第15章 免疫细胞标志和功能检测技术
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术传统的免疫细胞功能检测方法主要包括流式细胞术、细胞增殖试验和细胞毒性试验等。
其中，流式细胞术是一种常用的细胞表面标记物检测方法，可以通过检测细胞表面标记物的表达情况来评估免疫细胞的活性和状态。
细胞增殖试验可以评估免疫细胞的增殖能力，常用的方法包括MTT法和BrdU法等。
细胞毒性试验可以评估免疫细胞对靶细胞的杀伤能力，常用的方法包括细胞色素释放试验和细胞活性检测试剂盒等。
然而，传统的免疫细胞功能检测方法存在一些局限性。
首先，这些方法往往需要大量的细胞数目，且操作繁琐，不适用于临床应用。
其次，这些方法只能评估其中一方面的免疫功能，无法全面评估免疫细胞的整体功能状态。
此外，传统方法对于一些免疫细胞功能的检测灵敏度较低，无法满足一些特殊研究和临床需求。
近年来，随着生物技术的发展，一些新的免疫细胞功能检测技术逐渐崭露头角。
其中，高通量测序技术的应用为免疫细胞功能检测带来了革命性的突破。
高通量测序可以同时检测上千个基因的表达水平，可以用来评估免疫细胞的基因表达谱，并通过生物信息学方法分析不同样本的差异。
通过这种方法，可以全面了解免疫细胞的活性和功能状态。
另外，单细胞技术也是一种新兴的免疫细胞功能检测技术。
传统的免疫细胞功能检测方法通常是对大量细胞进行分析，无法检测到细胞群体中不同细胞的异质性。
而单细胞技术可以对单个细胞进行检测和分析，可以检测到不同细胞的功能差异，并研究细胞在群体中的相互作用。
单细胞技术可以通过扩增检测目标区域的方法，同时检测多个指标，可以全面评估免疫细胞的功能状态。
除了高通量测序和单细胞技术，还有一些新兴的免疫细胞功能检测技术值得关注。
例如，质谱技术可以定量检测细胞因子的分泌水平，可以评估免疫细胞的功能状态。
另外，光学显微镜技术可以直接观察免疫细胞的活动过程，可以评估细胞的运动能力和活跃度。
总而言之，免疫细胞功能检测技术的发展为了解免疫细胞的功能状态提供了新的手段。
高通量测序、单细胞技术、质谱技术和光学显微镜技术等新兴技术可以全面、准确地评估免疫细胞的功能状态，有望在临床和科研领域发挥重要作用。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术在我们的身体中，免疫细胞就像是一支训练有素的“军队”，时刻守护着我们的健康，抵御着外界病原体的入侵。
为了更好地了解这支“军队”的战斗力，免疫细胞功能检测技术应运而生。
免疫细胞功能检测技术是一类用于评估免疫细胞在免疫反应中的活性、数量、表型以及功能状态的方法。
这些技术对于诊断免疫相关疾病、监测治疗效果、评估个体的免疫状态以及研究免疫系统的机制都具有重要意义。
其中，流式细胞术是一种常见且强大的免疫细胞检测技术。
它通过让单个细胞依次通过激光束，根据细胞所发出的荧光信号来分析细胞的表面标志物、细胞内的蛋白质以及细胞的大小和粒度等特征。
比如说，我们可以利用特定的荧光标记抗体来识别 T 细胞、B 细胞、NK 细胞等不同类型的免疫细胞，并进一步了解它们的活化状态。
通过流式细胞术，医生能够快速准确地判断患者的免疫细胞是否存在异常，为疾病的诊断和治疗提供重要依据。
酶联免疫斑点法（ELISPOT）也是一项常用的技术。
它主要用于检测免疫细胞分泌细胞因子的能力。
想象一下，细胞因子就像是免疫细胞之间传递信息的“信使”，通过检测这些“信使”的分泌情况，我们就能了解免疫细胞的功能状态。
比如，在检测T 细胞对特定抗原的反应时，ELISPOT 可以准确地显示出分泌特定细胞因子（如干扰素γ）的 T 细胞的数量，从而反映出 T 细胞的免疫活性。
细胞增殖实验则能够评估免疫细胞的增殖能力。
当免疫细胞受到刺激时，它们会进行分裂和增殖以增强免疫反应。
通过使用特定的标记物或者检测细胞的代谢活性，我们可以确定免疫细胞是否能够有效地增殖。
这对于研究免疫细胞的活化和免疫应答的强度非常有帮助。
细胞毒性实验则用于检测免疫细胞杀伤靶细胞的能力。
比如，NK细胞和细胞毒性 T 淋巴细胞（CTL）能够识别并杀伤被感染或恶变的细胞。
在实验中，我们可以将靶细胞与免疫细胞共同培养，然后通过检测靶细胞的存活情况来评估免疫细胞的杀伤功能。
除了上述这些技术，还有一些其他的方法也在免疫细胞功能检测中发挥着重要作用。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术在现代医学领域，对免疫细胞功能的检测是一项至关重要的工作。
免疫细胞就像是我们身体内的“卫士”，它们时刻守护着我们的健康，抵御着各种病原体的入侵。
而了解这些“卫士”的工作状态和能力，对于诊断疾病、评估治疗效果以及探索新的治疗方法都具有极其重要的意义。
接下来，让我们一起深入了解一下免疫细胞功能检测技术。
免疫细胞包括多种类型，如 T 细胞、B 细胞、NK 细胞（自然杀伤细胞）、巨噬细胞等。
每种免疫细胞都有其独特的功能和作用机制，因此针对不同类型的免疫细胞，检测技术也有所不同。
