乳酸脱氢酶同工酶
乳酸脱氢酶282
乳酸脱氢酶282乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase, LDH）是一种广泛存在于生物体内的酶类，具有催化乳酸氧化还原的功能。
它参与了糖酵解途径中的关键步骤，将糖分解产生的乳酸转化为丙酮酸，同时在某些情况下也可逆转这一反应。
本文将从乳酸脱氢酶的结构、功能、生理作用和临床应用等方面进行介绍。
乳酸脱氢酶是一种四聚体酶，由四个亚基构成，包括两种亚基类型：M亚基（乳酸脱氢酶1）和H亚基（乳酸脱氢酶2）。
这两种亚基的组合形式决定了乳酸脱氢酶的同工酶型，包括LDH1、LDH2、LDH3、LDH4和LDH5。
这些同工酶在不同组织和器官中的表达量不同，反映出乳酸脱氢酶的组织特异性。
乳酸脱氢酶在细胞内主要参与糖酵解途径中的乳酸产生和消耗。
在缺氧情况下，乳酸脱氢酶催化糖酵解的最后一步，将产生的丙酮酸还原为乳酸，以维持细胞内NAD+的供应。
而在充氧情况下，乳酸脱氢酶则逆转这一反应，将乳酸氧化为丙酮酸，以提供能量和维持酸碱平衡。
乳酸脱氢酶的活性受到pH值、温度和离子强度等因素的影响。
乳酸脱氢酶在人体生理过程中扮演着重要的角色。
它参与了糖酵解途径，为细胞提供能量。
此外，乳酸脱氢酶在胚胎发育、骨骼肌运动、心肌代谢和免疫调节等方面也发挥着重要的作用。
乳酸脱氢酶在肿瘤细胞中表达较高，被广泛应用于肿瘤诊断和监测。
乳酸脱氢酶的活性异常与多种疾病的发生和发展密切相关。
例如，乳酸脱氢酶的升高可提示心肌梗死、肝炎、肝硬化等疾病。
乳酸脱氢酶的降低则可能与贫血、维生素B12缺乏等疾病有关。
通过检测血清中乳酸脱氢酶的活性，可以帮助医生判断疾病的类型、程度和预后，指导临床治疗。
乳酸脱氢酶在临床中的应用不仅局限于疾病的诊断和监测，还包括药物研发和体育训练等领域。
乳酸脱氢酶活性的改变可以作为药物毒性的指标，帮助筛选和评价药物的安全性。
在体育训练中，乳酸脱氢酶的活性可以反映肌肉疲劳程度，从而指导训练强度和恢复策略的制定。
乳酸脱氢酶作为一种重要的酶类，参与了糖酵解途径中的关键步骤，具有广泛的生理作用和临床应用价值。
乳酸脱氢酶380算高
乳酸脱氢酶380算高【原创版】目录1.乳酸脱氢酶 (LDH) 的介绍2.LDH 380 的含义3.LDH 380 数值高的可能原因4.高 LDH 380 的潜在健康问题5.如何降低 LDH 380 水平正文乳酸脱氢酶 (LDH) 是一种在人体细胞中广泛存在的酶，参与乳酸的代谢过程。
LDH 380 是指乳酸脱氢酶同工酶中的一种，其单位为 U/L。
正常情况下，人体血液中 LDH 380 的水平应该在 200-400 U/L之间。
当LDH 380 的水平超过正常范围时，可能表明存在某些健康问题。
LDH 380 数值高的可能原因包括:1.肌肉损伤：当身体受到创伤或者剧烈运动后，肌肉组织可能会受到损伤，从而导致 LDH 380 水平升高。
2.心脏疾病：心脏疾病可能导致心肌损伤，从而引起 LDH 380 水平升高。
3.肝脏疾病：肝脏是乳酸脱氢酶的主要生产地，如果肝脏受到损伤或者疾病，可能会导致 LDH 380 水平升高。
4.肿瘤：某些肿瘤细胞可能会产生乳酸脱氢酶，从而导致 LDH 380 水平升高。
高 LDH 380 的潜在健康问题包括:1.心肌损伤：高水平的 LDH 380 可能表明存在心肌损伤，需要进一步检查和治疗。
2.肝脏疾病：高水平的 LDH 380 可能表明存在肝脏疾病，需要进一步检查和治疗。
3.肿瘤：高水平的 LDH 380 可能表明存在肿瘤，需要进一步检查和治疗。
如何降低 LDH 380 水平？1.如果是由于剧烈运动引起的 LDH 380 水平升高，可以通过适当的休息和补充足够的水分来缓解。
2.如果是由于肌肉损伤引起的 LDH 380 水平升高，可以采用冷敷和局部保护等措施来缓解。
3.如果是由于肝脏疾病或肿瘤等引起的 LDH 380 水平升高，需要尽快就医，接受进一步的检查和治疗。
乳酸脱氢酶 380 算高是一种身体给我们的信号，表明身体某些部位可能受到损伤或者存在疾病。
乳酸脱氢酶
乳酸脱氢酶之吉白夕凡创作乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。
乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以肾脏含量较高。
乳酸脱氢酶是能催化丙酮酸生成乳酸的酶，几乎存在于所有组织中。
同工酶有六种种形式，即LDH-1(H4)、LDH-2(H3M)、LDH-3(H2M2)、LDH-4(HM3)、LDH-5(M4)及LDH-C4，可用电泳方法将其分离。
LDH同功酶的分布有明显的组织特异性，所以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病。
正凡人血清中LDH2，〉LDH1。
如有心肌酶释放入血则LDH1〉LDH2，利用此指标可以观察诊断心肌疾病。
基本信息英文名称: LDH(lactate dehydrogenase)序列信息:1 gsgcnldsar frylmg长度:16 aa{物种来源:Homo sapiens (human)}正常范围:血清135.0~215.0U/L;脑脊液含量为血清的1/10。
乳酸脱氢酶A简介乳酸脱氢酶(LDH)分子量为130~140KDa，由两种亚单位组成:H(暗示heart)和M(暗示muscle)。
它们按分歧的形式排列组合形成含4个亚基的5种同工酶，即:LDH1(H4)、LDH2(H3M1)、LDH3(H2M2)、LDH4(HM3)、LDH5(M4)。
