细胞培养与细胞生物学常用技术
举例说明细胞生物学的研究方法的种类
举例说明细胞生物学的研究方法的种类细胞生物学是研究细胞结构、功能和生理过程的学科，它使用多种方法来进行研究。
下面列举了十种常见的细胞生物学研究方法。
1. 光学显微镜观察：光学显微镜是一种常用的工具，用于观察细胞的形态、结构和功能。
通过调节镜头和使用染色剂，可以更清晰地观察细胞的细节。
2. 电子显微镜观察：电子显微镜是一种高分辨率的显微镜，可以观察到更小的细胞结构，如细胞器、细胞膜等。
它可以提供细胞的高分辨率图像。
3. 细胞培养：细胞培养是将细胞从生物体中分离出来，在含有营养物质的培养基中进行培养的过程。
这种方法可以研究细胞的生长、增殖和功能。
4. 免疫细胞化学：免疫细胞化学是通过使用抗体来标记和检测特定蛋白质的方法。
这种方法可以帮助研究人员了解细胞内不同蛋白质的位置和功能。
5. 细胞分离和纯化：细胞分离和纯化是将特定类型的细胞从混合细胞群中分离出来的方法。
这种方法可以帮助研究人员研究特定细胞类型的功能和特性。
6. 分子生物学技术：分子生物学技术包括PCR、DNA测序、基因克隆等，可以帮助研究人员了解细胞的基因组、基因表达和遗传变异。
7. 蛋白质分析：蛋白质分析是研究细胞内蛋白质的种类、结构和功能的方法。
常用的蛋白质分析方法包括SDS-PAGE、Western blot 等。
8. 细胞生物物理学：细胞生物物理学是研究细胞力学、细胞形态学和细胞力学等方面的学科。
常用的方法包括细胞变形实验、细胞力学模拟等。
9. 高通量筛选：高通量筛选是一种通过自动化实验系统进行大规模筛选的方法。
它可以帮助研究人员快速筛选和鉴定特定分子对细胞的影响。
10. 生物信息学分析：生物信息学分析是利用计算机和统计学方法对细胞数据进行分析的方法。
它可以帮助研究人员从大量数据中提取有用的信息，揭示细胞的复杂性。
细胞生物学的实验方法和技术
细胞生物学的实验方法和技术细胞生物学是研究细胞结构、功能和生命活动的学科，可以帮助我们了解生命的起源和本质。
在细胞生物学领域，实验是非常重要的，因为只有通过实验才能获取丰富的数据和信息。
接下来，我们将介绍一些常用的细胞生物学实验方法和技术。
1. 细胞培养细胞培养是一种将细胞放置在含有营养物的培养基上的实验方法。
这种方法可以被应用于很多方面，例如研究基因表达、病理生理学和新药发现等领域。
细胞培养通常要求细胞处于可能生长和分裂的特定生长条件下，培养基的配方和组成要根据细胞类型进行调整。
2. 免疫荧光染色免疫荧光染色是一种将抗体特异性地与待检测蛋白质结合，然后用荧光染色剂标记抗体的实验方法。
这种方法被广泛应用于检测蛋白质的组织学定位、蛋白质相互作用和细胞信号传导等方面的研究。
3. 细胞色素c释放实验细胞色素c释放实验是通过检测细胞色素c的释放来检测细胞凋亡状况的实验方法。
这种实验需要将细胞暴露在合适的刺激条件下，然后收集细胞，用针头机械破碎并分离出线粒体，接着用色素c检测试剂。
此方法可以被应用于癌症治疗、新药研发和基础细胞生物学研究等领域。
4. 网格溶解实验网格溶解实验是一种检测细胞侵袭和扩散能力的实验方法，常用于研究细胞恶性生长、转移和肿瘤治疗等领域。
这种实验需要在培养皿中放置一层含有孔的膜，将预处理好的细胞悬浮在孔上方的区域，然后留置一段时间等待细胞穿过孔隙层次，最后收集并处理细胞样本，通过各种方式检测细胞侵袭和扩散的情况。
5. 蛋白-蛋白相互作用实验蛋白-蛋白相互作用实验是一种检测蛋白质互相作用的实验方法。
