粗多糖提取
(完整版)粗多糖的测定方法
粗多糖的测定方法(1)1. 原理分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。
2. 适用范围参照AOAC方法。
适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。
3.仪器（1）分光光度计（2）离心机（3）旋转混匀器（4）恒温水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。
（2）2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和。
（3）铜贮存液：称取3.0 g CuSO4 ·5H2O，30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。
溶液可贮存2周。
（4）铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。
（5）洗涤液：取水50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混匀。
（6）1.8 mol/L H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。
（7）20 g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。
（8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h 至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。
准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。
（9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。
粗多糖的测定方法(2)5. 操作方法5.1 样品处理（1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml （V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。
（2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml （V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。
Sevag法脱蛋白-多糖提取
《多糖提取（Sevag 法去蛋白）》
1、实验原理介绍：
Sevag 法是去除游离蛋白的有效方法。
在粗多糖溶液中加入氯仿—正丁醇混合溶液进行充分振摇,将游离蛋白变性成为不溶性物质,经离心分离去除,可达到去除的目的。
2、实验方法及步骤
具体操作可以按下述操作试一试：取粗多糖溶液4 ml ,氯仿—正丁醇(预先配制成体积比为4∶1 混合液) 溶液1 ml ,置于具塞试管中,充分振摇30 min 后,经离心机离心1 min ,然后将水相与氯仿相分开。
将水相再加入相当于其体积1/ 4 的氯仿—正丁醇溶液,重复上述过程,共计重复三次。
多糖溶液体积较大时也可以采用分液漏斗，人工进行剧烈振荡后直接分离，注意振荡强度与分离效率关系很大。
操作过程中蛋白质多出现在两相界面处。
3、实验结果及讨论
1、需要取上清液重复加入sevage试剂我重复了十一次每次振摇15分
在紫外测250－280没有吸收峰才可确定除净了蛋白。
2、Sevag 法较为温和，对多糖的结构影响不大，但效率较低，往往重复五次以上才能达到理想效果。
考虑较为剧烈但效率更高的三氯乙酸法除蛋白。
3、糖蛋白不是那么容易除干净的，通常大量取多糖溶液(5%)按，用三角瓶在摇床上摇2h再放离心管里离心，得到水层再重复,如果蛋白含量多的话,除一两个星期的.直到震荡后水层上不再有白色泡茉为止。
实验二芦荟粗多糖的提取汇总