LDH催化丙酮酸与乳酸之间还原与氧化反应，在碱性条件下促进lactic acid向pyruvic acid方向的反应，而在中性条件下促进pyruvic acid向lactic acid的转化(为逆反应)。
LDH是介入糖无氧酵解和糖异生的重要酶。
由于LDH几乎存在于所有体细胞中，而且在人体组织中的活性普遍很高，所以血清中LDH的增高对任何单一组织或器官都是非特异的。
在AMI时升高迟、达峰晚，故对早期诊断价值不大。
由于半寿期长(10~163小时)，多用于回顾性诊断，如对入院较晚的AMI病人、亚急性MI的诊断和病情监测。
LDH在组织中的分布特点是心、肾以LDH1为主，LDH2次之;肺以LDH3.LDH4为主;骨骼肌以LDH5为主;肝以LDH5为主，LDH4次之。
乳酸脱氢酶和肌酸激酶同工酶高的原因
乳酸脱氢酶（LDH）和肌酸激酶（CK）同工酶高在临床检测中是常见的现象，常见于多种疾病和健康问题。
本文将从多个角度探讨乳酸脱氢酶和肌酸激酶同工酶高的原因，分析可能的病因，以及对策和建议。
一、乳酸脱氢酶（LDH）同工酶高的原因1. 炎症反应乳酸脱氢酶属于细胞内酶，其同工酶高常见于组织损伤和炎症反应。
细胞受损或炎症导致细胞膜通透性增加，LDH释放入血液中，引起其同工酶浓度升高。
2. 心肌梗死急性心肌梗死时，心肌组织受损，LDH从心肌细胞释放入血液中，导致其同工酶浓度升高。
3. 肝脏疾病肝脏疾病如黄疸、肝炎、肝硬化等也会导致LDH同工酶高。
肝脏受损使得LDH释放入血液中增加。
4. 肌肉损伤肌肉损伤如挫伤、拉伤、运动过度等也会导致LDH同工酶高。
肌肉损伤使得细胞内LDH释放入血液中增加。
二、肌酸激酶（CK）同工酶高的原因1. 肌肉损伤肌酸激酶同工酶高的最常见原因是肌肉损伤，特别是骨骼肌损伤。
运动过度、挫伤、拉伤等导致的肌肉损伤可以使得肌酸激酶释放到血液中，引起其同工酶浓度升高。
2. 心肌梗死与LDH类似，心肌梗死导致心肌细胞损伤，CK释放到血液中增加，导致其同工酶浓度升高。
3. 肌无力慢性肌无力症患者也常伴有CK同工酶高。
肌无力症导致肌细胞的破坏和修复过程不断进行，CK不断释放入血液中。
4. 药物一些药物如他汀类药物、胰岛素等在长期或过量使用时也会导致CK同工酶高。
三、其他因素除了上述常见原因外，还有一些其他因素也可能导致LDH和CK同工酶高，如高温、中毒、代谢性疾病、感染、内分泌疾病等。
总结起来，乳酸脱氢酶和肌酸激酶同工酶高的原因非常多样化，包括炎症反应、肌肉损伤、心肌梗死、肝脏疾病、肌无力、药物等因素均可能导致同工酶水平升高。
在临床实践中，对于LDH和CK同工酶高的患者，需要仔细分析病史，结合其他相关检查，以明确疾病的诊断和治疗方案。
通过合理的用药、规范的运动、健康的生活习惯等方式，可以预防LDH和CK同工酶高的发生。
实验7 琼脂糖凝胶电泳法测定血清乳酸脱氢酶同工酶
（4）恶性贫血 溶血性疾病、幼红细胞贫血症LD活性极度 升高，伴有LD1明显升高，LD1＞LD2。
（5）骨骼肌损伤时LD4和LD5可发生增高。
[注意事项]
1．红细胞中LD1、LD2活性很高，因此必须避免标本溶血。 2．LD4与LD5对热很敏感，因此底物-显色液的温度不能过
6．区带观察 观察显色的区带情况（数目、深浅等）。 7．定量 将各区带切开，分别装入试管中，加入400g/L尿素
4ml，于沸水浴中加温5min，取出冷却后以 575nm波长比色。 空白管取大小相同但无同工酶区带的凝胶，用上述相同的方 法处理。比色后根据各管吸光度值计算各同工酶的百分含量。
[计算]
A总＝A1+A2+A3+A4+A5 式中，A1～A5为各同工酶区带的吸光度。 各同工酶百分率（%）为：
实验7 琼脂糖凝胶电泳法分离（测定） 血清乳酸脱氢酶同工酶
[原理]
乳酸脱氢酶（LD）广泛存在于人体各组织细胞中，以 肾、心肌、肌肉、肝、红细胞含量最多。LD是由两种不同 亚基（M和H）组成的四聚体，共有5种同工酶形式，按电 泳的快慢命名为LD1、LD2、LD3、LD4和LD5。
5种同工酶大体可分为三大类：第一类以LD1为主，主 要存在于心肌，含量最多，可占总LD的50%左右；第二类 以 LD5 为 主 ， 以 横 纹 肌 为 代 表 ， 肝 脏 中 也 有 ； 第 三 类 以 LD3为主，存在于脾、肺。各组织LD同工酶的类型、含量 均有所差异。LD同工酶的测定相对于总活性的测定更具有 组织器官特异性，灵敏度也更高。
高（<50℃），否则易使其变性失活，不能显色。 3．LD4和LD5对冷不稳定，易发生失活，故最好采用新鲜标
乳酸脱氢酶
乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶.乳酸脱氢酶存在于所有组织细胞(de)胞质内,其中以含量较高.乳酸脱氢酶是能催化生成乳酸(de)酶,几乎存在于所有组织中.有六种种形式,即LDH-1(H4)、LDH-2(H3M)、LDH-3(H2M2)、LDH-4(HM3)、LDH-5(M4)及LDH-C4,可用电泳方法将其分离.LDH(de)分布有明显(de),所以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病.正常人中LDH2,〉LDH1.如有心肌酶释放入血则LDH1〉LDH2,利用此指标可以观察诊断心肌疾病.基本信息英文名称: LDH(lactate dehydrogenase)序列信息:1 gsgcnldsar frylmg长度:16 aa{物种来源:Homo sapiens (human)}正常范围:血清135.0~215.0U/L;脑脊液含量为血清(de)1/10.