甾体皂苷类成分提取分离方法
甾体皂苷类成分提取分离方法
甾体皂苷提取分离方法调研报告甾体皂苷( steroidal saponins) 是天然产物中一类重要的化学成分,大多都具有一定的生理活性,在天然产物化学研究中日趋活跃。
据不完全统计,超过90 个科的植物含有甾体皂苷,尤以单子叶植物的百合科、石蒜科、薯蓣科和龙舌兰科等植物报道最多。
由于含甾体皂苷成分的动植物药有相当的疗效。
所以,人们在应用和研究方面越来越广泛。
例如: Dracaena draco 被用于抗腹泻和止血[1],蒺藜用于治疗眼病、浮肿、腹胀、高血压、皮癣和气管炎[2], Chlorophytum malayense 对肿瘤有潜在的细胞毒活性[3], A gave americana有通便和利尿的作用[4], Solanum nigrum 在中国和日本用于对各种癌症的治疗[5],白首乌民间用于滋补药膳,是一种有前途的抗衰老药物[6],虎眼万年青民间用于抗肿瘤[7],西陵知母用于治疗烦热消渴,骨蒸劳热,肺热咳嗽等[8]。
本文就甾体皂苷的提取分离方法做一简单综述。
甾体皂苷类化合物由于连有糖残基, 一般有较强的极性, 易溶于水、甲醇、乙醇等极性溶剂, 不易溶于氯仿、乙醚等非极性溶剂。
甾体皂苷不易形成结晶（苷元例外）,且有时结构相似，给分离带来一定困难。
甾体皂苷提取分离基本步骤为粗提、除杂、分离。
1、提取目前, 实验室最常用不同浓度的工业乙醇或甲醇提取。
也有用水作为溶剂的, 如:Jianying zhang 等用80 - 85℃的水从Anemarrhena asphodeloides 的根状茎中提取到六种甾体皂苷[9]。
也可以先用氯仿、石油醚等强亲脂性溶剂处理中草药原料, 然后用乙醇为溶剂加热提取, 冷却提取液, 多数甾体皂苷由于难溶于冷乙醇而作为沉淀析出[10]。
2、除杂方法无论是用水还是醇作为溶剂提取所得到的皂苷,多还包含许多杂质, 如无机盐、糖类、鞣质、色素等, 尚需要进一步精制。
2.1 液液萃取法这是一种最普遍的皂苷除杂方法, 利用皂苷一般极性较大, 易溶于水而其中的一些杂质极性较小易溶于非极性溶剂的性质来去除一些脂溶性的杂质。
甾体皂苷提取方法研究进展
甾体皂苷提取方法研究进展作者：白云杰刘存芳来源：《现代农业科技》2015年第15期摘要甾体皂苷是合成甾体激素类药物的重要原料，是甾体药物研究开发的先导化合物，受到广泛关注。
对甾体皂苷提取方法的研究现状进行综述，为其开发利用提供一些有益的参考和借鉴。
关键词甾体皂苷；提取方法；研究进展中图分类号 R284.2 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2015）15-0281-01Research Progress of Steroidal Saponin Extraction MethodBAI Yun-jie LIU Cun-fang *（School of Chemistry and Environmental Sciences，Shaanxi University of Technology，Hanzhong Shaanxi 723000）Abstract Steroidal spaonin is important raw material of making steroid medicine and it is a good leading compound for steroid drugs exploitation，steroidal