②浸提液减压浓缩，用6 mol/L的盐酸调pH值3.2左右， 向经过调酸处理的芦荟凝胶浓缩汁中缓慢加入6倍量 的95%乙醇，边加边搅拌大约需要15~30 min，室温
下静置2 h，离心分离(2500 r/min，7 min)得多糖沉
淀。依次用乙醇、丙酮和乙醚洗涤，然后真空干燥，
最终得到的沉淀即为芦荟多糖粗品。
水提醇沉法原理？ 如何定量多糖的含量？
如何判断该化合物为多糖？
人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。
一般操作过程是：将中药水提液浓缩 至1︰2，药液放冷后，边搅拌边缓慢 加入乙醇使达规定含醇量，密闭冷藏 24～48h，滤过，滤液回收乙醇，得到 精制液。
操作时应注意以下问题：
①适当浓缩，以减少乙醇用量。控制浓缩程度，
过浓，有效成分易包裹于沉淀中而造成损失。②
浓缩液冷却后方可加入乙醇，以免乙醇受热挥发
或：减压浓缩至原来的1/3,向浓缩汁中缓慢加入6倍
体积冷的无水乙醇，边加边搅拌大约需要15~30 min，
室温下静置2 h，得粗多糖沉淀。
【注意事项】
加入乙醇沉淀多糖时要边加边搅拌，时间 要长一些; 注意仪器的规范使用；
实验结果与记录:
记录实验条件、过程和实验现象。
的包裹损失。
【实验材料、试剂与仪器】
试剂：无水乙醇。
烧杯、玻璃棒、小刀、纱布、量筒、电子 天平、高速冷冻离心机、旋转蒸发仪、真 空泵、水浴锅、组织匀浆机。
南瓜多糖提取方案
1.南瓜粗多糖的提取：准确称取100g 新鲜南瓜，加入200ml蒸馏水，在榨汁机中搅拌5min，置于烧杯，放入70℃恒温水浴中加热2h，搅拌提取多糖，然后抽虑，滤液80℃真空浓缩至固形物含量约30%，在浓缩液中加入5倍体积95%酒精搅拌均匀，冰箱放置过夜，离心得沉淀物。
沉淀物以水溶解重复醇析1次，然后将沉淀物用无水酒精、丙酮、乙醚洗涤，冷冻干燥得南瓜粗多糖。
2.Sevag法除蛋白质取粗多糖的样品，用蒸馏水溶解，按多糖水溶液体积的1/3-1/4加入氯仿：正丁醇（4：1）混合液剧烈震荡，离心分离30min，除蛋白质，反复操作5次，直至紫外光谱分析在蛋白质280nm和核酸260nm处无特征吸收峰，说明含氮物质已除去。
3. 南瓜多糖降糖组分的分离、纯化（三氯乙酸）将南瓜多糖粗品饱和溶解至0.1 mol/L 氯化钠溶液中,4 ℃放置24 小时,离心,弃去沉淀,滤液中加入40 %三氯乙酸使其终浓度达到10 % ,4 ℃冷藏24小时, 离心, 沉淀用0.1 mol/L NaCl 溶液溶解, 经Sepharose CL24B 柱层析,用0.1 mol/L 氯化钠溶液洗脱、分离,采用硫酸- 蒽酮法跟踪检测,收集含多糖的组分,再用0.1 mol/L NaOH 中和,将洗脱液适当浓缩,透析,用Sephadex A2200 柱层析分离、纯化, 用0.1 mol/L 氯化钠溶液洗脱(洗脱液流速: 0.55 mL/min) ,收集洗脱液,减压浓缩,冷冻干燥得白色粉末状南瓜多糖精品,测定其多糖含量。
4.南瓜多糖精品的纯度鉴定柱层析法将多糖精品溶解在0.05 mol/L磷酸缓冲液(PH=7.0 的PBS 2mol/l 的91.4ml磷酸一氢钠+8.6ml磷酸二氢钠为100mlPBS) 中, 质量浓度为0.3g/dL , 经用0.05 mol/L PBS 平衡后的Sephadex G2200 层析柱洗脱,体积流量为4.8 mL/h ,每管收集洗脱液2 mL ,硫酸- 苯酚法部分收集检测，分析多糖组分。
超声提取粗多糖的工艺流程
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灵芝粗多糖的提取工艺
灵芝粗多糖的提取工艺
灵芝多糖的提取工艺主要包括以下几个步骤：
1. 材料准备：选择新鲜的灵芝或者灵芝干燥品作为原料，将其进行切碎或研磨，以增加提取效果。
2. 提取溶剂的选择：常用的提取溶剂有水、乙醇、甲醇等。
具体选择溶剂需要根据灵芝多糖的性质和应用需求来确定。
3. 提取方法：常用的提取方法有水煮提取法、连续提取法、酸提取法、超声波提取法等。
不同的提取方法对灵芝多糖的提取效果有所差异。
4. 温度和时间控制：提取温度和时间对灵芝多糖的提取效果也有影响。
