细胞生物学技术
细胞生物学重要技术
三、显微操作技术
• 在倒置显微镜下利用显微操作器进行细胞或早期胚胎操作 的一种方法。 的一种方法。显微操作器是用以控制显微注射针在显微镜 视野内移动的机械装置。 视野内移动的机械装置。 • 显微操作技术包括细胞核移植、显微注射、嵌合体技术、 显微操作技术包括细胞核移植、显微注射、嵌合体技术、 胚胎移植以及显微切割等。 胚胎移植以及显微切割等。 –细 胞 核 移 植 技 术 已 有 几 十 年 的 历 史 ， Gordon 等 人 细 1962） 对非洲爪蟾进行核移植获得成功。 （ 1962 ） 对非洲爪蟾进行核移植获得成功 。 我国著名 学者童第周等上个世纪70 年代在鱼类细胞核移植方面 学者童第周等上个世纪 70年代在鱼类细胞核移植方面 70 进行了许多工作，并取得了丰硕成果。 进行了许多工作，并取得了丰硕成果。
（一）透射电子显微镜
1. 原理
• 以电子束作光源，电磁场作透镜。电子束的波长短，并且 以电子束作光源，电磁场作透镜。电子束的波长短， 波长与加速电压(通常50～120KV)的平方根成反比。 波长与加速电压(通常50～120KV)的平方根成反比。 50 KV)的平方根成反比 • 由电子照明系统、电磁透镜成像系统、真空系统、记录系 由电子照明系统、电磁透镜成像系统、 真空系统、 统、电源系统等5部分构成。 电源系统等5部分构成。 • 分辨力0.2nm，放大倍数可达百万倍。 分辨力0 nm，放大倍数可达百万倍。 • 用于观察超微结构 ， 即小于 0.2µm、 光学显微镜下无法看 用于观察超微结构， 即小于0 m 清的结构，又称亚显微结构。 清的结构，又称亚显微结构。
• 原理：根据隧道效应而设计，当原子尺度的针尖在不到一 个纳米的高度上扫描样品时，此处电子云重叠，外加一电 压（2mV~2V），针尖与样品之间形成隧道电流。电流强 度与针尖和样品间的距离有函数关系，将扫描过程中电流 的变化转换为图像，即可显示出原子水平的凹凸形态。 • 分辨率：横向为0.1~0.2nm，纵向可达0.001nm。 • 用途：三态（固态、液态和气态）物质均可进行观察。
细胞生物学的研究方法与技术
细胞生物学的研究方法与技术细胞生物学是研究细胞结构、功能及其在生物过程中作用的学科。
细胞生物学的发展离不开许多研究方法和技术的支持，这些方法和技术涉及多方面的学科，包括生物学、化学、物理学等，为细胞生物学的研究提供了有力的工具和手段。
常见的细胞生物学研究方法包括显微镜技术、细胞培养、各种分离和纯化技术、蛋白质组学、基因组学、转基因技术以及细胞途径和信号传导的研究等。
显微镜技术是细胞生物学的基础工具之一，早在17世纪就有学者发现了显微镜的作用。
如今，显微镜已经发展到了高倍率、高分辨率水平，并且应用范围越来越广。
荧光显微镜能够将酶标法和细胞组织学高效结合，使得研究人员能够看到细胞中特定蛋白质的位置及其在细胞内的转移过程，这种技术促进了细胞和分子生物学的研究进展。
另一个广泛应用的细胞生物学技术是细胞培养技术。
细胞培养可以使研究人员通过体外实验的方法来探究细胞生物学的许多方面，例如细胞增殖、代谢、分化以及感染和治疗等方面。
同时，细胞培养技术也为其他科学领域如医学和药物研发提供了重要工具和方法。
分离和纯化技术也是细胞生物学研究的重要方法之一。
这些技术用于从细胞中分离出不同的细胞结构和分子，以便对它们进行研究和分析。