spaonin has received widespread attention.The methods of extraction of steroidal spaonin were summarized，in order to offer beneficial reference and experience for the exploitation and utilization of the steroidal spaonin.Key words steroidal saponin； extraction method； research progress甾体皂苷是具有螺甾烷类化合物结构母核的一类皂苷，广泛分布于百合科、薯蓣科、玄参科、菝葜科及龙蛇兰科等单子叶植物中，有显著的生理活性，表现出祛痰、止咳、镇静、抗菌、抗癌、解热等功效。
甾体皂苷
O
HO
薯蓣皂苷元
(3) 呋甾烷醇类(furostanols)
27 21
O H 23 OH
25 20 17 22 24 26
18 12 19 1 2 10 11 9 8 13 14
O
16
15
HO
3 4
5 6
7
F环为开链衍生物
O
glc
OH
O
薤白苷丁
glc gal O
F环裂解的甾体皂苷的显色反应
对Ehrlich 试剂（对盐酸二甲氨基苯甲醛试 试剂显黄色
3.生物活性
防治心脑血管疾病 抗肿瘤 降血糖
免疫调节
地奥心血康胶囊——含8种从黄山药中提取的甾体 皂苷，对冠心病、心绞痛疗效显著。
心脑舒通——由蒺藜果实中提取的总甾体皂苷，具 有扩冠、改善冠脉循环作用。
云南白药---重楼
甾体皂苷I和甾体皂苷 IV，对P388和KB细胞有 显著抑制作用。
γδ -六元内酯环时，UV在（
征吸收。
17、IR光谱上内酯环羰基在（ 强吸峰，乙型较甲型波数（ ）处有两个 ）。
18、强心苷作为甾体衍生物有三类显色反 应，第一类为（ 反应；第二类为（ ）显色反应，如L-B ）可以用来区分
甲型与乙型强心苷，如Legal反应；第三类 为（ ）特征性反应，如K-K反应。
5.甾体皂苷元一般是（）。
A.A/B环反式稠合、B/C环顺式稠合
B.A/B环反式稠合、B/C环反式稠合
C.A/B环反式或顺式稠合、B/C环顺式稠合
D.A/B环反式或顺式稠合、B/C环反式稠合
E.以上均不是 答案：D
A. Liebermann-Burchard反应 B. Keller-Kiliani（K-K）反应 C. Kedde反应 D. Molish反应 6、区别甾体皂苷和三萜皂苷的反应是（）。 答案：A 7、区别甲型强心苷和乙型强心苷的反应是（）。 答案：C
第四节甾体皂苷
穿山龙（干燥根茎） 加水浸透后，再加入3.5倍量水，加入浓H2SO4 使达3%浓度，通蒸气加压进行水解8小时
水解物
用水洗去酸液，干燥后粉碎，使含水量不超过6%
干燥粉 加6倍量汽油（或甲苯），连续回流，提取20小时
汽油提取液 回收汽油，浓缩至约1:40,室温放置，使结晶 完全析出后，离心甩干
粗制薯蓣皂苷元 自乙醇或丙酮中重结晶，活性炭脱色
13
25 20 22
17
O 23 24
16
CH2OH
26
1
9
14
10 8
15
5
7
4
6
甾体皂苷元共有27个碳原子组成:
（1）分子中含有A,B,C,D,E,F六个环，A,B, C,D为甾体母核---环戊烷多氢菲，C22 是E环和F环共有的碳原子，以螺缩酮 的形式相联。