这种实验有几种方法，包括酵母对二杂交法、共免疫沉淀法和化学交联法等。
这些方法可以帮助我们了解蛋白质相互作用的机制，为研究信号转导、基因表达和疾病机理等领域提供参考资料。
以上是几种常用的细胞生物学实验方法和技术。
每一种方法都有自己独特的适用范围和步骤，研究者们需要根据具体的实验内容选择合适的方法。
细胞生物学实验技巧总结
细胞生物学实验技巧总结细胞生物学是一门研究细胞结构、功能和生命过程的学科，实验是探索和验证细胞生物学理论的重要手段。
为了更好地进行细胞生物学实验，我们需要掌握一些实验技巧和方法。
本文将总结一些常用的细胞生物学实验技巧，帮助读者更好地开展相关实验。
一、细胞培养技巧1. 细胞选取与分离：在细胞培养实验中，正确选择和分离细胞是非常重要的。
首先，根据实验的要求选择适当的细胞系或原代细胞。
其次，使用无菌技术将细胞转移到培养皿中，并确保培养容器的无菌状态。
2. 培养基的配制：细胞培养基的配制要根据细胞类型和实验要求进行合理的选择。
通常包括基础培养基和补充物。
在配制过程中，要注意严格按照要求添加培养基成分，保证培养基的质量。
3. 细胞培养条件的控制：细胞的生长和繁殖需要特定的环境条件。
在培养细胞的过程中，要注意控制温度、湿度和二氧化碳浓度等参数。
此外，定期更换培养基，并检查细胞的形态和活性。
二、细胞染色技巧1. 原位染色：原位染色是观察细胞形态和分子定位的重要方法。
其中，荧光原位杂交技术（FISH）可以用来检测基因的表达和定位。
使用特定的探针与目标DNA高度特异地结合，然后使用荧光探针显色，利用荧光显微镜观察染色体和核酸分子的位置。
2. 免疫染色：免疫染色是通过特异性抗体与目标分子结合，然后使用荧光标记的二抗进行检测，用于检测蛋白质的定位和表达。
在进行免疫染色时，需要注意选择适当的抗体和染色方法，并进行有效的洗涤步骤，以避免非特异性染色。
三、细胞分离和提取技巧1. 胞内蛋白提取：细胞内的蛋白质提取是许多分子生物学研究的基础。
为了获得高质量的胞内蛋白样品，可以使用细胞裂解缓冲液使细胞破碎，并添加蛋白酶抑制剂来保护蛋白质免受降解。
此外，离心操作可以用来去除细胞碎片和细胞器。
2. DNA/RNA的提取与纯化：DNA/RNA分离是研究基因组和转录组的重要步骤。
对于DNA的提取，可以使用DNA提取试剂盒，按照说明书进行提取和纯化。
细胞生物学实验技术
细胞生物学实验技术细胞生物学实验技术是现代生命科学研究中的关键环节，它为研究人员提供了深入了解细胞结构、功能和相互作用的途径。
本文将重点介绍一些常见的细胞生物学实验技术，包括细胞培养、染色技术、分离技术和显微镜观察等。
一、细胞培养技术细胞培养是一项基础性技术，它可以将细胞从体内取出并在适当的培养基中进行增殖和维持。
细胞培养的首要任务是提供适当的培养基，其中含有必需的营养物质、生长因子和适当的温度、湿度和气体条件。
细胞培养技术广泛应用于细胞生物学实验、组织工程、药物研发等领域。
二、染色技术染色技术是细胞生物学实验中常用的方法之一，它使研究者能够对细胞内各种结构和分子进行可视化观察。
常用的染色方法包括荧光染色、酶标染色和核酸染色等。
荧光染色利用荧光标记的抗体或染料，可使特定的细胞结构或分子在显微镜下发出荧光信号，从而观察其位置和表达水平。
酶标染色则通过酶与底物的反应，使细胞或组织显示出颜色等信号。
核酸染色则利用特定染料与细胞核酸结合，以观察DNA或RNA的分布情况。