一般来说，较高的温度和较长的提取时间可提高灵芝多糖的提取率，但同时也可能损失一部分活性成分。
5. 过滤和浓缩：将提取好的液体进行过滤去杂质，然后使用浓缩设备，如旋转蒸发器、真空浓缩器等，将溶剂去除或浓缩。
6. 干燥和粉碎：将浓缩后的灵芝多糖进行干燥，使其转化为粉末或颗粒状。
7. 质量控制：对提取得到的灵芝多糖进行质量检测，包括测定灵芝多糖的含量、
分子量、结构等。
需要注意的是，提取灵芝多糖的工艺可以根据具体需要进行调整和改进。
不同的提取工艺可能会有不同的影响，因此在实际操作过程中，需要根据实际情况来选择适合的提取工艺。
实验二 芦荟粗多糖的提取
实验二芦荟粗多糖的提取一、实验目的1、掌握“水提醇沉”法提取多糖的原理和方法2、掌握高速冷冻离心机、旋转蒸发器等仪器的用法二、实验原理——“水提醇沉”三、95%乙醇“无水乙醇”、dH2O四、仪器及器皿烧杯、玻璃棒、小刀、量筒、纱布、电子天平、高速冷冻离心机五、步骤芦荟（约50g）洗净、去叶尖、叶底dH2O浸泡0.5h（除去黄色汁液）去表皮内层凝胶切成小片3倍体积dH2O、55o C 4~5h 双层纱布过滤上清液浓缩至原体积的1/3 6倍体积冷的无水乙醇（缓慢加入并不断搅拌15~30min，收集，2h 后沉淀物）六、作业1、描述实验步骤现象描述：洗净的芦荟浸泡后水中会有丝状的流体，且清水稍微变黄；切块后置于水浴加热后的块状芦荟部分融化变为絮状，用纱布过滤后留下清夜；用旋转蒸发仪浓缩后液体颜色变深，往浓缩液中加入6倍体积冷的无水乙醇后会有絮状沉淀产生，放置10min、20min、30min 后悔发现沉淀不断增加。
2、原理水提醇沉法是先以水为溶剂提取药材有效成分，再用不同浓度乙醇沉淀除去提取液中杂质的方法。
它是利用中药中的大多数成分易溶于水和醇的特性，用水提出，并将提取液浓缩，加入适当的乙醇或水反复数次沉降，除去其不溶解的物质，最后制得澄明的液体。
3、如何进行定量（1）精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖100mg于100mL容量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度，作为对照品溶液。
此标准溶液1.0mL含葡萄糖1.0mg。
（2）精密量取该溶液0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL分别置于100mL容量瓶中，加蒸馏水定容，吸取上述溶液各2.0mL，再加入5％苯酚溶液1.0mL，摇匀。
迅速加入硫酸5.0mL，摇匀。
室温放置5min，90℃水浴加热15min，冷却至室温，以蒸馏水作参比，测定在波长490nm处的吸光度，得浓度（c）与吸光度（A）的线性回归方程。
（3）精密称取干燥至恒重的芦荟粗多糖10mg于100mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。
粗多糖的提取与纯化之脱色
2007-10-19 22:19:55 成大中药化学实验室 常用的方法有：离子交换法、氧化法（如H2O2氧化脱色，使用时应注意浓度不宜过高，否则引起多糖 的降解）、金属络合物法、吸附法（纤维素、硅藻土、活性炭等）。DEAE-纤维素（在纤维素与葡聚糖分子 上结合有一定的离子基团，当结合阳离子基团时，可换出阴离子，则称为阴离子交换剂。如二乙氨乙基 （Dicthylaminoethyl，DEAE）纤维素。在纤维素上结合了DEAE，含有带正电荷的阳离子纤维素－O－ C6H14N+H，它的反离子为阴离子（如Cl-等），可与带负电荷的多糖阴离子进行交换。当结合阴离子基团 时，可置换阳离子，称为阳离子交换剂，如羧甲基（Carboxymethy，CM）纤维素。纤维素分子上带有负电荷 的阴离子（纤维素－O－CH2－COO-），其反离子为阳离子（如Na+等）,可与带正电荷多糖阳离子进行交换。 在适当的盐浓度下，溶液的pH值高于等电点时，多糖或蛋白质被阴离子交换剂所吸附；当溶液的pH值低于等 电点时，多糖或蛋白质被阳离子交换剂所吸附。由于各种多糖或蛋白质所带的电荷不同。它们与交换剂的结 合程度也不同，只要溶液pH值发生改变，就会直接影响到蛋白质与交换剂的吸附，从而可能把不同的多糖或 蛋白质逐个分离开来。