(完整word版)2015 动物细胞培养技术实验报告
动物细胞传代培养试验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除篇一：细胞传代培养实验报告细胞传代培养一.实验目的初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程，为生物技术在医学上的应用打下基础。
二、原理从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。
细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗费少，比较经济，因此成为生物学研究的重要手段。
细胞培养可分为原代培养和传代（继代）培养。
直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。
细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。
所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、ph值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。
三、材料和试剂1、细胞:293细胞株2、试剂：0.25%胰酶、1640培养基（含10%小牛血清）3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、电动枪，培养板，吸液枪，5ml玻璃吸管、酒精灯等四、操作步骤1、将长满细胞的培养板中原来的培养液吸去。
2、加入1〜2m10.25%胰酶溶液，使板底细胞都浸入溶液中。
3、马上吸走胰酶液，再次加入2ml左右的胰酶，同样马上吸去，再加入几滴胰酶放入培养箱中消化几分钟4、用吸管将贴壁的细胞反复吹打成悬液，再按照观察的生长情况确定的传代比例传代5.根据确定的比例来取需要的量(剩余的细胞拿来做细胞计数)，加入4ml左右的培养液6.前后左右的来回震荡使细胞分散均匀后，将培养板放入培养箱7.收拾整理超净台附：消化液配制方法：称取2.5克胰酶蛋白酶，加入100m110xpbs+纯水溶解到1L,滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。
细胞培养实验报告
动物细胞培养一、试验目的。
1、掌握无菌操作技术。
2、掌握原代和传代细胞培养。
3、掌握细胞冷冻和复苏技术。
4、了解培养成纤维细胞的形态。
二、试验原理。
将动物机体的组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。
细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。
传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。
同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。
悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
对具有移动特性的稳定细胞系或细胞株进行长期保存，一方面可以作为细胞研究的试验材料，另一方面可以做细胞制品的生产材料。
目前广泛应用的细胞保存方法是低温冷冻保存法，。
细胞的冷冻保存的原则是慢冻快融，这样做是为了防止细胞由于冷冻过程中产生了冰晶而发生细胞破裂。
三、实验器材及药品。
器材：怀孕的小白鼠、培养箱、培养瓶、培养皿、移液器、眼科剪、镊子、酒精灯、离心机、水浴锅、倒置显微镜、CO2培养箱、超净工作台、离心管、高压灭菌锅、试管架等。
药品：小牛血清、DMEM合成培养基、抗生素、DMSO冷冻剂、胰酶、PBS缓冲液等。
四、实验操作。
1、消毒灭菌。
将实验所需用到的工具（如枪头、培养皿、眼科剪、镊子以及每个人的实验服等）集中灭菌、烘干。
配制75%的酒精以备实验时所需。
2、培养基的配制。
分别取10ml的小牛血清、90ml的DMEM合成培养基，将两种培养基混合在一起，再向其中加入1ml的抗生素，吹打混匀就得到了细胞培养的培养液。
3、原代培养。
（1）、准备。
将实验过程中会用到的工具以及药品全部放在超净工作台上进行紫外消毒灭菌。
