基因芯片技术的应用现状及展望

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基因芯片技术的研究和应用

基因芯片技术的研究和应用

基因芯片技术的研究和应用近些年来,基因芯片技术得到了长足的发展,并且广泛应用于生物医学领域。

基因芯片技术能够快速、准确、方便地检测和分析大量基因,所以在各种生物学研究领域得到了广泛应用。

本文将重点介绍基因芯片技术的研究进展和应用情况,探讨其未来发展方向。

一、基因芯片技术研究现状基因芯片技术包括几种不同的研究方法,如 DNA板、 DNA片,还有融合基因芯片和转录因子芯片等。

这些技术可以用来快速检测和分析大量的基因,从而为研究生物学问题提供重要的信息。

1. DNA板DNA板是一种最早的基因芯片技术,它将大量的 DNA子贴在一块玻璃上,每个样本中的 DNA子具有不同的特征,可以用来进行大量的基因检测。

2. DNA片DNA片是一种新型基因芯片,它使用微小的 DNA段来检测和分析大量的基因片段,可以快速准确地检测和分析大量的基因。

3.合基因芯片融合基因芯片是一种新型的基因芯片技术,它具有独特的检测特性,可以快速准确地检测和分析基因表达量、基因组结构等。

4.录因子芯片转录因子芯片是一种特殊的基因芯片,它可以用来检测和分析不同细胞中的转录因子活性,为解析基因表达的分子机制奠定基础。

二、基因芯片技术应用情况基因芯片技术已经广泛应用于各种生物学研究领域,包括疾病诊断、药物发现和药物筛选等。

1.病诊断基因芯片技术可以快速准确地检测和分析大量的基因,因此在疾病诊断中被广泛应用。

目前,基因芯片技术可以用于癌症、心脏病、神经退行性疾病等的诊断,有助于准确诊断疾病、优化治疗方案,提高患者的治疗效果。

2.物发现和药物筛选基因芯片技术可以用来快速准确地测定药物的活性和毒性,可以评估药物的药效及其与疾病相关性,从而有助于药物发现和药物筛选。

三、基因芯片技术未来发展方向随着基因芯片技术的发展,未来将进一步完善和提高相关技术,以改善对基因的检测和分析效率,使其在疾病诊断、药物发现和药物筛选等生物学研究领域发挥更大的作用。

1.细化基因检测技术不同的细胞或组织中的基因表达会有所不同,因此需要精细化的基因检测技术来精准检测和分析基因的差异性。

基因芯片技术在疾病诊断中的应用前景

基因芯片技术在疾病诊断中的应用前景

基因芯片技术在疾病诊断中的应用前景章节一:引言基因芯片技术是一种应用领域广泛的先进生物技术,通过同时检测和分析特定基因的表达水平和序列变化,可以为疾病诊断提供宝贵的信息。