例如，对蛋白质的分离和纯化可使研究人员了解蛋白质的功能和结构，以及它们如何参与到多种细胞过程中。
蛋白质组学和基因组学是近年来迅速发展起来的研究领域。
随着研究的深入，我们了解到不同细胞中的蛋白质和基因组成具有多种不同的功能。
可以通过分析这些蛋白质和基因组以探究它们在不同疾病中的作用，并且这些研究可为新药物的开发提供重要参考。
转基因技术是一种较新兴的细胞生物学研究方法。
通过转基因技术，研究人员可将指定的基因嵌入宿主细胞，以进一步研究这些基因的功能和影响。
转基因技术在药物研发和基因工程等领域有着广泛的应用，并是细胞生物学领域的重要组成部分。
最后一个细胞生物学研究方法是研究细胞途径和信号传导。
细胞途径和信号传导可使研究人员了解到不同的生物分子之间相互作用的机制，以及它们如何在生物过程中发挥作用。
细胞生物学技术在疾病治疗中的应用
细胞生物学技术在疾病治疗中的应用细胞生物学技术是现代医学中一项重要的技术之一，它是基于细胞和分子水平对人体病理和正常过程的深入研究和理解所发展起来的一组技术方法。
这些方法包括分子遗传学、蛋白质组学、基因组学、细胞培养等。
这些技术的发展让医学更加前沿，因为它们提供了更多治疗疾病的可能性。
目前，在疾病治疗中的应用越来越普遍，包括癌症、心血管疾病、神经疾病等。
下面我们将具体探讨这些领域的应用。
1. 癌症治疗癌症是细胞生物学技术最广泛应用的领域之一。
目前治疗方法主要包括传统的化疗、放疗和手术切除。
但是这些方法有很多副作用，也可能造成身体其他机能的损伤和影响。
随着细胞生物学技术的进步，研究人员发现了一些新的治疗方法，例如细胞免疫治疗、基因治疗和靶向治疗。
细胞免疫治疗是通过收集患者或者捐献者的免疫细胞，在实验室中进行培养、提纯、激活和扩增，使其获得强大的抗癌能力。
这些细胞会被注入到患者体内，可以顺利地与体内的癌细胞作战，从而达到治疗癌症的效果。
基因治疗利用基因技术来修复或替换患者身体中受损或失效的基因。
该治疗方法水平提高了现代医学处理癌症的效率。
其基本原理是将正确的基因注入患者身体，从而促进身体康复，提高生存率，提高患者的治疗效果。
靶向治疗是一种针对癌细胞分子的治疗方法。
通过分析分子特征，抑制肿瘤细胞的生长和分裂，达到治疗癌症的目的。
由于是针对性治疗，它可明显地限制对身体其他部位的损害，大大减少了化疗和放疗所带来的副作用。
2. 心血管疾病治疗心血管疾病是一个罕见但致命的循环系统疾病。
现代医学利用细胞生物技术和创新的治疗方案来治疗心血管疾病。
其中，造血干细胞移植和干细胞治疗是最常见的两种疗法。
造血干细胞移植是一种利用再生医学方法，在患者体内移植造血干细胞来恢复机体正常机能的治疗方法。
移植的造血干细胞可以分化出各种细胞，并促进心血管系统恢复。
干细胞治疗是利用患者体内的干细胞，通过实验室对其进行分离、分化和培养，提高干细胞分化的效率，最后把分化的细胞移植到患者的体内，从而促进了体内的心血管恢复。
细胞生物学实验技术及数据分析
细胞生物学实验技术及数据分析一、细胞培养技术细胞生物学实验技术是现代分子生物学领域的重要组成部分。
这个领域通过细胞培养技术为分子生物学提供了重要的工具。
细胞培养技术是利用体外培养细胞的技术，可以提供可重复的、标准化的实验条件。
细胞培养技术一般采用细胞培养基和纳米级的培养容器，用来提供细胞生长所需的营养物质和细胞环境。
在细胞培养中，一个最基本的需要就是完美的培养基。
培养基的种类很多，质量的好坏和细胞种类及培养条件的适宜度密切相关。
