爱爱医资源-免疫胶乳浊度分析在自动生化分析仪上的应用
胶乳免疫透射比浊法测定ASO在全自动生化分析仪上的应用
胶乳免疫透射比浊法测定ASO在全自动生化分析仪上的应用蔡武全;赵翠霞;杨剑平【期刊名称】《中国厂矿医学》【年(卷),期】2008(21)1【摘要】目的探讨胶乳免疫透射比浊法测定抗链球菌溶血素O(ASO)在全自动生化分析仪上的使用。
方法采用日立7080型全自动生化分析仪,两点速率法测定,主波长为600nm,副波长为700nm,温度37℃,血清:试剂1:试剂2为3μl:250μl:50μl,并与胶乳免疫散射比浊法进行对比。
结果血清ASO的检出限为0～500IU/ml;平均批内和批间的变异系数(CV)分别为1.55%、2.11%;平均回收率为103.0%;该法(X)与免疫散射比浊法(Y)有良好的相关性,相关方程Y=0.92X-8.2,相关系数r=0.993;血清甘油三酯浓度3.2mmol/L,血红蛋白浓度4.0g/L以下,胆红素浓度400μmol/L以下,对测定基本无干扰。
结论此法测定血清ASO线性范围宽,重复性好,准确性高,适用于全自动生化分析仪进行常规测定。
【总页数】2页(P91-92)【关键词】胶乳免疫透射比浊法;ASO;全自动生化分析仪【作者】蔡武全;赵翠霞;杨剑平【作者单位】陕西省森林工业职工医院【正文语种】中文【中图分类】R446.1【相关文献】1.胶乳免疫散射比浊法测定β2微球蛋白在全自动生化分析仪上的应用研究 [J], 常连刚;杜立水;宋衍秋;温丽娟;王春玲;曹凤芹;李和兰2.免疫透射比浊法在AU5800全自动生化分析仪检测降钙素原的方法学评价 [J], 戴婉如;周欢;林燕辉;伍严安3.全自动生化分析仪透射比浊法测免疫复合物的分析 [J], 浦春;程前玉;浦金合4.日立737型全自动生化分析仪透射比浊法测免疫复合物的分析 [J], 赵克斌;王萍5.用ABBOTT CCX自动生化分析仪免疫透射比浊法测定血清Ig和C_3 [J], 孙振荣;陈菁因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
胶乳增强免疫比浊法定量测定血浆中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的方法学评价及临床应用
胶乳增强免疫比浊法定量测定血浆中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的方法学评价及临床应用孙丽;牛国平【摘要】Objective To evaluate latex-enhanced immunoturbidimetric assay ( LEIA ) for the detection of plasma neutrophil gelatinase-associated lipocalin ( NGAL) and its clinical application .Methods LEIA was used to determine the concentration of plasma NGAL according to the Clinical and Laboratory Standards Institute ( CLSI ) standardization evaluation protocal.The imprecision, recovery rate, linear range, anti-interference and stability were assessed.The plasma NGAL levels of 86 patients with type 2 diabetes mellitus ( T2DM), including 41 patients with diabetic nephropathy( DN), and 40 healthy subjects ( healthy control group ) were determined.Results The within-run coefficients of variation(CV) for low and high levels of NGAL were 3.76%and 1.79%, respectively.The inter-day CV were 6.62%and 3.45%, respectively.The average recovery rate was 97.3%-104.6%.The linear range was from 0 to 5 000μg/L, and the deviation was <8%.Comparing