类风湿因子(RF)测定标准操作程序SOP文件
上海捷门生物技术有限公司RF检测试剂盒说明书
上海捷门生物技术有限公司RF检测试剂盒说明书
类风湿因子（RF）科研检测试剂盒组成结构：
1、血清：操作过程中避免任何细胞刺激。
使用不含热原和内毒素的试管。
收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。
1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
1000×g离心10分钟，取上清液。
5、类风湿因子（RF）科研检测试剂盒保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。
尽可能的不要使用溶血或高血脂血。
如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。
不要在37℃或更高的温度加热解冻。
应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
类风湿因子（RF）科研检测试剂盒注意事项
1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
2. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
3. 一次加样时间X好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线，X好做复孔。
5. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请
X后乘以稀释倍数。
6. 在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
7. 底物请避光保存。
8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
实验二、ASO、 RF的检测(精)
与胶乳颗粒结合成致敏颗粒，直接与血清中相应
抗体（RF、ASO）发生凝集反应。
变性IgG（Ag） 胶乳颗粒 RF（Ab） ASO（Ab） 间接凝集试验
链球菌溶血素“O”（Ag）
间接凝集试验
二、试剂及器材
RF胶乳试剂盒（RF胶乳试剂、阴/阳性对照等）
ASO胶乳试剂盒（ASO胶乳试剂、阴/阳性对照等） 待检血清，加样枪，TIP头，废物杯（84消毒液） 等。
间接凝集试验
1
2
3
RF
4
-
+
1、标记2、加血清（20源自μl）、阴阳性对照（1d）3、加胶乳试剂（1d）
4、观察结果
四、结果判断
阴性（-）：无凝集 阳性（+）：凝集 本次实验结果
待检血清RF___，ASO___。
间接凝集试验
五、注意事项
1.使用前摇匀试剂，无肉眼可见的絮状物出现，方 可使用； 2.加试剂和阴、阳性对照，保证液滴大小一致（约 50 μl ）； 3.离心获得新鲜血清标本，贮存于2-8℃，48h内使 用，时间过长须冰冻贮存； 4.阴阳性对照经检测HBsAg\HCV\HIV均为阴性，但 仍须像病人样品一样小心处理； 5.不同批号试剂盒中的胶乳液，阴阳性对照不能混 用； 6.正确使用移液枪（看视频）。
实验二
ASO/RF的检测
间接凝集反应—间接凝集试验
主讲：胡荣
RF （类风湿因子）：一种抗变性IgG的抗体。
ASO （抗链球菌溶血素“Ｏ”）：抗链球菌溶 血素“O”的抗体。
变性IgG（Ag） 链球菌溶血素“O”（Ag） RF（Ab） ASO（Ab）
间接凝集试验
一、原理
羧化聚苯乙烯胶乳颗粒具有很强的吸附蛋白 质的能力，借此将抗原（变性IgG、溶血素“O”）
实验二、ASO、 RF的检测(精)
与胶乳颗粒结合成致敏颗粒，直接与血清中相应
抗体（RF、ASO）发生凝集反应。
变性IgG（Ag） 胶乳颗粒 RF（Ab） ASO（Ab） 间接凝集试验
链球菌溶血素“O”（Ag）
间接凝集试验
二、试剂及器材
RF胶乳试剂盒（RF胶乳试剂、阴/阳性对照等）
ASO胶乳试剂盒（ASO胶乳试剂、阴/阳性对照等） 待检血清，加样枪，TIP头，废物杯（84消毒液） 等。
间接凝集试验
间接凝集试验
三、操作
1.冰箱中取出试剂，核对阴、阳性对照，平衡至室温； 2.准备所需反应孔（3孔:标本\阴性\阳性），标记； 3.用移液枪在反应孔中加入20 μl（RF）或50 μl
（ASO）血清，阴/阳性对照孔分别加阴阳性对照液
1d；
4.各反应孔加1d胶乳试剂（用前颠倒混匀）；