培养基中的活性成分和组分种类不同，可以适应不同的细胞和生长条件。
培养基中含有的营养物质包括必需氨基酸、糖类、维生素、核苷酸和矿物质离子等。
其中，必需氨基酸和糖类是最重要的成分，用于细胞的生长和代谢。
培养基中的血清组分也可以提供生长所需的因子和细胞生长所必需的支持。
此外，多肽激素和其他生长因子也是细胞培养中的重要组分。
在细胞培养中，要注意许多细节，如细胞的操作要求无菌操作、要做好细胞与培养基接触的温度千万不要过高或太低，否则会导致死亡。
二、细胞功能实验技术细胞功能实验技术是研究细胞内生化、分子和细胞生理学机制的有效工具。
分子生物学技术的出现，为分析的细胞和分子生物学提供了许多新的实验方法。
这些方法包括酶联免疫吸附实验、西方印迹法、凝胶迁移、免疫共沉淀和染色质免疫沉淀等。
酶联免疫吸附实验（ELISA）是识别蛋白质和其他大分子的一种常用实验技术。
它是利用通过固相吸附和酶标记抗体将蛋白质分离出来并进行定量分析的技术。
酶联免疫吸附实验可以检测单个蛋白质，还可以用于了解其在生物系统中的数量和分布。
这种技术广泛用于癌症、自身免疫性疾病、感染性疾病和代谢性疾病的检测。
西方印迹法（Western blot）是一种可以用来检测蛋白质的酶联免疫吸附实验（ELISA）的高分辨率技术。
该技术可以检测单个蛋白质，并通过分子量分析确定其大小。
这种技术可以用来确定细胞内蛋白质量和分布，并用于分析蛋白质亚型。
细胞生物学的基本实验技术和方法
细胞生物学的基本实验技术和方法细胞生物学是现代生命科学的一个重要分支，研究细胞的结构、功能、遗传和分子机制，对于理解生命的本质、疾病的发生和治疗具有重大意义。
本文将介绍一些细胞生物学的基本实验技术和方法，包括细胞培养、荧光显微镜、免疫染色、蛋白质电泳和PCR等。
一、细胞培养细胞培养是细胞生物学中最基本的实验技术之一，它是将细胞放入含有营养物质、生长因子和抗生素等的培养基中，使其在适当温度、湿度和CO2浓度下生长、增殖、分化或转化的过程。
细胞培养的方法非常丰富，可以根据细胞来源、类型、培养条件等进行分类，常用的有原代培养、细胞系、肿瘤细胞和原生动物等。
细胞培养可以用于研究细胞形态、生长特性、细胞周期、信号转导和基因调控等方面，也是制备疫苗、生产蛋白质和细胞治疗等方面的基础技术。
二、荧光显微镜荧光显微镜是一种利用荧光探针和激光光源来照射样品并检测荧光信号的显微镜，在细胞生物学中起着至关重要的作用。
荧光探针可以有机会或无机盐的形式存在，它们可以与细胞的生物分子如蛋白质、核酸等结合并发生光学反应，发射出荧光信号。
荧光显微镜具有高分辨率、高灵敏度、多重标记和实时成像等优点，可以用于研究细胞形态、结构、功能、互作和代谢等方面，还可以用于细胞追踪、基因表达、蛋白质定位和药物筛选等方面。
三、免疫染色免疫染色是一种利用抗体与特定抗原相结合来检测或定位生物分子的技术，在细胞生物学和免疫学中广泛应用。
抗体是由 B 细胞产生的一类蛋白质，它可以通过特异性与异物（如细胞表面抗原、蛋白质、核酸等）结合，从而实现对它们的检测和定位。
免疫染色有直接和间接两种方法，前者是将荧光染料或酶标记直接连接在一级抗体上，后者是将荧光染料或酶标记连接到二级抗体上，再与一级抗体结合来增强信号。
免疫染色可以用于鉴定细胞类型、检测蛋白质表达、定位细胞器、分析信号通路和检测抗体反应等方面。
四、蛋白质电泳蛋白质电泳是一种利用电场和凝胶电泳技术来分离和检测蛋白质的方法，在细胞生物学和生物化学中起着重要作用。