with similar foreign kit ( particle-enhanced immunoturbidimetric assay), the correlation was high (R2 =0.996 6).The system biases of 200 μg/L and 700 μg/L were 3.66 μg/L and 11.79 μg/L, respectively.The results met the requirements of manufacturers .There was no significant interference on the determination of plasma NGAL with total bilirubin≤600 μmol/L, hemoglobin≤10 g/L, vitamin C≤0.6 g/L and triglyceride≤15 mmol/L.The reagent could be stable for 35 d in theinstrument under the condition of 2-8 ℃.The plasma levels of NGAL in healthy c ontrol group were all in manufacturers′reference range .The level of plasma NGAL had been gradually increasing in healthy control group , T2DM group and DN group with statistical significance( P<0.01).The plasma NGAL were positively correlated with serum cystatinC (Cys C) and creatinine (Cr) (correlation coefficients were 0.58 and 0.43, P<0.01).Conclusions The LEIA for plasma NGAL determination has high sensitivity and precision , which is fast and easy to operate , and can be used directly on the automatic biochemical analyzer .The results are accurate and reliable .It is suitable for the clinical application for mass determination .%目的：对胶乳增强免疫比浊法（LEIA）定量测定血浆中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）进行方法学评价并探讨其初步的临床应用。
乳胶增强免疫比浊法在PG1、PG2临床检测中的应用价值
【摘要】目的：探究乳胶增强免疫比浊法在pg1、pg2临床检测中的应用价值。
方法：选取2012年5月-2014年5月本院治疗的胃癌患者50例（胃癌组），同期根据病理学检查结果选择75例萎缩性胃炎患者（对照1组），50例消化性溃疡患者（对照2组），以及正常体检者50例（对照3组）。
应用乳胶增强免疫比浊法检测四组患者空腹血清pg1、pg2水平，并进行对比分析。
结果：对照3组的pg1、pg2含量与其他三组比较差异均有统计学意义（p 【关键词】乳胶增强免疫比浊法；胃癌；应用价值；临床检测value of latex-enhanced immunoturbidimetry in the clinical detection of pg1，pg2/xue liang.//medical innovation of china，2016，13（17）：051-054 first-author’s address：nanxiong city people’s hospital，nanxiong 512400，chinadoi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.17.0141 资料与方法1.1 一般资料选取2012年5月-2014年5月本院治疗的胃癌患者50例（胃癌组），同期根据病理学检查结果选择75例萎缩性胃炎患者（对照1组），50例消化性溃疡患者（对照2组），所有患者均经胃镜检查，并经病理组织学确诊，符合消化病学分会制定的《中国慢性胃炎共识意见》的标准。
排除血液溶血或血液中胆红素增高者，排除纳入本研究前1周内有特殊用药史者。