（2）一般B/C 和C/D环稠合为反式（8β, 9α,13β,14α)，而A/B环有顺式或反 式（5β或5α）。
▪ 盾叶冠心宁——从盾叶薯蓣中提取的水溶 性皂苷。
抗肿瘤：
从百合科一植物中分离出的一种皂苷 OSW-1,此化合物对人的正常细胞几乎没 有毒性，而对恶性肿瘤细胞具有强烈毒 性。体外生理活性实验表明，它的抗癌 活性比目前临床应用的顺铂、紫杉醇等 高100倍，有望成为一类新的抗癌药物。
二、化学结构
21
27
21
O
Байду номын сангаас
25 26
18 20 22
23 24
19 11
12 13
O
17 16
1
9
14
2
10 8
15
HO 3
5
7
天然药物有效成分提取分离技术(研)
天然药物有效成分提取分离技术中草药以植物药为主，而植物都是由复杂的化学成分所组成。
其中主要有纤维素、叶绿素、单糖、低聚糖和淀粉、蛋白质和酶、油脂和蜡、树脂、树胶、鞣质及无机盐等。
其中，许多物质对植物机体生命活动来说不可缺少，称为一次代谢产物。
一般认为它们在药用上是无效成分或杂质。
而另外一些化学成分如：生物碱、黄酮、蒽醌、香豆素、木脂素、有机酸、氨基酸、萜类、苷类等对维持植物生命活动来说不起重要作用，称为二次代谢产物，这些物质在植物体内虽含量很少，多则百之几，少则百万分之几，甚至更少。
但它们往往具有较强的生理活性，其中有些已应用于临床，我们称之为有效成分。
当然有效成分与无效成分的划分是相对的，如天花粉的引产有效成分是蛋白质，香茹中的多糖对实验动物肿瘤有显著的抑制作用。
在进行中草药成分提取前，应注意对所用材料的原植物品种的鉴定并留样备查。
同时要系统查阅文献，以充分了解，利用前人的经验。
中草药有效成分的提取分离一般有下面两种情况：第一、从植物中提取已知的有效成分或已知的化学结构类型者。
如从甘草中提取甘草酸、麻黄中提取麻黄素；三棵针中提取黄连素等(提取有效成分)。
或从植物中提取某类成分如总生物碱、总酸性成分。
如从银杏叶中提取总黄酮；从大黄中提取总蒽醌(提取有效部位)。
工作程序比较简单。
一般先查阅有关资料，特别是工业生产的方法，搜集比较该种或该类成分的各种提取方法，再根据具体条件加以选用。
(注意先重复该方法，得到产品后，再结合生产实际，不断改进工艺，达到大生产要求)。
第二、从中草药中寻找未知有效成分或有效部位时，情况比较复杂。
只能根据预先确定的目标，在临床或药理试验配合下，经不同溶剂提取，以确定有效部位。
然后再逐步划分，追踪有效成分最集中的部位，最后分得有效成分。
一、中草药有效成分的提取对中草药化学成分的提取，通常是利用适当的溶剂或适当的方法将植物中的化学成分从植物中抽提出来。
常用的方法有溶剂法、水蒸汽蒸馏法和升华法等。
甾体皂苷.ppt
防治心血管疾病、抗肿瘤、降血糖、抗血栓、免疫调 节、抗菌作用。
二、结构与分类：
（一）甾体皂苷元化学结构特点 （1）基本母核 （ 2）结构特点
（二）结构类型及代表性成分 （三）糖： α -羟基糖
三、皂苷的理化性质
（一）物理性质 （二）化学性质
1、沉淀反应 （1）与甾醇的沉淀反应 （2）与金属盐类沉淀反应
螺甾烷醇型只对A试剂呈黄色，对E试剂不显色。
2、其双皂苷类无溶血作用，不能和胆甾醇形成复合物， 无抗菌活性。而即螺甾烷醇型单皂苷类则反之。
27
O O
CH2OH 26
变型螺甾烷醇
HO
物理性质：
1、性状--- 皂苷为白色或无色无定形粉末，熔点较高。
味苦辛辣，有强烈的吸潮性；有旋光性。 皂苷元有大多有完好结晶。
穿龙薯蓣药材粗粉
水浸透后，硫酸加热加压水解8h
