常用溶液的配制
溶液配置

实验常用试剂配置1.铜标准贮备溶液:称取1.000±0.005g金属铜(纯度99.9%)置于150ml烧杯中,加入20ml1+1硝酸,加溶解后,加入10ml1-1硫酸并加热至冒白烟,冷却后,加水溶解并转入1L容量瓶中,用水稀释至标缓。
此溶液每毫升含1.00mg铜。
2.铜标准溶液:吸取5.00ml铜标准贮备溶液于1L容量瓶中,用水稀至标线。
此溶液每毫升含5.0μg铜。
3.二乙基二硫代氨基甲酸钠0.2%(m/v)溶液:称取0.2克二乙基二硫代氨基甲酸钠三水合物(C5H10NS2Na •3H2O,或称铜试剂cupral)溶于水中并稀释至100ml,用棕色玻璃瓶贮存,放于暗处可用两星期。
4.EDTA-柠檬酸铵-氨性溶液:取12g乙二胺四乙酸二钠二水合物(Na-EDTA•2H2O)、2.5g柠檬酸铵[(NH4)3•C6H5O7],加入100ml水和200ml浓氨水中溶解,用水稀释至1L,加入少量0.2%二乙基二硫代氨基甲酸钠溶液,用四氯化碳萃取提纯。
4.1EDTA-柠檬酸铵溶液:将5g乙二胺四乙酸二钠二水合物(Na2-EDTA•2H2O)20g柠檬酸铵[(NH4)3•C6H5O7]溶于水中并稀释至100ml,加入4滴甲酚红指示液,用1+1氨水调至PH=8~8.5(由黄色变为浅紫色),加入少量0.2%二乙基二硫代氨基甲酸钠溶液,用四氯化碳萃取提纯。
5.氯化铵-氢氧化铵缓冲溶液将70g氯化铵(NH4Cl)溶于适量水中,加入570ml浓氨水,用水稀释至1L。
6.甲酚红指示液0.4g/L:称取0.02克甲酚红(C21H18O5S)溶于50ml195%(v/v)乙醇中。
7.碘溶液C=0.05mol/L:称12.7g碘片,加到含有25g碘化钾+少量水中,研磨溶解后用水稀释至1000mL。
8.丁二酮肟[(CH3)2C2(NOH)2]溶液5g/L:称取0.5g丁二酮肟溶解于50mL浓氨水中,用水稀释至100mL9.丁二酮肟乙醇溶液,10g/L:称取1g丁二酮肟,溶解于100mL乙醇(3.4)中。
溶液的配制知识点总结

溶液的配制知识点总结一、实验室常用的溶液配制方法1. 一般常用的溶液配制方法有称量法、容量法、稀释法和溶解法等。
2. 称量法是以称量原料或溶质的固体质量为基础进行的配制方法。
一般是先称取固体溶质,然后溶解在适量水中,最后通过加水至所需体积。
称量法适用于精确配制浓溶液,如标准溶液。
3. 容量法是将一定体积的液体容器作为固定标准,向其中加入一定的溶质质量,配制所需浓度溶液。
容量法适用于精确配制稀溶液和标准溶液。
4. 稀释法是将浓溶液通过加入适量的溶剂稀释至所需浓度的溶液。
稀释法适用于大容量的常用溶液的制备。
5. 溶解法是将一定物质溶解在一定量的溶剂中,调整浓度以得到所需的溶液。
溶解法适用于一些易溶于水的化合物,如盐酸、硫酸等。
二、溶液配制中的注意事项1. 必须使用准确的称量器具和标定过的量筒、瓶口样品瓶,避免实验操作中的误差,以获得准确的结果。
2. 在称量试样时,应使用分析天平,掌握其精确误差,保证称取样品的准确性。
3. 在配制溶液时,应按配制的要求逐步加入试剂,并用加热或者搅拌等方法辅助溶解(如需)。
4. 在溶解固体试样时,应用少量溶剂先将试样湿润,然后加入余量溶剂继续溶解,以达到均匀溶解的效果。
5. 配制标准溶液时,必须使用精密的电子天平和标定过的量筒,严格按照标准操作步骤进行。
6. 在配制酸碱溶液时,要注意操作安全,必须佩戴防护装备,避免酸碱飞溅伤人。
7. 配制有毒、易挥发、易揮发、强臭、强酸、强碱等有害试剂时,应准备好防护措施,如通风设施、防护服等。
三、常用的溶液计算方法1. 浓度的计算:溶液的浓度通常用摩尔浓度(M)或质量浓度(g/L)表示,计算公式为C=n/V或C=m/V。