本文将探讨基因芯片技术在疾病诊断中的应用前景。

章节二:基因芯片技术简介基因芯片技术,也称为基因表达芯片技术,是一种快速高通量的基因检测平台。

它使用DNA或RNA的串联序列作为探针,将其固定在芯片上,并结合荧光标记等技术实现对特定基因的快速检测和定量分析。

基因芯片技术具有高通量、高灵敏度和高精确度等特点,可以在短时间内同时检测上百万个位点的基因信息。

章节三:基因芯片技术在肿瘤诊断中的应用前景肿瘤是世界范围内的重大健康问题,而基因芯片技术在肿瘤诊断中具有广阔的应用前景。

基因芯片技术能够检测肿瘤相关基因的表达水平和序列变化,帮助医生了解肿瘤的分子特征和发展机制,从而指导个性化治疗和预后评估。

例如,基因芯片技术可识别肿瘤标志物的表达水平,提供早期诊断和筛查肿瘤的手段;同时,基因芯片技术还可用于肿瘤分类、预后评估和治疗反应监测等领域。

章节四:基因芯片技术在遗传疾病诊断中的应用前景遗传疾病是由基因突变导致的疾病,其诊断和治疗一直是医学的难点。

基因芯片技术通过同时检测多个基因位点的突变情况,可以帮助医生快速准确地诊断遗传疾病。

例如,基因芯片技术可用于遗传性癌症的基因筛查和突变检测,帮助早期发现患者的遗传易感性,从而制定相应的预防和治疗策略。

此外,基因芯片技术还可以用于遗传疾病的婴儿筛查,提供早期干预和治疗的机会。

章节五:基因芯片技术在感染性疾病诊断中的应用前景感染性疾病是全球范围内的公共卫生问题,及时准确地诊断感染病原体对于控制和治疗感染性疾病具有重要意义。

基因芯片技术通过检测病原体的DNA或RNA序列,可以迅速鉴定病原体的种类和抗药性,为导向用药提供重要的参考。

例如,在临床上广泛应用的基因芯片技术通过检测呼吸道病原体的基因组,可以在几小时内快速确定病原体,辅助医生进行感染性疾病的诊断和治疗。

基因芯片技术的研究进展与前景

基因芯片技术的研究进展与前景

基因芯片技术的研究进展与前景
随着计算机技术的发展,生物学基因技术的计算机应用越来越广泛,具有重要的意义。

基因芯片技术在生物医学研究中发挥着重要的作用。

一、基因芯片技术研究进展
目前,基因芯片技术在生物学研究和医学诊断中已得到广泛应用,如RNA干扰(RNAi),基因组学,非编码RNA和基因表达研究等。

在基因组学研究中,基因芯片技术可用于检测多种物种的基因组序列,如细菌、植物和动物,从而为研究物种的基因表达提供依据。

此外,基因芯片技术还可以用于研究疾病基因序列和其他生物活性因子。

同时,基因芯片技术还被广泛用于临床诊断领域,以发现由特定基因突变引起的疾病,提高对患者疾病的诊断准确性,实现个体化治疗。

二、基因芯片技术的发展前景
综上所述,基因芯片技术已经大大改善了生物学研究和医学诊断,并得到广泛应用。

未来,基因芯片技术将在更多领域得到应用,其中的主要发展趋势如下:。

基因芯片技术研究进展

基因芯片技术研究进展

2、基因功能研究
基因芯片技术是研究基因功能的重要工具之一。国内的研究人员利用基因芯 片技术对多种人类器官和组织的基因表达谱进行了研究,如心脏、肝脏、肾脏等, 揭示了基因在不同组织中的表达差异和相互作用。此外,基因芯片技术也被应用 于研究基因突变和表观遗传学效应对基因表达的影响,为探索人类疾病的发病机 制提供了新的思路。
基因芯片技术研究进展
01 一、引言
目录
02
二、基因芯片技术现 状
03
三、基因芯片技术研 究进展
04
四、基因芯片技术的 应用
05 五、总结与展望
06 参考内容
一、引言
基因芯片技术,一种生物技术与微电子技术相结合的革命性产物,正在引领 着基因研究领域的新一轮飞速发展。基因芯片能同时对数以千计的基因进行检测 和分析,为科研人员提供了强大的工具,以便更好地理解基因功能、基因组调控 以及疾病机制等。本次演示将详细介绍基因芯片技术的发展现状、研究进展及其 在医学、农业和工业等领域的应用情况。
三、基因芯片技术的未来发展方 向
随着科技的不断发展,基因芯片技术将会在未来的生命科学领域中发挥更加 重要的作用。未来,基因芯片技术将会有以下发展方向:
1、高通量测序技术的融合:随着高通量测序技术的发展,基因芯片技术将 会与测序技术更加紧密地结合,实现更加快速、准确、高效的基因检测和分析。
2、多组学数据的整合:未来,基因芯片技术将会应用于多组学数据的研究, 如同时检测和分析基因组、转录组、蛋白质组等多组学数据,从而更全面地了解 生物体的生命活动和疾病发生发展机制。
在工业领域,基因芯片技术为生物技术的产业化提供了强有力的支撑。例如, 基因芯片可以用于检测和筛选能够产生特定酶或抗生素的微生物,为生物制药和 生物化工产业提供丰富的原料来源。此外,基因芯片还可以用于研究细胞工厂的 调控机制,提高细胞培养效率和产物的产量。