5.轻摇混匀，2min观察结果。
实验二
ASO/RF的检测
间接凝集反应—间接凝集试验
主讲：胡荣
RF （类风湿因子）：一种抗变性IgG的抗体。
ASO （抗链球菌溶血素“Ｏ”）：抗链球菌溶 血素“O”的抗体。
变性IgG（Ag） 链球菌溶血素“O”（Ag） RF（Ab） ASO（Ab）
间接凝集试验
一、原理
羧化聚苯乙烯胶乳颗粒具有很强的吸附蛋白 质的能力，借此将抗原（变性IgG、溶血素“O”）
间接凝集试验
1
2
3
RF
4
-
+
1、标记
2、加血清（20 μl）、阴阳性对照（1d）
3、加胶乳试剂阴性（-）：无凝集 阳性（+）：凝集 本次实验结果
待检血清RF___，ASO___。
间接凝集试验
五、注意事项
类风湿因子(RF)测试：原理,步骤,解释和临床意义
类风湿因子（RF）测试：原理，步骤，解释和临床意义类风湿因子（RF）是与个体自身免疫球蛋白反应的自身抗体。
这些抗体通常针对人IgG的Fc片段。
RF已与三种主要的免疫球蛋白类别相关：IgM，IgG和IgA。
在这些中，最常见的是IgM和IgG。
关节间隙中免疫复合物的形成导致补体的活化和破坏性炎症，从而引起类风湿关节炎（RA）如其名称所示，RF特别适用于类风湿关节炎的诊断和监测。
类风湿关节炎（RA）是一种慢性炎症性疾病，主要影响关节和关节周围组织。
在诊断出类风湿关节炎的病例中，有60-80％的人检出了类风湿因子。
但是，有时在系统性红斑狼疮（SLE）患者的血清中和某些非风湿性疾病中也可以检测到。
在正常的老年人口中也可以观察到升高的值。
测试原理有许多方法可用于测试RF。
最常用的血清学方法是基于乳胶凝集试验。
由于RF是针对IgG分子Fc部分的IgM类抗体，因此可以通过其凝集涂有IgG分子的乳胶颗粒的能力来检测。
使用的试剂是聚苯乙烯胶乳颗粒在甘氨酸盐水溶液中的悬浮液，pH值为8.6±0.1，并涂有人丙种球蛋白。
定性方法程序1. 将所有试剂和标本置于室温。
2. 将一滴阳性对照和40ul患者血清分别放入幻灯片上的圆圈中。
3. 轻轻地在每个要测试和控制的样品圆上添加一滴RF乳胶试剂。
4. 使用单独的涂药棒/搅拌棒将反应混合物散布在特定区域的整个区域。
5. 在旋转摇床上将载玻片前后倾斜2分钟，使混合物缓慢旋转。
6. 2分钟后在明亮的人造光下观察凝集。
解释胶乳颗粒的凝集被认为是阳性反应，表明类风湿因子的存在处于可检测的显着水平。
阳性结果：乳胶颗粒悬浮液会在两分钟内发生凝集，表明RF水平超过18 IU / ml。
阴性结果：乳胶颗粒悬浮液在两分钟内没有凝集。
半定量法1. 使用等渗盐水以定性方法1：2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：64、1：128等方式制备阳性样品的系列稀释液，如下所示：1. 对于每个要测试的样品，将100 µL的0.9％盐水加入1至5的试管中。
检验科生化类风湿因子RF测定的标准操作规程
检验科生化类风湿因子测定的标准操作规程【目的】体外检测血清类风湿因子(RF)含量。
【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯，应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、检测原理类风湿因子试剂是大小均一的聚苯乙烯乳胶颗粒悬液，颗粒表面包被有抗人γ球蛋白，样本中类风湿因子与之结合后，发生凝聚反应，并产生浊度改变。
该浊度与样本中类风湿因子浓度成正比。
通过测定600nm处吸光度值的变化，即可测得样本中类风湿因子的浓度。
二、试剂1.试剂本科使用上海复星长征医学科学有限公司RF试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：试剂1（R1）叠氮化钠 0.1%磷酸盐缓冲液 13 mmol/L试剂2（R2）叠氮化钠 0.1%抗人γ球蛋白致敏胶乳颗粒抗原2.校准要求2.1校准品：使用与试剂配套使用的复星长征校准品对测定进行校准。
2.2校准间隔2.2.1试剂批号变更时，使用与试剂配套使用的复星长征校准品对测定进行校准后再对临床病人样本进行测定。
2.2.2室内质量控制出现问题时使用与试剂配套使用的复星长征校准品对测定进行校准并确认问题得到解决后方可对临床病人样本进行测定。
类风湿实验报告
一、摘要本研究旨在通过对患者进行类风湿因子（RF）检测，分析其临床意义，为临床诊断和治疗提供依据。
本次实验共检测了100例疑似类风湿关节炎患者的血清样本，通过ELISA法检测RF水平，结合临床表现及实验室其他指标，对类风湿关节炎进行诊断和鉴别诊断。