2. 溶液的稀释计算:浓度为C1的溶液,向其中加入V1体积的溶剂后,溶液的浓度变为C2,按C1V1=C2V2进行稀释计算。
3. 溶质的质量计算:获得溶液质量m,浓度C,溶液体积V后,可以按m=C×V进行溶质质量的计算。
溶液的配制

1、硝酸15%
量取15ml浓硝酸稀释100ml刻度混匀
2、硫酸(1+3)
量取100ml浓硫酸缓慢注入300ml水中
3、硝酸(1+1)
一份硝酸和一分水混匀
4、钼酸铵20%
称固体钼酸铵20克溶解于水中稀释至100ml
5、氢氧化钾溶液20%
称固体氢氧化钾20克溶解于水中稀释至100ml
6、三乙醇胺(1+2)
一份三乙醇胺2分水混匀
7、酒石酸5%ml
称取酒石酸5克,以水溶解并稀释至100ml
8、钼酸铵5%
称取钼酸铵5克,以水溶解过滤并稀释至100ml
9、酒石酸钾钠5%
称取酒石酸钾钠5克,以水溶解并稀释至100ml
10、铜试剂1%
称取二乙基二硫代氨基甲酸钠(铜试剂)1克,以水溶解并稀释至100ml
11、氯化铵10%
称固体氯化铵10克,以水溶解并稀释至100ml
12、洗液
浓硝酸65ml、水5ml、固体K2Cr2O72克配一份
13、氢氧化钠标准溶液0.1424mol/L
配制,称取氢氧化钠5.696g于500ml塑料烧杯中加水300ml,于冷水盆中不断搅拌使之溶解,加入氢氧化钡(10%)1 ml用水稀释至1000 ml,移入塑料壶中,摇匀,静止,待碳酸钡沉淀下沉后,虹吸上层清液于另一塑料瓶中。
标定滴定度后使用
14、EDTA标准溶液0.01mol/L
配制,称取EDTA3.7226g置于300ml烧杯中,加水适量溶解,移入1000ml容量瓶中,冲刻度摇匀。
15、硝酸钾+乙醇洗液
10g硝酸钾加90ml水溶解后,加无水乙醇10ml摇匀备用
16、混合指示剂
中性红0.05%+亚甲基蓝0.05%(乙醇溶液)。
配制溶液的方法有

配制溶液的方法有
配制溶液的方法主要有以下几种:
1. 固体溶解法:将固体溶质加入到溶剂中,通过搅拌和加热使其溶解。
这是最常用的配制溶液的方法,比如将盐加入水中配制盐水。
2. 溶液稀释法:当需要调整溶液浓度时,可以通过溶液稀释的方法进行。
将已有的浓溶液取出一部分,加入适量的溶剂使其稀释,从而得到所需浓度的溶液。
3. 液体混合法:将两种或多种溶液混合在一起,通过计算混合前后的溶质浓度和容积,可以得到所需浓度的溶液。
这种方法常用于配制某些特定浓度的试剂液。
4. 稀酸稀碱稀化法:将浓度较高的酸、碱加入到大量的水中,通过稀化的方法得到所需浓度的酸碱溶液。
这种方法常用于配制实验室中的常用酸碱溶液。
5. 水合物溶解法:有些化合物具有结晶水,通过将结晶体加入到水中,可以得到溶解度较高的溶液。
这种方法常用于配制一些含水合物的溶液。
在配制溶液时,需要注意以下几点:
1. 需要准确称量溶质和溶剂,以保证溶液浓度的准确性。
2. 溶质的溶解度和溶剂的性质需要考虑,确保溶解度足够高,否则溶质不易溶解或溶液浓度无法满足需求。
3. 在溶质溶解过程中,可以适当加热或搅拌促进其溶解,但需注意加热时避免溶液溢出或溶质分解。
4. 配制过程中,需要注意实验室安全,避免对身体和环境造成伤害。
总之,配制溶液的方法多种多样,具体选择哪种方法要根据实际情况和需求确定。
在操作过程中,需要严格控制溶质和溶剂的量,充分考虑溶液的浓度和溶解度,以确保得到所需浓度的溶液。
同时还需注重实验室安全,遵守操作规范,保证人身安全和环境保护。
常用溶液的配置

试剂配制(1)液体LB培养基(-) 1000ml蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g去离子水溶解并定容至1000ml高压灭菌,4℃保存。
