免疫细胞的分离与检测解析
免疫学实验方法
免疫学实验方法免疫学实验方法是免疫学研究的重要部分，它通过一系列的技术手段来识别、分析免疫系统中的各种生物分子、细胞和组织，以及它们之间的相互作用。
这些方法在免疫学领域广泛应用于疾病诊断、药物研发、疫苗研究等方面，对促进免疫学的发展和应用发挥了重要作用。
下面将介绍一些常用的免疫学实验方法。
一、ELISA法ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种用于检测抗体或抗原的免疫学实验方法。
该方法通过将待测抗体或抗原与固相物质结合，再加入酶标记的二抗来进行标记，最后通过酶底物的底物变色反应或荧光底物的发光反应来检测待测抗体或抗原的存在量。
二、流式细胞仪流式细胞仪是一种用于分析和计数悬浮细胞的仪器，它利用激光照射细胞，通过细胞膜上的特异性抗体标记来检测细胞的表面标记物和内部细胞器的性质和分布，对免疫细胞的表型和功能进行高效的分析。
三、免疫印迹法免疫印迹法是一种用于检测蛋白质的免疫学实验方法，通过电泳将待测蛋白分离，再将其转移到膜上，最后使用特异性抗体和标记的二抗来检测待测蛋白的存在量和大小。
四、免疫组化法免疫组化法是一种用于检测组织中特定蛋白的免疫学实验方法，通过将组织切片后进行脱水、脱脂和脱水处理，再使用特异性的抗体来标记待测蛋白，并观察标记物的颜色变化或发光情况来确定蛋白的位置和表达量。
五、免疫沉淀法免疫沉淀法是一种用于检测蛋白相互作用的免疫学实验方法，通过将待测抗体与蛋白结合，再使用蛋白A/G琼脂糖或磁珠等材料将蛋白抗原免疫沉淀下来，最后使用核酸酶或质谱技术来分析蛋白的互作关系。
以上介绍的是一些常用的免疫学实验方法，它们在免疫学研究中起着举足轻重的作用，不仅在科研领域有重要应用，同时在临床诊断和治疗中也有着广泛的运用。
希望以上内容能够对您有所帮助。
分离cd8t细胞基本流程
分离cd8t细胞基本流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!分离CD8T细胞是一种常见的实验操作，用于研究这些细胞在免疫应答中的功能。
免疫学实验
免疫学实验免疫学实验是一项非常重要的研究领域，它涉及到研究人体免疫系统的机制和功能，并通过实验手段来深入了解和探索免疫系统对疾病的防御和治疗作用。
在本文中，我们将介绍免疫学实验的一些基本概念和常见的实验方法，以及它们在研究和治疗免疫相关疾病中的应用。
首先，我们来了解一下免疫学实验中常用的一些基本概念。
免疫学实验主要涉及到免疫细胞、抗体和抗原的相互作用。
免疫细胞是人体免疫系统的重要组成部分，包括巨噬细胞、淋巴细胞等。
抗体是由免疫细胞产生的一种特殊蛋白质，它可以识别和结合到体内外入侵的病原体，激活免疫系统进行防御。
而抗原则是一种能够引起免疫系统反应的物质，可以是细菌、病毒、真菌等。
在免疫学实验中，常见的实验方法包括免疫组化、流式细胞术、ELISA等。
免疫组化是一种用于检测组织或细胞中某一种特定蛋白质的方法，它可以通过使用特异性抗体来标记和检测目标蛋白质的位置和表达水平。
流式细胞术则是一种通过流式细胞仪进行细胞表面标记和分析的方法，它可以对不同类型的免疫细胞进行鉴定和分类。
ELISA是一种用于检测和分析抗体和抗原相互作用的方法，它基于酶标记免疫吸附技术，可以测定目标物质的浓度和活性水平。
除了这些基本方法，免疫学实验还可以进一步应用于研究和治疗免疫相关疾病。