三、分离技术分离技术在细胞生物学实验中具有重要作用，它可以将不同类型的细胞或细胞组分进行分离和纯化。
常用的分离技术包括细胞离心、流式细胞术和免疫磁珠分离等。
细胞离心是通过离心机将混合细胞悬液分离成上清液和沉淀，从而获得纯化的特定类型细胞。
流式细胞术则通过流式细胞仪测量细胞的大小、形态和表面标记物，从而实现对细胞的高通量分离和分析。
免疫磁珠分离则利用特定抗体结合在磁珠表面，以实现对需要纯化的细胞或细胞组分的选择性捕获。
四、显微镜观察显微镜观察是细胞生物学实验的重要手段，它使研究者能够观察到细胞内不同的结构和过程。
传统光学显微镜可实现对细胞形态和部分细胞器的观察，但其分辨率有限。
近年来，随着超分辨显微镜技术的发展，研究者们能够突破传统光学显微镜的分辨率极限，实现对亚细胞结构和分子过程的观察。
总结细胞生物学实验技术在现代生命科学研究中发挥着至关重要的作用。
细胞生物学的基本实验技术和方法
细胞生物学的基本实验技术和方法细胞生物学是现代生命科学的一个重要分支，研究细胞的结构、功能、遗传和分子机制，对于理解生命的本质、疾病的发生和治疗具有重大意义。
本文将介绍一些细胞生物学的基本实验技术和方法，包括细胞培养、荧光显微镜、免疫染色、蛋白质电泳和PCR等。
一、细胞培养细胞培养是细胞生物学中最基本的实验技术之一，它是将细胞放入含有营养物质、生长因子和抗生素等的培养基中，使其在适当温度、湿度和CO2浓度下生长、增殖、分化或转化的过程。
细胞培养的方法非常丰富，可以根据细胞来源、类型、培养条件等进行分类，常用的有原代培养、细胞系、肿瘤细胞和原生动物等。
细胞培养可以用于研究细胞形态、生长特性、细胞周期、信号转导和基因调控等方面，也是制备疫苗、生产蛋白质和细胞治疗等方面的基础技术。
二、荧光显微镜荧光显微镜是一种利用荧光探针和激光光源来照射样品并检测荧光信号的显微镜，在细胞生物学中起着至关重要的作用。
荧光探针可以有机会或无机盐的形式存在，它们可以与细胞的生物分子如蛋白质、核酸等结合并发生光学反应，发射出荧光信号。
荧光显微镜具有高分辨率、高灵敏度、多重标记和实时成像等优点，可以用于研究细胞形态、结构、功能、互作和代谢等方面，还可以用于细胞追踪、基因表达、蛋白质定位和药物筛选等方面。
三、免疫染色免疫染色是一种利用抗体与特定抗原相结合来检测或定位生物分子的技术，在细胞生物学和免疫学中广泛应用。
抗体是由 B 细胞产生的一类蛋白质，它可以通过特异性与异物（如细胞表面抗原、蛋白质、核酸等）结合，从而实现对它们的检测和定位。
免疫染色有直接和间接两种方法，前者是将荧光染料或酶标记直接连接在一级抗体上，后者是将荧光染料或酶标记连接到二级抗体上，再与一级抗体结合来增强信号。
免疫染色可以用于鉴定细胞类型、检测蛋白质表达、定位细胞器、分析信号通路和检测抗体反应等方面。
四、蛋白质电泳蛋白质电泳是一种利用电场和凝胶电泳技术来分离和检测蛋白质的方法，在细胞生物学和生物化学中起着重要作用。
细胞生物学实验技术
细胞生物学实验技术细胞生物学作为生物学的一个重要分支，研究的是生命最基本的单元——细胞。
在现代科研和医学领域中，细胞生物学实验技术扮演着至关重要的角色。
本文将介绍几种常见的细胞生物学实验技术，以及它们在科学研究和实践中的应用。
一、细胞培养技术细胞培养技术是细胞生物学研究的基础，也是许多实验的起点。
通过细胞培养技术，科研人员可以将细胞在体外进行培养，以便进行各种实验。
细胞培养技术的关键是培养基的配制和培养条件的控制，包括温度、湿度、CO2浓度等。