细胞生物学的实验方法与技巧
细胞生物学的实验方法与技巧细胞生物学是研究细胞结构和功能的科学领域。
在细胞生物学中，实验方法和技巧是非常关键的。
细胞生物学的实验技术涉及到多种技术和方法，包括细胞培养、细胞分离、荧光显微镜、分子生物学等等。
在本文中，我们将会详细讨论细胞生物学中的实验方法和技巧。
一、细胞培养技术细胞培养技术是研究细胞生长、增殖、衰老等生理状态的一种重要的实验技术。
细胞培养技术通常需要使用一个适宜的培养基，该培养基还需要添加适当的营养物质和培养物质。
在培养细胞时，需要注意适宜的温度、湿度、和二氧化碳含量等因素，这些因素可以影响细胞的状态和生命活动。
另外，在细胞培养中，不可避免地会遇到一些问题，例如细胞的寿命、细胞的死亡、菌污染等问题。
为避免这些问题，需要在实验中采取一些必要的预防措施。
例如，可以使用无菌操作技术，采用CDMF等杀菌剂消毒培养器、培养器中的培养物料，这样可以有效防止细胞因菌污染而死亡。
二、细胞分离技术细胞分离技术是研究细胞的单个特性、形态和功能的一种技术。
在实验中需要利用细胞分离技术来获得一定数量的单个细胞。
细胞分离技术有多种方法，包括分离器分离、离心分离、胶体分离和酶消化等，每种方法都有其优缺点。
其中，酶消化是一种比较常见的细胞分离方法，通过加入一定量的酶，将组织内的胶原纤维、纤维素及其他基质物质消化掉，从而获得单个细胞。
在酶消化实验中，需要根据不同细胞类型、不同组织、不同生长状态等因素进行调整，以获得最佳效果。
三、荧光显微镜技术荧光显微镜技术是一种广泛用于生物学和生命科学中的高级显微镜技术。
在细胞生物学研究中，荧光显微镜技术是最常用的技术之一，因为它可以用来标记和检测细胞内的各种生物大分子，如蛋白质、核酸、酶等。
在荧光显微镜实验中，使用的荧光探针要与待检测的细胞相匹配，例如，使用荧光染料DPH来探测细胞内外膜分子的相互作用。
同时，还需注意荧光显微镜的光源选择、荧光图像的采集和分析等问题，以获得高质量的研究数据。
细胞生物学常用技术
贴壁细胞
计数设备
血细胞计数板 血细胞计数仪
计数方法
将血球计数板及盖片擦拭干净，将盖片 盖在计数板上。 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘， 使悬液充满盖片和计数板之间 ，静置 3min。 镜下观察计算计数板四大栺细胞总数， 压线细胞只计左侧和上方的。
计数方法
按如下公式计算
镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团， 应按单个细胞计算；若细胞团占 10%以 上，需重新制备细胞悬液。
二、细胞活力测定
总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞 活力。细胞活力的测定是细胞体外研究 中应用最广的技术手段之一。 组织中分离细胞及细胞复苏常需要检查 活力。 任何培养瓶内生长的细胞都由死细胞和 活细胞组成，很难从形态上区别死、活 细胞。 常用噻唑蓝比色（MTT）法、台盼蓝法。
冻存方法
标准程序 冻存管置于程序降温盒中，放入 -80℃ 冰箱，次日转移至液氮中长期保存。 冻存管置于程序降温仪中，先设定按12℃/min 降温，达到 -25℃以下时再按 5-10℃/min 降温，达到 -100℃时可迅 速转移至液氮中。
冻存方法