T 细胞功能检测是免疫细胞功能检测中的重要部分。
其中一种常见的方法是淋巴细胞增殖实验。
这就好比是观察 T 细胞在受到刺激后是否能积极“生长壮大”。
通过在体外给 T 细胞特定的刺激物，比如植物血凝素（PHA）等，然后观察细胞的增殖情况。
如果 T 细胞能够迅速增殖，说明它们具有较强的反应能力，反之则可能提示免疫功能存在异常。
细胞毒性 T 细胞（CTL）杀伤活性测定也是评估 T 细胞功能的重要手段。
想象一下 CTL 就像是训练有素的“杀手”，专门攻击被病原体感染的细胞或者癌细胞。
检测它们的杀伤活性，可以通过放射性核素释放法、乳酸脱氢酶释放法等。
这些方法能够直观地反映出 CTL 消灭“敌人”的能力。
再来说说 B 细胞功能检测。
B 细胞的主要功能是产生抗体。
检测血清中各类免疫球蛋白（Ig）的水平，如 IgG、IgA、IgM 等，能够间接反映 B 细胞的功能状态。
另外，通过检测 B 细胞对抗原的反应能力，比如测定抗体产生的量和亲和力，也可以评估B 细胞的功能是否正常。
NK 细胞作为机体天然免疫的重要组成部分，其功能检测也不容忽视。
NK 细胞具有直接杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞的能力。
常用的检测方法有放射性核素标记法、流式细胞术等。
这些方法可以帮助我们了解 NK 细胞的活性和数量，从而判断其在免疫防御中的作用是否正常发挥。
除了上述针对单个免疫细胞类型的检测方法，还有一些综合性的检测技术。
免疫细胞的分离及表面标志检测技术免疫细胞功能
第十四章免疫细胞的分离及表面标志检测技术第十五章免疫细胞功能检测技术Separation and Assays for Immunocyte第一部分目的要求和教学内容一、目的要求掌握：Ficoll—hypaque分层液分离PBMC的原理、方法，淋巴细胞亚群分离的原理、方法及应用，T细胞增殖试验的方法，B细胞的数量及功能的检测，NK细胞的活性、中性粒细胞、巨噬细胞功能的检测方法；熟悉：T细胞功能的体内试验、T细胞介导的细胞毒检测的方法；了解：淋巴细胞的纯化与亚群分离的方法、吞噬细胞的分离方法、溶血空斑试验。
二、教学内容1．免疫细胞的分离与纯化：细胞的分离，外周血单个核细胞的分离，淋巴细胞的纯化与亚群分离，吞噬细胞的分离。
2．淋巴细胞的数量检测：T细胞数量检测，B细胞数量检测。
3．淋巴细胞的功能检测：T细胞功能检测，B细胞功能检测，NK细胞活性测定。
4．吞噬细胞功能检测：中性粒细胞功能检测，巨噬细胞功能检测。
第二部分测试题一、选择题(一)单项选择题(A型题)1．外周血中的单个核细胞主要是指A．淋巴细胞B．嗜酸粒细胞C．单核细胞一淋巴细胞D．单核细胞E．中性粒细胞2．分离人外周血淋巴细胞分层液的最佳密度为A． 1.030B． 1.035C． 1.092D． 1.020E． 1.0773．用FicolI—hypaque分层液分离PBMC,分离的PBMC层位于试管的A．血浆层之上B．血浆层之中C．血浆层与分层液之间D．分层液之中E．试管底部4．用玻璃纤维或葡聚糖凝胶Sephadex-G10柱分离细胞时，从柱上洗脱下的细胞主要是A．粒细胞B．淋巴细胞C．单核细胞D．T细胞E．B细胞5．能与SRBC占合形成E花环的细胞主要是A．T细胞B．B细胞C．单核细胞D．粒细胞E．血小板6．用小鼠抗人CD3单克隆抗体检测T细胞，其结果代表的是A．T 细胞总数B．Th 胞数C．Ts细胞数D．CD4＋细胞数E．CD8＋胞数7．用尼龙棉柱分离细胞时，不易黏附尼龙棉纤维而被洗脱的细胞是A．粒细胞B．B 细胞C．单核细胞D．T 细胞E．血小板8．表示淋巴细胞的活力常用A．活淋巴细胞占总淋巴细胞的百分比B．活细胞浓度C．淋巴细胞浓度D．活细胞和总细胞的比值E．T细胞和B细胞的比例9．用腹腔渗出法可从动物的腹腔渗出液中分离出A．血小板B．B细胞C．单核细胞D．T细胞E．巨噬细胞10．活细胞经台盼蓝染色后呈A．蓝色B．棕色C．红色D．不着色E．天青色11．荧光标记法计数外周血B淋巴细胞，检测的特有的表面标志是A．CDl9B．CD20C．补体受体D．SmIgE．FcR12．NK细胞特有的表面抗原是A．CD2B．CDl6C．无特异的表面抗原D．CD23E．CD5613．仅能使T细胞发生淋巴母细胞转化的因子是A．PHAB．PWMC．．LPSD．ConAE．EBV14．能使B细胞和T细胞发生淋巴母细胞转化的因子是A．PHAB．PWMC．．LPSD．SPAE．EBV15．检查体液免疫功能最常用的方法是A．血清免疫球蛋白定量测定B．溶血空斑试验C．B淋巴细胞计数D．淋巴母细胞转化试验E．SmlgG测定16．溶血空斑试验用于检测下列何种细胞的功能A．T细胞B．B细胞C．中性粒细胞D．吞噬细胞E．NK细胞17．测定T淋巴细胞功能的体内试验是A．锡克试验B．狄克试验C．结核菌素试验D．天然血型抗体滴度E．血清：IgG测定18．正常人外周血T淋巴细胞转化率为A． <40％B．40％～50％C．60％～80％D．80％E． >90％19．