基因型鉴定 protocol知识分享
基因型鉴定原理
基因型鉴定原理一、引言基因型鉴定是指通过检测个体所携带的基因型，来确定其遗传信息的一种方法。
基因型是指个体所拥有的基因的组合，它决定了个体的遗传特征和表型表达。
基因型鉴定的原理是通过分析个体所携带的DNA序列，确定其基因型。
二、基因型鉴定方法1. PCR法PCR法是一种常用的基因型鉴定方法，它通过扩增DNA片段来分析个体的基因型。
PCR法需要设计一对引物，使其能够特异性地结合到目标序列上，并使用DNA聚合酶进行扩增。
通过PCR扩增后的产物，可以通过电泳分析进行分型。
2. 串联重复序列分析法串联重复序列是指在基因组中重复出现的短序列片段，其重复次数在不同个体间存在差异。
通过分析个体所携带的串联重复序列的重复次数，可以确定其基因型。
例如，STR（short tandem repeat）是一种常用的串联重复序列，通过扩增STR区域，并通过电泳分析不同长度的产物，可以确定个体的基因型。
3. 单核苷酸多态性分析法单核苷酸多态性是指基因组中存在的单个核苷酸的变异。
通过分析个体所携带的单核苷酸多态性位点的变异情况，可以确定其基因型。
例如，SNP（single nucleotide polymorphism）是一种常见的单核苷酸多态性，通过PCR扩增SNP位点，并通过测序分析不同的碱基，可以确定个体的基因型。
三、基因型鉴定的应用1. 亲子鉴定基因型鉴定可以通过比较父母和子女之间的基因型，确定亲子关系的真实性。
通过分析共同的基因型，可以确定子女是否来自于指定的父母。
2. 犯罪侦查基因型鉴定可以通过分析犯罪现场留下的DNA，与嫌疑人的DNA进行比对，从而确定嫌疑人是否与犯罪现场有关。
3. 遗传病筛查基因型鉴定可以通过分析个体所携带的遗传病相关基因的变异情况，来确定其是否患有某种遗传病。
这对于遗传病的早期筛查和预防具有重要意义。
四、基因型鉴定的局限性基因型鉴定虽然具有很高的准确性，但仍存在一些局限性。
首先，基因型鉴定需要一定的样本量和质量，如果样本质量不好或者样本量不足，可能会影响鉴定结果的准确性。
基因型鉴定——精选推荐
小鼠组织DNA的取材及抽提1 蛋白酶K储存液的配制用超纯水彻底溶解蛋白酶K粉剂，使终浓度为10mg/ml，每管1ml分装，-20度保存备用。
2 裂解液配制尿素4M（240.24g/1000ml）EDTA-2Na-2H2O 10mM ( 3.722g/1000ml)Sarkosyl 0.5% ( 5g/1000ml)Tris/HCl ( 1M, PH 8.0 ) 0.1M ( 100ml/1000ml )NaCl 0.2M ( 11.688g/1000ml )H2O 补足至1000ml1000ml3 小鼠组织取材使用乙醇擦拭的手术剪刀剪少许鼠耳尖部组织，半个火柴头大小足够；或取小鼠尾部组织2-3mm即可。
每次取材需用乙醇重新擦拭，如有条件可更换手术器械。
4 小鼠组织DNA抽提将取材完毕的组织置于1.5ml 离心管中，加500ul 裂解液其中含有50ul蛋白酶K储存液，使用1ml移液器反复吹打后封管置于56℃水浴过夜，或期间反复拿出震荡。
次日样本于室温12000rpm离心10min，转移上清于1.5ml 离心管中，加1ml无水乙醇，盖后振摇可见絮状沉淀。
12000rpm 4℃离心20min。
弃上清，加入预冷的70%乙醇洗涤，摇晃后12000rpm 4℃离心10min。
重复洗涤步骤。
完全弃去上清，通风橱内待乙醇挥发，加500ul纯水吹打溶解（看DNA沉淀的量，300ul亦可。
）取1- 2ul做PCR。
5 小鼠基因型的PCR鉴定反应体系：10×Taq buffer 1.0μldNTP (10mM) 0.2μlMgCl2(25mM) 1.0μlPrimer 1（10nM）0.5μlPrimer 2（10nM）0.5μlPrimer 3（10nM）0.5μlTissue DNA 1.0μlTaq polymerase 0.3μlddH2O 5.0μl10.0μl 反应条件：Step 1：94℃5minStep 2：94℃1min58℃30sec72℃1min重复Step 2 35个循环Step 3：72℃10minStep 4：4℃Hold。