免疫学实验可以帮助我们深入了解免疫系统在疾病中的作用机制，例如自身免疫疾病、感染性疾病等。
通过实验手段，我们可以研究免疫细胞的活性和功能，并探索潜在的治疗策略。
例如，在免疫细胞治疗中，我们可以通过实验手段提取、修饰和培养免疫细胞，并将其用于治疗癌症、自身免疫疾病等疾病。
此外，免疫学实验还有助于研发和评估新型的免疫药物和疫苗。
通过实验方法，我们可以研究药物在免疫系统中的作用机制和疗效，并评估其用于治疗疾病的潜力。
免疫学实验在疫苗研发中也发挥着重要的作用，通过评估免疫细胞对疫苗的反应和效果，我们可以确定疫苗的安全性和有效性。
总结起来，免疫学实验是一项非常重要且广泛应用的研究领域。
单细胞测序技术流程及其应用
单细胞测序技术流程及其应用随着生物学的快速发展，越来越多的生物问题需要从单个细胞的角度进行研究。
与传统的群体测序技术不同，单细胞测序技术可以单独测序某个特定细胞类型或特定状态的单个细胞，从而获取单个细胞的基因组学、转录组学和表观组学信息。
因此，单细胞测序技术在生物学研究，尤其是癌症、免疫、神经生物学等领域，具有广阔的应用前景。
1.单细胞分离单细胞测序技术首要的步骤是将单个细胞从样品中分离出来，以确保测序结果的准确性。
目前单细胞分离主要有三种方式：流式细胞术、显微取样和微流体技术。
2. lysis单细胞完整细胞膜和核壳的破裂是一个至关重要的步骤。
这个步骤不仅需要高效的细胞裂解剂和可靠的组织破碎器，还需要低浓度的尿素和二硫化物来溶解蛋白质。
3. cDNA合成和放大RNA在细胞裂解后被逆转录成cDNA。
核酸的放大可以用以下两种方法中的一种：扩增polymerase链反应（PCR）或通过非对称PCR。
4. cDNA质量检测cDNA质量检测包括定量和质量的评估。
目前采用的定量方法有比色法、荧光法和电泳法。
cDNA的质量可以通过DNA片段大小、比率，RNA质量和完整性及最终的放大情况来评估。
cDNA的测序可以有两种方法：成对的末端测序和单端测序。
常用的末端测序包括Illumina Hiseq平台和Ion Torrent Platforms的单细胞测序。
6. 数据分析数据分析包括以下四种类型：拆除在每个序列文件中，需要通过限制ATCG序列中的最小数字来删除悬空线。
这可以被认为是序列的重复或者测序错误或低质量读取。
定量上游分析可以将独一无二的序列与参考基因组或转录组序列进行比对。
拆除了低质量的序列后，可以将读取与参考序列比对来量化基因的表达。
簇合这是将单个读取组合在一起以检测不同且相似的基因表达。
聚类算法生成i个簇（每个簇代表一个单独的细胞）和每个簇的成员。
测序量化通过选择一个点和一个所有可能点的距离范围，测序量化是比较不同细胞之间的相似性。
pdc细胞流式指标 -回复
pdc细胞流式指标-回复PDC细胞（Plasmacytoid Dendritic Cells）是一种特殊的免疫细胞，分布在人体多个组织和器官中，主要负责抗病毒免疫应答。
在流式细胞术中，我们可以利用一系列指标来鉴定和分析PDC细胞，从而深入了解其功能和参与免疫调控的机制。
本文将一步一步解析PDC细胞流式指标，帮助读者了解这一重要免疫细胞群体。
首先，我们需要分离单个细胞，使其在流式细胞仪中能够被准确检测。
我们可以采取组织切片或体液，如血液或骨髓的方法来获得细胞样本。
在血液样本中，PDC细胞的典型标记物是CD123，该标记物在流式细胞仪中被使用。