乳酸脱氢酶A简介乳酸脱氢酶(LDH)分子量为130~140KDa,由两种亚单位组成:H(表示heart)和M(表示muscle).它们按不同(de)形式排列组合形成含4个亚基(de)5种同工酶,即:LDH1(H4)、LDH2(H3M1)、LDH3(H2M2)、LDH4(HM3)、LDH5(M4).LDH催化丙酮酸与乳酸之间还原与氧化反应,在碱性条件下促进lactic acid向pyruvic acid方向(de)反应,而在中性条件下促进pyruvic acid向lactic acid(de)转化(为逆反应).LDH是参与糖无氧酵解和糖异生(de)重要酶.由于LDH几乎存在于所有体细胞中,而且在人体组织中(de)活性普遍很高,所以血清中LDH(de)增高对任何单一组织或器官都是非特异(de).在AMI时升高迟、达峰晚,故对早期诊断价值不大.由于半寿期长(10~163小时),多用于回顾性诊断,如对入院较晚(de)AMI病人、亚急性MI(de)诊断和病情监测.LDH在组织中(de)分布特点是心、肾以LDH1为主,LDH2次之;肺以LDH3.LDH4为主;骨骼肌以LDH5为主;肝以LDH5为主,LDH4次之.血清中LDH 含量(de)顺序是LDH2>LDH1>LDH3>LDH4>LDH5.正常参考值人组织中(de)乳酸脱氢酶(LDH)用可以分离出5种同工区带,根据其电泳迁移率(de)快慢,依次命名为LDH1,LDH2,LDH3,LDH4,LDH5.不同组织(de)分布不同,存在明显(de),人心肌、肾和红细胞中以LDH1和LDH2最多,骨骼肌和肝中以LDH4和LDH5最多,而肺、脾、胰、甲状腺、肾上腺和淋巴结等组织中以LDH3最多.后来从睾丸和精子中发现了LDHx,其介于LDH4和LDH5之间.LDH是由H(心肌型)和M(骨骼肌型)两类组成,分别形成LDH1(H4)、LDH2(H3M)、LDH3(H2M2)、LDH4(HM3)、LDH5(M4).正常参考值(1)琼脂糖:LDH1(28.4±5.3)%;LDH2(41.0±5.0)%;LDH3(19.0±4.0)%;LDH4(6.6±3.5)%;LDH5(4.6±3.0)%.(2)醋酸纤维素薄膜法:LDH1(25.32±2.62)%LDH2(34.36±1.57)%LDH3(21.86±1.38)%LDH4(11.3±1.84)%LDH5(7.97±1.59)%(3)聚丙烯酰胺法:LDH1(26.9±0.4)%LDH2(36.0±0.5)%LDH3(21.9±0.4)%LDH4(11.1±0.4)%LDH5(4.1±0.3)%总之,健康成人血清LDH有如下(de)规律:LDH2>LDH1>LDH3>LDH4>LDH5.临床意义(1)心肌细胞LDH活性远高于血清数百倍,尤以LDH1和LDH2含量最高,LDH2占主导地位.时,血清LDH1和LDH2显着升高,约95%(de)病例(de)血清LDH1和LDH2比值大于1,且LDH1升高早于LDH总活性升高.LDH在心肌梗死后上升速度比慢很多,所以LDH上升在血液中存在时间较长,使得LDH成为诊断心肌梗死发生一周以上(de)有效工具.病毒性和风湿性心肌炎及克山病,出现心肌损害时,病人(de)血清LDH同工酶(de)改变与心肌梗塞相似.LDH1/LDH2比值>1还见于溶血性贫血、地中海贫血、恶性贫血、镰形细胞性贫血、肾脏损伤、肾皮质梗塞、心肌损伤性疾病、瓣膜病等.(2)脑干含LDH1较高.颇脑损伤仅累及大脑半球时,只有血清同工酶谱(de)增高,而不影响同工酶(de)相互比值,如果累及脑干时,病人血清LDH1(de)含量也增高.(3)发病后12~24小时,血清LDH1也已升高.若同时测定LDH总活性,可发现LDH1/总LDH(de)比值升高.早期血清中LDH1和LDH2活性均升高,但LDH1增高更早,更明显,导致LDH1/LDH2(de)比值升高.对急性心肌梗塞诊断(de)阳性率和可靠性优于单纯测定LDH1或CK-MB.(4)胚胎细胞瘤病人(de)血清LDH1活性升高.(5)急性肝炎,损伤或坏死后,向血流释入大量(de)LDH4和LDH5,致使血中LDH5/LDH4比值升高,故LDH5/LDH4>1可做为肝细胞损伤(de)指标.急性肝炎以LDH5明显升高,LDH4不增,LDH5/LDH4>1为特征;若血清LDH5持续升高或下降后再度升高,则可认为是慢性肝炎;肝昏迷病人(de)血清LDH5.LDH4活性极高时,常示预后不良;原发性肝癌以血清LDH4>LDH5较为常见.(6)肾皮质以LDH1和LDH2含量较高,以LDH4和LDH5活性较强.患(ATN)、慢性肾盂肾炎、慢性肾小球肾炎以及肾移植排异时,血清LDH5均可增高.(7)肺含LDH3较多,肺部疾患时血清LDH3常可升高.肺梗塞时LDH3和LDH4相等,LDH1明显下降;肺脓肿病人(de)血清LDH3.LDH4常与LDH5同时升高. 煤矿、钨矿矽肺病人(de)血清LDH1.LDH2下降,LDH4.LDH5升高.(8)血清LDH总活性升高而同工酶谱正常(LDH1/LDH2<1)(de)病例,临床出现率依次为;心肺疾病、恶性肿瘤、骨折、疾患、炎症、肝硬化、传染性单核细胞增多症、甲状腺功能减退、、组织坏死、病毒血症、肠梗阻等.(9)肌营养不良病人肌肉中LDH1.LDH2明显增高,LDH5显着下降;而血清则相反,LDH1.LDH2明显减少,LDH4.LDH5显着,表明血清LDH同工酶主要来自肌肉组织.(10)恶性病变时LDH3常增高.