其中对照1组患者男28例，女22例；年龄39～78岁，平均（45.5±8.1）岁；对照2组男27例，女23例；年龄41～78岁，平均（46.5±8.2）岁；胃癌组男29例，女21例；年龄42～79岁，平均（46.8±8.3）岁；同期选择50例健康体检者设为对照3组，其中男26例，女24例；年龄40～79岁，平均（45.9±8.9）岁。
免疫自动化仪器分析及应用
自动化免疫分析仪的结构特点
主机部分
计算机部分
信
信
稀 释
样发 品射
信 号
加 样
处光 理源 系系
检 测 系
清 统统 统
洗
息
息
处
储
理
存
及
分
数
析
字
报
转
告
结 果 报 告
换
系
统Hale Waihona Puke 第一节 免疫浊度测定的自动化分析
免疫浊度分析属于液相沉淀试验，基本原理是：抗原、抗体在 特定的电解质溶液中反应，形成小分子免疫复合物（<19S），在 增浊剂（如PEG、NaF等）的作用下，迅速形成免疫复合物微粒 （>19S），使反应液出现浊度。在抗体稍微过量且固定的情况下， 形成的免疫复合物量随抗原量的增加而增加，反应液的浊度亦随 之增大，即待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。
一、时间分辨荧光免疫分析仪
时间分辨荧光免疫测定（time resolved fluorescence immunoassay, TRFIA）是以镧系元素标记抗原或抗体作 为示踪物，并与时间分辨测定技术相结合，建立起来的一 种新型非放射性微量分析技术，具有灵敏度高，镧系元素 发光稳定，荧光寿命长，不受样品自然荧光干扰，标准曲 线范围宽等特点，已在临床实验室广泛使用。
• 技术要点 – 抗原抗体反应 – 信号检测，结果计算
• 抗原过量检测 – 标准抗原，第二速率峰
IMMAGE800全自动特定蛋白分析仪
方法评价
散射比浊试验是目前临床应用较多的一种方法，本法 自动化程度高，具有快速、灵敏、准确、精密等优点。采 用抗原过量检测方法，保证了结果的准确性。但仪器和试 剂价格比较贵, 对抗体的质量要求很高。
自动化分析-(免疫比浊)
自动化免疫比浊
➢免疫比浊分析技术发展
两测定Biblioteka 原抗体形成后的阶段 个 测定抗原抗体结合的峰值
散射(终点)比浊
阶
段
速率散射比浊
散射比浊法:
当一束光
在光源的光路方向（50-960）
免 疫 比 浊
线通过溶 液受到光 散射和光 吸收两个
角的方向上测量透射光强度 和被检测溶液中微粒浓度关 系的方法。
法
因素的影
➢对抗原过量进行阈值限定 先测定预反应时段抗原-抗体复合物的散射光信 号，若未超过阈值，可进行全量样本测定。若超 过阈值，提示样品浓度过高，需稀释后测定。
三、速率散射比浊分析
三、速率散射比浊分析 （一）基本原理
— 是测定抗原抗体结合反应的动态过程。
— 所谓速率，是在单位时间内抗原抗体结合形成 复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的 速率及测定的散射信号连接在一起，即是动态 的速率比浊分析。
平光线
散射光θ
透射光
检测器 检测器
光源 透镜 滤光片
散射比浊、透射比浊光路图
实验要求（了解）
❖ 溶液中形成的复合物分子应足够大(35-100nm) ❖ 溶液中形成的复合物分子要足够多 ❖ 控制抗原抗体反应的温度和时间 ❖ 加促凝剂，提高复合物形成速度，缩短检测时间 ❖ 应选择亲和力好、效价高的抗体，保证抗体过量 ❖ 将标准品稀释至少5个浓度测定，以吸光度值(A)
Rayleigh原理：即散射光的强度与复合物的量 呈正比，与散射光的夹角呈正比，与波长呈反 比。
在散射比浊中，增加抗原-抗体复合物的体积， 减小入射光的波长，扩大散射光夹角等因素， 均可增加检测的敏感度。
（二）反应物含量与散射浊度
Heidelberger曲线
胶乳增强免疫比浊法测定血清脂蛋白(a)试剂的临床应用评价
胶乳增强免疫比浊法测定血清脂蛋白（a）试剂的临床应用评价摘要】目的评价胶乳增强免疫比浊法脂蛋白（a）试剂的性能。
方法按NCCLS有关评价方案对试剂的精密度、线性范围、准确度（回收率）、比对实验三项主要性能指标进行系统评估。
结果该试剂的低、中、高值样本天内精密度（用CV天内值表示）分别为3.55、2.13%和1.36%，天间精密度（用CV天间值表示）分别为5.29、4.33%和2.86%；试剂在31～1284mg/L范围内线性良好；与进口试剂相比，相关系数r2=0.9905，相关方程为Y=0.9375X+10.23，测定结果呈显著相关（P<0.05）。
结论该试剂完全符合临床应用要求，建议推广使用。