接下来，我们需要对细胞样本进行预处理以获得单个细胞。
一种常用的方法是使用红细胞溶解缓冲液将红细胞溶解掉，使得其他受到红细胞污染的细胞得以被检测。
然后，我们需要对细胞进行表面标记，以帮助鉴定和分析PDC细胞。
PDC细胞的典型表面标记物包括CD123、CD303和CD304。
其中，CD123是最常用的PDC细胞标记物，可以帮助我们快速鉴定出PDC 细胞。
然后，我们还需要进一步进行细胞测定，以确定细胞的功能和免疫状态。
两个重要的测定是细胞活性和细胞类型鉴定。
细胞活性的测定通常使用细胞增殖标记物，如CFSE（Carboxyfluorescein diacetate succinimidylester）来测量。
细胞类型鉴定则使用针对特定细胞亚群的标记物。
在PDC 细胞中，常用于类型鉴定的标记物包括BCDA2和BDCA4。
这些鉴定方法可以帮助我们确定PDC细胞的功能和免疫特性。
最后，我们需要对得到的数据进行分析和解读。
在流式细胞仪中，我们可以通过分析细胞表面标记物的相对表达量，确定PDC细胞的比例和活性。
同时，我们还可以通过分析细胞内标记物的表达水平，了解PDC细胞的功能和免疫状态。
这些数据分析可以帮助我们深入了解PDC细胞在免疫应答中的作用和机制。
综上所述，PDC细胞是一类重要的免疫细胞，参与抗病毒免疫应答。
临床医学检验技师考试辅导临床免疫学和免疫检验 第十四章 免疫细胞的分离及其表面标志检测技术练习题
第十四章免疫细胞的分离及其表面标志检测技术一、A11、已知细胞中的黏附能力最大的为A、树突状细胞B、单核细胞C、B细胞D、T细胞E、红细胞2、免疫细胞检测技术中外周血单个核细胞指的是A、有核细胞B、淋巴细胞C、单核细胞D、淋巴细胞和单核细胞E、幼稚细胞3、下列关于T细胞亚群的分离，说法错误的是A、原理是根据相应细胞的不同标志加以选择性纯化B、凡根据细胞的表面标志进行纯化得到所需要的细胞群是阳性选择法C、选择去除不需要的细胞群，仅留下所需要的细胞为阴性选择法D、E花环沉降法是最先进的细胞分选技术E、尼龙毛柱分离法是常用的分离方法4、下列有关转化的淋巴细胞的形态描述中，错误的是A、细胞变大B、出现空泡C、核仁消失D、染色质疏松E、胞质扩大5、检测T细胞数量的试验是A、溶血空斑试验B、SmIg荧光抗体染色试验C、巨噬细胞或白细胞移动抑制试验D、E玫瑰花环试验E、计算盘直接计数6、溶血空斑形成试验中，空斑的大小表示A、抗体生成细胞的多少B、抗体生成细胞的种类C、细胞的大小D、抗体生成细胞产生抗体的多少E、吞噬细胞的活性7、做自然杀伤细胞毒试验，敏感而常用的是哪种细胞株A、小鼠T细胞肿瘤细胞株B、人肺癌细胞C、K562细胞系D、小鼠细胞毒T细胞系E、L929细胞株8、具有抗肿瘤效应的第一道防线是A、TC细胞B、中性粒细胞C、TH细胞D、B细胞E、NK细胞9、下列不属于自然杀伤（NK）细胞检测方法的是A、酶释法和放射性核素法B、酶释法和荧光分析法C、放射性核素法和荧光分析法D、放射性核素法和荧光分析法和酶释法E、反向溶血空斑实验和酶释法10、可刺激B淋巴细胞增殖转化的刺激物是A、PWMB、PHAC、ConAD、MHCE、BCG11、用于临床评价病人免疫状况的试验中，评价T细胞功能的试验是A、血清免疫球蛋白检测B、溶血空斑试验C、淋巴细胞转化试验D、膜表面Ig测定E、EA花环试验12、关于单个核细胞说法