水解物
水洗除酸后干燥
干燥粉
脱色，汽油提取
提取物
浓缩析晶
粗薯蓣皂苷元
重结晶
薯蓣皂苷元
四、甾体皂苷的检识 五、甾体皂苷的结构研究
UV IR MS 1HNMR 13CNMR
六、中药实例
麦冬 薤白 知母 重楼
甾体皂苷
一、概述
定义 ：是一类由螺甾烷类化合物与糖结合的寡 糖苷。其水溶液振摇后产生持久性的类似肥皂 溶液样泡沫，故称为甾体皂苷。
一含黄酮、甾体、三萜皂苷和单糖的药材,简述简单的分离流程和分离依据
一含黄酮、甾体、三萜皂苷和单糖的药材,简述简单的分离流
程和分离依据
简单分离流程：
1. 初步处理：药材进行清洗、晾干等处理，以去除杂质。
2. 粉碎：将药材研磨成粉末状，以便后续提取。
3. 提取：用适当的溶剂（如乙醇、水等）将药材中的活性成分提取出来。
根据待分离的成分的性质不同，可以采用多种方法，如浸泡法、渗漏法、回流提取法等。
4. 过滤：通过滤纸或滤芯等较细的过滤器将提取液中的固体颗粒或大分子物质去除。
5. 浓缩：通过蒸发或其他手段，去除提取液中的溶剂，使其浓缩，得到溶液或干燥物。
6. 分离：根据药材中不同成分的特性，采用分离方法进行分离。
常见的分离方法包括色谱法（如薄层色谱、柱层析等）、离子交换、凝胶过滤、升华等。
7. 结晶：通过结晶过程，使目标化合物以晶体形式沉淀出来，得到纯度较高的成分。
8. 干燥：采用适当的方法将获得的目标化合物或提取物进行干燥，以方便保存和使用。
分离依据：
1. 溶解性：不同成分在不同溶剂中的溶解性不同，可通过选择合适的溶剂来实现分离。
2. 挥发性：某些成分具有挥发性，通过蒸馏等方法可实现分离。
3. 极性：某些成分具有不同的极性，可以通过吸附剂或溶剂的选择来实现分离。
4. 晶体化学：根据不同成分的晶体特性，如晶体形态、溶解度等，实现分离。
5. 分子大小：根据不同成分的分子大小，如分子量、空间结构等，选择合适的分离方法。
需要根据具体药材和所需分离的成分来确定合适的分离流程和依据。
重楼中甾体皂苷的分离与结构鉴定
重楼中甾体皂苷的分离与结构鉴定康利平;马百平;张洁;熊呈琦;谭大维;从玉文【期刊名称】《中国药物化学杂志》【年(卷),期】2005(015)001【摘要】目的分离、鉴定云南重楼Paris polyphylla Smithvar.yunnanensis(Franch)Hand Mazz根茎中的甾体皂苷类化合物.方法采用乙醇提取、水饱和正丁醇萃取、硅胶柱色谱及高效液相色谱等方法进行分离,得到5个化合物,通过FAB-MS、1H-NMR、13C-NMR、1H-1H COSY、13C-1H COSY、HMBC、NOESY和TOCSY鉴定其化学结构.结果分离鉴定了5种甾体皂苷:薯蓣皂苷元-3-O-{α-L-鼠李吡喃糖基(1→4)-α-L-鼠李吡喃糖基(1→4)-[α-L-鼠李吡喃糖基(1→2)]}-β-D-葡萄吡喃糖苷(皂苷Pb,Ⅰ)、纤细薯蓣皂苷(Ⅱ)、皂苷Pa(Ⅲ)、薯蓣次苷A(Ⅳ)、pennogenin diglycoside(Ⅴ).结论化合物Ⅰ～Ⅴ均为已知甾体皂苷,纠正了已有文献中皂苷Pb(Ⅰ)核磁数据中的错误,提供了完整的NMR数据.【总页数】6页(P25-30)【作者】康利平;马百平;张洁;熊呈琦;谭大维;从玉文【作者单位】军事医学科学院,放射医学研究所,北京,100850;军事医学科学院,放射医学研究所,北京,100850;军事医学科学院,放射医学研究所,北京,100850;军事医学科学院,放射医学研究所,北京,100850;军事医学科学院,放射医学研究所,北京,100850;军事医学科学院,放射医学研究所,北京,100850【正文语种】中文【中图分类】R284;R914【相关文献】1.