人血清反应仍为阳性。Tຫໍສະໝຸດ UST结果解释示意图假阳性问题
性病实验室梅毒SOP
目的：规范的梅毒螺旋体检验操作，确保检测结果准确。
适用范围：性病实验室工作人员责任人：实验操作者1、标本的采集与处理1.1标本采集的基本要求1.1.1操作应规范化。
1.1.2所有标本都应当被视为具有传染性，医务人员应戴手套谨慎操作。
1.2梅毒标本采集梅毒的实验室诊断主要有病原体检测和血清学检测方法，各期梅毒的检测方法及部位见下表。
1.2.1血液1.2.1.1血清标本根据需要，用一次性真空采血针与促凝采血管抽取静脉血2-5 ml，室温静置1-2小时（或37℃静置30分钟），待血液凝固、血块收缩后，3000r/min离心10-15分钟，分离新鲜血清，备用。
也可采用保存于2-8℃或-20℃的血清。
溶血、脂血或污染的标本可影响试验结果。
1.2.1.2血浆标本根据需要，用一次性真空采血针与抗凝采血管抽取静脉血2-5 ml，轻轻颠倒混匀8-10次，3000r/min离心10-15分钟，分离血浆，备用。
血库血浆以及EDTA 抗凝血浆同样可以用于梅毒血清学实验（一般仅用于RPR实验，），但易出现假阳性反应（需用血清复试），如用其他抗凝剂应首先评价后再用。
1.2.1.3末梢全血消毒局部皮肤（成人和1岁以上儿童可选择手指或耳垂，1岁以下儿童采用足跟部）。
一次性采血针刺破皮肤，用无菌棉签擦掉第一滴血。
收集滴出的血液，立即用于检测。
1.2.2皮损部位组织液1.2.2.1用于病原学检查用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位，取渗出液与预先滴加在载玻片上的生理盐水混合后加盖玻片立即用于暗视野显微镜检测，或取渗出液直接涂片，用于镀银染色试验。
1.2.2.2用于核酸检测用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位，刮取渗出液，加入有DNA保存液（1ml/管）的标本管中，备用。
1.2.3淋巴液无菌操作下穿刺腹股沟淋巴结，注入0.3ml无菌生理盐水并反复抽吸2-3次，取少量的淋巴液直接滴于载玻片上，加盖玻片后立即进行暗视野镜检或备用。
梅毒的实验室检查模板
传播途径
•
性接触是主要的传染途径 – 未经治疗的患者在感染后的1年内最具有传染性 – 随着病期的延长，传染性越来越小 – 到感染后2年，通过性接触一般无传染性 • 母婴传播 – 在妊娠7周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘传染未经治疗 者，虽已无性传播（病期>2年），但妊娠时仍可传染给 胎儿 – 病期越长，传染性越小; • 输血传染 • 间接传播：日常用品、接吻、哺乳、医疗器械等途径（接 触部位附有梅毒螺旋体） 。
慢性生物学假阳性反应的疾病
• • • • • • 系统性红斑狼疮 自身免疫性溶血性贫血 盘状红斑狼疮 结节性多动脉炎 类风湿性关节炎 桥本氏甲状腺炎 • • • • • • • 风湿性心脏病 干燥综合征 毒品瘾者 慢性肾炎 肝硬化 老年 麻风 (是唯一产生慢
性生物学假阳性的感染 性 疾病)
妊娠的假阳性反应
梅毒螺旋体抗原血清试验
（1）FTA-ABS
（2）TPPA/ TPHA （3）TP-ELISA （4）发光法 （5）胶体金法
暗视野显微镜检查
• 标本类型：梅毒硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等 皮损的渗出液、淋巴结穿刺液 • 方法：暗视野显微镜下查找梅毒螺旋体。 • 结果：典型的梅毒螺旋体呈白色发光, 其螺旋 较密而均匀。运动方式： ①伸缩其螺旋间距离 而移动（主要方式）②蛇行式③旋转式 • 评价：
假阳性问题