交换剂对胶体离子（如多糖）和无机盐离子（如NaCl）都具有交换吸附的能力，当两 者同时存在于一个层析过程中，则产生竞争性的交换吸附。当Cl-的浓度大时，多糖不容易被吸附，吸附后 也易于被洗脱，当Cl-浓度小时，多糖易被吸附，吸附后也不容易被洗脱。因此，在离子交换层析中，一般 采用两种方法达到分离蛋白质的目的。一种是增加洗脱液的离子强度，一种是改变洗脱液的pH值。pH值增高 时，抑制蛋白质阳离子化，随之对阳离子交换剂的吸附力减弱。pH值降低时，抑制蛋白质阴离子化，随之降 低了蛋白质对阴离子交换剂的吸附。当使用阴离子交换剂时，增加盐离子，则降低pH值。当使用阳离子交换 剂时，增加盐离子浓度，则升高溶液pH值。 综上述，一般情况下，DEAE-纤维素用于分离酸性多糖，而CM纤维素用于分离碱性多糖）是目前最常用 的脱色方法，不仅能达到脱色的目的，而且可以分离多糖；对于同时含有游离蛋白质和色素的多糖，可通过 生成金属络合物的方法，同时除去蛋白和色素，方法是加入费林试剂（费林试剂是还原糖测定的主要试剂之 一，是一种铜盐的碱性溶液，由甲液与乙液二部分组成，原理是费林试剂中的二价铜(Cu2＋)，使具有还原 性的单糖氧化，二价铜被还原成一价铜(Cu＋)，再用重量法或容量法测定一价铜的量，通过系数换算成多糖 含量。配制方法：费林氏甲液——称取分析纯硫酸铜(CuSO4•5H2O)15g及四甲基蓝(次甲基蓝)0.05g， 用蒸馏水溶解，定容至1000mL；费林氏乙液——称取分析纯酒石酸钾钠50g，分析纯氢氧化钠54g及分析纯亚 铁氰化钾4g，用蒸馏水溶解，定容至1000mL）生成不溶性络合物，经分离后用阴离子交换树脂分解络合物。 季宇彬. 《中药多糖的化学与药理》. 北京: 人民卫生出版社. 2005.5
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** 学院本科生毕业论文龙葵粗多糖提取工艺条件的优化院(部)、专业生命科学学院生物科学研究方向生物化学学生姓名学号指导教师姓名指导教师职称讲师2014年06月01日大庆师范学院本科生毕业论文摘要本实验以龙葵为实验材料，通过单因素和正交法相结合的实验方法对龙葵粗多糖提取工艺进行优化，考察因素分别是料液比、冲泡时间、水浴时间和水浴温度，最终确定最优工艺条件为料液比1:25、冲泡时间50℃、水浴时间25min、水浴温度90℃，粗多糖的提取率为0.1%。
关键词：龙葵；粗多糖；条件优化AbstractThis experiment by morel as experiment material, using single factor and orthogonal method, experimental method of solanum nigrum polysaccharide extraction process was optimized, examine factors are respectively and solid-liquid ratio, brewing time, water bath time and water bath temperature, and ultimately determine the optimal process conditions for the material liquid ratio, the brewing time 50℃, and water bath time 25min, water bath temperature 90℃, the coarse polysaccharide extraction yield of 0.1%.Key words：morel；crude polysaccharide；condition optimization中文摘要 (I)英文摘要 (II)目录...................................................................................................................... I