第十一章 动物细胞与组织培养的基础PPT课件

原代培养(primary culture)
将机体取出的细胞或组织进行实 效（立即）培养的过程，又称初培养。 初培养的细胞大约增殖10代左右，这 样的细胞称为原代细胞。
传代培养(passage culture)
指从原代培养的细胞继续转接培 养，又称继代培养。
二、发展历史
开始：1907，Harrison用蝌蚪的髓管放于一 滴淋巴液内，培养出神经元
培养板， 冻存管
超净工作台
纯化水装置
天平 真空泵
培养器皿
金属器材
辅助器材
• 加样器 • 支架 • 离心管 • 冷冻管
滤器
CO2培养箱
CO2培养箱设定的条件为37 ℃ ，5％ CO2 。 使用CO2培养箱培养细胞时应注意的 问题：
①用螺旋口瓶培养细胞时，需将 瓶盖微松，以保证通气。
培养细胞一代生长过程
–1）游离期 –2）指数生长
期 –3）稳定期 –4）衰退期
5、原代培养与传代培养技术
•贴壁细胞原代培养：从新鲜供体取得 组织细胞后在体外进行首次培养，一般 持续1－4周。 将分离所得的细胞沉淀， 按实验要求，用培养液配制成需要浓度 的细胞悬液，接种培养瓶内，水平放置， 37度，进行培养，1—2天换液一次，大 部可见细胞贴壁生长。
三、动物细胞的体外培养生长特性
• 根据形态特征分类
• 贴壁型
• 上皮细胞型、 • 成纤维细胞型、 • 游走细胞型、 • 多形细胞形。
• 悬浮型
• 悬浮在溶液中
细胞贴壁过程
接触抑制
定义：细胞从 接种到长满底 物表面后，由 于细胞繁殖数 量增多相互接 触后，不再增 加。
四、动物细胞、组织培养的基本技术
酚红在培养基中被用来作为PH值的指 示剂：中性时为红色，酸性时为黄色， 碱性时为紫色。
（3）气体：O2及CO2用以保证细胞体内代谢 活动的进行 。
当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7 g时， 细胞培养时应使用10%CO2；当培养基中 NaHCO3为每公升1.5 g 时，则应使用5%CO2 培养细胞。
优点
• ⑴理化环境可控制。 • ⑵细胞经培养后形成的细胞系和细胞株，特征均一。 • ⑶培养物可直接被观测。 • ⑷提供大量均一的细胞供制备用。 • ⑸便于进行人工筛选。 • ⑹结合电影技术，可观察细胞代谢活动和反应。 • 广泛应用于病毒学，免疫学，遗传学，肿瘤学，分化
及发育，细胞毒理试验，生物技术等各个领域。
1、体外培养的特点： （1）营养要求高； （2）适应培养环境性差； （3）生长缓慢； （4）无菌条件要求严格；
2、培养工具
超净工作台，压力蒸汽消毒器，电热 干燥箱，滤器，酸缸
CO2培养箱 倒置显微镜 酶标仪、微孔板震荡器 液氮罐 自动双重纯水蒸馏器，纯水仪 耗材：培养瓶，吸管，电动吸引器，
天然培养基的种类主要包括生物性 体液（如血清）、组织浸出液（如胚 胎浸出液）、凝固剂（如血浆）、水 解乳蛋白、胶原等。
②合成培养基
合成培养基是根据天然培养基的成分， 用化学物质对细胞体内生存环境中已知物 质在体外人工条件的模拟，经过反复试验 筛选、强化和重新组合后形成的培养基。
合成培养基的优点是既能给细胞提供一 个近似于体内的生存环境，又便于控制和 提供标准化体外生存环境，且成本低。但 是，人工合成培养基缺少某些成分，不能 完全满足体外细胞生长需要，只能维持细 胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补 充一定量的天然培养基。
b. 培养基PH调整液消化液：胰蛋白酶、二乙烯 四乙酸二钠（EDTA）及胶原酶溶液
d. 抗生素溶液：青霉素、链霉 素、卡那霉素、制霉菌素等。
※双抗（青、链霉素）：终浓度 为：青霉素为100单位/毫升培养液， 链霉素为100微克/毫升培养液。
4、体外培养细胞的生长与增殖过 程
③无血清培养基
无血清培养基不加动物血清，在 已知细胞所需营养物质和贴壁因子 基础上，在基础培养基（MEM）中加 入适宜的促细胞生长因子，保证细 胞的良好生长。
无血清培养基由基础培养基和替 代血清的补充成分组成。
④动物细胞培养必需的溶液
a. 平衡盐水（BSS）：由生理盐水和 葡萄糖制成。Hanks液（HBS）和Earle 液（EBS）是两种常用的BSS基础溶液。
②保持培养箱内空气干净。定期 消毒（90 ℃ ，14 h)。
③箱内灭菌蒸馏水3000毫升蒸馏水槽 中以保持箱内湿度，避兔培养液蒸发。
酶标仪
微孔板震荡器
培养板
培养瓶
3、培养条件
（1）温度：最适温度为37℃。细胞对低 温的耐受性要比对高温的耐受性强。高 温对细胞的威胁很大。
（2）PH：最适PH为7.2-7.4之间。但是， 多数类型的细胞对偏酸性的耐受性强于 偏碱性。
（4）营养：动物细胞培养对营养的要求较 高，往往需要多种氨基酸、维生素、辅酶、 核酸、嘌呤、嘧啶、激素和生长因子，其 中很多成分系用血清、胚胎浸出液等提供， 在很多情况下还需加入5%～10%的胎牛或小 牛血清。
①天然培养基
其优点是营养成分丰富、培养效果 好；缺点是成分复杂，影响对某些实 验产物的提取和实验结果的分析。个 体差异大、来源有限，还容易发生支 原体污染。
成熟：以人的肿瘤组织为材料建立的各种 细胞系，如Hela细胞系。
研究内容：细胞内代谢活动，外界对其影 响，细胞间互相作用等。
细胞系（cell line） 初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即 称之为细胞系。由原代培养产生的能进行无限 次传代培养的细胞群即成无限细胞系。此时细 胞发生了遗传突变，染色体呈亚二倍体或非整 倍体，失去接触抑制特性。 细胞株（cell strain） 从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离 培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的 细胞群，称细胞株。再由原细胞株进一步分离 培养出与原株性状不同的细胞群，亦可称之为 亚株（Substrain）
第十一章 动物细胞与组织培养 的基础
目的：1、掌握动物细胞、组织、器官 培养的相关概念；2、掌握动物细胞体 外培养的特性；3、掌握动物细胞体外 培养的方法；
重点：细胞培养的方法
一、动物细胞与组织培养的定义
动物细胞与组织培养是从动物 体内取出细胞或组织，模拟体内的 生理环境，在无菌、适温和丰富的 营养条件下，使离体细胞或组织生 存、生长并维持结构和功能的一门 技术。