• 假阳性：非梅毒患者的血清反应呈阳性 ①技术性假阳性
– 由于标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、 试剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。
②生物学假阳性
– 是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化， 使梅毒血清试验出现阳性
急性生物学假阳性反应的疾病
风疹 水痘 传染性单核细胞增多症 传染性肝炎 上呼吸道感染 肺炎球菌性肺炎 病毒性肺炎 牛痘疹
梅毒的实验室检测与技术规范课件
事故处理
如发生意外事故，应立即报告实验室负责人，采 取相应的处理措施，如清洗伤口、消毒环境等。
CHAPTER 05
梅毒实验室检测结果分析与 解读
检测结果判定原则
明确检测原理
01
了解和掌握梅毒检测的基本原理和方法，包括抗原抗体反应、
梅毒的实验室检测与 技术规范课件
目录
• 概述 • 梅毒的实验室检测技术 • 梅毒实验室规范化操作流程 • 梅毒实验室技术规范与标准操作规程 • 梅毒实验室检测结果分析与解读 • 梅毒实验室检测新技术与发展趋势
CHAPTER 01
概述
定义与背景
梅毒是由梅毒螺旋体引起的慢 性传染病，可累及全身器官。
基于免疫学技术的检测方法改进与创新
化学发光免疫分析
该技术结合了化学发光和免疫分 析的优点，具有高灵敏度、宽线 性范围和良好的稳定性，已广泛 应用于梅毒血清学检测。
酶联免疫吸附试验
该技术利用酶催化底物反应产生 光信号，从而实现对梅毒抗体的 定量检测，具有操作简便、成本 低等优点。
基于生物信息学在梅毒诊断中的应用前景
合理布局实验室空间，设置独立 的阳性血清和脑脊液检测区域，
以避免交叉污染。
实验器材
使用一次性实验器材，如注射器 、吸管、离心管等，避免交叉感
染。
实验人员
实验人员应接受专业培训，熟悉 梅毒检测的原理、操作流程和质
量控制要求。
标准操作规程
1 2
样本采集
采集血液样本时，应使用真空采血管，避免直接 接触血液。采集脑脊液样本时，应使用无菌穿刺 技术。
血清学筛查
血清学确证
使用酶联免疫吸附试验（ELISA）等血清学 方法筛查患者血清中的梅毒抗体。
梅毒螺旋体抗体检测(TPPA)SOP
梅毒螺旋体抗体检测（TPPA）（凝集法）1.目的：规范实验室TPPA检测操作。
2.范围： xxx 院 xxx 科3.测定原理：将梅毒螺旋体（Nichols株）的精制菌体成分包被在人工载体明胶粒子上。
这种致敏粒子和样本中的梅毒螺旋体抗体进行反应发生凝集，产生粒子凝集反应（Particle Agglutination Test,PA法）由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体抗体，并且用来测定抗体的效价。
4.标本：4.1采用正确医用技术收集血清/血浆样本，血浆样本推荐使用肝素钠抗凝血浆，枸橼酸钠和EDTA抗凝剂。
4.2样本中的沉淀物和悬浮物，红细胞等其它有形成分可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。
4.3严重溶血或脂血的样本不能用于测定。
4.4样本收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2~8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。
使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。
4.5血清样品即使钝化也不会影响检测结果。
5.试剂：珠海丽珠试剂股份有限公司提供的试剂。