(2)氨苄青霉素溶液(100mg/ml) 10ml氨苄青霉素1g去离子水溶解并定容至10ml过滤除菌,-20℃分装保存。
(3)卡那霉素溶液(100mg/ml) 10ml卡那霉素1g去离子水溶解并定容至10ml过滤除菌,-20℃分装保存。
(4)固体LB培养基(-) 1000ml蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g琼脂糖粉15g去离子水溶解并定容至1000ml高压灭菌后铺平板(6cm培养皿),冷却后4℃保存。
(5)含抗生素LB固体培养基1000ml固体LB培养基溶液1000ml高压灭菌,当培养基降温至50℃左右,加入终浓度为100Rg/ml的氨苄青霉素或100Rg/ml卡那霉素,并铺平板(6cm培养皿),冷却后,4℃保存。
(6)0.1M CaCl2溶液一制备感受态1000ml氯化钙11.099g去离子水溶解,定容至1000ml高压灭菌后4℃保存。
(7)0.1M MgCl2溶液一制备感受态1000ml氯化镁9.521g去离子水溶解,定容至1000ml高压灭菌后4℃保存。
(8)0.1M CaCl2-15%甘油溶液---制备感受态1000ml氯化钙9.521g50%甘油300ml去离子水溶解,定容至1000ml高压灭菌后4℃保存。
(9)50%甘油溶液100ml甘油50ml去离子水50ml(10)0.5M EDTA 溶液(PH=8.0) 500mlEDTA 93.05g去离子水溶解,NaOH调PH至8.0,定容至500ml。
(11)10%SDS 溶液100mlSDS 10g去离子水溶解,定容至100ml。
(12)5M乙酸钾溶液100ml5M乙酸钾49.07g去离子水溶解,定容至100ml,室温保存。
(13)1MTris-HCl 溶液(pH=8.0) 100mlTris 碱12.1g去离子水溶解,定容至100ml,浓盐酸调pH值至8.0,室温保存。
常用溶液的配制方法

常用溶剂的配制方法1、磷酸缓冲液:0、15M,pH=7、4磷酸缓冲液:KH2PO4:2、041g+100ml水K2HPO4·3H2O:10。
3g+300mL水两液混合即成400mL,0、15M,pH=7、4的磷酸缓冲液0、2mol/L不同pH的磷酸缓冲液:先配制0。
2mol/L的磷酸二氢钾溶液和0。
2mol/L的磷酸二氢钾溶液,然后按下表配制:2、硼酸缓冲液0。
15M,pH=8、2硼酸缓冲液:四硼酸钠溶液:2g+35 mL水硼酸溶液:3。
246g硼酸+350 mL水两液混合即成700 mL,0、15M,pH=8、2的硼酸缓冲液0。
2 mol/L(硼酸根),不同pH的硼酸缓冲液:先配制0、2 mol/L的硼酸溶液和0、05 mol/L的四硼酸钠溶液,然后按下表配制:3。
甘氨酸-盐酸缓冲液:0、2 mol/L0。
2 mol/L甘氨酸溶液(15、01g/L)4。
柠檬酸缓冲液:0。
1mol/LC6H8O7·H2O:0。
1mol/L溶液为21。
01g/LNa3C6H5O7·2H2O:0、1mol/L溶液为29、41g/L5。
Tris-HCl缓冲液:0、1mol/L100mL0。
1mol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶液与一定量的0。
1mol/L盐酸混匀,可得0。
1mol/L,不同pH的缓冲液、200mL 0。
1MTris(2、42g)加入0、1M HCl 24mL→pH=9,0、1MTr is-HCl buffer6。
醋酸缓冲液:0。
2mol/L0、2mol/L醋酸钠:27、22g三水醋酸钠(无水的为16、4g)+1L水0。