二、实验目的1. 通过检测类风湿因子（RF）水平，为临床诊断类风湿关节炎提供依据。
2. 分析RF检测结果与其他实验室指标的相关性，为临床诊断提供参考。
3. 探讨RF检测在类风湿关节炎鉴别诊断中的作用。
三、实验方法1. 样本收集：选取100例疑似类风湿关节炎患者，收集其血清样本，并记录患者的一般资料、临床表现及实验室检查结果。
2. 试剂与仪器：采用ELISA法检测RF水平，所用试剂为美国Biolegend公司生产的RF检测试剂盒。
仪器包括酶标仪、洗板机、移液器等。
3. 实验步骤：（1）按照试剂盒说明书进行操作，配制工作液。
（2）将血清样本和标准品分别加入相应的孔中，进行孵育。
（3）加入酶标抗体，再次孵育。
（4）加入底物，进行显色反应。
（5）终止反应，测定吸光度（OD）值。
4. 数据分析：采用SPSS 22.0软件对实验数据进行统计分析，比较不同组别RF水平及与其他实验室指标的相关性。
四、结果1. 类风湿因子（RF）检测结果：100例疑似类风湿关节炎患者中，RF阳性率为60%，其中IgM型RF阳性率为50%，IgG型RF阳性率为30%，IgA型RF阳性率为20%。
2. RF水平与其他实验室指标的相关性：（1）RF水平与红细胞沉降率（ESR）呈正相关（r=0.78，P<0.01）。
（2）RF水平与C反应蛋白（CRP）呈正相关（r=0.65，P<0.01）。
（3）RF水平与抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP）呈正相关（r=0.45，P<0.05）。
3. 类风湿关节炎诊断与鉴别诊断：（1）根据RF检测结果，结合临床表现及实验室其他指标，共确诊类风湿关节炎患者40例。
血清类风湿因子(RF)的检测
血清类风湿因子(RF)的检测1.目的规范类风湿因子(RF)检测试验，确保检测结果准确性和重复性。
2．范围本操作规程适用于生化室工作人员、实习人员、进修人员的操作前培训。
3.术语4．测定原理样本中RF与胶乳颗粒超敏化的变性的人IgG抗体反应，出现凝集反应，在波长660nm处检测其吸光度的变化，其变化程度与样本中的RF含量成正比。
5. 标本采集与处理5.1标本类型：标本最好不要溶血。
留取标本后请尽快分离血清/血浆。
5.2标本稳定性：血清标本在2-8℃稳定48天,或-20℃可稳定6个月。
6. 试剂6.1试剂：本科使用金斯尔试剂盒，即用式液体试剂。
试剂内主要成分如下：规格: R1 3×20ml R2 1×20ml6．2试剂准备试剂为液体双试剂，开瓶即可使用。
6．3试剂稳定性原装试剂在2～8℃避光保存，稳定期12个月。
试剂开瓶载机2～8℃稳定28天。
7.仪器参数设定AU2700参数设定：金斯尔试剂仪器参数具体参加试剂厂家提供的相应仪器的参数说明书.8．校准：具体参见临床生化校准程序8.1 校准条件：8.1.1仪器光路系统经过光路保养或更换光源等重要部件后。
8.1.2仪器经过大保养后。
8.1.3挪动仪器的安装地点。
8.1.4更换试剂批号。
8.1.5室内质控失控。
8．2 AU2700金斯尔试剂系统的校准：8.2.1 准备：金斯尔配套校准物.8.2.2 保存和稳定性：原校准品在2～8℃保存至有效期。
8.2.3保存位置：2号冰箱。
8.2.4操作步骤：蓝色样本架的1号位置放蒸馏水；黄色样本架的相应位置放定标液→仪器主画面[USER] →[Calibration] →[选择校准项目]→[START]→[YES]。
9．室内质控及失控纠正：见临床生化室内质控程序9．1质控物来源：柏乐液体质控品(批号:45612/45613)。
9．2质控物储存条件及准备：-15～-20℃保存至有效期，从低温冰箱取出后室温平衡30分钟。
类风湿因子液体试剂盒(免疫透射比浊法)使用指南
本试剂盒用于体外定量测定人血清或血浆类风湿因子。
【产品信息】货号试剂盒规格170229910021 试剂1 5×25ml＋试剂2 1×25ml 170229910730 试剂1 4×20ml＋试剂2 2×8ml 170209910059 5×1ml TruCal RF (类风湿因子校准品)5个不同浓度水平的校准品【摘要】类风湿因子(RF)是一类自身抗体，包括所有类型的免疫球蛋白。
它们是抗变性或聚合IgG分子Fc片段的抗体[1]。
诊断所检测的RF主要是IgM类RF，用来检出各种类风湿疾病，是炎症的起源[2]。
大约70％～80%的类风湿性关节炎(RA)患者RF为阳性，但是并不特异，因为RF浓度的升高还出现在非类风湿疾病中。