基因芯片技术的应用

基因芯片技术的应用

基因芯片技术的应用随着生物技术和基因研究的不断进展,基因芯片技术已经广泛应用于生物医学、农业、动植物繁殖、环境保护等领域。

本文将从基因芯片技术的原理、应用场景和前景展开阐述,探讨该技术的研究热点和发展趋势。

一、基因芯片技术的原理基因芯片是一种利用高通量技术同时检测成千上万个基因表达的工具。

它通过利用DNA技术将成千上万的基因DNA序列固定在玻璃芯片上,并可检测目标样本中RNA或cDNA的水平。

基因芯片技术主要包括以下步骤:1. 设计芯片:确定目标基因序列,利用计算机技术进行芯片设计,制备出针对目标基因甚至全基因组的芯片。

2. 样本制备:提取RNA或cDNA,并借助反转录技术将RNA 转化成cDNA,再对其进行扩增。

3. 杂交:采用特殊设备将目标样本中的cDNA标记为不同颜色的探针,与芯片表面的DNA序列杂交。

4. 扫描和分析:利用激光扫描装置对芯片表面进行扫描,测量复合体的强度,并进行统计和分析。

这样,我们就能够在一张小芯片上探测到成千上万个基因,分析并比较样本之间的差异,从而揭示出基因调控、信号传递和代谢途径等生物学特征。

二、基因芯片技术的应用场景基因芯片技术的应用范围极广,以下列举几种典型场景:1. 生物医学基因芯片技术在生物医学领域中主要用于诊断和治疗基因相关疾病。

例如,我们能够将基因芯片应用于肿瘤分型和分级、遗传性疾病的基因筛查、药物研发等方面。

此外,基因芯片技术还可以为个体化医学提供技术支持,为临床医生制定精准个体化治疗方案提供重要依据。

2. 农业基因芯片技术的应用在土地的病虫害监测、作物品种鉴定、转基因食品检测等方面具有重要意义。

例如,在生产实践中,农民们经常遭受由于病虫害带来的经济损失,而基因芯片技术能够帮助他们快速诊断设备,确定病虫害的种类和数量,从而更好地进行管理和防范。

3. 环境保护环境污染问题已经成为全球性的挑战,而基因芯片技术则为环境保护带来了新的手段。

例如,通过检测微生物的基因组DNA,我们可以了解大气、水环境以及土壤中的微生物种类组成状况,协助我们了解生态系统的状况和进行环境监测。

基因芯片技术的研究进展与前景

基因芯片技术的研究进展与前景

基因芯片技术的研究进展与前景摘要关键词基因芯片,遗传性疾病,基因组计划,一、基因芯片技术的产生背景基因芯片技术是伴随着人类基因组计划而出现的一项高新生物技术。

2001年6月公布了人类基因组测序工作草图;2002年出发飙了较高精确度和经过详细注解的人类基因组研究结果;2004年10月发表了已填补基因组中许多Gap片段的更精确的人类全基因组序列,标志人类基因组计划的完成和新时代的开始。

随着人类基因组计划的开展,也同时进行了模式生物基因组测序工作。

动物、植物、细菌及病毒基因组等测序工作都已取得重大进展。

随着各种基因组计划的实施和完成(有的即将完成),一个庞大的基因数据库已经建成。

怎样从海量的基因信息中发掘基因功能。

如何研究成千上万基因在生命过程中所担负的角色;如何开发利用各种基因组的研究成果,将基因的序列与功能关联起来,认识基因在表达调控、机体分化等方面的生物学意义;解释人类遗传进化、生长发育、分化衰老等许多生命现象的奥秘;深入了解疾病的物质基础及发生、发展过程;开发基因诊断、治疗和基因工程药物并用来预防诊断和治疗人类几千种遗传性疾病……这些都将成为现代生物学面临的最大挑战。

这样的背景促使人们研究和开发新的技术手段来解决后基因组时代面临的一系列关键问题。

20世纪90年代初,为适应“后基因组时代”的到来,产生了一项新的技术,即以基因芯片为先导的生物芯片技术。

二、基因芯片的概念基因芯片(又称DNA芯片、DNA微阵列)技术是基于核酸互补杂交原理研制的。

该技术指将大量(通常每平方厘米点阵密度高于400 )探针分子固定于支持物上后与有荧光素等发光物质标记的样品DNA或RNA分子进行杂交,通过检测每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息,从而对基因表达的量及其特性进行分析。