错误的是A、单个核细胞包括淋巴细胞、单核细胞B、单个核细胞的体积、形态、比重与其他细胞不同C、可利用单个核细胞的体积不同，按照密度梯度来分离D、在进行密度梯度分离时，单个核细胞比重比溶液的比重大E、多核粒细胞比重比单个核细胞比重大13、采用密度梯度分离法分离得到的细胞主要为A、单核细胞和粒细胞B、单核细胞C、淋巴细胞D、淋巴细胞和单核细胞E、淋巴细胞和粒细胞14、利用E花环沉降法可分离A、单核细胞和B细胞B、浆细胞和粒细胞C、B细胞和T细胞D、B细胞和粒细胞E、B细胞和吞噬细胞15、对分离细胞的保存说法错误的是A、用适量的10%～20%小牛血清的Hanks等培养液重悬B、以二甲亚砜作为保护剂C、短期保存中，放4℃保存D、短期保存中，迅速改变细胞所处的温度，以免造成温度休克E、长期保存中，放在液氮中，-196℃16、从单个核细胞悬液中分离出单核细胞的方法不包括A、E花环沉降法B、贴壁黏附法C、吸附柱过滤法D、磁铁吸引法E、Percoll分离液法17、下列关于淋巴细胞分离的说法错误的是A、进行细胞免疫的检测，一般须将待检淋巴细胞从血液中或组织中分离出来B、外周血细胞单个核细胞包括淋巴细胞、粒细胞和红细胞C、利用外周血的细胞的理化特性的差异可以分离不同的细胞群体D、淋巴细胞的理化特性与其他细胞差异很小，用简单的方法不易分离纯化E、淋巴细胞的分离利用专门的淋巴细胞分离纯化技术18、细胞活力测定常用的简便方法是A、伊红染色B、美蓝染色C、台盼蓝染色D、抗酸染色E、HE染色19、LPS可激发哪种细胞转化A、B细胞B、T细胞C、自然杀伤（NK）细胞D、杀伤细胞E、巨噬细胞20、可刺激T细胞增殖的刺激物是A、ConAB、MHCC、SPAD、AFPE、LPS21、自然杀伤（NK）细胞具有A、对TI抗原应答效应B、ADCCC、对TD抗原应答D、主要分泌细胞因子作用E、特异杀伤肿瘤细胞作用22、属于非抗原刺激物的物质是A、SRBCB、BCGC、LPSD、类毒素E、抗毒素血清23、关于溶血空斑试验的叙述错误的是A、1个空斑代表1个抗体生成细胞B、需要绵羊红细胞和补体参与C、空斑大小代表抗体产生的多少D、是可检测B淋巴细胞功能的一种体外试验方法E、只可检测IgG类抗体24、下列哪项不是T细胞表面标志的检测方法A、SmIg的检测B、抗体致敏细胞花环法C、免疫金银染色法D、免疫荧光法E、ABC法25、溶血空斑试验检测的是哪类细胞的功能A、T淋巴细胞B、巨噬细胞C、自然杀伤（NK）细胞D、B淋巴细胞E、LAK细胞答案部分一、A11、【正确答案】B【答案解析】单核细胞具有在37℃和Ca2＋存在时，能主动黏附在玻璃、塑料、尼龙毛、棉花纤维或葡聚糖凝胶的特性。
第三版免疫学检验技术第9-13章中级试题及答案
第九章酶免疫技术一、A11、下图所示的为哪一种ELISA技术的反应原理示意图（）。
A、双抗原夹心法B、双位点一步法C、间接法测抗体D、竞争法E、捕获法2、钩状效应是指用ELISA一步法测定标本中待测抗原时，抗原浓度过（），实测值偏（）的现象，极易造成假阴性A、低，高B、高，高C、高，低D、低，低E、高，不变3、ELISA试验中最常用的标记酶是（）。
A、ASTB、HRPC、ACPD、LDHE、ALT4、酶增强免疫测定技术是最早取得实际应用的（）。
A、均相酶免疫测定B、异相酶免疫测定C、固相酶免疫测定D、液相酶免疫测定E、固相-液相酶免疫测定5、利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体的方法，通常称为（）。