在无RA临床症状的高龄人群中，阳性率达到大约10%[3]。
检测RF为鉴别诊断风湿疾病提供了重要的信息[4]。
另外，RA中的高浓度RF值常和疾病的进行性临床发展有关。
但是RF的阳性结果必须结合临床或其他检验结果予以证实。
【方法】免疫透射比浊终点测定法。
【原理】使用热聚合IgG和样品中的类风湿因子进行抗原-抗体反应，形成抗原-抗体复合物，进行透射比浊终点测定。
【试剂】在测定时的各组分和浓度试剂1（R1）：磷酸缓冲液pH 7.4 40 mmol/L试剂2（R2）：热聚合人IgG 适量试剂稳定性与贮存试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻！注意事项1. 试剂中含叠氮钠（0.95g/L），不可入口，避免接触皮肤及粘膜。
2. 应采取必要的预防措施使用试剂。
废液处理参照各地方法规要求。
试剂准备试剂为即用式。
未提供的实验所需物品9 g/L氯化钠溶液一般的实验室仪器设备【标本】血清，肝素或EDTA血浆。
不要使用含氟化钠的血样收集瓶。
稳定性：20-25℃保存可稳定1天2-8℃保存可稳定3天-20℃保存可稳定4周不可使用已被污染的标本。
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5仪器
ROCHE MODULAR P或日立7060生化分析仪。
6操作
见ROCHE MODULAR P生化分析仪作业指导书。
7参考范围
1-14IU/mL。
8线性范围
本法线性范围为7-120IU/mL，不准确度允许范围 ±3SD，不精密度CV=4.25%，灵敏度为2.4IU/ml。
9注意事项
9.1胶乳试剂在使用前应摇匀。
9.2血清标本出现溶血、脂血或黄疸的干扰情况参见抗干扰能力。
9.3仅应用于体外诊断。
10抗干扰能力：
10.1标准：回收率在90％－110％之ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ。
10.2黄疸：黄胆指数达到60时不会有明显干扰。（直接和间接胆红素浓度约为60mg/dl）
10.3溶血：溶血指数达到1000时不会有明显干扰。（血红素浓度约1000mg/dl）
10.4脂血：乳糜指数达到1000时不会有明显干扰。（甘油三酯浓度约为2000mg/dl）
10.5 RF的浓度低于6000mg/dl时不会有HOOK效应。
11临床意义
RF是抗变性IgG-FC片段的自身抗体。在诊断类风湿性关节炎时检测RF是非常关键的，是阳性率最高的指标之一。另外在其它的类风湿炎症及非类风湿疾病中也可见RF，皮肌炎、SLE、其他病毒、细菌感染炎症时也增高。在临床上大于60岁的老人也可查出RF。
4.3质控物
来源：ROCHE配套质控
其它适合的质控品
贮存条件：置2-8℃冰箱至有效期。
准备：直接使用。
质控间隔时间及限制：应视不同地区及各自实验室情况而定。质控结果应在限定的范围之内，如果超出范围，实验室应根据情况采取措施。
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-39
类风湿因子(RF)测定
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-39
类风湿因子(RF)测定
版序：ABCD
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1测定方法
免疫比浊法
2测定原理
血清类风湿因子（RF）与试剂中的结合由抗RF抗体的人体γ-球蛋白的胶乳颗粒相结合，与之发生凝集形成不溶性免疫复合物，RF的浓度与胶乳颗粒的凝集形成的浊度成正比。
典型的定量检测RF的程序是通过IgG型致敏的羊的红细胞与乳胶颗粒发生凝剂。罗氏RF测定基于加入乳胶后的增强的凝集反应。
3标本
血清及肝素-Li, EDTA抗凝血浆,处理方法见标本处理程序。
稳定性：20－25℃24小时
4－8℃3天
-20℃4周
4试剂
4.1试剂
来源：ROCHE配套试剂（详见试剂说明书）。
贮存条件及稳定性：未打开试剂盒：2－8℃储存至效期末
R1：打开后机上稳定90天
R2：打开后机上稳定90天
准备：直接使用。
4.2校准物
来源：ROCHE配套校准物，符合WHO标准64/2,具体如下：
S1：0.9％的NaCl
S2-6：RF定标液(货号：2172828)
贮存条件：校准物在2-8℃保存可保存至有效期。
准备:直接使用。
定标频率：A试剂批号更换B由质控结果决定