通俗地说,就是通过微加工技术,将数以万计、乃至百万计的特定序列的DNA片段(基因探针),有规律地排列固定于2cm2的硅片、玻片等支持物上,构成的一个二维DNA探针阵列,与计算机的电子芯片十分相似,只是在固相基质上古高度集成的不是半导体管,而是成千上万的网格状密集排列的基因探针,所以被称为基因芯片。

cma基因芯片

cma基因芯片

cma基因芯片摘要:1.CMA基因芯片的概述2.CMA基因芯片的应用领域3.CMA基因芯片的技术优势4.我国在CMA基因芯片研究的发展现状5.CMA基因芯片的未来发展趋势正文:随着生物科技的发展,基因芯片技术逐渐崭露头角,其中CMA (Chromosome Microarray Analysis)基因芯片备受瞩目。

本文将介绍CMA基因芯片的概述、应用领域、技术优势,以及我国在该领域的研究现状和未来发展。

一、CMA基因芯片的概述CMA基因芯片,又称染色体微阵列分析,是一种高通量、高灵敏度的基因检测技术。

通过检测基因组DNA序列的拷贝数变异(CNV)和基因表达水平,CMA基因芯片在遗传病、肿瘤等疾病的诊断、研究及治疗中具有重要价值。

二、CMA基因芯片的应用领域1.遗传病诊断:CMA基因芯片可检测染色体非整倍体、微缺失、微重复等遗传病,提高诊断的准确性和效率。

2.肿瘤基因诊断:通过检测肿瘤相关基因的拷贝数变异和表达差异,有助于肿瘤的早期发现、分型和预后评估。

3.基因表达谱分析:研究生物体内基因的表达模式和调控关系,为功能基因组学研究提供有力支持。

4.农业育种:CMA基因芯片可用于品种选育、遗传资源评价和分子育种等领域。

三、CMA基因芯片的技术优势1.高度集成:一块CMA基因芯片可同时检测多种指标,实现多维度分析。

2.分辨率高:CMA基因芯片的分辨率可达单个碱基级别,提高检测的准确性。

3.样本需求低:CMA基因芯片采用荧光定量PCR技术,对样本需求较低,适用于各类生物样本。

4.数据分析便捷:CMA基因芯片的数据分析软件成熟,便于实验结果的解读和应用。

四、我国在CMA基因芯片研究的发展现状近年来,我国CMA基因芯片研究取得了世界领先的成果,不仅在技术研发上不断突破,还广泛应用于临床诊断、基础研究等领域。

我国已有多家企业研发出具有自主知识产权的CMA基因芯片产品,并逐步实现产业化。

五、CMA基因芯片的未来发展趋势1.芯片技术的优化:进一步提高芯片的分辨率、灵敏度和检测效率,降低成本。

2024年基因芯片市场发展现状

2024年基因芯片市场发展现状

2024年基因芯片市场发展现状概述基因芯片是一种用于检测和分析基因表达的高通量技术,它具有高灵敏度、高特异性和高通量的特点,被广泛应用于基因组学、转录组学和蛋白质组学等研究领域。

本文将探讨当前基因芯片市场的发展现状。

市场规模与增长趋势据市场研究报告显示,基因芯片市场在过去几年中取得了显著的增长。

预计到2025年,全球基因芯片市场规模将达到X亿美元。

这一增长主要受益于生物技术和医疗行业对于个性化医疗和精准医学的不断需求。

同时,大规模基因测序项目和疾病的遗传基础研究也推动了基因芯片市场的发展。

技术革新与产品创新基因芯片市场的发展离不开技术革新和产品创新。

近年来,随着基因测序技术的快速发展和降低成本,基因芯片的设计和生产技术也在不断完善。

新一代基因芯片具有更高的解析度、更低的噪音和更快的检测速度。

此外,基因芯片的多样性也得到了拓展,包括基因组芯片、转录组芯片、蛋白质芯片等,为研究人员提供了更广泛的选择。

应用领域扩展基因芯片的应用领域也在不断扩展。

目前,基因芯片主要应用于以下几个领域:1.医学研究:基因芯片可用于研究疾病的遗传基础、筛选潜在药物靶点以及了解疾病发展的分子机制。

2.肿瘤学:基因芯片在肿瘤研究中起到了关键作用,可以帮助识别不同类型的肿瘤和预测疗效,从而指导治疗方案。

3.农业:基因芯片可用于农作物基因组的分析和育种研究,帮助提高作物的抗病性、产量和品质。

4.药物研发:基因芯片可用于药物的靶点筛选和药理学研究,加速药物研发过程。

5.个性化医疗:基因芯片可以根据个体的基因表达情况为患者定制个性化治疗方案,提高治疗效果。

市场竞争格局目前,全球基因芯片市场呈现出竞争激烈的态势。

主要的市场参与者包括Illumina、Thermo Fisher Scientific、Agilent Technologies、Roche Diagnostics等。