【关键词】脂蛋白（a）临床应用评价【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）09-0376-01研究表明，脂蛋白（a）是公认的致动脉粥样硬化的独立危险因素，其发病机制还有待深入研究[1]。
而根据刘怀平等[2]报导，冠心病、急性心肌梗死、脑梗死、高血压、糖尿病肾病、急性感染、肝硬化、肾衰竭、原发性肾病综等患者血清Lp （a）均明显高于正常人血清水平。
因而，Lp（a）的测定具有广泛的临床意义。
目前最为常用测定Lp（a）的方法为胶乳增强免疫比浊法，本文结合国内应用较广的浙江伊利康公司生产的Lp（a）测定试剂盒进行了主要的指标评价和探讨。
现将结果报告如下：1 材料与方法1.1 样本我院住院和门诊病人当天空腹血清标本。
1.2 试剂和仪器 Lp（a）测定试剂盒由浙江伊利康公司生产，批号：111209；比对试剂为英国朗道公司生产，仪器为日立7080全自动生化分析仪。
1.3 方法均按试剂盒生产厂商提供测定参数、测定方法进行。
2 实验结果2.1 精密度按NCCLS[3] 评价方案，取低、中、高三个不同浓度的样本，连续测20次，再每天测2次，共测20天，结果见表1。
表1 天内和天间精密度测定结果（单位：mg/L ，n=20）2.2 回收试验取一份新鲜混合人血清，测定Lp（a）的浓度为265mg/L，将其分成6份，每管0.9m1，分别加入浓度为136 mg/L、489 mg/L、834mg/L的高、中、低血清0.1ml，混合后Lp（a）浓度分别为252 mg/L、287mg/L、322mg/L共3个浓度的样品，共测定5次，计算回收率分别为102.7%、101.5%、99.2%，平均为101.1%。
自动生化分析仪自动识别免疫比浊分析中的钩状效应
自动生化分析仪自动识别免疫比浊分析中的钩状效应【提要】目的探讨全自动生化分析仪上识别钩状效应的方法.方法以IgG为检测对象，在HITACHI-7170A型全自动生化分析仪上，抗原抗体反应10 分钟，利用定时监测-时间反应进程曲线，分析其变化特征，选择钩状效应的识别参数 .结果以反应时间(读点)20点的反应完成率(ABS20/ABS34)>0.9 0为限额参数，可自动识别钩状效应.结论?免疫比浊测定分析中的钩状效应，可通过正确的参数设置自动识别.时间反应进程曲线是识别钩状效应的基础，反应率是识别钩状效应的有效方法.【关键词】免疫比浊法钩状效应抗原抗体［中图分类号］R 392-33 ［文献标识码］ A ［文章编号］1008-634X(2000)04-0252-03Automatic Check Method of Hook Effect in the Immunoassay with AutomaticClinical Chemistry AnalysisLIU Zhong-min GAO Yue-ting CHEN Tao（Department of Laboratory,First Affiliated Hospital of Guangzhou MedicalCollege ,Guangzhou 510120 China）【Abstract】Objective To obtain automatic checck method of hook effec t in the turbibimetric immunoassay with automatic clinical chemistry analysis.Methods With model 7170A automatic clinical chemistry analyzer，the method and value of automatic check o f hook effect was obtained by assaying absorbance of immune complexes produced by which IgG of different concentratoin reacted with antibody for 10 minutes and t raced the relationship between the quantity of antigen and absorbance,and by an alyz ing charactreistics of reaction monitor curve of immunofraction and tracing the relationship between the quantity of antigen and hook efect,and by calculating c heck value of the hook effect.Results