A、双抗体夹心法B、双位点一步法C、间接法D、竞争法E、捕获法6、ELISA中最常用的固相载体是（）。
A、聚氯乙烯B、聚苯乙烯C、三聚氧胺D、琼脂糖E、尼龙膜7、均相酶免疫测定不具有的特点是（）。
A、常用于半抗原和小分子的检测B、操作简便，易于自动化C、不易受样品中的内源性酶的干扰D、酶与抗原结合后仍保留酶和抗原的活性E、灵敏度不及异相酶免测定8、酶增强免疫测定技术（EMIT）是一种（）。
A、非均相酶免疫测定技术B、均相酶免疫测定技术C、酶免疫组织化学技术D、酶免疫测定与电泳相结合的技术E、电泳技术9、ELISA板包被后，最常用的封闭物质是（）。
A、人白蛋白B、人球蛋白C、牛血清白蛋白D、牛血清球蛋白E、鼠白蛋白10、可用免疫渗滤试验和免疫层析试验检测的项目没有（）。
A、抗HCV B、HIV C、HCG D、HBsAg E、HAV11、制备抗体酶结合物的方法通常采用（）。
A、戊二醛交联法B、糖原染色法C、免疫印迹法D、酶耦联测定法E、捕获竞争法12、下列不属于ELISA测定方法中所必需的试剂（）。
A、固相的抗原或抗体B、酶标记的抗原或抗体C、酶作用的底物D、戊二醛交联剂E、稀释的血清13、斑点免疫层析试验最常用的载体材料是（）。
临床检验技术士《专业知识》考前点题卷一
临床检验技术士《专业知识》考前点题卷一[单选题]1.血液保存液中，其配方CPDA中的C是（江南博哥）指A.枸橼酸B.磷酸盐C.葡萄糖D.腺嘌呤E.枸橼酸三钠参考答案：E参考解析：血液保存液配方可分为：ACD（A，枸橼酸；C，枸橼酸三钠；D，葡萄糖）与CPD（C，枸橼酸三钠；P，磷酸盐；D，葡萄糖及枸橼酸）两大类保存液。
在CPD中加腺嘌呤即为CPDA-1。
掌握“血液保存液3,4”知识点。
[单选题]2.尿干化学检测白细胞呈阴性，离心镜检尿沉渣白细胞15～20个/HP。
合理的解释是镜下所见为A.淋巴细胞B.中性粒细胞C.上皮细胞D.酵母样真菌E.红细胞参考答案：A参考解析：白细胞：①分析仪法（+），镜检法（-）：可能的解释为尿液在膀胱贮存时间过长或其他原因致使白细胞破坏。
②分析仪法（-），镜检法（+）：多发生在尿液中以淋巴细胞或单核细胞为主时，应以显微镜检查结果为准。
掌握“尿有形成分分析仪临床应用2,4”知识点。
[单选题]3.再生障碍性贫血的血常规呈A.小细胞低色素性贫血B.单纯小细胞性贫血C.大细胞性贫血D.大细胞不均一性贫血E.正细胞正色素性贫血参考答案：E参考解析：再生障碍性贫血为正细胞正色素性贫血。
掌握“贫血的定义和分类1”知识点。
[单选题]4.IMViC实验不包括A.糖发酵试验B.吲哚试验C.枸橼酸盐利用试验D.甲基红试验E.V-P试验参考解析：IMViC实验主要包括吲哚试验，枸橼酸盐利用试验，甲基红试验和V-P试验。
掌握“肠杆菌微生物学检测3,4”知识点。
[单选题]5.有关磷的叙述错误的是A.血液中的磷以有机磷和无机磷2种形式存在B.血磷通常是指血浆中的有机磷C.儿童血磷高于成人D.磷是人体的重要组成物质E.血中磷酸盐是血液缓冲体系的重要组成成分参考答案：B参考解析：血液中的磷以有机磷和无机磷2种形式存在，血磷通常是指血浆中的有机磷和无机磷。
掌握“第七章钙磷镁与微量元素的临床意义及调解3,4”知识点。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