5.1试剂盒在2℃—10℃储存，防止冷冻，避免强光照射，有效期12个月。
5.2 试剂盒开启使用后，冷冻干燥品配好后，2℃—10℃保存可使用7日，使用前必须做对照试验。
5.3试剂组成5.3.1溶解液（液体）：用于调制致敏粒子和未致敏粒子。
5.3.2血清稀释液（液体）：用于样品的稀释。
5.3.3致敏粒子（冷冻干燥）：调制浓度为1%的梅毒螺旋体（Nichols株）致敏明胶粒子。
5.3.4未致敏粒子（冷冻干燥）经单宁酸处理调制浓度为1%的明胶粒子。
5.3.5阳性对照血清（液体）用抗梅毒螺旋体（Nichols株）家兔免疫血清调制成抗体效价为1：320(最终稀释倍数)。
6.临床标本测定6.1试剂的调制6.1.1溶解液（液体）：按照测定操作规则使用。
6.1.2血清稀释液（液体）：按照测定操作规则使用。
梅毒的实验室诊断资料
假阴性反应
在梅毒螺旋体感染后1～2周内可呈阴性反应 梅毒螺旋体感染不久即开始治疗 晚期梅毒患者的血清中反应素含量低，敏 感性低的梅毒血清试验易出现阴性反应 在二期梅毒时RPR试验也可出现阴性反应， 前带现象(prozone phenomenon)
血清学检测的几个特点
在最初的两周可能是阴性结果 FTA、TPPA和ELISA在所有阶段都最敏感 VDRL和RPR在三期梅毒期可能为阴性 VDRL-CSF仅用于诊断神经性梅毒
检测方法-梅毒螺旋体血清试验
TPPA
TPPA试验原理与TPHA试验基本相同。TPPA试验用
梅毒螺旋体致敏明胶颗粒替代TPHA试验中致敏羊红细胞， 此致敏颗粒与人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生 可见的凝集反应，具有较高的敏感性。明胶粒子为洋红 色，在操作部步上也较为方便，出结果较快。
梅毒血清假阳性反应
技术性假阳性反应：如实验室操作错误，标本溶 血等，如重复试验，无梅毒患者血清试验成为阴 性。 生物学假阳性反应：因非螺旋体抗原血清试验是 非特异性的，在其它一些疾病，尤以感染性疾病， 也可释放心拟脂至血液中，产生反应素，如麻风、 麻疹、疟疾、传染性肝炎、病毒性肺炎、传染性 单核细胞增多症，系统性红斑狼疮，非典型性肺 炎、甚至妊娠都可出现阳性，但这类患者血清反 应滴度低，很少超过1：8。而且半年内渐转成阴 性。另外可用特异性的梅毒血清反应证实。如用 FTA－ABS试验
(五）、生存条件 厌氧寄生物，在人体内可长期生存，体外不易生存 干燥、肥皂水及一般消毒剂如1：1000苯酚、新洁尔灭、稀酒精均可 于短时间将其杀死 在血液中4℃经3日可死亡，故在血库冰箱冷藏3日以上的血液就无传 染性 温度的影响：41-42℃时可生活1-2小时，在48℃仅半小时即失去感染 力，100℃立即死亡。对寒冷抵抗力大，在0℃时，可生活48小时，如 将梅毒病损标本臵于冰箱内，经1周仍可致病。在低温（-78℃）保存 数年，仍可保持其形态、活动及毒性 在封存的生理盐水稀释的组织液中可生活10小时左右 在潮湿的器具或湿毛巾中，亦可生存数小时 在干燥环境中可见迅速死亡 。
性病实验室梅毒SOP (1)
目的：规范的梅毒螺旋体检验操作，确保检测结果准确。
适用范围：性病实验室工作人员责任人：实验操作者1、标本的采集与处理1.1标本采集的基本要求1.1.1操作应规范化。
1.1.2所有标本都应当被视为具有传染性，医务人员应戴手套谨慎操作。
1.2梅毒标本采集梅毒的实验室诊断主要有病原体检测和血清学检测方法，各期梅毒的检测方法及部位见下表。
1.2.1血液1.2.1.1血清标本根据需要，用一次性真空采血针与促凝采血管抽取静脉血2-5 ml，室温静置1-2小时（或37℃静置30分钟），待血液凝固、血块收缩后，3000r/min离心10-15分钟，分离新鲜血清，备用。