基因型鉴定方法
基因型鉴定方法基因型(genotype)是指一个生物体内细胞DNA所包含的与某个性状相关的基因类型。
主要通过PCR和Southern blotting分析来鉴定基因修饰动物的基因型。
PCR反应为常规方法，转基因动物有时需要用Southern blotting验证转基因拷贝数。
用Southern blotting还可以确定转基因是否发生重排或删除。
基因发生重排时，会导致酶切位点发生变化，产生不同的酶切图谱。
用实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)可快速确定转基因mRNA表达量。
转基因随机插入动物基因组，如果转基因动物没有异常，通常不需要确定转基因整合位置；如需测定，可以通过荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)在显微镜下直接观察整合位置和局部染色体结构。
这项技术还可以用于检测转基因插入部位的染色体重排以及由Cre重组酶诱导的局部染色体删除。
PCR反应基因型鉴定的原理是首先设计能与引入的外源基因结合的特异性引物，扩增原本不存在于动物基因组中的DNA序列。
引物的设计很关键，转基因动物基因型分析的引物通常位于转基因内，一般选择特异性的DNA序列作为引物以确定转基因是否存在。
在多数情况下，转基因的插入位点是未知的，难以设计引物以确定转基因是否为纯合子或杂合子。
对于基因敲除和基因敲入动物，由于明确知道基因修饰的位置，因此，可以设计野生型和突变型的引物以确定基因型是否为纯合子或杂合子。
突变型引物对：一个引物位于同源重组短臂外；另一个位于引入的外源基因，如Neo基因内。
野生型引物通常位于要敲除的DNA序列。
突变型和野生型PCR产物的大小应不同，在100～700bp之间，足以用凝胶电泳区别鉴定。
引物的GC比例约为50％(40％～60％)。
基因型分析时还要注意设立对照组。
PCR反应阳性对照：可选内源性看家基因如β-actin，以确定DNA质量和正确的扩增反应体系。
基因型鉴定方法范文
基因型鉴定方法范文首先，进行DNA提取是基因型鉴定的关键步骤之一、DNA提取的方法有很多种，常用的有酚氯仿法和离心管法。
其中，酚氯仿法是一种经典的提取方法，通过使用酚和氯仿溶液，可以将DNA从细胞中提取出来。
离心管法则是利用离心机的旋转力，将细胞组织离心沉淀，然后采用特定的溶液提取DNA。
DNA提取的目的是获得足够高质量的DNA样本，以确保后续步骤的准确性。
其次，目标序列扩增是基因型鉴定的核心步骤之一扩增目标序列常采用的方法是聚合酶链反应（PCR）。
PCR是一种体外DNA扩增技术，利用DNA聚合酶酶和双链DNA模板，通过一系列的循环反应，在体外扩大目标DNA序列的数量。
PCR的原理是将DNA模板加热至90-95℃，使其双链DNA解链，然后降温至50-60℃，将引物与目标序列互相结合，最后将温度升高至72℃，DNA聚合酶与dNTPs进行DNA链合。
通过多次循环反应，可以扩增出足够数量的目标DNA序列。
最后，进行测序分析是确定基因型的关键步骤。
测序分析主要分为传统测序和新一代测序两种方法。
传统测序方法是利用二进制编码和限制酶去鉴定DNA序列，通过几个测序反应，逐个测出DNA序列中的每个核苷酸，然后通过比对和比较进行测序分析。
这种方法相对来说比较简单，但耗时较长，适用于小规模的基因型鉴定。
新一代测序技术则是一种高通量测序技术，可以在短时间内获得大量的DNA序列信息。
通过并行测序和高通量测序平台，可以同时测序多个DNA片段，从而加速DNA序列的获取。
这种方法具有高速、高效、高通量的特点，适用于大规模的基因型鉴定。
综上所述，基因型鉴定方法是通过对DNA序列进行分析，确定个体的基因型。
其主要步骤包括DNA提取、目标序列扩增和测序分析。