现代细胞培养技术已经非常成熟，可以培养多种细胞系，广泛应用于细胞生物学研究、药物筛选和临床诊断等领域。
二、细胞转染技术细胞转染技术是将外源DNA、RNA或蛋白等物质导入到细胞内的技术。
通过细胞转染技术，科研人员可以研究基因的功能、蛋白的表达以及疾病的发生机制。
常见的细胞转染方法包括化学法、电穿孔法、基因枪法等。
细胞转染技术在基因工程、基因治疗和干细胞研究等领域有着广泛的应用。
三、细胞分选技术细胞分选技术是将不同类型的细胞或不同状态的细胞进行分离和分选的技术。
通过细胞分选技术，科研人员可以获得纯化的细胞群，用于后续的实验和分析。
常见的细胞分选方法包括流式细胞术、磁性珠法、荧光显微镜法等。
细胞分选技术在免疫学、干细胞研究和癌症诊断等领域有着重要的应用。
四、细胞成像技术细胞成像技术是利用显微镜等设备对细胞进行观察和成像的技术。
通过细胞成像技术，科研人员可以了解细胞的结构、功能以及动态变化。
现代的细胞成像技术包括荧光显微镜、共聚焦显微镜、原子力显微镜等。
细胞成像技术在细胞生物学、神经科学和药物研究等领域有着广泛的应用。
五、细胞分子生物学技术细胞分子生物学技术是研究细胞内分子基因组的技术。
通过细胞分子生物学技术，科研人员可以研究细胞的DNA、RNA、蛋白等分子水平的信息。
常见的细胞分子生物学技术包括PCR扩增、基因克隆、蛋白质组学等。
细胞分子生物学技术在基因表达调控、基因组编辑和疾病诊断等方面有着重要的应用。
细胞生物学的实验方法与技巧
细胞生物学的实验方法与技巧细胞生物学是研究细胞结构和功能的科学领域。
在细胞生物学中，实验方法和技巧是非常关键的。
细胞生物学的实验技术涉及到多种技术和方法，包括细胞培养、细胞分离、荧光显微镜、分子生物学等等。
在本文中，我们将会详细讨论细胞生物学中的实验方法和技巧。
一、细胞培养技术细胞培养技术是研究细胞生长、增殖、衰老等生理状态的一种重要的实验技术。
细胞培养技术通常需要使用一个适宜的培养基，该培养基还需要添加适当的营养物质和培养物质。
在培养细胞时，需要注意适宜的温度、湿度、和二氧化碳含量等因素，这些因素可以影响细胞的状态和生命活动。
另外，在细胞培养中，不可避免地会遇到一些问题，例如细胞的寿命、细胞的死亡、菌污染等问题。
为避免这些问题，需要在实验中采取一些必要的预防措施。
例如，可以使用无菌操作技术，采用CDMF等杀菌剂消毒培养器、培养器中的培养物料，这样可以有效防止细胞因菌污染而死亡。
二、细胞分离技术细胞分离技术是研究细胞的单个特性、形态和功能的一种技术。
在实验中需要利用细胞分离技术来获得一定数量的单个细胞。
细胞分离技术有多种方法，包括分离器分离、离心分离、胶体分离和酶消化等，每种方法都有其优缺点。
其中，酶消化是一种比较常见的细胞分离方法，通过加入一定量的酶，将组织内的胶原纤维、纤维素及其他基质物质消化掉，从而获得单个细胞。
在酶消化实验中，需要根据不同细胞类型、不同组织、不同生长状态等因素进行调整，以获得最佳效果。
三、荧光显微镜技术荧光显微镜技术是一种广泛用于生物学和生命科学中的高级显微镜技术。
在细胞生物学研究中，荧光显微镜技术是最常用的技术之一，因为它可以用来标记和检测细胞内的各种生物大分子，如蛋白质、核酸、酶等。
在荧光显微镜实验中，使用的荧光探针要与待检测的细胞相匹配，例如，使用荧光染料DPH来探测细胞内外膜分子的相互作用。
同时，还需注意荧光显微镜的光源选择、荧光图像的采集和分析等问题，以获得高质量的研究数据。