也可采用保存于2-8℃或-20℃的血清。
溶血、脂血或污染的标本可影响试验结果。
1.2.1.2血浆标本根据需要，用一次性真空采血针与抗凝采血管抽取静脉血2-5 ml，轻轻颠倒混匀8-10次，3000r/min离心10-15分钟，分离血浆，备用。
血库血浆以及EDTA 抗凝血浆同样可以用于梅毒血清学实验（一般仅用于RPR实验，），但易出现假阳性反应（需用血清复试），如用其他抗凝剂应首先评价后再用。
1.2.1.3末梢全血消毒局部皮肤（成人和1岁以上儿童可选择手指或耳垂，1岁以下儿童采用足跟部）。
一次性采血针刺破皮肤，用无菌棉签擦掉第一滴血。
收集滴出的血液，立即用于检测。
1.2.2皮损部位组织液1.2.2.1用于病原学检查用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位，取渗出液与预先滴加在载玻片上的生理盐水混合后加盖玻片立即用于暗视野显微镜检测，或取渗出液直接涂片，用于镀银染色试验。
1.2.2.2用于核酸检测用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位，刮取渗出液，加入有DNA保存液（1ml/管）的标本管中，备用。
1.2.3淋巴液无菌操作下穿刺腹股沟淋巴结，注入0.3ml无菌生理盐水并反复抽吸2-3次，取少量的淋巴液直接滴于载玻片上，加盖玻片后立即进行暗视野镜检或备用。
SOP标准操作程序-艾博梅毒条
SOP标准操作程序TP梅毒螺旋体抗体【实验原理】梅毒试剂条采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术来定性检测全血/血清/血浆中是否含有梅毒抗体，试剂盒含有被事先固定于膜上测试区（T）的重组特异性梅毒抗原和质控区（C）的相应抗体。
【标本】全血标本收集后应尽快使用，或尽快分离血清或血浆以避免融血，检测时只能使用未融血的标本，严重融血的标本必须重新采集血样。
样本收集后应尽可能马上使用，不能够在室温下长时间存放。
血清或血浆标本可在2 -8℃冷藏存放一周。
长期保存需冷冻于-20℃。
冷藏或冷冻样本应在检测前恢复到室温并充分混匀。
样本切忌反复冻融。
【注意事项】1.本产品是一种定性地检测梅毒抗体存在的试剂，不能确定标本中抗体的含量。
2.本产品只用于初筛检测使用，检测结果不能作为机体感染梅毒临床诊断的唯一依据。
3.本产品仅用于体外诊断，并适用于检测血清/血浆样本中的梅毒抗体。
4.本产品只用于初筛检测使用，检测结果不能作为确诊依据。
为了确保结果的准确性，可对样本用其他方法，例如ELISA，进一步确认。
5.同所有的诊断试剂一样，检测结果必须结合内科医生得出的其它临床症状进行诊断。
6.如果测试结果呈阴性并有临床症状存在，可建议使用其他临床方法进行测试。
阴性结果并不能排除感染梅毒的可能性。
【操作步骤】*实验前准备在进行测试前必须先完整阅读使用说明书，使用前将试剂板和血样标本恢复至室温（20℃-30℃）。
*实验步骤1．从原包装铝箔带中取出试剂条，粘附于记录卡上，平置桌面，在1小时内应尽快地使用。
2．吸取全血/血清/血浆标本50ul（或吸管2滴）置于加样区，再加1滴缓冲液。
3．等待红色条带的出现，在10分钟内读取测试结果。
关键要注意，在红色条带出现以前，背景要清晰，特别当样本中含有低滴度的梅毒抗体，会导致出现的T线颜色很淡，此时更需注意背景要清晰。
在30分钟后读取的结果无效。
【结果判定】阳性（+）：两条红色条带出现。
一条位于测试区（T）内，另一条位于质控区（C）内。
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目的：规范的梅毒螺旋体检验操作，确保检测结果准确。