黄精中甾体皂苷的分离与结构鉴定 [J], 唐翩翩;徐德平2.盾叶薯蓣中甾体皂苷的分离与结构鉴定 [J], 金明;仙靓;孙丽娜;石硕;张卉;张新新;郭增军3.响应面法优化重楼药材中甾体皂苷的回流提取工艺研究 [J], 王仕宝;苏莹;李会宁;杨培君;吴鹏4.泡沫分离法分离重楼中重楼皂苷的工艺研究 [J], 兰洁;李锐;韩丽;杨明;王瑾5.狭叶重楼的主要甾体皂苷类化学成分的分离及鉴定 [J], 尹鸿翔;薛丹;白楠;陈雏;陈阳;张浩因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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甾体皂苷提取分离方法甾体皂苷( steroidal saponins) 是天然产物中一类重要的化学成分,大多都具有一定的生理活性,在天然产物化学研究中日趋活跃。
据不完全统计,超过90 个科的植物含有甾体皂苷,尤以单子叶植物的百合科、石蒜科、薯蓣科和龙舌兰科等植物报道最多。
由于含甾体皂苷成分的动植物药有相当的疗效。
所以,人们在应用和研究方面越来越广泛。
例如: Dracaena draco 被用于抗腹泻和止血[1],蒺藜用于治疗眼病、浮肿、腹胀、高血压、皮癣和气管炎[2], Chlorophytum malayense 对肿瘤有潜在的细胞毒活性[3], A gave americana有通便和利尿的作用[4], Solanum nigrum 在中国和日本用于对各种癌症的治疗[5],白首乌民间用于滋补药膳,是一种有前途的抗衰老药物[6],虎眼万年青民间用于抗肿瘤[7],西陵知母用于治疗烦热消渴,骨蒸劳热,肺热咳嗽等[8]。
本文就甾体皂苷的提取分离方法做一简单综述。
甾体皂苷类化合物由于连有糖残基, 一般有较强的极性, 易溶于水、甲醇、乙醇等极性溶剂, 不易溶于氯仿、乙醚等非极性溶剂。
甾体皂苷不易形成结晶（苷元例外）,且有时结构相似，给分离带来一定困难。
甾体皂苷提取分离基本步骤为粗提、除杂、分离。
1、提取目前, 实验室最常用不同浓度的工业乙醇或甲醇提取。
也有用水作为溶剂的, 如:Jianying zhang 等用80 - 85℃的水从Anemarrhena asphodeloides 的根状茎中提取到六种甾体皂苷[9]。
也可以先用氯仿、石油醚等强亲脂性溶剂处理中草药原料, 然后用乙醇为溶剂加热提取, 冷却提取液, 多数甾体皂苷由于难溶于冷乙醇而作为沉淀析出[10]。
2、除杂方法无论是用水还是醇作为溶剂提取所得到的皂苷,多还包含许多杂质, 如无机盐、糖类、鞣质、色素等, 尚需要进一步精制。
2.1 液液萃取法这是一种最普遍的皂苷除杂方法, 利用皂苷一般极性较大, 易溶于水而其中的一些杂质极性较小易溶于非极性溶剂的性质来去除一些脂溶性的杂质。
一般的操作是将醇提取液减压浓缩得到的浸膏, 悬浮于水中, 依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行梯度萃取,甾体皂苷一般存在于正丁醇层, 减压回收正丁醇后得总皂苷。
2.2 沉淀法在含甾体皂苷的甲醇或乙醇液中倒入大量的乙醚或丙酮, 可将皂苷类化合物沉淀出来。
进一步利用过滤或离心的方法即得总皂苷, 反复利用这种沉淀法可达到初步纯化的效果。