随着技术的不断进步，以及新一代测序技术的应用，基因型鉴定的效率和准确性得到了极大的提高，将为生物医学和农业领域提供更多有益的信息。
基因型鉴定技术的发展对于疾病诊断、个体定制治疗和种质改良等方面具有重要的意义，有望为人类社会带来更多的福祉。
细胞基因型鉴定
细胞基因型鉴定细胞基因型鉴定是一种通过分析细胞的基因组来确定个体基因型的技术手段。
细胞基因型鉴定在医学、生物学研究和法医学等领域有着重要的应用价值。
本文将介绍细胞基因型鉴定的原理、方法和应用。
一、细胞基因型鉴定的原理细胞基因型鉴定的原理基于DNA的序列差异。
DNA是构成基因的分子，不同个体的DNA序列存在差异，这些差异可以通过分子生物学技术进行检测和分析。
细胞基因型鉴定主要通过PCR扩增和DNA测序等方法来鉴定个体的基因型。
二、细胞基因型鉴定的方法1. PCR扩增：PCR是一种常用的DNA扩增技术，通过引物将目标DNA序列扩增为足够数量的DNA片段，为后续的分析提供充足的模板。
PCR扩增可以选择性地扩增目标基因片段，从而实现基因型鉴定。
2. DNA测序：DNA测序是确定DNA序列的方法，通过测序仪将PCR扩增得到的DNA片段进行测序，可以得到DNA序列信息。
根据DNA序列的差异，可以判断个体的基因型。
三、细胞基因型鉴定的应用1. 医学领域：细胞基因型鉴定可以用于遗传病的筛查和诊断。
一些遗传病是由特定基因突变引起的，通过细胞基因型鉴定可以检测个体是否携带这些突变基因，从而提前预防和治疗。
2. 生物学研究：细胞基因型鉴定可以用于物种鉴定和亲缘关系分析。
通过比较不同个体的基因型，可以判断它们是否属于同一物种，以及它们之间的亲缘关系。
3. 法医学：细胞基因型鉴定在刑事侦查和亲子鉴定中有着重要的应用。
通过比对被鉴定个体的DNA序列与现场留下的DNA样本进行比对，可以确定个体的身份和亲子关系。
细胞基因型鉴定技术的发展为医学、生物学研究和法医学等领域提供了强有力的工具。
随着技术的不断进步，细胞基因型鉴定的精确性和灵敏度将进一步提高，为人类的健康和社会稳定做出更大的贡献。
基因型鉴定protocol
一、基因型鉴定p r o t o c o l
1、剪尾取样及编号
从鼠房取出需要基因型鉴定的小鼠（由于小鼠一般在21天时已经断奶，故小鼠剪尾的时间应不小于三周），查看鼠箱上的基因信息，根据基因信息从编号笔记本上找出相应编号，续编。
其置于混合仪上消化，55℃（此温度下DNA在水中的溶解度最高，即最为稳定），3h。
②向消化后的样品中加入400微升异丙醇，反复颠倒，一般可见絮状分层（个别样品看不到）。
之后放至离心机13000r，10min。
③去上清，加入750微升70%乙醇，13000r，10min。
重复此操作一
次。
④去上清，将EP管倒置于吸水纸上或置于空气中晾干。
(最好晾干，倒置在吸水纸上有可能会使一部分DNA流失)
3、PCR(例，三转小鼠，做三次PCR，每次PCR针对的基因不同，所
94℃预热 ~ 4min
94℃变性 ~ 1min
61℃ 退火 ~ 1min 30个循环
72℃ 延伸 ~ 1min
72℃ ~ 7min
4℃ ~ hold
注意盖子盖紧。
4、琼脂糖电泳
①配胶，根据规格来配，如80ml规格，称量0.8000g琼脂糖，加入80ml 0.5*TBE buffer。
加热至沸腾
EB.。
全基因敲除小鼠基因型鉴定原理及方法
全基因敲除小鼠基因型鉴定原理及方法下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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新生小鼠genotypingprotocol
新生小鼠genotypingprotocol从小鼠合笼到基因分型一，小鼠合笼：1，准备需要合笼的老鼠（要求为性成熟老鼠：8—10周龄），记录老鼠基本信息，包括编号，性别，出生日期，基因型。
2，挑选需要合笼的公鼠，每笼放一只，记录笼号和卡片流水号，并在卡片上标记该老鼠的基本信息（编号，基因型）。