升高(de)原因乳酸脱氢酶偏高(de)原因至于乳酸脱氢酶高(de)原因,有以下方面:1.当病情恶化成乙肝患者时,部分受损,血清中LDH4和LDH5含量就会有不同程度(de)增高.2.乙肝治疗方法特别是是用药不当,长期服用同一种药物时造成肾毒现象(de)产生.当肾毒现象出现时,血清中乳酸脱氢酶含量会迅速升高.3.乙肝不进行合适积极(de)治疗,发展到一定程度时会造成肝脏代谢严重异常,导致功能衰竭,从而也会引起乳酸脱氢酶含量升高.4.肺梗塞、恶性贫血、休克及肿瘤转移所致(de)胸时,会引起乳酸脱氢酶(de)偏高.偏低(de)原因乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞(de)胞质内,其中以肾脏含量较高.血清乳酸脱氢酶正常范围是100~300U/L,当出现乳酸脱氢酶偏低时,常见原因如下.乳酸脱氢酶偏低(de)原因1:检查过程中出现误差;乳酸脱氢酶偏低(de)原因2:内分泌失调;乳酸脱氢酶偏低(de)原因3:过于劳累、睡眠不好、心情不好等.总之,乳酸脱氢酶偏低一般不是很严重,经过调理即可恢复.但如果出现乳酸脱氢酶偏高就要引起重视了.因为肺梗塞、恶性贫血、休克及肿瘤转移所致(de)胸时,会引起乳酸脱氢酶(de)偏高.LDH实验概述乳酸脱氢酶(LDH)是催化乳酸和丙酮相互转化(de)同工酶,属于氢.该酶存在于所有动物(de)组织中,在肝脏中活性最高,其次为心脏、骨骼肌、,在肿瘤组织及细胞中也能检测到.在大多数中,它是由两种按一定比例组成(de)5种四聚体.它(de)每条肽链各由一个基因编码,经转录、翻译、修饰加工等过程,最后成为有生物学活性(de)物质.不同(de)动物,不同(de)组织或器官在不同(de)或不同(de)生活周期均有其特异性(de)同工酶酶谱.自然界中存在L和D两种乳酸脱氢酶.实验原理用纯化(de)抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗D-LDH抗体(de)微孔中依次加入标本或标准品、生物素化(de)抗D-LDH抗体、HRP标记(de)亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色.TMB在(de)催化下转化成蓝色,并在酸(de)作用下转化成最终(de)黄色.颜色(de)深浅和样品中(de)D-LDH呈正相关.用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度.试剂盒组成及试剂配制1. 酶联板(Assay plate ):一块(96孔).2. 标准品(Standard):2瓶(冻干品).3. 样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶.4. 生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶.5. 标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶.6. 生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)7. 辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶.9. 浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍.10. 终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4).需要而未提供(de)试剂和器材1. 标准规格酶标仪2. 高速离心机3.4. 干净(de)试管和Eppendof管5. 系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器6. 蒸馏水,容量瓶等操作步骤实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡.每次检测都应该做.如样品浓度过高时,用样品进行稀释,以使样品符合试剂盒(de)检测范围.1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔.空白孔加样品100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于孔底部,尽量不触及,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟.为保证实验结果有效性,每次实验请使用新(de)标准品溶液.2. 弃去液体,甩干,不用洗涤.每孔加生物素工作液100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体(de)比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟.3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干.4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液) 100μl,37℃,60分钟.5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干.6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品(de)前3-4孔有明显(de)梯度蓝色,后3-4孔梯度不明显,即可终止).7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色).