也可利用皂苷会与胆甾醇形成沉淀的特性进行初步纯化。
皂苷溶于乙醇, 加胆甾醇的乙醇溶液沉淀,过滤, 沉淀干燥后置于索( soxhlex) 提取器中用苯回流, 不溶物为皂苷, 苯液浓缩后可回收胆甾醇。
2.3 吉拉德(Girard) 腙法吉拉德试剂T 或P 在一定条件下, 可与含羰基的甾体皂苷元生成腙, 而与不含羰基的甾体皂苷元分离。
通常先将粗甾体皂苷元溶于少量乙醇, 再加入吉拉德试剂T 或P, 并加乙酸使达10%的含量, 水浴加热或室温下放置后, 加水稀释, 加入乙醚萃取除去不含羰基的皂苷元, 在水相中加入盐酸使羰基皂苷元形成的吉拉德腙水解, 即可得原羰基皂苷元。
2.4 大孔吸附树脂法大孔吸附树脂多为苯乙烯或2-甲基丙烯酸酯型, 理化性质稳定, 不溶于水、酸、碱及常用有机溶剂。
根据其结构单元不同分为各种型号, 常用的如: D101型、DA- 201 型、Diaion HP- 20 型、AB- 8 型等[11]。
舒孝顺等用大孔树脂分离菝葜总皂苷, 从HPD100、HPD300、HPD600、及D101 四种大孔树脂中筛选出HPD100 非极性树脂, 研究结果表明该树脂对于本体系中的总皂苷具有吸附快解吸较易、流体流动性能好、操作简单和周期短等优势[12]。
在用大孔树脂获得较为精致的总皂苷后, 为进一步获得皂苷单体, 一般还需采用其他的色谱方法。
3、分离方法甾体皂苷亲水性较强, 有些皂苷极性非常接近,以上述方法分离纯化, 难以获得单体化合物, 所以皂苷经过一定的纯化后, 常采用不同的色谱法分离甚至反复经过色谱法分离, 才能获得单体成分。
总皂苷的分离主要是采用柱色谱技术。
填料以硅胶为主,另外有葡聚糖凝胶(如Sephadex LH-20) ,烷基键合硅胶(ODS) 等。
Sephadex LH-20 适合于分子量相差大的化合物的分离,ODS 对极性大的化合物分离效果较好。
在柱分离模式上, 有常压色谱、中压色谱(MPLC) 和高压色谱(HPLC) 。
HPLC 法用于分离高极性、大分子量及结构相似的甾体皂苷有着突出的优点。
3.1 制备薄层层析法方法与薄层层析相同, 只是增加薄层吸附剂厚度来增加其载药量,与柱层析相比,分离效果更好,能用来制备较纯的皂苷,但制备量最大仍只能达到几百毫克。
3.2 硅胶柱层析法硅胶柱层析是一种传统的分离方法, 目前在甾体皂苷的分离工作中仍被广泛应用。
如: 陈梦菁通过多次硅胶柱层析, 从四川蜘蛛抱蛋中分离到了三种甾体皂苷[13]。
林厚文等运用反复硅胶柱层析从中药玉竹中分离到了四个甾体皂苷[14]。
分离时经常采用氯仿- 甲醇- 水三元溶剂体系。
在氯仿- 甲醇溶剂体系中加入适量的水, 可克服皂苷类化合物进行硅胶色谱分离时产生的拖尾现象, 获得更好的分离效果。
3.3 反向硅胶柱层析法近年来反向键合相得到广泛应用。
使用最多的预填充反向硅胶柱主要Lichroprep Rp- 8 (Merck,60-80%甲醇洗脱)和Lobar Rp- 8(Merck,60- 80%甲醇洗脱), 常使用的反向多孔聚合物有DIAION HP- 20、KogelBG4600(以不同比例的甲醇和水洗脱)。
陈昌祥等从云南大理产的蜘蛛抱蛋根茎甲醇提取物中, 先经硅胶柱层析, 再经硅胶H 柱层析, 洗脱部分经Rp- 8 反向柱层析得到两种甾体皂苷[15]。
Toshihiro Inoue 等从Dichelostemma Multiflorum 的块茎中通过ODS 反向硅胶柱层析和硅胶柱层析得到三种新的甾体皂苷和两种已知的皂苷[16]。