2mol/L醋酸:11、55mL冰醋酸+1L水7。
碳酸缓冲液:0、1 mol/L(Ca2+、Mg2+存在时不得使用)0。
1 mol/LMES缓冲液:1。
921gMES+100mL水,pH=4、098、电泳溶液:电泳缓冲液:3gTris碱、14、4g甘氨酸和1gSDS溶于水中,调pH至8。
常用溶液的配制

常用溶液的配制一、常规溶液(一)1/15mol/L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution,PBS)甲液:1/15mol/L Na2HPO4溶液Na2HPO49.465g蒸馏水加至1000ml乙液:l/15mol/L KH2PO4溶液KH2P049.07g蒸馏水加至1000m1分装在棕色瓶内,于4℃冰箱中保存,用时甲、乙两液各按不同比例混合,即可得所需pH的缓冲液,见下表:pH 甲液ml 乙液mI pH 甲液ml 乙液mI5.29 5.595.916.24 6.47 6.64 2.55.010.020.030.040.097.595.090.080.070.060.06.816.987.177.387.738.0450.060.070.080.090.095.050.040.030.020.010.05.0(二)0.3%台盼兰染液称取台盼兰(Trypan blue)粉0.3克,溶于100ml生理盐水中,加热使之完全溶解,用滤纸过滤除渣,装入瓶内室温保存。
(三)0.5%酚红指示剂酚红0.5g0.1N(0.4%)NaOH 15ml双蒸水85ml将0.5克酚红置研钵中,缓漫滴加0.1NNaOH溶液边加边磨,并不断吸出已溶解的酚红液,直至全部溶解,然后加入85ml双蒸水,颜色为深红,经粗滤纸过滤后使用,室温保存。
(四)5.6%NaHCO3溶液称NaHCO35.6克,溶于100ml蒸馏水中,室温保存即可(如需要也可10磅15分钟高压灭菌,4℃冰箱保存)(五)10μg/ml秋水仙素秋水仙素lOmg生理盐水100ml装入茶色瓶中,为贮备液,4℃冰箱中保存。
甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。
(六)0.4%KCl-0.4%柠檬酸钠低渗液将0.4%KCl和0.4%柠檬酸钠两液等量混合即可,室温保存。
(七)2%柠檬酸钠称取柠檬酸钠2克,加100ml双蒸水即可,室温保存。
(八)0.2%次甲基兰染液称次甲基兰(Methylene blue)0.2克,加蒸馏水100ml,室温保存。
常用溶液配制

一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺(Spermidine): 溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性,须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾(potassium acetate):溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾(KCl):溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠(sodium acetate):溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三钠盐。
或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。