简易程序 冻存管首先置于4℃，约40min。 之后置于-20℃，约30-60min。 再置于-80℃中放置过夜。 最后置于液氮罐中长期保存。
冻存方法
预先配制冻存液：70%培养基 + 20%血 清 + 10% DMSO。胰酶消化对数生长 期细胞，经离心弃上清后加入适量冻存 液吹打成细胞悬液（ 1-5×106 个 /ml ）。 细胞悬液按觃栺加入至冻存管中，密封 后标记细胞名称、研究者姓名和日期。 4年内存活率最高可达80%以上。
平板兊隆形成
平板兊隆形成
必须选择对数生长期细胞。计数要准确， 至少三遍，取平均值。 在接种细胞时，细胞数避克过多，否则 会出现细胞兊隆融合幵给计数带来麻烦， 同时一定要使细胞分散均匀。 一般情冴下，接种200个细胞时，10ml 培养液足够支撑 3 周，中间不必换液， 主要注意防止污染。
细胞生物学技术在生命科学研究中的应用
细胞生物学技术在生命科学研究中的应用随着科技的不断发展，生命科学研究也在迅速拓展。
在现代科技中，细胞生物学技术扮演着越来越重要的角色。
通过细胞生物学技术，科学家们可以深入研究细胞的内部构造及其生命特性，掌握细胞的生命活动，进而推动生命科学的发展。
一、细胞培养技术细胞组织学作为生命科学的关键学科之一，它的主要研究对象便是细胞。
细胞培养技术就是细胞组织学中必须掌握的一个基础技能。
通过细胞培养技术，科学家们可以获得大量同源细胞，便于研究细胞的生命过程及行为。
细胞培养技术可以将细胞分离出来，放在培养皿中，加上生长所需的营养物质，让细胞在培养皿中生长，形成细胞种群。
常见的细胞培养方法有原代细胞培养、细胞株培养等。
原代细胞培养是从新鲜组织中分离出细胞并进行细胞培养。
细胞株培养是将原代细胞培养至一定代数，形成一定数量的同种细胞群体后，选择细胞继续培养。
除此之外，细胞培养技术还有许多其他应用。
在药物筛选中，科学家们可以使用细胞培养技术制备药物，探索药物的生物学效应。
二、基因编辑技术基因编辑技术在细胞生物学中的应用越来越普及。
该技术可以更改细胞DNA，以改变细胞的基因表达方式及细胞的生物学特性。
最常见的基因编辑技术就是CRISPR-Cas9技术。
该技术可以精准地选择特定的DNA序列进行切割，从而实现基因编辑。
通过CRISPR-Cas9技术，科学家们可以根据需要拓展或压制特定基因的功能或抑制生物病理学过程。
三、细胞检测技术细胞检测技术是一门用于检测细胞学元素的学科，主要应用于生命科学研究。
该技术通过发现细胞表达基因的变化为病理诊断服务。
根据细胞检测技术的不同，我们可以分为细胞分子检测、蛋白质质检测、细胞组分分析等多种类型。
四、单细胞测序技术单细胞测序技术就是针对单个细胞进行基因组测序的技术。
它可以直接获取细胞内的分子信息，揭示单个细胞在基因组水平上的差异，深入研究细胞的内部构造及生命特性。
通过单细胞测序技术，科学家们可以研究密度较高细胞的分工、极小肿瘤的扩散及发育等。
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第二章第三章第四章电镜1.电镜、分辨率、透射电子、二次电子、电子束、超薄切片、免疫电镜技术电镜：以电电子束为光源，电磁场为透镜，利用电子散射产生的信号进行显微成像的具有高分辨率和放大倍率的显微镜。
电镜用于研究组织和细胞的超微结构分辨率：用于表示人眼和光学仪器能够辨别的两点之间最小距离的标志。
人0.2mm，光镜0.2um。
分辨率是衡量电镜性能的重要指标。