适用范围：性病实验室工作人员责任人：实验操作者1、标本的采集与处理1.1标本采集的基本要求1.1.1操作应规范化。
1.1.2所有标本都应当被视为具有传染性，医务人员应戴手套谨慎操作。
1.2梅毒标本采集梅毒的实验室诊断主要有病原体检测和血清学检测方法，各期梅毒的检测方法及部位见下表。
1.2.1血液1.2.1.1血清标本根据需要，用一次性真空采血针与促凝采血管抽取静脉血2-5 ml，室温静置1-2小时（或37℃静置30分钟），待血液凝固、血块收缩后，3000r/min离心10-15分钟，分离新鲜血清，备用。
也可采用保存于2-8℃或-20℃的血清。
溶血、脂血或污染的标本可影响试验结果。
1.2.1.2血浆标本根据需要，用一次性真空采血针与抗凝采血管抽取静脉血2-5 ml，轻轻颠倒混匀8-10次，3000r/min离心10-15分钟，分离血浆，备用。
血库血浆以及EDTA 抗凝血浆同样可以用于梅毒血清学实验（一般仅用于RPR实验，），但易出现假阳性反应（需用血清复试），如用其他抗凝剂应首先评价后再用。
1.2.1.3末梢全血消毒局部皮肤（成人和1岁以上儿童可选择手指或耳垂，1岁以下儿童采用足跟部）。
一次性采血针刺破皮肤，用无菌棉签擦掉第一滴血。
收集滴出的血液，立即用于检测。
1.2.2皮损部位组织液1.2.2.1用于病原学检查用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位，取渗出液与预先滴加在载玻片上的生理盐水混合后加盖玻片立即用于暗视野显微镜检测，或取渗出液直接涂片，用于镀银染色试验。
1.2.2.2用于核酸检测用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位，刮取渗出液，加入有DNA保存液（1ml/管）的标本管中，备用。
1.2.3淋巴液无菌操作下穿刺腹股沟淋巴结，注入0.3ml无菌生理盐水并反复抽吸2-3次，取少量的淋巴液直接滴于载玻片上，加盖玻片后立即进行暗视野镜检或备用。
1.2.4脑脊液操作由专业人员进行，一般用腰椎穿刺术获得。
患者侧卧于硬板床，两手抱膝紧贴腹部，头向前胸屈曲，使躯干呈弓形，以髂后上棘连线与后正中线的交点为穿刺点，相当于第3-4腰椎棘突间隙，消毒处理后，用2%利多卡因自皮肤到椎间韧带作局部麻醉。
术者用左手固定穿刺皮肤，右手持穿刺针以垂直背部方向缓缓刺入，针尖稍斜向头部，成人进针深度约4-6cm，儿童约2-4cm。
当针头穿过韧带与硬脑膜时，有阻力突然消失落空感，此时可将针芯慢慢抽出，即可见脑脊液流出，至于合适的容器中，备用。
1.3标本接收的标准1.3.1核对样品与运送单，检查样品管有无破损和溢漏。
如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，对样品管和盛器消毒并做记录。
1.3.2检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、脂血以及黄疸等情况。
如果样品污染或者认为样品不能被接受，应将样品安全废弃。
并将样品情况立即通知运送机构。
1.3.3对不合要求的标本，可以拒绝接受。
2、梅毒的实验室检查2.1梅毒螺旋体暗视野显微镜检查2.1.1原理梅毒螺旋体侵入人体后，在皮肤黏膜下增殖，并很快沿着淋巴管到达附近淋巴结，经过2-4周的潜伏期，在侵入部位发生炎症反应，称为硬下疳，数天到1周后，淋巴结肿大。
二期梅毒是梅毒螺旋体由局部经淋巴结进入血液，在人体内大量播散后而出现的全身表现，一般发生在感染后的7-10周或硬下疳出现后6-24周，主要为皮肤黏膜损害，有扁平疣、黏膜斑和玫瑰斑疹等。
患梅毒的孕妇可以通过胎盘使胎儿受染。
研究证明，在妊娠期7周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘。