终止液(de)加入顺序应尽量与底物液(de)加入顺序相同.为了保证实验结果(de)准确性,底物到后应尽快加入终止液.8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔(de)光密度(OD值). 在加终止液后15分钟以内进行检测.计算以标准物(de)浓度为横坐标(),OD值为纵坐标(普通坐标),在纸上绘出,根据(de)OD值由标准曲线查出相应(de)浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物(de)浓度与OD值计算出标准曲线(de)直线式,将样品(de)OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品(de)实际浓度.注意事项1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓,避免起泡.2. 洗涤过程非常重要,不充分(de)洗涤易造成假阳性.3. 一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样.4. 请每次测定(de)同时做标准曲线,最好做复孔.5. 如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请最后乘以稀释倍数.6. 在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应(de)配制,不能混淆.7. 底物请避光保存.8. 不要用其它生产厂家(de)试剂替换试剂盒中(de)试剂.偏高怎么办血清中乳酸脱氢酶偏高主要有恶性肿瘤,肝炎、肝硬化等疾病引起(de),乳酸脱氢酶检查偏高常见于急性肝炎、阻塞性黄疸、心肌炎、恶性肿瘤、肝硬化、肝癌、运动肌肉营养不良、急性白血病及恶性贫血等病症.临床医学实践表明,80%以上患者体内(de)血清乳酸脱氢酶升高是由肝脏疾病引起(de),尤其是急性乙肝、肝硬化、肝癌等.因此,若患者发现乳酸脱氢酶在血清中(de)含量不再正常范围之内,应及时到肝病医院进行检测,在医生(de)指导下进行有针对性(de)治疗.。
第四章实验五乳酸脱氢酶_LDH_同工酶的分离纯化
NAD+：10 mL NBT：10 mL PMS：2 mL 0.5 M PH7.6 Tris-HCl: 15 mL 0.5 M乳酸钠：15 mL 0.1NaCl：5 mL 去离子水：43 mL
共计100 mL
四、实验操作
1.样品处理：1 g 组织切碎，加 pH 7.4 Tris-HCl缓 冲液10 mL，匀浆，10,000 g ，4℃，离心10 min，上
离子交换剂结构：以Sephadex-QAE A-50为例
葡聚糖 -N+(CH3)3 –Cl基质 功能基团 平衡离子
电荷基团 反离子
离子交换剂的种类
1 按基质种类不同： 离子交换树脂，离子交换纤维素，离子交换凝胶等
2 按功能基团不同： 强酸型 含磺酸基团 (R-SO3H)， 中等酸型 含磷酸基团 (-O-PO2H4) 弱酸型 含酚基、羧基 强碱型 含季胺基团 [-N+(CH3)3]，弱碱型 含叔胺、伯胺基团[-N(CH3)2] 3 按平衡离子的性质不同：
ABC
D
E
A280
5 10 15 20 25 30 35 40 50
洗脱体积
4.聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定：活性电泳 只做分离胶，胶倒好直接插上试样梳，进行聚合
编号 1 2 3 4 5
总体积
溶液名称 30% Acr –0.8% Bis pH 8.9 Tris -HCl TEMED 10% AP H2O
三、实验试剂
1、20 mM Tris-HCl，pH 7.4缓冲液； 2、A液: 20 mM Tris-HCl，pH 6.3缓冲液 3、B液: A液含60 mM NaCl 4、C液: A液含100 mM NaCl 5、D液: A液含150 mM NaCl 6、E液: A液含240 mM NaCl 7、QAE-Sephadex A-50准备：取1克QAE-Sephadex A-50于烧杯中加入100 mL A
乳酸脱氢酶
乳酸脱氢酶之答禄夫天创作乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶.乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内, 其中以肾脏含量较高.乳酸脱氢酶是能催化丙酮酸生成乳酸的酶, 几乎存在于所有组织中.同工酶有六种种形式, 即LDH-1(H4)、LDH-2(H3M)、LDH-3(H2M2)、LDH-4(HM3)、LDH-5(M4)及LDH-C4, 可用电泳方法将其分离.LDH同功酶的分布有明显的组织特异性, 所以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病.正凡人血清中LDH2, 〉LDH1.如有心肌酶释放入血则LDH1〉LDH2, 利用此指标可以观察诊断心肌疾病.基本信息英文名称: LDH(lactate dehydrogenase)序列信息:1 gsgcnldsar frylmg长度:16 aa{物种来源:Homo sapiens (human)}正常范围:血清135.0~215.0U/L;脑脊液含量为血清的1/10.