透射电子：当样品厚度小于100nm时，部分电子可穿透样品，将穿透样品的电子叫做透射电子。
（利用透射电子信息成像的称为透射电镜）二次电子：在入射电子的轰击下,样品表面5-50 nm 深度激发出来的电子称为二次电子。
（利用二次电子信息成像的称为扫描电镜）电子束：又称电子射线，电子束带负电荷，具有光的波动性、可折射性。
电镜利用电子束作为“光源”成像。
超薄切片：将环氧树脂包埋的组织块切成100nm以下的薄切片称为超薄切片，超薄切片经电子染色后在TEM下观察组织细胞内部的超微结构。
immune electron microscopy：免疫电镜技术是将免疫学方法与电子显微镜技术相结合，利用抗原与抗体特异结合的特性，在超微结构水平定位特异大分子的技术。
2.电镜在医学领域的应用观察细胞器和组织器官的超微结构；观察病毒和细菌等；观察组织细胞超微病理结构；用于临床疾病的诊断；观察生物材料复合体及模式生物等3. 从分辨率、放大倍率、成像信号、样品制备、图像特点和应用几方面对透射电镜和扫描电镜进行比较TEM分辨率为0.1nm，放大倍率是100万倍，成像信号为透射电子信号成像，样品制备过程复杂，要制成50～100nm的超薄切片，图像特点为二维结构，平面图像，TEM用于观察组织细胞内部的超微结构。
SEM分辨率为0.6nm，放大倍率是80万倍，成像信号为二次电子信号成像，样品制备方法较简单，标本可大而厚，图像特点为三维结构图像，立体感较强，SEM 用于观察样品表面及其断面立体形貌。
4.了解细胞内部的超微结构变化应选择哪种类型的电镜，为了保证良好的超微构，在样本取材及固定时应注意什么？如果是培养细胞，细胞数量一定要达到多少？了解细胞内部的超微结构变化应选择TEM。
为保证良好的超微结构，在样本取材及固定时应注意做到快、小、轻、冷。
快：在1分钟内固定组织，尽可能保持其生活状态，因为瞬间的拖延都会导致细胞超微结构的变化。
小：组织块必须切成1mm³的小块，组织块过大其中央得不到及时固定会发生细胞自溶现象。
轻：不要牵拉、锯、挤压组织。
要用锐利的刀片，避免细胞受到损伤。
冷：低温操作，4℃保存，降低酶的活性，避免组织发生自溶。
如果是培养细胞，细胞数量一定要达到1×1075.在透射电镜样本取材时，样本不可大于1mm3，并在1分钟以内完成固定。
请问如果组织块过大会出现什么后果？没有及时固定的组织电镜下会出现何种改变？由于电镜固定液戊二醛对组织的穿透能力较弱，如果组织块过大会造成组织中心得不到及时固定，在电镜下没有得到及时固定组织细胞的细胞器会发生变性，特别是对缺血乏氧十分敏感的线粒体会出现肿胀和空泡变性等改变。
6.扫描电镜用于观察组织表面结构，因此取材时必需要充分暴露组织表面结构，请问常用的方法和注意事项有哪些？在样品取材时必须充分暴露并保护好观察面，避免损伤要观察的部位，易卷曲的样品, 如气管、胃、肠粘膜可固定在滤纸上展平，要将表面的血液、粘液用生理盐水或缓冲液仔细漂洗干净。
7. 什么是血管灌注固定？为什么脑、心、肾脏等组织要进行灌注固定取材？在样品制备过程中为什么要进行半薄切片定位？血管灌注固定是通过血管灌注适量的固定剂，在动物体内把活细胞在原位及时固定。
血管灌注固定速度快，固定均匀，可减少离体或死亡后缺氧引起自发性的变化影响，特别是对脑、心肌、肾脏等对缺氧比较敏感的组织尤为重要。
半薄切片的意义在于：1 选取超薄切片的部位，超薄切片的面积一般要小于0.5mm2，要经过半薄切片来选取有意义的部位。