常用检测细胞毒效应的方法是A．3H-TdR掺人法B．125I释放法C．51Cr释放法D．形态学检测法E．CD8检测法20．包被有抗Ig抗体的亲和板，其吸附的是A．T细胞B．B细胞C．NK细胞D．NKT‘细胞E．吞噬细胞21．Ficoll—hypaque液分离淋巴细胞是一种A．不连续密度梯度离心法B．连续密度梯度离心法C．亲和层析法D．离子交换层析法E．自然沉降法22．Ficoll—hypaque淋巴细胞分离液的主要成分是A．聚蔗糖B．泛影葡胺C．聚乙二醇D．聚蔗糖+泛影葡胺E．聚蔗糖+聚乙二醇23．Percoll分离液的主要成分是A．聚蔗糖B．泛影葡胺C．聚乙二醇D．聚乙烯吡咯烷酮E．经聚乙烯吡咯烷酮处理的硅胶颗粒24．检测中性粒细胞杀菌功能的方法是A．NBT还原试验B．白细胞计数C．溶血空斑试验D．淋巴母细胞转化试验E．补体介导的细胞毒试验25．MTT比色法检测IL-2活性，下列哪项是错误的A．需要IL一2依赖细胞株B．增殖细胞具有吸收MTT的能力C．颜色的深浅代表细胞代谢活性的强弱D．可反映B细胞的功能E．可反映T细胞的功能(二)多项选择题(x型题)1．淋巴细胞分离液要求符合的条件有A．对细胞无毒B．高渗C．不溶于血液D．无色E．有合适的比重2．与T细胞计数有关的表面抗原是A．CD2B．CD3C．CD4D．CD8E．CDl93．与B细胞计数有关的表面标志是A．SmIgB．CDl9C．CD20D．CD21E．CD24．符合淋巴母细胞转化的形态学特征有A．细胞体积变小B．核仁明显、核染质疏松C．可见有丝分裂D．胞浆极少，呈天青色E．胞内可见空泡5．用酶联免疫斑点试验检测B细胞功能的优点有A．稳定、特异 B．可检测抗体分泌细胞C．可检测抗体的分泌量 D．可同时进行B细胞计数 E．可同时检测不同抗原诱导的不同抗体的分泌6．细胞免疫功能测定包括以下哪些A．T细胞计数B．B细胞计数C．T细胞功能测定D．Tc细胞效应测定E．细胞因子测定7．检测淋巴细胞亚群常用的方法有A．免疫荧光法B．流式细胞仪测定C．酶免疫组化法D．放射免疫法E．免疫金染色法8．细胞免疫功能体内试验方法有A．细胞毒试验B．混合淋巴细胞反应C．皮肤试验D．淋巴细胞增殖试验E．接触性过敏试验9．T细胞增殖试验常用的检测方法有 A．流式细胞仪法B．形态学方法C．51Cr释放法D．MTT检测法E．3H一FdR掺人法10．检测吞噬细胞功能的方法有A．吞噬试验B．杀菌试验C．NBT还原试验D．化学发光测定法E．趋化功能测定法11．淋巴细胞亚群的分离方法有A．E花环分离法B．尼龙棉柱分离法c．亲和板结合分离法D．免疫磁珠分离法E．超速离心分离法12．T细胞数量检测包括A.T细胞增殖试验B．间接荧光免疫法C．酶免疫组织化学法D．微量细胞毒试验E．花环技术13．检测T细胞数量的花环试验有A．酵母菌花环试验B．补体C3b花环试验C．E花环试验D．葡萄球菌花环法E．抗体致敏细胞花环法14．B细胞表面具有、A．mIgB．CD抗原C．Fc受体D．补体受体E．EB病毒受体15．B细胞数量检测的方法包括A．mIg的检测法B．CD抗原检测法C．Fc受体检测法D．补体受体检测法E．小鼠红细胞受体检测法16．B淋巴细胞功能的测定方法有A．B细胞增殖试验B．溶血空斑试验C．酶联免疫斑点法D．体内测定法E．形态学检查法17．中性粒细胞吞噬和杀菌功能的测定方法A．形态学检查法B．显微镜检查法C．溶菌法D．NBT还原试验E．化学发光测定法18．巨噬细胞功能的检测方法包括A．炭粒廓清试验B．吞噬功能检测C．巨噬细胞溶酶体酶测定D．细胞毒作用测定E．巨噬细胞促凝血活性测定(三)配伍题问题1-3A．红细胞层B．粒细胞层C．单个核细胞层D．血浆与血小板层E．淋巴细胞分离液层1.采用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，最上层是2.采用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，最下层是3.采用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，第二层是问题4-6A．淋巴细胞转化试验B．溶血空斑试验C．炭粒廓清试验D．琼脂糖凝胶平板法E．化学发光测定法4．巨噬细胞吞噬功能的检测：5．中性粒细胞趋化功能的检测：6．中性粒细胞吞噬和杀菌功能的检测：二、填空题1．PBMC包括（）和（）。
临床免疫学检验 课件 第15章 免疫细胞标志和功能检测技术
PMBC
Ficoll 分离液
(聚蔗糖-泛影葡胺）
２份6%聚蔗糖蒸馏水溶液 １份34%泛影葡胺生理盐水溶液
纯度达 95%
上层：血浆
外周血
Ficoll
白膜层 中层：分离液
底层：红细胞和多核细胞
二 、淋巴细胞分离
?贴壁粘附法 ?吸附柱过滤法 ?Percoll 分离液法
1.贴壁黏附法
PBMC
37℃ 1 hour
? 外周血单个核细胞分离 ? 淋巴细胞的分离 ? T、B细胞和 T细胞亚群的分离
一、外周血单个核细胞分离