实验开始前带好乳胶手套，用酒精对手进行消毒。
将怀孕的小白鼠放在酒精中杀死，取出子宫内的胚胎组织。
（2）、剪切与消化。
将胚胎组织放于平板中，用眼科剪将组织块剪碎，剪得越碎越好。
细胞培养实验报告
动物细胞造就一.实验目标.1.控制无菌操纵技巧.2.控制原代和传代细胞造就.3.控制细胞冷冻和苏醒技巧.4.懂得造就成纤维细胞的形态.二.实验道理.将动物机体的组织从机体中掏出,经各类酶（经常运用胰蛋白酶）.螯合剂（经常运用EDTA）或机械办法处理,疏散成单细胞,置适合的造就基中造就,使细胞得以生计.发展和滋生,这一进程称原代造就.细胞在造就瓶长成致密单层后,已根本上饱和,为使细胞能持续发展,同时也将细胞数目扩展,就必须进行传代（再造就）. 传代造就也是一种将细胞种保管下去的办法.同时也是运用造就细胞进行各类实验的必经进程.悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才干分瓶.对具有移动特征的稳固细胞系或细胞株进行长期保管,一方面可以作为细胞研讨的实验材料,另一方面可以做细胞成品的临盆材料.今朝普遍运用的细胞保管办法是低温冷冻保管法,.细胞的冷冻保管的原则是慢冻快融,如许做是为了防止细胞因为冷冻进程中产生了冰晶而产生细胞决裂.三.实验器材及药品.器材：怀孕的小白鼠.造就箱.造就瓶.造就皿.移液器.眼科剪.镊子.酒精灯.离心计心情.水浴锅.倒置显微镜.CO2造就箱.超净工作台.离心管.高压灭菌锅.试管架等.药品：小牛血清.DMEM合成造就基.抗生素.DMSO冷冻剂.胰酶.PBS 缓冲液等.四.实验操纵.1.消毒灭菌.将实验所需用到的对象（如枪头.造就皿.眼科剪.镊子以及每小我的实验服等）分散灭菌.烘干.配制75%的酒精以备实验时所需.2.造就基的配制.分别取10ml的小牛血清.90ml的DMEM合成造就基,将两种造就基混杂在一路,再向个中参加1ml的抗生素,吹打混匀就得到了细胞造就的造就液.3.原代造就.（1）.预备.将实验进程中会用到的对象以及药品全体放在超净工作台长进行紫外消毒灭菌.实验开端前带好乳胶手套,用酒精敌手进行消毒.将怀孕的小白鼠放在酒精中杀逝世,掏出子宫内的胚胎组织.（2）.剪切与消化.将胚胎组织放于平板中,用眼科剪将组织块剪碎,剪得越碎越好.将剪碎的组织块放于离心管中,参加大约200µl 的胰酶进行消化.也可将其置于37度恒温箱中进行消化.（3）.分别细胞.消化到一准时光时,假如离心管中的溶液中消失了显著的污浊,可用吸管吸出少许消化液在镜下不雅察,如组织已疏散成细胞团或单个细胞,则应当参加与胰酶等量的造就液终止消化.离心管于离心计心情中离心,弃上清液,得到疏散的细胞.℃恒温CO2箱造就,瓶口极少拧的松一点.4.传代造就.（1）.倒置显微镜下不雅察细胞的形态.倒置显微镜下不雅察造就细胞的长势及密度,依据细胞密度决议传代的稀释倍数.（2）.收集原代造就的细胞.吸出造就瓶中的旧造就液,并用PBS 冲洗两遍.然后向造就瓶中参加200µl的胰酶进行消化.消化一段时光后用设置装备摆设好的造就液等比例终止消化.然后离心,收集到原代造就的细胞.（3）.传代细胞的造就.向离心管内参加大约7—8ml的造就液,吹打混匀.将造就液转移到造就瓶中,置于37度恒温CO2造就箱中造就.造就1—2天后于显微镜下不雅察细胞的形态.5.细胞冷冻保管.（1）.收集细胞.吸出造就瓶中的旧造就液,并用PBS冲洗两遍.然后向造就瓶中参加200µl的胰酶进行消化.消化一段时光后用设置装备摆设好的造就液等比例终止消化.然后离心,收集细胞.（2）.冷冻.向离心管中参加必定量的造就液以及10%—20%的DMSO冷冻液,吹打混匀并转移到冷冻管中.先将冷冻管在4度冰箱中放置10min,再放在—70度的冰箱中冷冻留宿.（3）.苏醒.将冷冻的细胞掏出来后,连忙放在40度水浴中,使其快速熔化.并对熔化的细胞进行进一步的不雅察.五.实验成果.传代细胞传代第一次换液细胞原代第一次的细胞原代第四天的细胞冷冻苏醒的细胞六.实验剖析与评论辩论.从本次实验的图片可以看出来,实验做得还算成功,细胞根本上没有被污染.在做的进程中必定要异常留意无菌操纵,这是决议实验成功的症结身分.在做原代造就的时刻,必定要将小鼠胚胎的组织块剪得够碎,确保在用胰酶消化后可以得到分别的单个细胞.在做传代造就时,要掌控好胰酶的消化时光.冷冻苏醒时,必定要按照步调进行冷冻,遵守慢冻速溶的原则.。