3，挑选需要合笼的母鼠，每笼只，同样在卡片上标记母鼠的基本信息（编号，基因型），注意，同一笼中母鼠的耳号不能相同。
4，合笼时间的选择（具体情况具体分析）。
5，母鼠验栓。
合笼次日晨8:00验栓，有阴栓的母鼠更换到仅放有受孕母鼠笼中，在卡片上标记好母鼠信息（包括与该母鼠交配的公鼠的编号），在原鼠笼的卡片上划掉该母鼠信息。
6，重复步骤5连续三天，将仍未受孕的母鼠统一分装到不含有公鼠的笼中，标记相应信息卡片，至此合笼结束。
二，新生小鼠基因分型1，新生小鼠从出生时P0开始计数，到4周龄p28时需要对其进行基因分型且进行分笼。
2，对小鼠耳号的编号方式见下图：背部3，按照一窝新生老鼠8只（3只Male, 5只Female）为例，按上图耳号的位置打耳号，编号方式为（Male）1-1, 1-2, 1-3, (Female)2-1, 2-2, 2-3, 2-4, 2-5, 做好分笼，将打耳号时产生的ear punch biopsy放于对应编号的PCR管中，管上做对应编号。
4，Add 40μl Sol Ⅰ，Heat to 95℃15min，Add 40μl Sol Ⅱ5，2μl for PCR reaction.6，PCR结果凝胶电泳，电泳结果拍照并打印，清晰标记每个泳道的对应小鼠编号。
7，按照小鼠编号和电泳结果，在分笼后鼠笼卡片上标记对应小鼠编号的基因型。
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基因型鉴定p r o t o c o l
一、基因型鉴定protocol
1、剪尾取样及编号
从鼠房取出需要基因型鉴定的小鼠（由于小鼠一般在21天时已经断奶，故小鼠剪尾的时间应不小于三周），查看鼠箱上的基因信息，根据基因信息从编号笔记本上找出相应编号，续编。
①在EP管上预先写明小鼠编号
②从鼠箱中取出老鼠（戴上手套后用手抓住小鼠尾部向上提出，提住鼠尾不放，将小鼠慢慢放至实验台上，此时小鼠会向前爬动，用另一只手从背侧捏住小鼠背部皮肤，要注意捏的位置尽量靠近颈的上部，防止小鼠的头部扭动），从小鼠尾端用剪刀剪下3mm左右鼠尾（不可超过5mm,会使小鼠受伤），将剪下的样品放入对应编号的EP管内，用电烙铁烫及小鼠尾部剪口处，一定要使伤口烫合，防止其流血不止。
然后对小鼠进行鼠耳编号。
（注意：编号时要记录小鼠的性别）
2、DNA提取
①向每只含样品的EP管内加入400微升消化液（含蛋白酶K），将其置于混合仪上消化，55℃（此温度下DNA在水中的溶解度最高，即最为稳定），3h。
②向消化后的样品中加入400微升异丙醇，反复颠倒，一般可见絮状分层（个别样品看不到）。
之后放至离心机13000r，10min。
③去上清，加入750微升70%乙醇，13000r，10min。
重复此操作一次。
④去上清，将EP管倒置于吸水纸上或置于空气中晾干。
(最好晾干，倒置在吸水纸上有可能会使一部分DNA流失)
3、PCR(例，三转小鼠，做三次PCR，每次PCR针对的基因不同，所用引物不同，每次PCR做样品数+3（空对照：不加模板；正对照：突变型小鼠的样品；负对照：野生型小鼠的样品）个体系)。
单个体系如下：
ddW 18
10*buffer （含Mg2+） 2.5 dNTP(2.5mM) 2.5 Primer R(20µM) 0.25 Primer F(20µM) 0.25 Taq酶 0.5 Template 1
程序：
94℃预热 ~ 4min
94℃变性 ~ 1min
61℃ 退火 ~ 1min 30个循环
72℃ 延伸 ~ 1min
72℃ ~ 7min
4℃ ~ hold
注意盖子盖紧。
4、琼脂糖电泳
①配胶，根据规格来配，如80ml规格，称量0.8000g琼脂糖，加入80ml 0.5*TBE buffer。
加热至沸腾
（80ml~90s;40ml~90s;20ml~30s）,待冷却至60℃时加0.001%的EB.倒至插有梳子的胶板上，待用。
②上样
6*loading buffer ~ 5µl
样品或对照 ~ 25µl
③电泳，140V
④凝胶成像分析系统，将结果填入信息卡，并在卡上注明日期。