2 对同一部位进行光、电镜对比观察，在较大范围内了解组织结构、病变部位和病理性质，有利于更确切的认识超薄切片中的结构及其相互关系。
第六章第八章1.免疫细胞化学技术间接法的优点有哪些1 只要拥有同一种属的一抗和标记的二抗就可以操作而不必对针对各种抗原的一抗做标记，大大简化了抗体的制备2 一个一抗分子可以和多个二抗分子结合，提高了灵敏度3 一抗未经标记，可以避免标记造成的对抗体抗原结合的影响2.免疫荧光双标技术双标用两种荧光素分别显示不同的抗原物质，使几种待测物质可以由不同颜色的荧光素在同一张组织切片上反映出来，效果非常直观。
双标要求一抗种属分开，二抗颜色分开。
3 名解ABC，LSAB，探针ABC：亲和素生物素酶复合物技术，把亲和素与生物素偶联的过氧化物酶或碱性磷酸酶按照一定比例组合成亲和素－生物素－酶复合物，能保证其中的亲和素有一定的游离结合位点让生物素偶联物质结合。
LSAB：生物素标记的链球菌亲和素，具有灵敏度高。
特异性强，稳定性好的优点。
此法实验过程中有一下几点注意事项：封闭、使用双氧水、显色。
探针：指一些序列已知或序列未知但分子已知的核酸分子。
后者指的是虽不明确该分子全部序列但已知其针对何靶分子。
探针主要分为ｃＤＮＡ，ＲＮＡ和寡核苷酸三种。
４．亲和技术原理利用两物质之间亲和能力而互相结合，以定位特异分子的技术，最常用的亲和物质系统是亲和素和生物素。
５．原位杂交的应用原理：使含有特异序列、经过标记的核酸单链即探针，在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交，再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测，从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。
应用：６．为什么原位杂交技术是分子细胞生物学水平技术？（原位杂交技术中如何应用了其他几种细胞化学技术？）第九章流式细胞分析术1.名解：流式细胞分析术，荧光补偿；DNA指数，增殖指数;收获率和纯度FCM是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的技术。
（层流技术保证了样品中的每一个细胞都沿流动室中心轴运动，实现了每一个细胞以相同的速度、相同方向、相同的轨迹流经仪器检测区。
）荧光补偿：目前使用的荧光素都是宽发射谱的，相互之间有明显重叠部分。
分束片和滤色片等光学元件不能完全解决这些问题。
实际工作中常用的方法是利用电子技术或计算机软件等方法将串入相邻萤光通道的信号加以扣除。
即荧光补偿。
DNA指数：DI，用于描述样品细胞DNA含量的偏离程度和倍体水平。
定义为整成二倍体细胞的DI=1.0 ，而被测样品的DI为（被测样品中G0/G1细胞DNA含量）/正常二倍体DNA含量。
增殖指数：PI，用来反映肿瘤细胞的增殖能力。
定义为样品细胞群体中S期细胞G2M 细胞之和占总细胞群体的百分比。
收获率：指分离后所得的细胞亚群数占原细胞样品中该亚群细胞数的百分比。
纯度：指分离后的样品中该亚群细胞所占的百分比。
2.FCM细胞散色光信号和荧光信号FCM被测样品中的细胞流经了仪器检测区时受到激发光的照射，激发光与细胞相互作用后可产生散射光信号和荧光信号。
散射光信号分为前向角散射信号和侧向角散射信号。
前与细胞大小有关，侧包含有细胞内部结构形态学信息。