II 1 前言 (1)1.1龙葵简介 (1)1.2龙葵的药用价值 (1)1.3中药代茶饮 (1)2 材料及方法 (3)2.1实验材料 (3)2.2实验器材与药品 (3)2.2.1 实验器材 (3)2.2.2 实验药品 (3)2.2.3 实验器具 (3)2.3实验方法 (3)2.3.1 制取粗多糖主要流程 (3)2.3.2 萄糖标准曲线的确定 (3)2.3.3 粗多糖提取率计算公式 (4)2.3.4 龙葵粗多糖提取单因素实验 (4)2.3.5 正交试验设计 (5)3 结果与讨论 (6)3.1单因素实验结果与讨论 (6)3.1.1 料液比单因素实验结果与讨论 (6)3.1.2 冲泡温度单因素实验结果与讨论 (7)3.1.3 水浴温度单因素实验结果与讨论 (8)3.1.4 水浴时间单因素实验结果与讨论 (9)3.2正交实验结果与讨论 (10)4 结论与展望 (12)[参考文献] (13)5 致谢 (14)1.1龙葵简介龙葵（Solanum nigrum L.），俗称黑天天，野葡萄、老鸦眼睛草、苦菜、苦葵等，属茄科茄属龙葵种，是一年生草本植物[1,6]。
分布很广泛，在全国很多地区都有分布。
在中国，龙葵存在3个种和1个变种，即龙葵（Solanum nigrum L.）、红果龙葵（S.alatum Moench）、少花龙葵（S.paucifloum(Liou) H.Y.Zhang)以及变种黄果龙葵（S.nigrum L.var.flavovirens S.Z.Liou et W.Q.Wang）[8]。
龙葵全草的化学成分分析，其中含有生物碱、维生素、多糖、氨基酸、矿物质、色素、树脂等，龙葵浆果中也有很多的成分，例如酯、羧基化合物、甾醇、酚性化合物、多种矿物质以及多糖等。
其中，关键作用的化学成分主要为生物碱和多糖[1,6]。
1.2龙葵的药用价值大量的研究表明，龙葵多糖在医药方面具有极其重要的潜在价值。
表现为拥有使血管透性及透明质酸酶的生物活性下降，推动抗体的形成，使血液的凝固性降低，以及抑制心脏的兴奋等免疫功能的作用。
[1]K. S．Heoa等提出龙葵多糖具有促进肿瘤细胞凋亡的作用。
[2]并且在治疗风湿痛、肝炎、癌症、艾滋病等疾病方面提供了有力的治疗依据，具有使机体免疫功能和抗肿瘤的功能提高的作用。
1.3中药代茶饮中药代茶饮，是我国传统的一种调理身体和养生的药剂，特别受到中老年人的喜爱。
中药代茶饮，又称药茶或茶剂，利用中草药和茶叶配合或者是只用中草药进行冲泡饮用的一种方式。
利用此方式饮用中药，方便快捷，省时省力，省去了熬药的复杂过程，并且用量较小，只用汤剂剂量的半量或三分之一，甚至更少。
药性温和，不会有伤胃之顾虑，味道比较淡，大部分人都能接受。
在熬药的过程中，有些成分会随着蒸汽或者由于沥汁的过程中不彻底而损耗，用饮茶的方法则完全没有这些忧虑。
中药代茶饮是可以一直饮用的，不会对身体产生伤害，反而达到养生的目的。
这种药茶长时间服用，它的药用成分在体内维持较高浓度，而使药效持续时间长，效果明显。
中药代茶饮不仅可以用于疾病的防治，还可以用于病后的调理，补益正气，调和脏腑，促进康复。
中药可以作为茶来饮用，究竟中药中是什么有着预防和治疗疾病的作用。
[10-12]经过查找文献，了解到多糖是溶于温水，中药代茶饮是将中药浸在热水中，必然有些多糖会溶解在水中。
饮用这种水达到了一定的治疗效果，这种治疗效果是和龙葵多糖的药用价值很吻合，所以中药代茶饮中龙葵中粗多糖起到了一定的疗效。
多糖的药用价值是近年来探究的热点话题。
本实验通过对龙葵粗多糖的提取条件进行优化，得到较优的提取条件，为以后对多糖的提取提供了依据。
2材料及方法2.1实验材料大庆药材店购买的龙葵,烘干粉碎备用。
2.2实验器材与药品2.2.1实验器材表2-1实验仪器、型号及厂家仪器名称厂家型号水浴锅HH-6江苏金坛市亿通电子有限公司紫外分光光度计UV725N上海科学精密仪器厂电子分析天平广州市正一科技公司FA2004N2.2.2实验药品（1）主要试剂：无水乙醇、葡萄糖、浓硫酸、苯酚溶液（2）配制试剂：4%苯酚溶液、1mg/mL葡萄糖标准溶液2.2.3实验器具烧杯、三角烧瓶、量筒、移液管、玻璃棒、试管等。