这些公司拥有强大的研发实力和市场影响力,通过不断推出创新产品和与其他公司合作来扩大市场份额。

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基因芯片技术的应用现状及展望1基因芯片1.1基本概念和原理又称DNA 微阵列、DNA 芯片, 通过微加工技术和微电子技术在固体芯片表面构建成的微型生物化学分析系统,能够通过检测基因的丰度来确定基因的表达模式和表达水平。

由于常用硅芯片或玻片作为固相支持物, 并且在制备过程中运用了计算机芯片的制备技术, 所以称为基因芯片技术。

基因芯片的工作原理与核酸分子杂交的方法是一致的, 都是运用已知核酸序列作为探针与互补的靶核苷酸序列进行杂交, 然后通过信号检测进行定性和定量分析。

与传统的核酸杂交不同的是基因芯片是在一微小的片基如硅片、玻片和塑料片等表面上集成了大量的核酸分子识别探针, 能够在同一时间内平行分析大量的基因, 进行大量信息的筛选与检测, 实现对生物样品快速、并行、高效地进行检测或医学诊断。

1.2研究背景80 年代初, 科学家提出了固相核酸杂交的设想, Bains 等首先对固相杂交DNA 测序进行了有益的探索; 其后, 俄罗斯、美国及英国的科学家分别报道了用杂交测定核酸序列的方法。

1991 年, Affymetrix 公司Fodor 等建立了原位光刻合成技术, 为寡核苷酸在片原位合成制作高密度基因芯片奠定了基础, 标志着核酸检测技术已发展到了一个新的阶段。

1994年, 俄美科学家共同研制了用于B- 地中海贫血基因突变筛查的基因芯片, 测序的速度提高了近1 000 倍, 被认为是一种全新的快速测序方法。

鉴于基因芯片潜在的巨大商业价值, 90年代中期开始, 国外更多的商业公司加入了芯片开发的行列。

1996 年底, Affymetr ix 公司推出可应用的基因芯片和较完整的芯片制造、杂交、扫描及数据分析系统, 其它如GeneralScanning Inc、Telechem、Cartesian 等公司亦相继研制出芯片用激光共聚焦扫描仪及分析软件。

到目前为止, 芯片技术在基础研究, 尤其是在基因表达方面已得到应用, 而在医学应用方面也已开发出少数基因诊断等相关芯片。

但由于芯片和检测系统价格昂贵、专利及许多技术问题还有待解决, 因此目前尚未大规模的应用。

在我国, 较早从事基因芯片研究的机构有清华大学、复旦大学、东南大学等。

其中, 清华大学处于领先地位, 并得到国家重点支持。

其它如东南大学在分子印章法制备高密度基因芯片、复旦大学在硅导电玻璃介质生物芯片制备、西安超群公司在三维立体基因芯片制造等方面也都取得了一定成果。

1.3基因芯片的分型视分类方法不同可以分为以下几种主要类型:a.无机片基和有机合成物片基的基因芯片b.原位合成和预先合成然后点样的基因芯片c.基因表达芯片和DNA测序芯片另外根据所用探针的类型不同分为cDNA微阵列(或cDNA微阵列芯片)和寡核苷酸阵列(或芯片),根据应用领域不同而制备的专用芯片如毒理学芯片(Toxchip)、病毒检测芯片(如肝炎病毒检测芯片)、P53基因检测芯片1.4基因芯片核心技术1.4.1载体表面化学修饰基因芯片多以玻璃片为载体,由于玻璃片表面化学性质稳定,在连接上述各种活性基团之前,通常需要先进行硅烷化处理。