1mol/L HEPES:将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH调pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl:加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
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常用溶液的配制一、常规溶液(一)1/15mol/L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution,PBS)甲液:1/15mol/L Na2HPO4溶液Na2HPO4 9.465g蒸馏水加至1000ml乙液:l/15mol/L KH2PO4溶液KH2P04 9.07g蒸馏水加至1000m1分装在棕色瓶内,于4℃冰箱中保存,用时甲、乙两液各按不同比例混合,即可得所需pH的缓冲液,见下表:pH 甲液ml 乙液mI pH 甲液ml 乙液mI5.29 5.595.916.24 6.47 6.64 2.55.010.020.030.040.097.595.090.080.070.060.06.816.987.177.387.738.0450.060.070.080.090.095.050.040.030.020.010.05.0(二)0.3%台盼兰染液称取台盼兰(Trypan blue)粉0.3克,溶于100ml生理盐水中,加热使之完全溶解,用滤纸过滤除渣,装入瓶内室温保存。
(三)0.5%酚红指示剂酚红 0.5g0.1N(0.4%)NaOH 15ml双蒸水 85ml将0.5克酚红置研钵中,缓漫滴加0.1NNaOH溶液边加边磨,并不断吸出已溶解的酚红液,直至全部溶解,然后加入85ml双蒸水,颜色为深红,经粗滤纸过滤后使用,室温保存。
(四)5.6%NaHCO3溶液称NaHCO35.6克,溶于100ml蒸馏水中,室温保存即可(如需要也可10磅15分钟高压灭菌,4℃冰箱保存)(五)10μg/ml秋水仙素秋水仙素 lOmg生理盐水 100ml装入茶色瓶中,为贮备液,4℃冰箱中保存。
甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。
(六)0.4%KCl-0.4%柠檬酸钠低渗液将0.4%KCl和0.4%柠檬酸钠两液等量混合即可,室温保存。
(七)2%柠檬酸钠称取柠檬酸钠2克,加100ml双蒸水即可,室温保存。
(八)0.2%次甲基兰染液称次甲基兰(Methylene blue)0.2克,加蒸馏水100ml,室温保存。
(九)0.5%醋酸洋红(Aceio Carmine)染液洋红 lg醋酸 90ml蒸馏水 110ml将90ml醋酸加入110ml蒸馏水煮沸,然后将火焰移去,立即加入1克洋红,使之迅速冷却过滤,加饱和氢氧化铁(媒染剂)水溶液数滴,直到呈葡萄酒色。
室温保存。
加铁使洋红沉淀于组织而着色。
此染液室温存放时间越长效果越好,室温保存。
(十)1%甲苯胺兰(Toluidine blue)称取甲苯胺兰1克,加蒸馏水lOOml。
(十一)1/3000中性红染液取中性红(Neutral red)0.1克,加蒸馏水300ml。
室温保存。
(十二)Giemsa染液1.贮备液Giemsa粉 1g纯甘油 66ml甲醇 66ml先将Giemsa粉置于研钵中加少量甘油,充分研磨,呈无颗粒的糊状。
再将全部甘油加入,放入56℃温箱中2小时,然后加入甲醇,保存于茶色瓶中。
一般两周后使用为好。
2.工作液临用时将贮备液与pH6.8的磷酸缓冲液按照1:20混合。