细胞生物学的技术和方法
细胞生物学的技术和方法细胞生物学是研究细胞的基础结构和功能的学科，它是现代生命科学的核心。
随着科技的不断发展和进步，细胞生物学的研究也越来越深入。
在这方面，细胞生物学的技术和方法占据了一个非常重要的地位。
一、细胞培养技术细胞培养是指将生物组织或细胞在人工培养条件下进行培养。
这一技术对于探究生物细胞的基本特性和生理病理过程具有重要的意义。
目前，细胞培养技术主要分为原代细胞培养和细胞系培养两种。
原代细胞培养是指从人类或动物组织中分离出的细胞，常用于细胞生长因子等的研究。
而细胞系培养则是从原代细胞培养中分离出的细胞系，可以在无限期时间内进行培养，被广泛应用于疾病治疗和药物筛选等方面。
二、生物标记技术生物标记技术是指采用生物分子作为标记物，通过与细胞分子相互作用实现细胞成像或检测的技术。
常见的生物标记物有蛋白质分子、核酸分子和纳米颗粒等。
生物标记技术在细胞分子机制研究、疾病诊断和治疗等方面具有重要的应用价值。
三、单细胞RNA测序技术单细胞RNA测序技术是指对单个细胞进行RNA测序的技术。
这一技术可以揭示细胞间的差异性，发现低频率细胞和介于生物学状态之间的转换状态等。
该技术在癌症早期诊断、疾病治疗以及基因编辑等方面具有很好的应用前景。
四、蛋白质组学技术蛋白质组学技术是指对蛋白质组进行高通量分析的技术。
这一技术可以在同一时间对上千个蛋白进行检测，揭示细胞内蛋白质相互作用关系、功能调控以及疾病发生的发生机制等方面提供一定的帮助。
蛋白质组学技术已越来越成为疾病治疗、药物筛选以及基因编辑研究的重要手段。
五、基因编辑技术基因编辑技术是指直接在细胞中编辑基因序列的技术。
基因编辑技术通过CRISPR-Cas9系统、TALEN系统或zinc finger nuclease等工具，直接清除或修改细胞基因序列。
这一技术可以应用于疾病治疗、农业生产以及基础科研等领域。
总之，细胞生物学的技术和方法在现代生命科学的研究中起着不可替代的作用。
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细胞培养与细胞生物学常用技术目录实验一软琼脂克隆形成 (2)实验二细胞划痕愈合 (4)实验三细胞活力检测 (6)实验四细胞免疫荧光 (8)实验五细胞转染 (12)实验六细胞总RNA提取 (15)实验七逆转录反应 (18)实验八Real Ｔｉme PCＲ……………………………………………2０实验一软琼脂克隆形成【原理】正常情况下，贴壁生长的细胞必须依附在固体基质上才能生长,将其悬浮于液体或半固体基质中培养则难以增殖，这种现象称为锚定依赖性生长(anchorage dｅpｅnｄeｎｔｇrｏwｔh）。
而某些细胞在在被转化后,例如恶性肿瘤细胞，可以不依赖固体基质,在半固体(琼脂、甲基纤维素）培养基中也可增殖并形成细胞集落,这种现象称为锚定非依赖性生长(anｃhoｒage ｉndepｅnｄentｇrｏwtｈ)。
锚定非依赖性生长是肿瘤细胞的一种标识，也是检测恶性转化细胞较为准确的标志之一。
软琼脂克隆形成技术，则是在体外水平检测肿瘤细胞和转化细胞系锚定非依赖性生长能力最常用的手段之一。
该技术利用低熔点琼脂糖模拟体内细胞所处的半固体状态,并将细胞消化成单细胞,使细胞处于不贴壁及单细胞状态。
经过三周左右的生长，通过比较克隆形成率,来比较不同细胞或同一种细胞在不同的处理之后的转化及锚定非依赖生长的能力。
因此，软琼脂克隆形成实验是肿瘤研究领域一种重要的体外检测技术。