动物细胞培养实验方案
动物细胞培养实验方案一、实验目的：1.掌握动物细胞的培养技术；2.了解动物细胞的生长特点和培养条件要求；3.学习观察和分析动物细胞的形态变化和生长状态。
二、实验器材与试剂准备1.器材：细胞培养器皿（如培养皿、蜡烛罩、CO2培养箱等）、离心机、显微镜、细胞计数板、计时器等；2.试剂：细胞培养基、培养液添加剂（如酶、抗生素等）、PBS缓冲液、生长因子、染色剂等。
三、实验步骤1.细胞培养基的配制：按照制定的配方将培养基粉末加入适量的无菌去离子水中，搅拌均匀后，进行高温高压灭菌，冷却后分装至培养器皿中；3.细胞处理和接种：将收集到的组织先用PBS缓冲液洗涤，然后使用细胞裂解酶或胰酶等消化酶消化组织，使细胞分散，处理成单个细胞后，用细胞计数板计数，并将细胞悬液接种到预先准备好的培养器皿中；4.细胞培养条件的控制：将培养器皿置于CO2培养箱中，设定适当的温度（通常为37℃）、湿度和CO2浓度（通常为5%），并保持稳定；5.细胞培养的观察和记录：观察培养皿中细胞的形态变化和生长状态，记录细胞的外观、增殖情况、易于观察的指标等；6.细胞的子培养和冻存：当细胞达到一定密度时，可以进行子培养，即将细胞从一个培养皿中转移到新的培养皿中，以促进细胞的增殖和保存细胞生物资料。
此外，也可以将分散的细胞加入由培养液和冻存剂组成的试管中，通过冷冻的方式保存细胞，并用于后续的实验。
四、实验控制与常见问题的解决1.环境控制：细胞培养箱中的温度、湿度和CO2浓度的调整应尽量保持稳定；2.培养基的配制：根据细胞培养物的不同，可以选择不同配方的培养基，确保培养基的质量符合要求；4.洗涤步骤：组织或细胞的洗涤步骤应轻柔，避免对细胞的损伤；5.细胞的接种量：对于粘附性细胞，接种量应适当，以避免细胞过度堆积或过度稀释。
五、实验结果和分析观察培养皿中细胞的生长状态、细胞数量以及形态的变化，记录生长状态、增殖情况和其他可以观察到的指标，并进行数值化分析和统计。
实验九动物细胞培养
原代培养的绍API染色）
正常细胞
1万单位/ml青、链霉素）。
四、原代培养
• 1.酒精棉球消毒鸭蛋，剥出鸭胚，去头、翅、爪和内脏， 加Hank’s 液，剪碎为0. 5 -1mm3 的小块， Hank’s 液洗涤2 - 3 次。
• 2. 组织块移入培养瓶，间距0.5cm摆放后倒置培养瓶，加少量营养液， 保持湿润，37 ℃培养，2hr后翻转培养瓶，添营养液继续培养。
• 3. 定期观察细胞贴壁生长状况，如颜色变黄，说明细胞生长，3-5天 后更换培养液。
• 4 .倒置显微镜下观察拍照。 • 5.单层细胞用Hank’s 液洗涤后，加入维持液，用于原代细胞维持。
五、传代培养
• 当培养细胞接近汇合成片时，倾去培养液。 • 加入0. 25 %（含0. 02 %EDTA ）消化2-3分钟，倾去大部
实验九 动物细胞培养
一、实验目的
• 掌握无菌操作； • 掌握原代和传代细胞培养； • 了解培养成纤维细胞的形态。
• 3. 主要试剂 • 双蒸水、Hank’s液、0.25%胰蛋白酶、
EDTA、NaHCO3 、台盼蓝、洋红。 • 营养液：DMEM培养基（含8%小牛血清、
1万单位/ml青、链霉素）。 • 维持液： DMEM培养基（含5%小牛血清、
凋亡细胞
分裂中期细胞
六、作业
• 1. 细胞培养过程中应该注意哪些事项？ • 2. 描绘培养成纤维细胞的形态（或提供照
片）。
动物细胞观察实验报告
一、实验目的1. 熟悉制作临时装片的步骤。
2. 掌握使用显微镜观察动物细胞的基本方法。
3. 了解动物细胞的基本结构及其功能。
二、实验原理动物细胞是生物体的重要组成部分，其结构和功能对生物体的生命活动具有重要意义。
通过观察动物细胞，我们可以了解其基本形态和结构，为进一步研究细胞生物学奠定基础。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：小白鼠肝细胞、生理盐水、碘酒、载玻片、盖玻片、显微镜、镊子、滴管等。
2. 仪器：显微镜、酒精灯、烧杯、剪刀、吸水纸等。
四、实验步骤1. 取一小块小白鼠肝组织，用生理盐水清洗后，用剪刀剪成小块。
2. 将小块肝组织放入载玻片中央，滴加少量生理盐水。
3. 用镊子轻轻将肝组织压平，使细胞充分展开。
4. 盖上盖玻片，用镊子轻轻压平，使细胞与盖玻片紧密接触。
5. 用碘酒滴在盖玻片边缘，使碘酒均匀地浸入细胞中。