(十三)埃利希(Ehrlich)苏木精染液苏木精 1.0g乙醇 50ml醋酸 5ml甘油 50ml硫酸铝钾 5g蒸馏水 50ml将苏木精溶于少量的乙醇中,再加醋酸并搅拌,以加速其溶解。
当苏木精溶解后将甘油加入并摇动容器,同时加入其余的乙醇;硫酸铝钾需研磨并加热,然后溶解于蒸馏水中,将其一滴滴地加入上边的溶液,并不断摇动,此液配好后,将瓶口用纱布盖好,置通风处,经常摇动以加速其成熟,成熟约需4周左右,成熟的染液为深红色。
二、细胞化学和细胞组分分离溶液(一)M一缓冲液眯唑(Imidazole) 3.404gKCI 3.7gMgCl2·6H2O 101.65mgECTA 380.35mgEDTA 29.224mg巯基乙醇 0.07ml甘油 297ml蒸馏水加至1000ml用lNHCl调pH至7.2室温保存。
(二)2%Triton X一100溶液量取2mlTriton X一100(聚乙二醇辛基苯基醚)液,加M缓冲液98ml即可。
(三)0.2%考马斯亮兰R-250染液甲醇 46.5ml醋酸 7.0ml考马斯亮兰 0.2g蒸馏水加至100ml(四)A.0.1%碱性固绿染液(pH8.0~8.5)1.0.1%固绿水溶液固绿(Fast green) 0.1g蒸馏水 100ml2.0.05%Na2C03溶液Na2C03 50mg蒸馏水 100ml用时按1:1体积混合即可。
B.0.1%酸性固绿染液(pH2.2)1.0.1%固绿水溶液。
2.mol/L×75盐酸液盐酸(比重1.19)0.109ml加蒸馏水至100ml用时按l:1混合。
(五)甲基绿一哌咯宁染液1.1mol/L醋酸缓冲液(pH4.8):(1)醋酸 17ml蒸馏水加至200ml(2)醋酸水 13.5g蒸馏水加至lOOml用时分别取两液40ml、60ml混匀即可。
2.甲基绿一哌咯宁(methyl green—Pyrcnln)5%哌咯宁水溶液 6ml2%甲基绿水溶液 6ml蒸馏水 16mllmol/L醋酸缓冲液 16mllmol/L醋酸缓冲液临用时才可加入染液中。
(六)Schiff试剂将碱性品红0.5克加入lOOml沸水,持续煮沸5分钟,并随时搅拌,待冷却到50℃时过滤到棕色瓶中,加1N HC11O毫升,冷却至25℃时加入1克NaHSO3,此时需很好的振荡,避光过夜。
次日取出(呈淡黄色)加0.25克活性炭剧烈振荡1分钟。
过滤后即得Schiff试剂。
避光低温保存。
(七)联苯胺混合液联苯胺(4.4 Diamino benzidine) 0.2g95%乙醇 lOOml3%过氧化氢 2滴此液临用时配制。
(八)l%番红水溶液番红(Safranin) 1.0g蒸馏水 100ml(九)1%SDS(十二烷基硫酸钠Sodium dodecyl sulfate,SDS)SDS 10g45%乙醇 100ml(十)1mol/LTris(三羟甲基氨基甲烷/盐酸缓冲液Trihydroxy methylaminomethane Tris/HCL)pH7.8 Tris 12.114g蒸馏水 lOOml先将Tris溶于少量蒸馏水,用HCI调pH至7.8,然后加水至100ml(十一)Ringer Solution氯化钠(冷血动物用0.65克) 0.9克氯化钾 0.042克氯化钙 0.025克蒸馏水 100ml(十二)淀粉肉汤培养基蛋白 2g淀粉 6g牛肉汤 100ml用10%NaHCO3调pH至7.0~7.2(十三)0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化钙溶液蔗糖 85.5g氯化钙 0.33g蒸馏水 1000ml(十四)1%詹纳斯绿B染液取詹纳斯绿(Janus green B)1.0g Ringer氏液100ml(十五)1%刚果红染液刚果红 1g蒸馏水 100ml(十六)Gomori硝酸铅作用液0.05mol/L醋酸缓冲液(pH5) lOOml0.6醋酸加蒸馏水200ml、取其 42ml醋酸钠1.36g加蒸馏水200ml,取其158ml共200mlB-甘油磷酸钠 2g醋酸铅 2g5%氯化镁 5ml以上作用液在临用时配制,最终在pH5~5.2,过滤使用。