乳酸脱氢酶A简介乳酸脱氢酶(LDH)分子量为130~140KDa, 由两种亚单元组成:H(暗示heart)和M(暗示muscle).它们按分歧的形式排列组合形成含4个亚基的5种同工酶, 即:LDH1(H4)、LDH2(H3M1)、LDH3(H2M2)、LDH4(HM3)、LDH5(M4).LDH催化丙酮酸与乳酸之间还原与氧化反应, 在碱性条件下增进lactic acid向pyruvic acid方向的反应, 而在中性条件下增进pyruvic acid向lactic acid的转化(为逆反应).LDH是介入糖无氧酵解和糖异生的重要酶.由于LDH几乎存在于所有体细胞中, 而且在人体组织中的活性普遍很高, 所以血清中LDH的增高对任何单一组织或器官都是非特异的.在AMI时升高迟、达峰晚, 故对早期诊断价值不年夜.由于半寿期长(10~163小时), 多用于回顾性诊断, 如对入院较晚的AMI病人、亚急性MI的诊断和病情监测.LDH在组织中的分布特点是心、肾以LDH1为主, LDH2次之;肺以LDH3.LDH4为主;骨骼肌以LDH5为主;肝以LDH5为主, LDH4次之.血清中LDH含量的顺序是LDH2>LDH1>LDH3>LDH4>LDH5.正常参考值人组织中的乳酸脱氢酶(LDH)用电泳法可以分离出5种同工酶区带, 根据其电泳迁移率的快慢, 依次命名为LDH1, LDH2, LDH3, LDH4, LDH5.分歧组织的乳酸脱氢酶同工酶分布分歧, 存在明显的组织特异性, 人心肌、肾和红细胞中以LDH1和LDH2最多, 骨骼肌和肝中以LDH4和LDH5最多, 而肺、脾、胰、甲状腺、肾上腺和淋凑趣等组织中以LDH3最多.后来从睾丸和精子中发现了LDHx, 其电泳迁移率介于LDH4和LDH5之间.LDH是由H(心肌型)和M(骨骼肌型)两类亚基组成, 分别形成LDH1(H4)、LDH2(H3M)、LDH3(H2M2)、LDH4(HM3)、LDH5(M4).正常参考值(1)琼脂糖电泳法:±5.3)%;±5.0)%;±4.0)%;±3.5)%;±3.0)%.(2)醋酸纤维素薄膜法:±2.62)%±1.57)%±1.38)%±1.84)%±1.59)%(3)聚丙烯酰胺法:±0.4)%±0.5)%±0.4)%±0.4)%±0.3)%总之, 健康成人血清LDH同工酶有如下的规律:LDH2>LDH1>LDH3>LDH4>LDH5.临床意义(1)心肌细胞LDH活性远高于血清数百倍, 尤以LDH1和LDH2含量最高, LDH2占主导位置.急性心肌梗塞时, 血清LDH1和LDH2显著升高, 约95%的病例的血清LDH1和LDH2比值年夜于1, 且LDH1升高早于LDH总活性升高.LDH在心肌梗死后上升速度比肌酸激酶慢很多, 所以LDH上升在血液中存在时间较长, 使得LDH成为诊断心肌梗死发生一周以上的有效工具.病毒性和风湿性心肌炎及克山病, 呈现心肌损害时, 病人的血清LDH同工酶的改变与心肌梗塞相似.LDH1/LDH2比值>1还见于溶血性贫血、地中海贫血、恶性贫血、镰形细胞性贫血、肾脏损伤、肾皮质梗塞、心肌损伤性疾病、瓣膜病等.(2)脑干含LDH1较高.颇脑损伤仅累及年夜脑半球时, 只有血清同工酶谱的绝对值增高, 而不影响同工酶的相互比值, 如果累及脑干时, 病人血清LDH1的含量也增高.(3)急性心肌梗塞发病后12~24小时, 血清LDH1也已升高.若同时测定LDH总活性, 可发现LDH1/总LDH的比值升高.早期血清中LDH1和LDH2活性均升高, 但LDH1增高更早, 更明显, 招致LDH1/LDH2的比值升高.对急性心肌梗塞诊断的阳性率和可靠性优于纯真测定LDH1或CK-MB.(4)胚胎细胞瘤病人的血清LDH1活性升高.(5)急性肝炎, 肝细胞损伤或坏死后, 向血流释入年夜量的LDH4和LDH5, 致使血中LDH5/LDH4比值升高, 故LDH5/LDH4>1可做为肝细胞损伤的指标.急性肝炎以LDH5明显升高, LDH4不增,LDH5/LDH4>1为特征;若血清LDH5继续升高或下降后再度升高, 则可认为是慢性肝炎;肝昏迷病人的血清LDH5.LDH4活性极高时, 常示预后不良;原发性肝癌以血清LDH4>LDH5较为罕见.(6)肾皮质以LDH1和LDH2含量较高, 肾髓质以LDH4和LDH5活性较强.患急性肾小管坏死(ATN)、慢性肾盂肾炎、慢性肾小球肾炎以及肾移植排异时, 血清LDH5均可增高.(7)肺含LDH3较多, 肺部疾患时血清LDH3常可升高.肺梗塞时LDH3和LDH4相等, LDH1明显下降;肺脓肿病人的血清LDH3.LDH4常与LDH5同时升高. 煤矿、钨矿矽肺病人的血清LDH1.LDH2下降, LDH4.LDH5升高.(8)血清LDH总活性升高而同工酶谱正常(LDH1/LDH2<1)的病例, 临床呈现率依次为;心肺疾病、恶性肿瘤、骨折、中枢神经系统疾患、炎症、肝硬化、沾染性单核细胞增多症、甲状腺功能减退、尿毒症、组织坏死、病毒血症、肠梗阻等.(9)肌营养不良病人肌肉中LDH1.LDH2明显增高, LDH5显著下降;而血清则相反, LDH1.LDH2明显减少, LDH4.LDH5显著, 标明血清LDH同工酶主要来自肌肉组织.(10)恶性病变时LDH3常增高.升高的原因乳酸脱氢酶偏高的原因至于乳酸脱氢酶高的原因, 有以下方面:乙肝病毒携带者病情恶化成乙肝患者时, 部份肝细胞受损, 血清中LDH4和LDH5含量就会有分歧水平的增高.2.乙肝治疗方法特别是是用药不妥, 长期服用同一种药物时造成肾毒现象的发生.当肾毒现象呈现时, 血清中乳酸脱氢酶含量会迅速升高.3.