?外周血单个核细胞（ peripheral blood mononuclear cells, PBMC）包括淋巴细胞和
单核细胞（monocyte ）。
?分离原理 ：根据比重不同进行分离
血小板
PBMC
多核白细胞
红细胞
? 对分离介质的要求：
– 对细胞无毒； – 基本等渗；
分离介质 是关键
– 与血浆和分离细胞不相溶；
– 有特定的比重。
? 不同动物的PBMC 比重有差异：
– 小鼠：1.085
– 大鼠：1.087
– 人：1.075～1.090
? 常用Ficoll分离液(1.077±0.001)分离人的
1. E花环沉淀法
成熟T细胞具有CD2分子 能结合绵羊红细胞
方法：淋巴细胞 +SRBC 悬液→加入分层液
→T细胞形成 E花环而沉于管底 →悬液
中为B细胞。
缺点：分离效率低，易受多种因素影响
2. 尼龙毛分离法(吸附能力差异)
方法：淋巴细胞→通过聚酰胺纤维管→洗脱下来的是T细胞
3. 亲合板结合分离法—分离亚群
免疫学及免疫学检验学题库答案
一、名词解释第1章概论1.免疫学：2.免疫分子：3.补体：4.临床免疫学：第2章抗原抗体反应5.抗原抗体反应：6.抗原抗体反应特异性7.可逆性8.比例性9.抗原抗体反应的等价带zoneofequivalence10.最适比optimalratio11.带现象zonephenomenon第3章免疫原和抗血清的制备12.免疫原immunogen13.半抗原14.免疫佐剂15.多克隆抗体polyclonal antibody, pcAb第5章凝集反应16.凝集反应17.直接凝集反应18.间接凝集反应19.明胶凝集试验第6章沉淀反应20.沉淀反应21.絮状沉淀试验22.免疫浊度测定23.凝胶内沉淀试验24.单项扩散试验25.双向扩散试验26.免疫电泳技术27.对流免疫电泳28.火箭免疫电泳29.免疫电泳30.免疫固定电泳第19章补体检测及应用31.补体32.免疫溶血法33.补体结合试验第22章感染性疾病与感染免疫检测34.感染第23章超敏反应性疾病及其免疫检测35.超敏反应36.Ⅰ型超敏反应37.Ⅱ型超敏反应38.Ⅲ型超敏反应39.Ⅳ型超敏反应第24章自身免疫性疾病及其免疫检测40.自身耐受41.自身免疫42.自身免疫病43.自身抗体44.抗核抗体第25章免疫增殖性疾病及其免疫检测45.免疫增殖性疾病46.免疫球蛋白增殖病47.本周蛋白48.血清区带电泳49.免疫电泳50.免疫固定电泳第26章免疫缺陷性疾病及其免疫检验51.免疫缺陷病52.获得性免疫缺陷综合征第27章肿瘤免疫与免疫学检验53.肿瘤免疫学54.肿瘤抗原55.肿瘤标志物第28章移植免疫及其免疫检测56.移植57.主要组织相容性复合体58.移植排斥反应59.移植物抗宿主反应GVHR60.血清学分型法二、填空题;第1章概论1.推动现代生命科学前进的三架战车：分子生物学、免疫学、细胞生物学;2.免疫学的发展历史可分为三个时期：经验时期、免疫学科形成时期、现代免疫学时期;3.为保持机体内环境稳定,免疫系统的三大生理功能分别是：免疫防御、免疫自稳、免疫监视;4.免疫应答的过程主要分为：识别阶段、活化阶段、效应阶段5.免疫系统的组成包括三部分,分别是：免疫器官、免疫细胞、免疫分子;6.补体的三条激活途径分别是：经典途径、甘露糖结合凝集素途径、旁路途径;第2章抗原抗体反应7.在抗原抗体反应中,主要的结合力有：静电引力、范德华力、氢键、疏水作用力;8.在抗原抗体反应中,主要的特点有：特异性、可逆性、比例性、阶段性;第3章免疫原和抗血清的制备9.组织细胞或培养细胞可溶性抗原的制备过程中,常用的方法有：反复冻融法、超声破碎法、自溶法、酶处理法、表面活性剂处理法任写出二种均可得分;10.在免疫原和抗血清的制备过程中,可溶性抗原的纯化方法：超速离心法、选择性沉淀法、凝胶过滤法、离子交换层析法、亲和层析法等任写出二种均可得分;11.在免疫原和抗血清的制备过程中,纯化抗原的鉴定的内容主要有：蛋白含量测定、分子量测定、纯度鉴定、免疫活性鉴定;12.在免疫原和抗血清的制备过程中,抗血清的鉴定内容有：抗体特异性的鉴定、抗体效价的鉴定、抗体纯度的鉴定、抗体亲合力的鉴定;第5章凝集反应13.在凝集反应中,间接凝集反应的类型主要有：正向间接凝集反应、反向间接凝集反应、间接凝集抑制反应、协同凝集反应;14.抗球蛋白试验,又称Coombs试验,是检测抗红细胞不完全抗体的一种方法;第6章沉淀反应15.免疫电泳技术类型主要包括：对流免疫电泳、火箭免疫电泳、免疫电泳、免疫固定电泳;第14章免疫细胞的分离及其表面标志检测技术16.在外周血单个核细胞分离实验中,对分离介质的基本要求有：对细胞无毒、基本等渗、不溶于血浆或分离物质、有一定密度;17.在淋巴细胞分离过程中,其中的单核细胞去除方法有：贴壁黏附法、吸附柱过滤法、磁铁吸引法、Percoll分层液法; 第15章免疫细胞功能检测技术18.在免疫细胞功能检测技术方面,针对T细胞功能检测方法有：T细胞增殖试验、 T细胞分泌功能测定、T细胞介导的细胞毒试验、体内试验;第19章补体检测及应用第22章感染性疾病与感染免疫检测19.