玻璃片的硅烷化使用硅烷化试剂,即硅烷耦合剂,是一种有机硅单体,具有两种以上不同反应基团,能起到把有机材料和无机材料进行化学耦合的媒介作用。

该类化合物一般具有RSiX3的化学结构,X表示水解基团,如甲氧基、乙氧基等,能与无机材料(玻璃、金属、二氧化硅)进行化学结合,R为有机官能团(如氨基、羟基、巯基等),能与有机物质结合。

在玻璃片处理过程中,比较常用的硅烷化试剂有氨丙基三甲氧基硅烷、氨丙基三乙氧基硅烷、硫丙基三甲氧基硅烷和N.氨乙基氨丙基三甲氧基硅烷。

硅烷化的玻璃片可以进行活性基团的连接,不同活性基团连接方法略有不同。

修饰后的载体应该达到表面均匀一致,容易进行共价的或非共价的化学修饰,并且在荧光探针激光波长范围内有一个低的背景荧光。

探针制备探针的制备主要有两种方法:一种方法是原位合成,即直接在载体上原位合成探针,此种方法适合制作高密度寡核苷酸芯片;另外一种方法是通过PCR进行扩增。

模板的来源有两种:一是克隆化核酸片段,可以是序列信息保存在Gen—Bank等公共数据库中、商业出售的cDNA克隆、EST克隆,也可以是各个实验室从各种文库中筛选并保存下来的上述克隆;这些克隆化核酸片段经PCR扩增后即用作探针。

进行基因表达分析时,多数情况下采用此种cDNA探针。

同一生物体中不同基因之间的同源性可能较高,PCR产物应代表其最可变的区域。

另一种是基因组DNA,用特异性引物对其进行PCR扩增,得到需要的序列片段。

1.4.2靶序列荧光标记基因芯片技术首选荧光染料作为标记,主要是因为荧光染料具有操作简便、高稳定性、高灵敏度、高选择性等特点。

荧光标记方法有直接标记和间接标记法。

直接标记是利用反转录酶或PCR 反应将CyDye标记核苷酸直接渗入到样品中,这是最常用的一种标记方法。

其局限性是酶对于CyDye标记核苷酸的低渗入效率,大多数酶不能均匀地渗入Cy3和Cy5荧光素,杂交信号不均一。

Cy5的渗入效率通常不如Cy3高。

间接标记又称合成后标记,是将一个化学活性核苷酸类似物(氨基烯丙基一dUTP)在链合成中掺入到PCR产物或cDNA第一链中。

氨基烯丙基-dUTP与无修饰的dUTP掺入效率相似,得到的探针随后用CyDye的活性反应物进行“合成后标记”,该活性反应物与氨基烯丙基一dUTP结合。

这种标记方法的优点是能得到Cy3和Cy5更加均一的掺入和更强的信号。

基因芯片打印基因芯片的打印方式有两种,即原位合成法和合成后交联法。

原位光刻合成技术系Affyrmetrix公司的一项专利技术。

运用这种方法制作的芯片探针密度可达106/cm2,即探针间隔为5~10Ⅱm。

用这种方法制备的基因芯片需要预先设计、制造一系列掩膜,造价昂贵;制造过程中采用光脱保护法,掩膜孔径较小时会发生光衍射现象,制约了探针密度的进一步提高;光脱保护不彻底,每步产率只有92%~94%,因此这种方法只能用来合成30 nts左右的寡核苷酸探针。

Gasson等¨]利用投影电视中的数控微镜阵列技术制造了一种无需掩膜的高密度芯片原位合成系统—MAS(maskless array synthesizer,~MAS)。

用这种方法可以在1.4 cm2的区域合成480 000种探针,单个探针的区域为16 ptm2}采用分辨率更高的DMAS(digital maskless array synthesizer,DMAS),可以在同样大小的区域合成2 000 000种探针。

如果40种探针代表一个基因,就可以在一种芯片上合成相当于50 000个基因的探针。

合成时间比光控原位合成大为减少,合成成本也大为降低。

与原位合成法相比,合成后交联法比较简单,只需要将预先制备好的寡核苷酸、cDNA或PCR产物等样品通过自动点样装置点于经过特殊处理的玻璃片或其他材料上即可,合成后交联法适用于大片段DNA,有时也用于寡核苷酸,甚至mRNA。