3.4 葡聚糖凝胶色谱法葡聚糖凝胶是由平均分子量一定的葡聚糖及交联剂( 如含氧氯丙烷) 以醚桥的形式互相交联聚合而成的三维空间网状结构。
利用凝胶吸水后能形成凝胶粒子, 在其交联键的骨架中有许多大小的网眼, 使进入凝胶内部的分子和不能进入凝胶内部的分子进行分离。
常用的凝胶有sephadexLH- 20、G- 10、G- 25 等。
Robson,R.B 等从Smilax Officinalis 的根状茎中应用Sephadex LH- 20 成功得到三种甾体皂苷[17]。
周小平等由分蘖葱头的乙醇提取物经葡聚糖凝胶和硅胶柱色谱分离得到四个甾体皂苷类化合物[18]。
3.5 高效液相层析法(HPLC) 中压液相层析(MPLC)和低压液相层析(LPLC)采用不同的压力,调整流动相的流速,具有很好的分离效果。
HPLC 在甾体皂苷的分离工作中应用得最为广泛。
Mitsue Haraguchi 用硅胶柱层析、MPLC、HPLC 法从Cestrum sendtenerianum 的叶中得到了五种甾体皂苷[19]。
董梅、吴立军等从黄山药的根茎95%乙醇提取物通过硅胶柱色谱和HPLC 分离得到三个甾体皂苷[20]。
3.6 其它柱色谱法除硅胶柱色谱外，目前也有采用中性氧化铝、氧化镁为吸附剂，用混合溶剂洗脱，可以精制皂苷，高伟华等用氧化镁吸附杂质后，再用氧化铝-大孔树脂混合柱净化处理样品，再用硅胶柱色谱进行分离纯化，得到较纯的皂苷。
3.7 结晶法Masaki Itabashi 从Furcraea foetida 的干燥叶片中用结晶法得到了一种具有生物活性的甾体皂苷[21]。
在实验中, 通常是几种分离方法相互结合, 最终才能得到纯度较高的甾体皂苷。
Mimaki,Y.等从Cordyline stricta 新鲜叶中依次经过硅胶柱层析、Diaion HP- 20、ODS 硅胶层析、分配型硅胶层析、HPLC 和TLC,最终得到了三个甾体皂苷[22]。
Satou, tadaaki 利用硅胶柱层析、TLC、ODS 硅胶柱层析、Sephadex LH- 20、Diadion HP-20、HPLC 从Lilium martaqon 的新鲜茎中得到二种新的甾体皂苷[23]。
3.8 膜技术膜技术使用微滤膜、超滤膜、纳滤膜来分离得到物质，具有高效、过程基本无相变、可在常温下运作及工艺简单、操作方便、投资省等优点，已成为一项新兴的用于澄清、分离和浓缩等方面的绿色节能技术。
通过膜技术来分离纯化甾体，可实现常规方法不能实现的分离效果。
3.9 高速逆流色谱法(HSCCC)高速逆流色谱是一种不用固态支撑体或载体的液液分离色谱和能实现连续有效分离功能的实用新型分离技术。
液滴逆流层析法分离效能高，有时可将结构极其相近的成分分开，近年来广泛用于分离纯化皂苷，其主要优点是没有固体吸附剂，不存在被分离物质的不可逆吸附，因此对分离纯化微量且生理活性很强的化合物尤其是极性化合物特别有意义。
结语综上所述,目前实际生产提取富集甾体皂苷类化合物采用的仍主要是煎煮、回流提取，联合利用超滤技术或大孔吸附树脂等措施纯化。
近年来随着反相以及中高压色谱的普遍使用，甾体皂苷提取分离技术取得了很大的进步,这些进展促进了皂苷结构、药理、药效等方面的研究。
随着现代仪器分析的不断开发,提取分离技术不断进步,甾体皂苷乃至皂苷类化合物的研究必将成为天然药物化学中更加诱人和更有潜力的领域。
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