The hook effect could be detected by aut omatic clinical analyzer if value,reaction rateof the 20th measurement point(AB S20/ABS34),was lower than 0.9.Conclusions The check of ho ok effect in immunoreaction were performed by setting correctly limited value.R eaction monitor curve of immunoreaction was the basis of check of hook ef fect.T he comparison of reaction was a kind of effective method of the check of hoo k effect.【Key Words】Immunoassay; Turbibimetric; Hook effect; Ant igen; Amtibody免疫测定是利用抗原抗体反应检测标本中微量物质的方法.基于抗原抗体反应的敏感性和特异性，免疫测定的范围遍及医学检验的各个领域.任何物质只要能获得相应的特异性抗体，即可用免疫测定进行检测.抗原抗体反应是按一定的分子比例结合，当二者比例适中时，形成的免疫反应最强烈；当抗原或抗体过量时，免疫反应都将减弱［1］. 因此，。
胶乳免疫比浊法测定血清铁蛋白的方法学评价
５ ． ０ ％． ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｅ ｃ ｉ ｓ ｉ ｏ ｎ ｗａ ｓ ｇ ｏ ｏ ｄ ． Ｆ Ｅ Ｒ ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗａ ｓ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｎ ｇ ｅ ｏ ｆ ２ ５ ￣ ５ ０ ０ ｎ ｇ ／ ｍＬ． ｎｄ ａ ｔ ｈ ｅ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｌ ｉ ｎ ｅ ａ ｒ ｗａ ｓ ｇ ｏ ｏ ｄ ． Ｃｏ ｍｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ｅ ｘ ｐ ｅ ｉ ｒ ｍｅ ｎ ｔ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｈ ｉ ｐ ｏ ｆ Ｆ ＥＲ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ｅ ｄ ｂ ｙ ｔ ｗｏ ｍａ ｎ ｕ ｆ ａ ｃ ｔ ｕ ｒ ｅ ｒ ｓ ’ ｋ ｉ ｔ ｓ ｗｅ ｒ ｅ
著・
胶乳免疫 比浊法测定血清铁蛋 白的方法学评价
赵锐 ， 戴雯， 徐万州， 梅四清， 崔艳 ， 姜树朋 ， 李艳 （ 武汉 大 学人 民 医院检 验 医学 中心 ， 湖 北 武汉 ４ ３ ０ ０ ６ ０ ）
【 摘要】 目的 对胶乳免疫 比浊法定量测定 血清铁蛋 白（ Ｆ Ｅ Ｒ ） 进行方法学评 价。方法 参 照美国临床 实验 室
标准化协会 （ Ｃ Ｌ Ｓ Ｉ ） 推荐 的评价方法 ， 对 胶乳免疫 比浊测定血清 Ｆ Ｅ Ｒ的精密度 、 回收实验 、 线性范 围等进 行评价 。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
13
免疫胶乳浊度分析
（immunolatex turbidimetry）
比浊法中，少量的小的抗原抗体复合物极难形成 浊度，除非放置较长时间；如形成较大的复合物 ，则抗原和抗体用量也较大，显然不符合微量化 的要求。
➢ 与采用惰性纳米微球的传统技术相比，检测的灵敏度 得到了极大的改善，最高可达到1.0ng/ml。
19
免疫胶乳浊度分析
（immunolatex turbidimetry）
（1）操作简单，可在几分钟内快速、准确地检测血清 蛋白含量，真实反映病情进展和评估治疗效果，对 于疾病的早期诊断和治疗具有重要的临床意义；
个或两个以上胶乳颗粒凝聚时则使透过光减少。 c) 免疫微球凝聚的程度为被测物浓度的函数，由此可测
出标本中待测物的含量。
15
(a)带抗体的胶乳在1个波长之内可透过光线 (b)结合后，则形成光线衰减
16
免疫胶乳浊度分析
（immunolatex turbidimetry）
该技术的关键在于两个方面： 首先是选择适用的胶乳，其大小（直径）要稍小于