其梅毒患者硬下疳、淋巴结、皮肤黏膜损害以及孕妇羊水中均可检查到梅毒螺旋体。
将标本置于暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上，可使梅毒螺旋体折射出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。
2.1.2方法2.1.2.1仪器耗材：1)暗视野显微镜2)无菌纱布3)不锈钢刮刀4)灭菌棉拭子5)载玻片、盖玻片6)注射器，注射针头7)灭菌生理盐水2.1.2.2检测流程1)将待检标本制成生理盐水涂片，加盖玻片后立即备检。
2)在预先调整好的暗视野显微镜的聚光器上加数滴浸油，轻轻调低聚光器，使之在载物台下方。
3)将标本玻片置载物台上，上升聚光器，使浸油接触载玻片底面，避免浸油内有气泡。
4)镜检：先低倍后高倍，寻找有特征形态和运动方式的梅毒螺旋体。
2.1.3结果2.3.1.1结果判读：在暗视野显微镜下观察,发现有纤细、白色、有折光的螺旋状微生物，长6-20um,直径小于0.2um，有6-14个螺旋，具有旋转、蛇行及伸缩等特征性的运动方式，可判断为梅毒螺旋体。
2.3.1.2结果报告：暗视野显微镜下若发现上述特征的梅毒螺旋体则报告阳性结果；未见到上述特征的梅毒螺旋体则报告阴性结果。
2.1.4临床意义1)梅毒螺旋体暗视野显微镜检测阳性在临床上可确诊梅毒，特别是对于有皮肤黏膜损害和淋巴结病变的一、二期梅毒的诊断具有重要价值，且具有快速，方便，易操作等特点。
2)若未能发现梅毒螺旋体，不能排除梅毒诊断。
阴性结果原因可能为：标本中的微生物数量不足（单次的暗视野检测其敏感性低于50%）、病人已接受治疗、皮损已接近自然消退或取自非梅毒性皮损。
3)无论暗视野显微镜检查的结果如何，都应进一步进行血清学检测。
2.1.5注意事项1)取材前，应用无菌生理盐水清洁皮肤表面，取材时应注意无菌操作。
2)应取到组织渗出液，尽量避免出血，以提高检出阳性率。
3)取材后应立即置暗视野显微镜下观察，如搁置太久，梅毒螺旋体活动能力会下降，导致镜下难以观察到阳性结果。
4)对口腔溃疡标本，在暗视野显微镜下如观察到梅毒螺旋体的特征性形态和运动方式，应与其他螺旋体相区别。
2.2.甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）2.2.1原理梅毒螺旋体一旦感染人体，宿主迅速对感染早期被损害的自身细胞以及梅毒螺旋体细胞表面所释放脂类物质做出免疫应答，在3-4周内可产生抗类脂抗原的抗体（亦称为反应素）。
这种抗体在体外可与心磷脂、卵磷脂和胆固醇等组成的抗原（0.03%心磷脂、0.21%卵磷脂和0.90%胆固醇）发生抗原-抗体反应。
心磷脂、卵磷脂和胆固醇都是醇溶性脂类，遇水形成胶体溶液。
当含有反应素的梅毒血清与之混合时，即粘附在胶体颗粒的周围。
经摇动、碰撞，形成抗原抗体复合物，出现凝集颗粒，即为阳性反应。
甲苯胺红不加热血清试验即在抗原中加入甲苯胺红颗粒作为指示物，与待检血清（浆）中的反应素结合，形成肉眼可见的红色絮状物。
血清不需灭活，肉眼可观察结果。
2.2.2方法2.2.2.1仪器耗材：1)TRUST试剂盒2)水平旋转仪：要求旋转环状直径为2cm，转速为（100±2）r/min，并带有计时器和保湿盖）3)无菌生理盐水（0.9%）2.2.2.2检测流程：2.2.2.2.1定性试验1)试剂准备：检测前将试剂盒置室温预温30分钟2)加标本：吸取50μl血清（浆）置试验卡片圈中，并均匀地涂布在整个卡圈内。
不能将标本溢出环圈外面。
3)加抗原：将抗原轻轻摇匀，在每个标本圈中，用专用滴管针头垂直滴加1滴（60±1滴/ml，约17μl/滴）抗原,不需要手工混匀。