目前公认的肝炎病毒至少有5种：甲型肝炎病毒HAV、乙型肝炎病毒HBV、丙型肝炎病毒HCV、丁型肝炎病毒HDV、戊型肝炎病毒HEV;20.在乙肝病毒检测的过程中,主要检测的五项指标有：HBsAg、抗HBs、抗HBc、HBeAg、抗HBe;21.在先天性感染中,临床上将以上4种病原菌称为“TORCH”,为产前检查的重点项目,分别是：弓形体、巨细胞病毒、风疹病毒、单纯疱疹病毒;第23章超敏反应性疾病及其免疫检测22.根据免疫反应的速度和组织损伤的机制不同,将超敏反应分为四种类型,分别是：第 I 型速发型超敏反应、第II 型细胞毒或溶细胞型超敏反应、第III型免疫复合物型超敏反应、第IV 型延缓型或迟发型超敏反应;第24章自身免疫性疾病及其免疫检测23.在抗核抗体ANA检测方法中,常见的ANA荧光图形有：周边型核膜性、均质性、斑点性、核仁型、着丝点型;第25章免疫增殖性疾病及其免疫检测24.在免疫增殖性疾病中,常见的单克隆免疫球蛋白病有：多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症、重链病、轻链病、良性单克隆免疫球蛋白病;25.在免疫增殖性疾病中,免疫球蛋白异常增生常用的免疫检测方法有：血清区带电泳、免疫电泳、免疫固定电泳、血清免疫球蛋白定量、本周蛋白的检测;第26章免疫缺陷性疾病及其免疫检验26.在免疫缺陷性疾病中,常见的免疫缺陷病一般特征包括：反复感染、恶性肿瘤、伴发自身免疫病、遗传倾向、多系统病变;27.在免疫缺陷性疾病中,原发性免疫缺陷性疾病主要有：原发性B细胞缺陷病、原发性T细胞缺陷病、原发性联合免疫缺陷病、原发性吞噬细胞缺陷病、原发性补体系统缺陷病;28.在免疫缺陷性疾病中,继发性免疫缺陷性疾病主要有：继发性T细胞功能缺陷、继发性低丙球蛋白血症、继发性吞噬细胞功能缺陷、继发性补体缺陷;第27章肿瘤免疫与免疫学检验29.在常见肿瘤标志物中,胚胎抗原类肿瘤标志物主要有：甲胎蛋白、癌胚抗原;30.在常见肿瘤标志物中,酶类肿瘤标志物主要有：前列腺特异性抗原PSA 、神经元特异性烯醇化酶NSE、α-L-岩藻糖苷酶测定AFU;31.在常见肿瘤标志物中,激素类肿瘤标志物主要有：人绒毛膜促性腺激素 hCG、降钙素calcitonin, CT;32.在常见肿瘤标志物中,蛋白质类肿瘤标志物主要有：β2-微球蛋白β2M 、铁蛋白;第28章移植免疫及其免疫检测33.在移植免疫实验中,排斥反应类型主要包括四种,分别是：超急性排斥反应、急性排斥反应、慢性排斥反应、移植物抗宿主反应GVHR;34.常见的组织或器官移植有：肾脏移植、肝脏移植、心脏移植与心肺联合移植、骨髓与其他来源的干细胞移植;三、单项选择题1.免疫应答是一个复杂的连续过程,依次分为哪几个阶段AA. 识别阶段、活化阶段、效应阶段B. 效应阶段、识别阶段、活化阶段C. 活化阶段、效应阶段、识别阶段D. 活化阶段、识别阶段、效应阶段2.抗原抗体反应形成明显沉淀物的最佳条件为CA. 抗体略多于抗原B. 抗原略多于抗体C. 抗原抗体比例合适D. 抗体显着多于抗原3.用已知抗原或抗体检测相应的抗体或抗原,是根据抗原抗体反应的AA. 特异性B. 比例性C. 可逆性D. 阶段性4.弗氏不完全佐剂的组成包括 BA. 液状石蜡、羊毛脂、卡介苗B. 液状石蜡、羊毛脂C. 液状石蜡、卡介苗D. 羊毛脂、卡介苗5.沉淀反应中的钩状效应是因为BA. 抗体过量B. 抗原过量C. pH浓度过高D. pH浓度过低6.细胞活力测定常用的简便方法是BA. 伊红染色B. 台盼蓝染色C. HE染色D. 美蓝染色7.正常人外周血T淋巴细胞转化率为CA. <40%B. 40%～50%C. 60%～80%D. 80%8.在CH50试验中,溶血程度和补体含量之间的关系为 BA. 直线B. S形曲线C. 抛物线D. 正态分布曲线9.正常血清中,补体含量最高的是CA. C1B. C2C. C3D. C410.发生III型超敏反应性疾病的始动环节是 BA. 大分子免疫复合物沉积在毛细血管基底膜B. 中等大小分子免疫复合物沉积在毛细血管基底膜C. 小分子免疫复合物沉积在毛细血管基底膜D. 补体激活11.用免疫荧光法检测ANA有多种核型,不正确的是DA. 周边型B. 均质型C. 斑点型或颗粒型D. 原生质型12.血清中检测到M蛋白不提示下列疾病DA. 多发性骨髓瘤B. 巨球蛋白血症C. 重链病或轻链病D. 肾病13.本-周蛋白的本质是BA. 尿中微球蛋白B. 尿中游离的免疫球蛋白轻链C. 尿中游离的白蛋白D. 尿中游离的管型物14.多发性骨髓瘤属于哪种细胞异常CA. T细胞B. B细胞C. 浆细胞D. 单核细胞15.血清中免疫球蛋白含量缺乏,一般应考虑何种病 CA. 轻链病B. 重链病C. 免疫缺陷病D. 免疫增殖病16.切除胸腺的新生动物的淋巴结中缺乏何种细胞 BA. B淋巴细胞B. T淋巴细胞C. 粒细胞D. 巨噬细胞17.沉淀反应中抗体过量的现象称为AA. 前带B. 后带C. 等价带D. 带现象18.弗氏完全佐剂的组成包括AA. 液状石蜡、羊毛脂、卡介苗B. 液状石蜡、羊毛脂C. 液状石蜡、卡介苗D. 羊毛脂、卡介苗19.