乙肝不进行合适积极的治疗, 发展到一定水平时会造成肝脏代谢严重异常, 招致肾脏功能衰竭, 从而也会引起乳酸脱氢酶含量升高.4.肺梗塞、恶性贫血、休克及肿瘤转移所致的胸腹水时, 会引起乳酸脱氢酶的偏高.偏低的原因乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内, 其中以肾脏含量较高.血清乳酸脱氢酶正常范围是100~300U/L, 当呈现乳酸脱氢酶偏低时, 罕见原因如下.乳酸脱氢酶偏低的原因1:检查过程中呈现误差;乳酸脱氢酶偏低的原因2:内分泌失调;乳酸脱氢酶偏低的原因3:过于劳累、睡眠欠好、心情欠好等.总之, 乳酸脱氢酶偏低一般不是很严重, 经过调理即可恢复.但如果呈现乳酸脱氢酶偏高就要引起重视了.因为肺梗塞、恶性贫血、休克及肿瘤转移所致的胸腹水时, 会引起乳酸脱氢酶的偏高.LDH实验折叠概述乳酸脱氢酶(LDH)是催化乳酸和丙酮相互转化的同工酶, 属于氢转移酶.该酶存在于所有植物的组织中, 在肝脏中活性最高, 其次为心脏、骨骼肌、肾脏, 在肿瘤组织及白血病细胞中也能检测到.在年夜大都植物组织中, 它是由两种肽链按一定比例组成的5种四聚体.它的每条肽链各由一个基因编码, 经转录、翻译、修饰加工等过程, 最后成为有生物学活性的物质.分歧的植物, 分歧的组织或器官在分歧的发育阶段或分歧的生活周期均有其特异性的同工酶酶谱.自然界中存在L和D两种乳酸脱氢酶.折叠实验原理用纯化的抗体包被微孔板, 制成固相载体, 往包被抗D-LDH抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗D-LDH抗体、HRP标识表记标帜的亲和素, 经过完全洗涤后用底物TMB显色.TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色, 并在酸的作用下转化成最终的黄色.颜色的深浅和样品中的D-LDH呈正相关.用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值), 计算样品浓度.折叠试剂盒组成及试剂配制1. 酶联板(Assay plate ):一块(96孔).2. 标准品(Standard):2瓶(冻干品).3. 样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶.4. 生物素标识表记标帜抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶.5. 辣根过氧化物酶标识表记标帜亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶.6. 生物素标识表记标帜抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)7. 辣根过氧化物酶标识表记标帜亲和素(HRP-av idin):1×120μl/瓶(1:100)8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶.9. 浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶, 使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍.10. 终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4).折叠需要而未提供的试剂和器材1. 标准规格酶标仪2. 高速离心机3. 电热恒温培养箱4. 干净的试管和Eppendof管5. 系列可调节移液器及吸头, 一次检测样品较多时, 最好用多通道移液器6. 蒸馏水, 容量瓶等折叠把持步伐实验开始前, 请提前配置好所有试剂, 试剂或样品稀释时, 均需混匀, 混匀时尽量防止起泡.每次检测都应该做标准曲线.如样品浓渡过高时, 用样品稀释液进行稀释, 以使样品符合试剂盒的检测范围.1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔.空白孔加样品稀释液100μl, 余孔分别加标准品或待测样品100μl, 注意不要有气泡, 加样将样品加于酶标板孔底部, 尽量不触及孔壁, 轻轻晃动混匀, 酶标板加上盖或覆膜, 37℃反应120分钟.为保证实验结果有效性, 每次实验请使用新的标准品溶液.2. 弃去液体, 甩干, 不用洗涤.每孔加生物素标识表记标帜抗体工作液100μl(取1μl生物素标识表记标帜抗体加99μl生物素标识表记标帜抗体稀释液的比例配制, 轻轻混匀, 在使用前一小时内配制), 37℃, 60分钟.3. 温育60分钟后, 弃去孔内液体, 甩干, 洗板3次, 每次浸泡1-2分钟, 350μl/每孔, 甩干.4. 每孔加辣根过氧化物酶标识表记标帜亲和素工作液(同生物素标识表记标帜抗体工作液) 100μl, 37℃, 60分钟.5. 温育60分钟后, 弃去孔内液体, 甩干, 洗板5次, 每次浸泡1-2分钟, 350μl/每孔, 甩干.6. 依序每孔加底物溶液90μl, 37℃避光显色(30分钟内, 此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色, 后3-4孔梯度不明显, 即可终止).7. 依序每孔加终止溶液50μl, 终止反应(此时蓝色立转黄色).终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同.