一、免疫细胞膜分子检测的原理与类型 1、以抗体识别抗原 2、以配体识别受体
二、免疫细胞膜分子的主要检测方法
1、免疫标记检测方法 荧光抗体法 酶免疫检测法 免疫金银染色法
2、补体依赖的细胞毒试验（CDC） 3、花环形成试验
SmIg的荧光抗体检测法SmIgBiblioteka 酶免疫检测法染料补体
补体依赖的细胞毒试验（CDC）
第一节 免疫细胞的分类与分离
一、免疫细胞的种类与特征 二、免疫细胞的分离技术 三、细胞的冻存与复苏
一、免疫细胞的特征
1、免疫细胞的形态学特征 理化性状 生物学特性
2、免疫细胞的膜分子特征 CD分子
吞噬溶酶体
NK cells
二、免疫细胞的分离技术
1、密度梯度离心法 2、黏附分离法 3、荧光激活分离法 4、磁性分离法 5、其他分离法
2、细胞复苏的原理与方法：细胞复苏时速度要快，
使之迅速通过细胞最易受损的－5～0℃，细胞仍能生长， 活力受损不大。
目前常用的保护剂为二甲亚砜（DMSO）和甘油，它们 对细胞无毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细胞。
细胞冻存罐
第二节 免疫细胞膜分子的检测
一、免疫细胞膜分子检测的原理与类型 二、免疫细胞膜分子的检测方法
稀释抗凝血
血浆
淋巴细胞分离液 离心前
单个核细胞
粒细胞 红细胞 离心后
2、黏附分离法-纯淋巴细胞群的分离
贴壁法：将已制备的单个核细胞悬液倾于玻璃或塑料平
皿或扁平小瓶中，移至37℃温箱静置1h左右，单核细胞和 粒细胞均贴于平皿壁上，而未贴壁的非粘附细胞几乎为纯淋 巴细胞，继用橡皮刮下贴壁的细胞即为纯单核细胞群。因B 细胞也有贴壁现象，用本法分离的淋巴细胞群中B细胞有所 损失。
可溶性MHC-肽四聚体法：mhc-肽四聚体复合物
的原理是通过增强t细胞受体与mhc-肽复合物亲和力，达 到可直接特异性检测t细胞的目的。 作为临床诊断工具，定量检测外周血及组织中抗原特异 性CTLs的比率，并进行表型及功能分析。 用于过继性肿瘤免疫治疗 用于疫苗疗效的监测
抗原肽-MHC分子四聚体技术
1、密度梯度离心法
聚蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F/H)分层液 Ficoll是蔗糖的多聚体，呈中性，亲水性高，平均分子量为 400,000，当密度为1.2g/ml仍未超出正常生理性渗透压，也不 穿过生物膜。 红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单 核细胞的比重小于或等于分层液比重，离心后漂浮于分层液 的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分层液中。吸取分层液 液面的细胞，就可从外周血中分离到单个核细胞。
单个核细胞悬液中加直径为3μm的羰基铁颗粒，置37℃温箱 内短时旋转摇动，待单核细胞充分吞噬羰基铁颗粒后，用磁 铁将细胞吸至管底，上层液中含较纯的淋巴细胞。
（2）磁激活细胞分离术MACs：是一种特异性细