直接Coombs试验检测的抗体是AA. 结合在红细胞表面的IgGB. 游离的IgGC. 结合在红细胞表面的IgMD. 游离的IgM20.单项扩散试验出现双环的沉淀线是因为DA. 两种抗原B. 两种抗体C. 抗体为多克隆抗体D. 抗原为性质相同的两个组分扩散率不同21.Ficoll液单次密度梯度离心后外周血细胞分布由上至下依次为CA. 单个核细胞、血小板和血浆、粒细胞、红细胞B. 血小板和血浆、粒细胞、单个核细胞、红细胞C. 血小板和血浆、单个核细胞、粒细胞、红细胞D. 血小板和血浆、单个核细胞、红细胞、粒细胞22.淋巴细胞转化为淋巴母细胞后,其形态学特征为BA. 细胞大小由大变小B. 出现核仁1～4个C. 胞浆内空泡逐渐消失D. 细胞伪足消失23.溶血空斑试验用于检测下列何种细胞的功能BA. T细胞B. B细胞C. NK细胞D. 吞噬细胞24.Boyden小室常用于测定 BA. 白细胞吞噬功能B. 中性粒细胞趋化功能C. 白细胞杀伤功能D. 淋巴细胞抑制功能25.在溶血反应中检测试剂中,加入少量钙、镁离子的目的是CA. 使反应液保持等渗B. 抑制补体的活性C. 有助于补体激活D. 维持反应液的pH值26.乙型肝炎感染后最早出现的病毒标志物是AA. HBsAgB. HBeAgC. HBcAgD. 抗-HBs27.新生儿溶血症发生的条件是CA. 母亲Rh+、胎儿Rh+B. 母亲Rh+、胎儿Rh-C. 母亲Rh-、胎儿Rh+D. 母亲Rh-、胎儿Rh-28.造成系统性红斑狼疮病人免疫损伤的主要机制是 CA. I超敏反应B. II超敏反应C. III超敏反应D. IV超敏反应29.人类MHC位于第几对染色体上 CA. 第12对染色体短臂B. 第12对染色体长臂C. 第6对染色体短臂D. 第6对染色体长臂30.HLA交叉配型的目的是 BA. 检测供者血清有无抗受者HLA抗体B. 检测受者血清有无抗供者HLA抗体C. 检测供者淋巴细胞表面的HLA抗原D. 检测受者淋巴细胞表面的HLA抗原四、简答题第1章概论1.T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞的主要功能分别是什么2.在临床免疫学与免疫检验中,现代免疫学检验技术包括哪些方法第2章抗原抗体反应3.抗原抗体反应有哪些影响因素4.什么是标记免疫技术标记免疫技术按检测现象可分为哪些类型第3章免疫原和抗血清的制备5.常用的细胞破碎方法有哪些6.连接半抗原的载体有哪些制备半抗原性免疫原的方法有哪些7.免疫佐剂有哪些种类其作用机制是什么8.动物采血有哪些方法9.抗血清的鉴定包括哪些内容第5章凝集反应10.什么叫直接凝集反应什么叫间接凝集反应它们之间有何不同11.叙述抗球蛋白试验的类型、特点以及临床应用第6章沉淀反应12.单向扩散试验的概念和应用13.平板法双向免疫扩散试验的概念和应用14.免疫固定电泳的概念及临床应用15.抗原性质分析出现哪三种结果现象结果解释第14章免疫细胞的分离及其表面标志检测技术16.外周血单个核细胞分离,其分离介质的基本要求是什么17.外周血单个核细胞悬液富含淋巴细胞,但又混杂有单核细胞、红细胞和血小板,请问去除单核细胞的方法有哪些第15章免疫细胞功能检测技术18.T细胞功能检测内容有哪些19.B细胞功能检测内容有哪些20.NK细胞活性测定方法有哪些21.在检测T细胞的功能时,可选择T细胞增殖试验,请回答其基本原理第19章补体检测及应用22.在补体总活性测定中,一般采用CH50测定法,请说明其基本原理;23.在单个补体成分的测定中,一般采用免疫溶血法,请简述其概念及原理;24.请简述补体结合试验的概念、实验原理及结果解释第22章感染性疾病与感染免疫检测25.请列出目前公认的肝炎病毒种类26.乙型肝炎的诊断标志物主要检测指标有哪些27.在临床中,乙肝病毒检测常见的指标俗称：两对半有哪些28.什么叫先天性感染常见的病原菌“TORCH”只要只的是哪些病毒第23章超敏反应性疾病及其免疫检测29.试比较Ⅰ～Ⅳ型超敏反应特点30.使用青霉素可能引起哪些类型超敏反应简述其发病机制; 答：青霉素临床应用时有可能引起的超敏反应类型有：I、II、III、IV型;1I 型超敏反应：指青霉素过敏性休克,其发病机制是青霉素本身并无免疫原性,其降解产物为半抗原,与体内蛋白质结合而产生免疫原性,刺激机体产生特异性IgE,使机体处于致敏状态;当机体再次使用青霉素时,可发生过敏性休克;2II 型超敏反应：指青霉素过敏性血细胞减少症,其发病机制是青霉素降解产物能与血细胞膜蛋白或血浆蛋白结合获得免疫原性,从而刺激机体产生抗体;这种抗体与和药物结合的红细胞、粒细胞和血小板作用,引起药物性溶血性贫血、粒细胞减少症和血小板减少性紫癜;3III型超敏反应：指使用大剂量青霉素等药物可引起类似血清病样的反应,其发病机制是因为患者体内已产生特异性抗体,而大剂量药物尚未完全排除,两者结合形成中等大小免疫复合物所致;4IV型超敏反应：指青霉素引起的接触性皮炎,其发病机制是青霉素小分子半抗原与体内蛋白质结合成完全抗原,使T细胞致敏;当机体再次接触青霉素时,可发生接触性皮炎;31.