合成后交联法有两种点样方法:非接触式喷墨点加法和接触点加法。

非接触式喷墨点加法是由Biodot公司开发的。

目前非接触式喷墨打印基因芯片有两种技术,一种是压电打印技术,陶瓷材料的压电晶体紧密环绕玻璃毛细管(内含核酸片段),通电后压电晶体变形,挤压毛细管,使液滴从毛细管的喷口喷射出来,每次喷射量为50~500 pL;另一种为注射泵一螺线管技术,将一个高分辨率的注射泵与高速微螺线管阀相连,同时通过一个开关阀门连接一个储液器。

抽拉注射泵使样品向上吸入管头,然后回压注射器对系统施加压力,打开微螺线管阀,喷出液滴,每次喷射量为4~8 nL。

压电打印技术上样量小,但是稳定性和定量性不如注射泵。

1.4.3基因芯片杂交基因芯片杂交属于固液相杂交El-g],标记的靶分子与固定在芯片上的探针之间在严格的条件下进行分子杂交,影响杂交效率的因素主要有固定在芯片上的探针数、靶分子浓度、杂交双方的序列特性、杂交体系中的盐浓度、杂交的温度及杂交液的pH值等。

在杂交体系中,基因芯片上探针分子的浓度要远远高于靶分子浓度,这对于获得正确可信的实验结果十分重要。

当基因芯片上的探针约10倍于靶分子浓度时,杂交反应为一级动力学方式,此时的杂交速率主要决定于探针浓度,探针浓度每提高一倍,信号将增强一倍。

.在杂交体系中,一价阳离子(如Na+)的存在可以提高异源杂交双链生成的速度,其原理是Na+可以屏蔽带负电荷的磷酸根骨架,通常在DNA芯片杂交时应用的Na+浓度为1mol/L,倘若杂交温度显著低于异源杂交双链的熔点时,温度对杂交速率有正影响,一般寡聚核苷酸芯片的杂交温度范围为25℃~42℃,而cDNA 芯片的杂交温度范围为55℃~70℃,但在用电离甲酰胺溶液为杂交体系时,则杂交温度为42℃。

杂交后的芯片需经严格的洗涤以去除未杂交的核酸片段及杂交缓冲液等,避免引起荧光背景。

1.4.4基因芯片扫描基因芯片扫描仪采用荧光检测,即利用激光激发掺入检测点中的荧光生色基团,读取荧光报告基团发出光信号,利用光电倍增管或电荷耦合器件(CCD)将其转化为电信号,然后通过软件将电信号还原成为图形或相关数据,最后通过分析所得数据给出检测报告。

目前商业化的基因芯片扫描仪主要有激光共聚焦芯片扫描仪和CCD芯片扫描仪两大类,其中前者使用最为普遍。

激光共聚焦芯片扫描仪采用激光作激发光源,使荧光生色基团产生高强度的发射荧光,用光电倍增管进行检测,灵敏度和分辨率较高,可检测每平方微米零点几个荧光分子。

其重复扫描的精度主要受X-Y移动平台的机械精度和环境条件的影响。

扫描仪常采用2种以上不同波长的激光器作为发光源,最多达4种,以激发不同荧光染料标记的靶分子。

常用的激光器波长范围可从488 am至近红外光区。

扫描得到的图像是黑白的。

多种荧光标记的芯片,可分别在不同波长的激光下重复扫描进行,也可在多个激发波长下,同时扫描即可得到多个波长的数据。

1.4.5基因芯片数据分析基因芯片分析主要包括数据采集、处理、分析和报告等环节。

芯片扫描仪对生物芯片扫描后,得到代表荧光强度的电信号,通过伪彩处理形成数字图像文件,因此必须经过图像处理提取各样品点的数据,才能进行统计分析,此过程借助专业图像分析软件完成。

图像的提取过程包括:图像的平滑过滤、图像背景的确定、样片斑点的识别、数据的提取、存贮与显示等。

得到的图像信息以数据库方式存储,需要建立管理系统,保存下列信息:芯片各点的基因名称、基因的碱基序列或功能的主要描述、GenBank存取码,图像克隆标记、代谢途径标记、内部克隆标记,芯片各点的荧光图像、背景值、光密度值等;还应有芯片的制备、实验环境条件、样品的类型和制备方法、实验目的和操作者姓名等信息。

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