胞分选技术，其高度特异性来自抗体对抗原的特异性识别。 主要组成成分为MACS微珠、MACS分选柱和MACS分选器。 MACS微珠是与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微 粒。MACS分选柱置于一个永久性磁场—MACS分选器中， 可以将磁力增强1000倍，足以滞留仅标记极少量微珠的目的 细胞。用缓冲液冲洗分选柱，所有未标记的细胞被冲洗掉。 分选柱离开磁场，即可获得被标记的细胞组分。
MHC I类(左)和Ⅱ类(右)分子四聚体结构示意图
三、细胞的冻存与复苏
1、细胞冻存的原理与方法：在不加任何条件下直
接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶， 引起细胞死亡。向培养液加入保护剂，可使冰点降低。 在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细 胞。贮存在-130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。
第三节 免疫细胞功能测定
一、转化、增殖试验 二、细胞毒试验 三、抗体形成试验 四、细胞吞噬与杀伤试验
一、转化、增殖试验
1、淋巴细胞转化试验：刺激物分为非特异性（如植
物血凝素、刀豆素A等）和特异性刺激因子（如抗原）；检 测方法为形态学检测法和3H-TdR掺入法及MTT法等。
2、混合淋巴细胞培养：混合淋巴细胞培养(MLC)或
❖ 吸附柱法：将单个核细胞悬液注入装有玻璃纤维或葡聚糖凝胶 SephadexG10的柱层中，凡有粘附能力的细胞绝大部分被吸附而粘 滞在柱层中，从柱上洗脱下来的细胞主要是淋巴细胞。此法简单易行， 对细胞极少损害。
3、荧光激活分离法（FACS）
流式细胞仪
4、磁性分离法
（1）磁铁吸引法：利用单核细胞具有吞噬的特性，在
N
S
MACS (阳性选择法）
N
S
MACS (阴性选择法）
5、其他分离法
花环沉降法：本法是将淋巴细胞与一定比例的绵羊红
细胞混合，待淋巴细胞形成E花环后，继用淋巴细胞分层液 分离细胞。浮悬在分层界面而不形成E花环的群则富含B细 胞，而沉降在管底的形成E花环的细胞用低渗法处理，使围 绕细胞周围的绵羊红细胞快速裂解，则获得纯的T细胞。
E-花环：利用T细胞膜上的异种动物红细胞受体
花环形成细胞
B细胞
绵羊红细胞 T细胞
EA-花环：B淋巴细胞表面有Fc受体，能与免疫球蛋白的
Fc段结合，因此用抗体致敏的红细胞与B淋巴细胞混合，可见B 淋巴细胞周围粘附有红细胞
EAC-花环：B淋巴细胞表面有补体受体，在抗体致敏的
红细胞中加入补体，可形成红细胞-抗体-补体复合物，再与B 淋巴细胞混合，则可形成EAC玫瑰花环。
称混合淋巴细胞反应(MLR)常用于器官移植前的组织配型， 以测定受体和供体主要组织相容性抗原(HLA抗原)相容的程 度。由于MLC中淋巴细胞接受同种异型抗原的刺激而发生活 化、增殖，产生种类众多的细胞因子，促进NK、LAK和 CTL等杀伤细胞的分化，因此又是免疫调节研究中常用的实 验模型。
2、黏附分离法：淋巴细胞亚群的分离
❖ 尼龙毛法：混合单个核细胞悬液在通过尼龙毛柱时，B细胞、浆细胞、 单核细胞和一些辅助细胞被选择性粘附于尼龙毛上，而多数T细胞则 通过尼龙毛柱，这是获得富含T细胞群的有效方法。 T细胞得率为2030%左右。
❖ 亲和板法：利用亲和层析法分离淋巴细胞亚群，其原理是各种淋巴细 胞亚群具有不同的抗原性，将相应抗体结合于塑料平板上，继加细胞 悬液，凡抗原阳性的细胞则与相应抗体结合，抗原阴性的细胞可从未 吸附的细胞悬液中获取。