血清病与血清过敏性休克分属哪型超敏反应比较发病机制;第24章自身免疫性疾病及其免疫检测32.自身免疫病都具有哪些共同特性33.什么叫自身抗体,其主要特点有哪些第25章免疫增殖性疾病及其免疫检测34.在免疫增殖性疾病中,常见的单克隆免疫球蛋白病有哪些35.在免疫增殖性疾病中,免疫球蛋白异常增生常用的免疫检测方法有哪些第26章免疫缺陷性疾病及其免疫检验36.请列出免疫缺陷病的一般特征37.原发性免疫缺陷性疾病有哪些38.继发性免疫缺陷病有哪些39.什么叫获得性免疫缺陷综合征其临床特点及典型特征是什么第27章肿瘤免疫与免疫学检验40.什么叫肿瘤抗原,其产生的可能机制有哪些41.什么叫肿瘤标志物,理想的肿瘤标志物具有哪些特性第28章移植免疫及其免疫检测42.什么叫移植排斥反应,根据排斥反应发生的时间、免疫损伤机制和组织病理改变,如何进行分类43.常见的组织或器官移植有哪些44.排斥反应的免疫监测包括哪些方面。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术免疫系统是人体的重要防御机制之一，能够识别病原体并消灭它们，维护身体的健康。
免疫细胞功能检测技术是一种用于评估免疫系统功能的测试方法，可以帮助人们更好地了解自身的免疫状况和疾病风险。
本文将介绍免疫细胞功能检测技术的原理、应用和未来发展趋势。
一、免疫细胞功能检测技术原理免疫细胞功能检测技术通过测定机体内免疫细胞的功能状态，评估免疫系统的健康状况。
其中，常见的技术包括流式细胞术、酶联免疫吸附法（ELISA）、细胞因子检测等。
1. 流式细胞术流式细胞术是一种通过流式细胞仪检测细胞表面标记物的技术，常用于检测免疫细胞的表型和活性。
通过标记细胞表面的特定抗原和荧光染料，流式细胞术可以定量测定细胞表面标记物，并进行多参数分析。
2. 酶联免疫吸附法（ELISA）ELISA是一种常用的免疫细胞功能检测技术，可用于定量测定体液中特定抗原或抗体的浓度。
通过将待测样品与特定抗原或抗体反应，并加入酶标记的二抗，在底物作用下形成可见的颜色反应，从而定量测定抗原或抗体的浓度。
3. 细胞因子检测细胞因子是一类在免疫反应中发挥重要调控作用的分子信号物质，如干扰素、白细胞介素等。
细胞因子检测技术可以通过ELISA等方法测定体液或细胞培养上清中细胞因子的浓度，为炎症反应的评估和免疫状态的监测提供重要信息。
二、免疫细胞功能检测技术应用免疫细胞功能检测技术在免疫学研究和临床医学中有着广泛的应用。
以下是该技术在不同领域的应用举例：1. 免疫系统疾病诊断免疫细胞功能检测技术可以帮助医生诊断免疫系统疾病，如自身免疫性疾病、免疫缺陷病等。
通过评估免疫细胞的数量、活性和功能状态，可以辅助医生制定治疗方案和判断治疗效果。
2. 肿瘤免疫治疗肿瘤免疫治疗是一种利用机体免疫系统增强对肿瘤细胞的攻击能力的治疗方法。
免疫细胞功能检测技术可以评估患者体内免疫细胞的活力和功能状态，为肿瘤免疫治疗方案的制定和疗效监测提供依据。
3. 个体化医疗免疫细胞功能检测技术还可以用于个体化医疗，根据不同个体的免疫细胞功能状况，制定相应的健康管理方案。
免疫细胞标志和功能检测技术-四川大学
CD 抗原
鉴定与检测: 单克隆抗体（ McAb） CD抗原国际统一编号 目前已鉴定的CD分子达300多种，已
弄清130多种CD分子编码基因的核苷 酸序列及其染色体定位 很少通过单一CD抗原区分某一淋巴细 胞亚群
CD分组
T细胞相关CD B细胞相关CD 髓系细胞相关CD NK细胞相关CD 血小板相关CD 激活抗原 粘附分子 内皮细胞 细胞因子受体
CD8分子：细胞毒性T细胞标志
由α、β链借二硫键连接形成的异二聚体， 胞膜外结构属IgSF成员
α链V样区与MHCⅠ类分子非多态α3区域 结合
生物学功能：胞浆区可与p56lek激酶结合 参与信号传导
CD4和CD8分别是MHC-II类或MHC-I类分子
的受体，可加强和稳定T细胞表面TCR与抗原呈 递细胞或其它靶细胞表面非己抗原肽-MHC分子 复合物的结合，并有助于TCR-CD3信号传递。
CD2可与绵羊红细胞（SRBC）结合，故又称绵 羊红细胞受体（E受体）。 E花环试验: 测定外周血T细胞总数
外周血淋巴细胞 + SRBC
T淋巴细胞CD2-多个SRBC形成致密花环
计数外周血T细胞总数
（2）CD3：
表达于全部T细胞表面 T细胞表面标志 由γ、δ、ε、ζ和η五种链组成的跨膜多肽
第十五章
免疫细胞标志和功能检测技术
白杨娟
华西医院实验医学科临床免疫实验室
中枢免疫器官：胸腺、骨髓 免疫器官 外周免疫器官：淋巴结、脾脏等
免
疫
参与免疫应答或与
免疫细胞 免疫应答有关的各
淋巴细胞 单核巨噬细胞
系
种细胞
其他免疫细胞
统Hale Waihona Puke 免疫分子Ig、补体、细胞因子、黏附分 子、神经递质、CD抗原等
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第三节 抗原提呈细胞的表面标志
抗原提呈细胞的表面标志