【材料】1、仪器：CＯ2培养箱、倒置显微镜、超净工作台、酒精灯、高压灭菌锅、水浴锅;2、试剂:ＤMEM培养基、胎牛血清、无水乙醇、75%乙醇、PBS 溶液、0.25%胰酶溶液、低熔点琼脂糖；3、细胞株:肝癌细胞系HepG２;【步骤】1、配制1．２%和0.7%的低熔点琼脂糖,高压灭菌后置于42℃水浴锅(或者恒温温箱）中，使其保持融化状态;2、配制2x DMEM培养基（含20%FＢS、2ｘ抗生素)，37℃预热；3、将1．２％的低熔点琼脂糖胶与2x DMED培养基等体积混合,将混合液加入到６孔板中，每孔１.５mL,轻轻混匀，避免产生气泡,室温放置待其凝固；4、取对数生长期的细胞,胰酶消化后尽量吹散细胞，制成单细胞悬液,取出１0μL,细胞悬液进行细胞计数,用无血清培养基稀释细胞至１x104个/ｍL;５、待下层胶完全凝固后,各取１.5mＬ的0.７%琼脂糖胶与２x 培养基进行等体积混合，加入300μL细胞悬液，充分混匀后入６孔板中，每孔1mL(即1００0个细胞／孔)，每种细胞设置３个平行孔;6、将６孔板置于CＯ２培养箱中孵育培养2-3周后，每孔加入１mＬ0.1％结晶紫染色，室温染色1０min，再用清水洗30ｍｉn,镜下拍照,计数并分析克隆形成情况。
实验二细胞划痕愈合【原理】细胞迁移是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的浓度梯度后而产生的移动。
细胞迁移是正常细胞的基本功能之一，是机体正常生长发育的生理过程，也是活细胞普遍存在的一种运动形式。
胚胎发育、血管生成、伤口愈合、免疫应答、炎症反应、动脉粥样硬化、癌症转移等过程中都涉及细胞迁移。
细胞划痕愈合实验(woｕｎd healing）简称划痕实验,是最早用来研究细胞迁移的体外实验,操作简单,经济实惠,因而被广泛应用。
细胞划痕愈合的操作过程十分简单,基本的步骤包括“划痕”的制造,细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。
具体过程为：当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”；然后置于显微镜下连续拍照，记录划痕边缘的细胞逐渐进入空白区域,即“划痕”愈合的过程，最后根据“划痕”愈合的速率反映细胞迁移的速率。
【材料】１、仪器:CＯ2培养箱、活细胞工作站、超净工作台、酒精灯;2、试剂及耗材：ＤMEM培养基、胎牛血清、75%乙醇、ＰBS溶液、0.２５%胰酶溶液、30mm直径细胞培养皿、尺子、记号笔;3、细胞株：肝癌细胞系HeｐG2;【步骤】１、培养皿接种细胞前,先用直尺测量,并在培养皿背面做“横线”标记,大约每隔０.５～1.0ｃｍ一条,一共５条线;2、取处于指数生长的细胞，胰酶消化后收集细胞沉淀,细胞计数后稀释至2.5x１0５个/mL；3、取背面做好标记的培养皿（直径３0ｍm)，每皿接种2mＬ细胞，置于培养箱培养3４h;4、取出细胞培养皿，用1０μＬ枪头比着直尺,垂直于底面的横线划痕；５、加入1mL PBS缓冲液,清洗细胞3次，洗去划痕产生的细胞碎片;6、加入2mL无血清培养基,置于活细胞工作站下拍照２4h，每小时拍一张照片；７、根据收集图片数据分析实验结果,计数细胞迁移率。
迁移率=【(Ｔ0时划痕宽度值-Tt时划痕宽度值）/T0时划痕宽度值】ｘ100%实验三细胞活力检测【原理】最常用的细胞活力检测方法为噻唑蓝比色法（ＭTT法）。