2.3实验方法2.3.1粗多糖提取主要流程干燥龙葵→粉碎→称重→按料液比冲泡过夜→水浴→过滤去渣→等体积过夜醇沉→过滤去上清液→取沉淀定容→苯酚硫酸法测定OD490。
2.3.2萄糖标准曲线的确定（1）准确称取无水葡萄糖0.5000g，至500ml容量瓶稀释定容，成为1mg/ml 葡萄糖标准溶液。
（2）用移液管分别吸取0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml、0.7ml、0.8、0.9ml 、1.0ml ，至试管，每样需平行三次，分别加蒸馏水至2ml 、6%苯酚2ml 、浓硫酸2ml ，每样需平行三次，振荡，置于沸水浴中加热15min ，取出后在流动自来水中冷却至室温。
另在一试管中加蒸馏水2ml ，加苯酚和硫酸，同上操作作空白对照。
于分光光度仪上于490nm 处测定吸光度，横坐标代表浓度，纵坐标代表吸光度，绘制葡萄糖的标准曲线(如图2-1所示)，得线性回归方程如公式2-1：()20.01869(0.99807)2-12.35694A C R -==公式式中：C ——表示葡萄糖浓度（mg/ml ）A ——表示吸光度O D 490图2-1葡萄糖浓度(mg/mL)2.3.3 粗多糖提取率计算公式()()100%2-2V C W =⨯⨯⨯多糖提取率公式式中：C ——表示葡萄糖浓度（mg/mL ）V ——表示样品定容后的溶液体积（mL ）W ——表示称取的龙葵粉末的质量（mg ）2.3.4 龙葵粗多糖提取单因素实验文献表明多糖可溶于温热的水，可采用水提醇沉的方法来提取多糖。
因此实验将料液比1:20，水浴温度60℃，水浴时间20min，冲泡温度60℃为单因素实验最初设定的实验条件。
采用控制变量法，分别对水浴时间、水浴温度及料液比和冲泡温度这四个因素进行不同水平实验，以此获得较优的单因素提取水平。
（1）料液比单因素实验分别称取一定质量干燥的龙葵，设定料液比的梯度为1:15、1:20、1:25、1:30、1:35五个水平，60℃冲泡过夜，60℃水浴20min，过滤去渣，等体积无水乙醇过夜醇沉，过滤取粗多糖沉淀，定容，使用苯酚硫酸法测OD490，计算粗多糖提取率，并进行讨论。
（2）冲泡温度单因素实验分别称取一定质量干燥的龙葵，料液比为1:20，加20m l水。
设定冲泡温度的梯度为50℃、60℃、70℃、80℃、90℃五个水平，冲泡过夜，60℃水浴20min，过滤去渣，等体积无水乙醇过夜醇沉，过滤取粗多糖沉淀，定容，使用苯酚硫酸法测OD490，计算粗多糖提取率，并进行讨论。
（3）水浴温度单因素实验分别称取一定质量干燥的龙葵，料液比为1:20，加20m l水。
60℃冲泡过夜。
设定水浴温度梯度为50℃、60℃、70℃、80℃、90℃五个水平，水浴时间为20min，过滤去渣，等体积无水乙醇过夜醇沉，过滤取粗多糖沉淀，定容，使用苯酚硫酸法测OD490，计算粗多糖提取率，并进行讨论。
（4）水浴时间单因素实验分别称取一定质量干燥的龙葵，料液比为1:20，加20ml水，60℃冲泡过夜。
设定水浴温度梯度为10min、15min、20min、25min、30min五个水平，水浴时间为20min，过滤去渣，等体积无水乙醇过夜醇沉，过滤取粗多糖沉淀，定容，使用苯酚硫酸法测OD490，计算粗多糖提取率，并进行讨论。
2.3.5正交试验设计通过以上单因素实验结果，查找文献，设计L9（34）最终确定提取龙葵粗多糖的最优工艺。
3 结果与讨论3.1 单因素实验结果与讨论3.1.1 料液比单因素实验结果与讨论通过单因素料液比实验2.3.4.1，得到龙葵粗多糖提取率如下所示：表3-1料液比的单因素实验结果序号料液比 获得平均粗多糖重量（g ） 粗多糖提取率（%） 11:15 0.0008 0.0813 21:20 0.0010 0.0952 31:25 0.0011 0.1096 41:30 0.0008 0.0828 5 1:35 0.0004 0.0376粗多糖提取率(%)料液比(m/v)图3-1料液比单因素实验结果由表3-1和图3-1可以看出，随着料液比的增加，龙葵与溶剂的接触面积不断增大，糖分子易于扩散，析出的多糖量多，粗多糖的提取率不断提高。