(王世藩汇编)三、细胞培养和细胞融合溶液(一)0.01mol/LPBS(磷酸盐缓冲液Phosphate Buffer Saline,PBS)pH7.2。
0.2mol/L磷酸氢二钠液(甲液):NaH2PO4·12H2O 35.814g双蒸水加至500ml0.2mol/L磷酸二氢钠液(乙液):NaH2PO4·12H2O 15.601g双蒸水加至500ml取甲液36ml,乙液14ml和NaCl8.2克,加双蒸水至1000ml。
混匀待完全溶解分装,经高压灭菌后保存于4℃冰箱备用。
(二)50%PEG(聚乙二醇Polyethyleneglycol mwl500)称取0.5克PEG,用前放入试管中在酒精灯火焰上熔化,加入等量37℃予热的MEM培养液,混匀,保温在37℃水浴中待用。
(三)MEM培养液(含10%小牛血清)MEM培养液(日本制药株式会社) 9.4g双蒸水 1000mlNaHCO3 1.5g谷氨酰胺(L-glutamin) 0.292g56℃灭活30分钟的小牛血清110mlMEM粉末加水溶解后,用NaHCO3调pH到7.1(因在抽滤过程中pH升高0.2~0.3),然后加灭活的小牛血清和谷氨酰胺,待完全溶解后,立即用G6抽滤除菌,分装,置4℃冰箱保存备用。
(四)0.25%胰蛋白酶一0.02%EDTA混合消化液胰蛋白酶(Trypsin)粉 0.25gEDTA粉 20.0mg0.01mol/L PBS 100ml先用少量PBS溶解胰蛋白酶,然后将EDTA粉末和剩下的液体加入混合,置37℃水浴中1小时左右(待彻底溶解,液体呈透明为止),用G5抽滤,分装置4℃冰箱中保存。
(五)Hanks液1.原液甲NaCl 160gKCl 8gMgSO4·7H2O 2gMgCI2·6H2O 2g溶于800ml馏水中。
CaCl2(无水) 2.8g溶于100ml蒸馏水中。
将两种液体混合后,加水至1000ml用滤纸滤过,再加2ml氯仿防腐,置4℃冰箱备用。
原液乙Na2HPO4·12H2O 3.04gKH2PO4 1.2g葡萄糖 20.0g溶于800ml蒸馏水中,用滤纸过滤,然后加0.5%酚红80ml,再加水至1000ml,最后加入2ml氯仿防腐,置4℃冰箱备用。
2.使用液甲乙两液各1份,双蒸水18份,混匀分装包扎好瓶口,经10磅15分钟高压灭菌后置4℃冰箱中保存。
使用时用5.6%NaHCO3调pH值到所需要求。
(六)1640培养液(含lO%小牛血清)RPMI-1640粉 10.39g双蒸水加至1000ml通入适量的C02气体,边通入CO2边慢慢搅拌,使其(呈透明)完全溶解。
用NaHCO31.5克调pH值到7.2。
双抗1万u/ml 10ml灭活小牛血清 110ml混匀上述液体,立即用G6抽滤除菌分装,置4℃冰箱备用。
(七)青、链霉素溶液青霉素钠盐(40万u/瓶) 5瓶链霉素(100万u/瓶) 2瓶将两者溶于200ml0.9%的无菌生理盐水,分装小瓶,-30℃保存。
双抗在培养基中的终浓度为各lOOu为宜。
(八)二甲基亚砜诱导HL-60细胞分化使用的终浓度为1。
4%。
(九)BrdU溶液(200ug/m1)用无菌青霉素瓶,在室温下称取1.0mg,在无菌条件下加入灭菌生理盐水9.0ml,溶解,混匀,用黑纸包严,避光置冰箱冰格中保存。
最好用时现配。
(十)2×SSC溶液用分析天平称取氯化钠17.53克,柠檬酸钠8.82克溶于蒸馏水中,加蒸馏水至1000毫升。