MTT全称为3-（4，５-Dｉmetｈylthiazol-2-yl）-２,5-dipheｎylｔｅtrａzｏｌｉuｍbroｍide,汉语化学名为3－(4,5-二甲基噻唑-２)-2,５-二苯基四氮唑溴盐,商品名为噻唑蓝，是一种黄颜色的染料。
活细胞线粒体内琥珀酸脱氢酶可以将外源性ＭＴＴ还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒，并沉积在细胞中,但死细胞没有此功能，因此结晶形成的量与活细胞数成正比。
ＤＭＳO能溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在490ｎm波长处测定其光吸收值,可间接反应活细胞数量。
由于该方法灵敏度较高，而且相对比较经济,因此广泛应用于药物筛选等细胞毒性检测领域。
【材料】1、仪器:CO２培养箱、倒置显微镜、超净工作台、酒精灯、多功能酶标仪;2、试剂：细胞培养基、胎牛血清、MＴT（5ｍg／mＬ)、DMSO、７5%乙醇、PBS溶液、顺铂母液3、细胞株:肝癌细胞系HepG2；【步骤】一、细胞接种１、从ＣO2培养箱中取出细胞培养瓶，吸弃培养基，ＰBS洗涤2次，胰酶消化后,加入培养基重悬细胞并转移至离心管中;2、800rpm离心2ｍiｎ,弃上清;3、加入３～5ｍL新鲜培养基重悬细胞（以25cm2培养瓶为例)，吸取１0μL细胞悬液，滴加至血球计数板上进行细胞计数;4、根据细胞计数结果,将细胞浓度稀释至4ｘ104个/mL;5、将细胞悬液按100μL/孔加至96孔细胞培养板;6、将96孔板置于ＣO2培养箱中孵育培养过夜。
二、细胞荷药１、用新鲜培养基将５ｍM顺铂母液的药物浓度稀释至15μＭ;2、从CO2培养箱中取出96孔板,吸弃培养基，实验组更换为上述含药物的新鲜培养基，对照组更换为新鲜培养基；3、将9６孔板置于CO２培养箱中继续孵育培养24ｈ。
三、MTＴ法检测1、从CＯ２培养箱中取出96孔板，吸弃培养基，每孔加入90μＬ新鲜培养基及１0μL 5mg／mL ＭＴT；2、将9６孔板置于CO２培养箱中继续孵育培养4h；３、吸弃培养基,每孔加入100μL DMSO,震荡混匀１0miｎ;４、用酶标仪测定490nｍ处的吸光值（Ａ4９0），计算细胞活力。
实验四细胞免疫荧光【原理】免疫细胞化学(immunohiｓtochemｉstry),是利用抗原抗体间特异性结合的原理,同时借助特殊的标记技术，实现对细胞内目的抗原或抗体进行定位、定性或定量检测的一种技术。
它不仅特异性强、灵敏度高，而且克服了传统免疫学检测技术只能定性和定量，而不能定位的缺点，可以实现定性定量的同时对目的蛋白进行精确定位,因此又被称为原位免疫检测技术。
也正由于具备这些优势，免疫细胞化学技术已在免疫学、微生物学、病理学、肿瘤学以及临床检验等诸多领域中得以被广泛应用。
免疫细胞化学技术有多种染色方式,根据标记物的种类,分为免疫荧光法、免疫酶标法、免疫铁蛋白法及免疫胶体金发等。
其中，免疫荧光法结合激光共聚焦扫描显微镜拍照技术,大大提高了检测分辨率，可以更为精确地检测抗原的细胞定位及分布。
目前可选用的荧光素较多,其中较为成熟的荧光素标记物包括异硫氰酸荧光素(fluorescｅｉn iｓoｔhiocyanate,FITC)、四甲基异硫氰酸罗丹明(tetrａmeｔhyl rhodaｍiｎｉsoｔｈiocyａｎate，TRIＴＣ）、四乙基罗丹明（rｈoｄamine,RB200）等,更有利于实现同时对两种或多种抗原进行检测，即双染和多染技术。