为了保证实验结果的准确性, 底物反应时间到后应尽快加入终止液.8. 用酶联仪在450nm波长依序丈量各孔的光密度(OD值). 在加终止液后15分钟以内进行检测.折叠计算以标准物的浓度为横坐标(对数坐标), OD值为纵坐标(普通坐标), 在半对数坐标纸上绘出标准曲线, 根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式, 将样品的OD值代入方程式, 计算出样品浓度, 再乘以稀释倍数, 即为样品的实际浓度.折叠注意事项1. 当混合卵白溶液时应尽量轻缓, 防止起泡.2. 洗涤过程非常重要, 不充沛的洗涤易造成假阳性.3. 一次加样时间最好控制在5分钟内, 如标本数量多, 推荐使用排枪加样.4. 请每次测定的同时做标准曲线, 最好做复孔.5. 如标本中待测物质含量过高, 请先稀释后再测定, 计算时请最后乘以稀释倍数.6. 在配制标准品、检测溶液工作液时, 请以相应的稀释液配制, 不能混淆.创作时间：二零二一年六月三十日7. 底物请避光保管.8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂.偏高怎么办血清中乳酸脱氢酶偏高主要有恶性肿瘤, 肝炎、肝硬化等疾病引起的, 乳酸脱氢酶检查偏高罕见于急性肝炎、阻塞性黄疸、心肌炎、恶性肿瘤、肝硬化、肝癌、运动肌肉营养不良、急性白血病及恶性贫血等病症.临床医学实践标明, 80%以上患者体内的血清乳酸脱氢酶升高是由肝脏疾病引起的, 尤其是急性乙肝、肝硬化、肝癌等.因此, 若患者发现乳酸脱氢酶在血清中的含量不再正常范围之内, 应及时到肝病医院进行检测, 在医生的指导下进行有针对性的治疗.创作时间：二零二一年六月三十日。
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乳酸脱氢酶同工酶
【临床意义】
（1）心肌细胞LDH活性远高于血清数百倍，尤以LDH1和LDH2含量最高。
急性心肌梗塞时，血清LDH1和LDH2显著升高，约95%的病例的血清LDH1和LDH2比值大于1，且LDH1升高早于LDH总活性升高。
病毒性和风湿性心肌炎及克山病，出现心肌损害时，病人的血清LDH同工酶的改变与心肌梗塞相似。
LDH1/LDH2比值>1还见于溶血性贫血、恶性贫血、镰形细胞性贫血、肾脏损伤、肾皮质梗塞、心肌损伤性疾病、瓣膜病等。
（2）脑干含LDH1较高。
颇脑损伤仅累及大脑半球时，只有血清同工酶谱的绝对值增高，而不影响同工酶的相互比值，如果累及脑干时，病人血清LDH1的含量也增高。
（3）急性心肌梗塞发病后12～24小时，血清LDH1也已升高。
若同时测定LDH 总活性，可发现LDH1/总LDH的比值升高。
早期血清中LDH1和LDH2活性均升高，但LDH1增高更早，更明显，导致LDH1/LDH2的比值升高。
对急性心肌梗塞诊断的阳性率和可靠性优于单纯测定LDH1或CK-MB。
（4）胚胎细胞瘤病人的血清LDH1活性升高。
（5）急性肝炎，肝细胞损伤或坏死后，向血流释入大量的LDH4和LDH5，致使血中LDH5/LDH4比值升高，故LDH5/LDH4>1可做为肝细胞损伤的指标。
急性肝炎以LDH5明显升高，LDH4不增，LDH5/LDH4>1为特征；若血清LDH5持续升高或下降后再度升高，则可认为是慢性肝炎；肝昏迷病人的血清LDH5．LDH4活性极高时，常示预后不良；原发性肝癌以血清LDH4>LDH5较为常见。
（6）肾皮质以LDH1和LDH2含量较高，肾髓质以LDH4和LDH5活性较强。
患急性肾小管坏死（ATN）、慢性肾盂肾炎、慢性肾小球肾炎以及肾移植排异时，血清LDH5均可增高。
（7）肺含LDH3较多，肺部疾患时血清LDH3常可升高。
肺梗塞时LDH3和LDH4相等，LDH1明显下降；肺脓肿病人的血清LDH3．LDH4常与LDH5同时升高。
煤矿、钨矿矽肺病人的血清LDH1．LDH2下降，LDH4．LDH5升高。
（8）血清LDH总活性升高而同工酶谱正常（LDH1/LDH2<1）的病例，临床出现率依次为；心肺疾病、恶性肿瘤、骨折、中枢神经系统疾患、炎症、肝硬化、传染性单核细胞增多症、甲状腺功能减退、尿毒症、组织坏死、病毒血症、肠梗阻等。
（9）肌营养不良病人肌肉中LDH1．LDH2明显增高，LDH5显著下降；而血清则相反，LDH1．LDH2明显减少，LDH4．LDH5显著，表明血清LDH同工酶主要来自肌肉组织。
（10）恶性病变时LDH3常增高。
【LDH升高的原因】
1．当乙肝病毒携带者病情恶化成乙肝患者时，部分肝细胞受损，血清中LDH4和LDH5含量就会有不同程度的增高。
2．乙肝治疗方法特别是是用药不当，长期服用同一种药物时造成肾毒现象的产生。
当肾毒现象出现时，血清中乳酸脱氢酶含量会迅速升高。
3．乙肝不进行合适积极的治疗，发展到一定程度时会造成肝脏代谢严重异常，导致肾脏功能衰竭，从而也会引起乳酸脱氢酶含量升高。
4．肺梗塞、恶性贫血、休克及肿瘤转移所致的胸腹水时，会引起乳酸脱氢酶的偏高。
【LDH偏低的原因】
乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以肾脏含量较高。
血清乳酸脱氢酶正常范围是100～300U/L，当出现乳酸脱氢酶偏低时，常见原因如下。
1：检查过程中出现误差;
2：内分泌失调;
3：过于劳累、睡眠不好、心情不好等。
总之，乳酸脱氢酶偏低一般不是很严重，经过调理即可恢复。
但如果出现乳酸脱氢酶偏高就要引起重视了。
因为肺梗塞、恶性贫血、休克及肿瘤转移所致的胸腹水时，会引起乳酸脱氢酶的偏高。