荧光信号主要指经过特异萤光染色后细胞受照发射的荧光信号。
（掌握荧光的特异性以及定量关系）3.FCM的数据储存方式、FCM的不同显示方式FCM数据储存方式为List Mode。
显示方式分为单参数（直方图），双参数（散点图、等高线轮廓图和假三维图）和多参数数据显示。
直方图：横轴为该参数测量强度相对值，单位是道数。
强度分布可以是线性的，也可以是对数的。
纵轴一般是细胞数或细胞出现的频数。
散点图：在二维图上，X轴代表第一个测量参数，Y轴代表第二个测量参数。
每个点代表一个细胞。
等高线：用等高线来表示细胞数，在一条等高线上细胞数相同，不同的等高线上细胞数不同。
假三维：纵轴与横轴分别代表被测细胞的两个测量参数,Z轴为细胞数。
多参数数据显示图：三维坐标匀为参数（散射光或荧光）而非细胞数。
4. 比较单细胞悬液的制备过程中分散细胞的方法常用方法有酶消化法、机械法和化学试剂处理法。
机械法往往常成严重的细胞损伤，而结果却是较低的细胞产量。
可以用低速离心去碎片，用尼龙网过滤团块等，也可利用电子学技术处理的方法排除团块和碎片的干扰。
酶学法、化学法对实体组织的分散效果较理想，但会造成所测化学成份的不良影响。
总之FCM所测细胞是单个分散状态；对细胞团块，细胞碎片尽可能少；细胞的活性不受损害，以保证下一步的荧光染色处理不受影响。
5. 酶消化法应注意哪些条件?配制酶溶液试剂时要兼顾酶反应的适宜条件与活细胞要求的生理环境；注意酶溶液的适用浓度；注意酶消化过程的最佳温度与持续时间6.读图：线性分布直方图、多参数数据显示方法P115、P118第十一章图像分析系统1.名解图像分析：是分析细胞学技术中的重要分析手段，是在计算机技术，信号处理，自控理论，摄像技术等基础上发展起来的综合应用技术。
像素：构成图像的基本元素数字图像：模拟图像经数字化处理(空间点阵上抽样和颜色灰度的量化)后,所得到的灰度值的二维数组2.图像分析系统的采图步骤图像输入（确定输入条件）---> 图像增强（图像像质改善）---> 图像分割（图像二值化）--->图像整理（特征提取）---> 图像识别处理和测量（标尺和参数）---> 数据分析3.图像分析系统的应用几何形态检测；显色程度表达；密度分布检测；定性分析和定量分析细胞核浆比测量。
（DNA含量测量、骨标本几何参数测量、扫描电镜（SEM）图象几何参数测量、血管参数测量、白血球细胞测量、神经轴突测量、银颗粒密度测量、荧光定量测试、骨髓腔三维重建、免疫组化测量、电泳条带测量）其他1. 离心技术：利用旋转产生的离心力，将不同大小的颗粒从溶液中分离，如细胞、细胞器、病毒、大分子。
包括差速离心法、沉降速度离心，又称移动区带（密度）离心和沉降平衡离心，又称等密度梯度离心。
2. 差速离心法：通过一系列递增速度的离心，依次将大小不同的颗粒逐级分离。
分离大小相差悬殊的细胞和细胞结构成分。
3. 移动区带离心法：用梯度蔗糖或甘油作为介质，将要分离的样品放在介质表面，形成一个狭带，然后超速离心，使不同大小的颗粒以不同的速度向管底方向移动，形成一系列区带，从管底小孔中分次收集各种颗粒成分。
分离密度相近而大小不等的细胞或细胞器。
分离效果只与颗粒大小有关，与密度无关。
4. 等密度梯度离心：离心时采用包括各种颗粒密度范围的梯度介质，被分离颗粒达到与其相同的密度介质时不再移动，形成一系列区带，然后从管底收集。
分离密度不等的颗粒,适用于病毒、DNA、RNA、蛋白质等，效果只与颗粒密度有关，与大小无关。