波长。用500nm波长者，选择100nm颗粒较适合；用 585nm波长者，则选用100～200nm颗粒为好。目前多 用200nm的胶乳颗粒。 其次，胶乳与抗体结合时用化学交联虽好，但失活 也较严重；一般用吸附法即可。
17
免疫胶乳浊度分析
（immunolatex turbidimetry）
18
免疫胶乳浊度分析
最早应用的免疫沉淀反应是Ouchterlony在1948年建立 的琼脂双向扩散法。
1965年Mancini等和Fahey等分别建立了可以定量的单 向（辐射状）免疫扩散技术。
Laurell等1966年建立了电免疫扩散法，使报告结果的 时间由单向免疫扩散法的≥24h缩短到4-5h。
4
免疫比浊
经典的免疫沉淀试验通常是在抗原与相应抗体反应的 终点判定结果，存在费时、操作繁琐、敏感度低（10 ～100mg/L）、不能自动化等缺陷。
6
散射比浊、透射比浊 光路图
平光线 IC
光 射 散
θ
NEPHELOMETRIC DETECTOR
透射光+散射光
LIGHT SOURCE
FILTER
REACTION CUVETTE
TURBIDIMETRIC DETECTOR
8
透射还是散射
目前，国内开展的各项免疫检验，均求使用国家食 品药品监督管理局（SFDA）准入和批准的仪器和试 剂。这样做不仅能使各项检查更加统一，规范，各 实验室之间检查结果更具可比性，而且也可避免很 多不必要的医疗纠纷。
（immunolatex turbidimetry）
胶乳颗粒多为惰性微球和羧基化微球
氨基化高分子纳米微球
➢ 氨基化纳米微球的颗粒大小较传统的微球更小（约 0.1μm），它与抗体的结合是通过其表面的氨基与抗 体的氨基端共价结合，在微球与抗体之间有一个桥联 化学臂，降低了位阻效应，不仅提高了抗体的结合率 ，而且还为抗体提供合适的三维空间立体结构，有效 地保护了抗体与抗原结合的活性区域。
（2）不易受人为操作和外界因素干扰，检测稳定性和 重复性都很好；
免疫胶乳浊度分析 在自动生化分析仪上的应用
免疫比浊回顾 免疫胶乳浊度分析（immunolatex turbidimetry） 在生化分析仪上进行测定的有抗体间的特异性反应
手工操作 核心—基础 自动化分析
3
免疫比浊
免疫比浊技术是在免疫沉淀反应（Precipitation）检测 法的基础上建立的。
根据沉淀反应时，抗原抗体结合后可使反应系统透光 度发生改变，建立了以测定透光度为特征的微量免疫 沉淀测定法法，既免疫浊度测定技术。
5
免疫比浊
1967年由Richie首次报告，20世纪70年代逐步完善， 80年代初期初步应用临床常规检查。
抗原抗体在液相（特殊的缓冲液）中快速结合，形成 抗原抗体复合物，反应液出现浊度。
免疫化学是免疫学技术和生物化学技术的结合。既具 有免疫学抗原抗体结合的特异性，又具有生物化学反 应动力学特点。
11
透射免疫比浊
可溶性抗原与其特异性抗体，在一定缓冲液中形成的 复合物，经一段时间聚合后出现浊度，人射光在渗过 反应液时，由于溶液内IC粒子对光线的反射和吸收， 引起透射光减少，可用吸光度A表示。
用已知浓度的标准参考品建立标准曲线，测出待测抗 原的含量。
透射比浊法主要用于生化分析仪。
12
透射免疫比浊
免疫复合物直径为35～lOOnm，这一范围要求近紫外光处 入射光发出最大的干扰(最大吸收峰)，选择290～410nm 波长测定最佳。
由于抗原抗体结合后在短时间内(<19s)只能形成小复合 物，无法进行比浊，需要等几分钟到数小时(>19s)形成 可见的复合物，才能进行比浊。
a) 速率法和终点法测定； b) 速率法的灵敏度和特异性优于终点法；终点法
的稳定性较好；
10
透射还是散射
目前，由于技术的发展，两种比浊法的灵敏度和特异 性已接近，而全自动生化仪的自动化程度和精密度要 胜于专用散射比浊仪，透射免疫比浊法在临床上的应 用日益广泛。生化分析仪通过免疫比浊法技术，架起 了现代生化检验和现代免疫技术的桥梁。
免疫比浊技术中散射比浊法目前均用获国家食品药 品监督管理局（SFDA）批准进口的自动化分析仪器 和配套的各种检测项目的专用试剂。
透射比浊法（生化分析仪）可用国产试剂。
——全国临床检验操作规程 第3版
9
透射还是散射
散射比浊
专用仪器 专用配套试剂 原装进口试剂昂贵
透射比浊
生化分析仪 开放试剂 （可用国产试剂）
为解决快速反应及微量化的要求，建立了免疫胶 乳浊度法（immunolatex turbidimetry）。
14
免疫胶乳浊度分析
（immunolatex turbidimetry）
其基本原理是： a) 将特异性抗体吸附在大小适中、均匀一致的胶乳颗粒
上，当遇到相应抗原时，则使胶乳颗粒发生凝集。 b) 单个胶乳颗粒在入射光波之内，不阻碍光线透过；两