另外,免疫荧光可以对活细胞进行染色，在流式细胞术(flowcytomitｒy，ＦCW)方面有更多的应用,因而成为最为常用的免疫细胞化学技术之一。
免疫荧光技术是先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。
在细胞中形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素，受激发光的照射后，由低能态进入高能态,而高能态的电子是不稳定的，以辐射光量子的形式释放能量后,再回到原来的低能态的过程中可以发出明亮的荧光，利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织,从而确定抗原或抗体的性质和定位，以及利用定量技术测定含量。
根据荧光素标记的位置,可以分为直接法与间接法。
直接法是最早的标记方法,是利用荧光素直接标记待测蛋白第一抗体的标记方法，这种方法特异性高，但灵敏度较低,而且每种抗体均需要单独标记，十分不便且成本相对较高，因此逐渐被其他方法所替代；间接法是对直接法的改进,它不再标记直接与抗原结合的特异性一抗，而是标记与一抗结合的二抗，由于与一抗结合的二抗分子往往不是一个，因此间接法可以大大提高检测的灵敏度,与直接法相比,荧光亮度可增强3-4倍。
除灵敏度高外，间接法所需要的种属间接荧光抗体，可以适用于同一种属产生的多种第一抗体的标记显示，大大降低了检测成本,因此成为现在最广泛应用的免疫荧光技术之一。
【材料】1、仪器:ＣO2培养箱、倒置显微镜、超净工作台、酒精灯、正置荧光显微镜、高压灭菌锅;2、试剂：DMEM培养基、胎牛血清、无水乙醇、7５%乙醇、ＰBS溶液、0.２5％胰酶溶液、4%多聚甲醛、Ｐ53一抗、FITC荧光二抗、抗荧光衰减封片剂、TrｉtｏｎX-10０;3、细胞株:肝癌细胞系HepG2;【步骤】一、准备工作1、切片处理:将盖玻片置于浓酸浸泡过夜,自来水冲洗２０遍，蒸馏水清洗5遍,高压灭菌，烘干备用;2、细胞悬液制备:胰酶消化HepＧ2细胞，收集细胞沉淀,培养基重悬,制成单细胞悬液，计数后稀释至2x10５个/mＬ备用。
二、细胞爬片1、在6孔板孔中央滴加100μＬ培养基，每孔放入一张经过处理的盖玻片，使其恰好覆盖在孔内培养基上；2、每孔缓慢逐滴加入2mL稀释后的细胞悬液，轻柔混匀;3、将6孔板置于ＣO2孵箱中,培养过夜。
三、免疫荧光1、取出6孔板,弃掉孔内培养基，PBS轻柔清洗3次，每次3mｉn;2、每孔加入1ｍＬ预冷的４%多聚甲醛,4℃固定20mｉn;３、ＰＢS清洗3次，每次３ｍin;4、每孔加入1mL含0.２%Ｔrｉtｏn Ｘ-100的ＰBS,冰上静置１０min；5、PＢＳ清洗3次，每次3miｎ;6、每孔加入1ｍL含1%BSA的PBS,室温封闭1ｈ；7、将P53一抗以１:1０0的比例稀释后，取出100μL滴加在封口膜上,从培养孔中取出盖玻片，用吸水纸吸去背面及细胞面边缘处的液体后,轻轻放在封口膜上，细胞面与抗体均匀接触，４℃孵育过夜;8、取下盖玻片，置于6孔板相应孔中,PＢS清洗３次,每次3mi ｎ;9、滴加荧光素二抗,37℃孵育30mｉn（注意避光操作)；10、ＰBS清洗3次,每次3miｎ;11、每孔加入50０μL ＤＡPI染色液,室温染色５mｉn；1２、PＢS清洗３次,每次３ｍin;13、取一张洁净载玻片,中心位置滴加５0μL抗荧光淬灭封片剂，从6孔板中取出盖玻片，控干液体,贴有细胞的一面朝下，放置在封片液上，尽量避免气泡;14、显微镜下观察、拍照。