4)反应：将卡片置水平旋转仪上，建议罩上保湿盖，（100±2）r/min旋转8分钟。
5)从旋转仪中取出卡片后立即在亮光下用肉眼观察结果。
用手轻微的旋转或倾斜卡片可有助于弱阳性和阴性标本。
2.2.2.2.2定量实验1)实验卡片准备：在卡片中圈1到圈4中分别标上1:2，1：4，1：8，1：162)稀释液准备：在圈1到圈4中加入50μl生理盐水，勿将盐水液滴涂开。
3)标本稀释：吸取50μl血清（浆）于圈1中，用移液器来回吸放5-6次已混合圈1中的生理盐水和标本，但要避免产生气泡。
从圈1（1:2）中移取50μl到圈2（1：4）用上述同样方法混合后依次稀释至圈3（1：8）和圈4（1：16）。
混旋后从圈4中弃去50μl。
4)依次从圈4-圈1将不同稀释度的标本涂布整个圈内。
5)加抗原等以下实验步骤同定性试验的2-4。
6)如阳性反应滴度大于1;16,则继续稀释以测定最高稀释反应滴度。
2.2.3结果2.2.3.1结果判读1)阳性反应：圆圈内出现中或大的红色絮状物，液体清亮；2)弱阳性反应：圆圈内出现小的红色絮状物，液体混浊；3)阴性反应：圆圈内仅见炭颗粒集中于中央一点或均匀分散。
2.3.3.2结果报告1)定性试验：出现凝集反应报告阳性，不产生凝集反应报告阴性。
2)定量实验：出现凝集反应的血清最高稀释倍数为抗体滴度，结果报告滴度为1：X，X依次为1、2、4等稀释倍数。
2.2.4临床意义1)梅毒螺旋体一旦感染人体后产生抗类脂抗原的抗体，未经治疗可长期存在。
经适当治疗后，抗体可以逐渐减少至转为阴性，早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后3个月，TRUST抗体滴度可下降2个稀释度，6个月可下降4个稀释度，一期梅毒一般约1年后可转为阴性，二期梅毒2年后可转为阴性。
但晚期梅毒治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50%病人血清反应仍为阳性。
2)TRUST定性试验结果可用于现症梅毒诊断。
TURST定量试验结果可用于疗效观察和判愈。
2.2.5注意事项1)生物学假阳性：非梅毒螺旋体抗原血清学试验采用的抗原为心磷脂、卵磷脂和胆固醇的混合物，所检测的抗心磷脂抗体易见于其他多种疾病，如急性病毒性感染、自身免疫性疾病、结缔组织病、静脉吸毒者以及怀孕的妇女等。
因此该类反应会出现假阳性反应。
所以该类试验阳性标本需进一步采用梅毒螺旋体抗原血清学试验（如TPPA、ELISA）等复检，以排除生物学假阳性，确认是否为梅毒螺旋体感染。
2)前带现象：只对早期梅毒患者进行非梅毒螺旋体抗原血清试验时，有时血清中存在高浓度的抗体，导致抗原抗体浓度不匹配，出现弱阳性、不典型或阴性反应的结果，此时需将血清稀释后再进行试验，可出现阳性结果。
该现象称为前带现象。
2.3梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）2.3.1原理梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）是用超声裂解梅毒螺旋体抗原致敏明胶粒子，致敏粒子与待检血清（浆）中的梅毒螺旋体抗体结合，产生肉眼可见的颗粒凝集。
2.3.2方法2.3.2.1仪器耗材：1)TPPA检测试剂盒2)移液器3)保湿盒2.3.2.2检测流程：1)试剂准备：试验前30分钟将待检标本和试剂从冰箱中取出，恢复至室温。
2)加稀释液：每份样本作4孔，用移液器将血清稀释液滴入微量反应板第1孔（100μl），从第2孔-第4孔各滴25μl。
3)样本稀释：用移液器取待检血清25μl置第1孔中，然后以2n 的方式从第1孔稀释至第4孔。
4)加对照液：用移液器在第3孔滴入25μl未致敏粒子；在第4孔滴入25μl致敏粒子。