单核-吞噬细胞的典型的表面标志是CD14。 人成熟DC的主要特征表面标志为CD1a、CD11c和CD83 ，但不表达单核-吞噬细胞、T细胞、B细胞和NK细胞的典 型的表面标志。
二、B细胞表面标志
CD19、CD20、CD21、CD22和CD23等。 以CD5为标志结合CD19或CD20可将B细胞分为B1（ CD19+CD5+）和B2(CD19+CD5-)两个亚群。
三、NK细胞表面标志
NK细胞表面至少存在CD2、CD16、CD56、CD69、CD94 、CD96、CD158a、CD159a、CD161和CD244等多种抗原。
荧光激活细胞分离仪分离法
第二节 淋巴细胞标志及亚群分类
一、Ｔ细胞表面标志及亚群
CD3+CD4+CD8-辅助性Ｔ细胞（help T cell,Th） CD3+CD4-CD8+细胞毒性Ｔ细胞（cytotoxic T cell,Tc or CTL） CD4+CD25+ Foxp3+调节性Ｔ细胞（regulatory T cell,Tr or Treg）
体内试验
特异性抗原皮肤试验 PHA皮肤试验
第五节 其它免疫细胞功能检测技术
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
吞噬细胞功能
趋化 吞噬 胞内杀灭作用
一、趋化功能检测
滤膜渗透法（Boyden 小室法）
二、白细胞吞噬功能的检测
吞噬率(%) 吞噬细菌的白细胞数 100 计数的白细胞数
三、杀菌能力的检测
白细胞＋菌液
37℃培养
第六节 免疫细胞功能检测的临床应用
反映机体免疫功能状态。 肿瘤、免疫缺陷病等疾病的诊断和疾病预后监 测。 组织器官移植后对受者的细胞免疫学功能监测 则有利于排斥反应的早期发现，以便及时采取有效 措施。
本章小结
淋巴细胞并不是功能单一的群体，但其在光学显微镜 下的形态基本是一样的，因此要对其进行进一步的分类和 观察就不能采用形态学的方法，而要依靠对其表面标志的 检测。
定时取定量菌液培养
计算菌落数
四、氮唑蓝(NBT)还原试验
原理
中性粒细胞杀菌 耗能
四氮唑蓝(淡黄色) 代谢 生成H+
操作
抗凝血+NBT应用液 温育 推片
甲簪(蓝黑色) 瑞士复染
五、巨噬细胞功能检测
(一)炭粒廓清试验 正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90%炭粒，脾 巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒。据此给小鼠定量静脉 注射印度墨汁(炭粒悬液)，间隔一定时间反复取静 脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中炭粒被廓 清的速度，判断巨噬细胞的功能。 (二)吞噬功能检测 巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的吞噬功 能，常用鸡红细胞(CRBC)、白色念珠菌、酵母细胞 等作为吞噬颗粒，用斑蟊敷贴法收集人巨噬细胞或 从腹腔渗出液获得鼠巨噬细胞。
重点提示
外周血单个核细胞分离 淋巴细胞的分离 T、B细胞和T细胞亚群的分离
细胞分选和基本原理
细胞分选和基本原理 不同细胞密度不同 不同细胞表面生物学特性不同 不同细胞表面分化抗原不同
不同细胞密度不同
人的红细胞密度为1.093 粒细胞密度为1.092 单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的密度为1.0761.090
第四节 淋巴细胞的功能检测
T淋巴细胞增殖试验
原理：
淋巴细胞
刺激物
DNA合成
分化
母细胞
细胞变大 细胞浆扩大 核染色质疏松 核仁明显
2. 淋巴细胞转化的刺激物
非特异性刺激物： PHA ------ T细胞 ConA ------- T细胞 PWM ------- T、 B细胞 LPS ------- B细胞 特异性刺激物： 异种抗原 同种组织抗原
利用细胞表面标志可以实现对各类细胞的计数。
本章小结
免疫细胞功能试验包括体内和体外试验。 免疫细胞功能体外试验主要根据免疫细胞的增殖活性 、分泌活性和杀伤活性等特性而进行实验设计。
本章小结
吞噬细胞功能检测，方法有趋化功能检测、吞噬和杀 菌功能测定等。
了解方法学基本原理，可举一反三，根据需要选择或 设计相应试验。
用1.077±0.001的分层液可将细胞分离
密度梯度离心(Ficoll)离心
细胞表面分化抗原（CD抗原）
适用于T、B细胞的分离 已知CD抗原细胞亚群的分离 未知CD抗原细胞亚群的分离（阴性分选）
不同细胞谱系，不同细胞分化阶段，细胞表面CD抗原不同
磁珠大小可以选择
免疫磁珠法细胞分选过程
第一章 血液标本采集与处理
临床免疫学检验技术
第十五章 免疫细胞标志和功能检测技术
刘辉
目录
第一节 免疫细胞的分离 第二节 淋巴细胞标志及亚群分类 第三节 抗原提呈细胞的表面标志 第四节 淋巴细胞的功能检测 第五节 其它免疫细胞功能检测技术 第六节 免疫细胞表面标志和功能检测的临床应用
第一节 免疫细胞的分离