6. 将载玻片放到显微镜载物台上，先用低倍镜观察细胞整体结构，再用高倍镜观察细胞内部结构。
7. 观察细胞核、细胞质、细胞膜、线粒体、内质网、高尔基体等细胞器。
五、实验现象1. 细胞核呈圆形或椭圆形，染色较深，位于细胞中央。
2. 细胞质呈透明或淡蓝色，内有各种细胞器，如线粒体、内质网、高尔基体等。
3. 细胞膜呈透明或淡蓝色，与细胞质相区别。
4. 线粒体呈圆形或椭圆形，染色较深，分布在细胞质中。
5. 内质网呈网状结构，染色较浅，分布在细胞质中。
6. 高尔基体呈囊泡状结构，染色较浅，分布在细胞质中。
六、实验结论1. 动物细胞具有典型的真核细胞结构，包括细胞核、细胞质、细胞膜、线粒体、内质网、高尔基体等细胞器。
2. 细胞核是细胞的控制中心，负责细胞的遗传信息的存储和传递。
3. 细胞质是细胞的生命活动场所，含有各种细胞器，参与细胞的代谢、合成、运输等功能。
4. 细胞膜是细胞的保护层，负责细胞内外物质的交换。
5. 线粒体是细胞的能量工厂，负责细胞的能量供应。
6. 内质网和高尔基体参与蛋白质的合成、加工和运输。
细胞培养实验报告
细胞培养实验报告摘要：本实验旨在通过细胞培养的方法，观察和研究细胞的生长情况、传代和分化过程。
我们选择了XXX细胞株作为研究对象，并在适当的培养条件下进行培养和观察。
通过实验发现，细胞的生长能力受到培养基成分、温度和培养时间的影响。
细胞的传代实验进一步验证了细胞的增殖能力和稳定性。
此外，我们还进行了细胞分化实验，观察到细胞在特定培养条件下，能够展示出不同的形态和功能。
引言：细胞培养是生物学研究中常用的实验手段之一，也是体外研究细胞生物学行为的重要工具。
通过控制培养条件，可以使细胞在体外自组织和不断增殖，为我们研究细胞的生长、分化和功能提供了便利。
本报告将详细介绍细胞的培养、传代和分化实验的过程和结果。
材料与方法：1. 细胞株选择：选择XXX细胞株作为研究对象。
2. 培养基配制：根据细胞株的需求，配制适当的培养基，包括营养成分、生长因子等。
3. 细胞培养：将细胞接种于培养皿中，放置于恒温培养箱中，培养温度为37℃，CO2含量为5%。
4. 细胞观察：利用显微镜观察细胞的生长情况和形态变化。
5. 细胞传代：当培养皿中的细胞达到一定密度时，将其进行传代，即将细胞分散至新的培养皿中，并继续培养。
6. 细胞分化：在特定的培养条件下，诱导细胞分化形成不同功能细胞。
结果与讨论：1. 细胞培养实验：经过5天的培养，观察到细胞呈现出快速增殖的趋势。
细胞形态呈现为充实和贴壁生长，呈单层排列，细胞核呈椭圆形，并具有较高的核质比。
这表明细胞在适当的培养条件下能够正常生长和增殖。
2. 细胞传代实验：经过3次的传代实验，我们观察到细胞的增殖能力和稳定性。
每次传代后，细胞的形态、生长速度和增殖能力都相对稳定。
这说明细胞在体外培养过程中，能够保持其生物学特性和遗传信息的稳定性。
3. 细胞分化实验：在特定培养条件下，如改变培养基成分或添加特定的诱导因子，我们观察到细胞的形态和功能出现了明显的变化。
例如，在添加特定的分化因子后，细胞能够分化为不同细胞类型，如神经元和肌肉细胞。
细胞培养 实验报告
细胞培养实验报告细胞培养实验报告细胞培养是一项重要的实验技术，广泛应用于生物学、医学和药物研发等领域。
通过细胞培养，科研人员可以研究细胞的生长、分化、增殖以及对外界刺激的响应等生物学特性。
本实验旨在探究细胞培养的基本原理和技术操作，并观察细胞在不同条件下的生长情况。
实验材料与方法1. 材料：- 细胞培养基：含有适当营养物质的培养基，提供细胞生长所需的营养成分。
- 细胞：选择适合实验的细胞系，如HeLa细胞，用于观察细胞的生长情况。
- 试剂：如胰蛋白酶、细胞培养添加剂等，用于处理和培养细胞。
- 培养器具：培养皿、离心管、显微镜等。
2. 方法：- 细胞分离：将细胞培养物中的细胞分离出来，通过胰蛋白酶等酶的作用，使细胞从培养皿上脱落。
- 细胞计数：用显微镜观察并计数细胞数量，以确定细胞的密度。
- 细胞培养：将细胞转移到含有培养基的新培养皿中，提供适宜的条件促进细胞的生长和分裂。
- 细胞观察：使用显微镜观察细胞的形态、生长状态和细胞群落的分布情况。
- 细胞传代：当细胞达到一定密度时，将细胞从原培养皿转移到新的培养皿中，以保持细胞的健康生长。
实验结果与分析在本次实验中，我们选择了HeLa细胞系进行细胞培养实验。
首先，我们将HeLa细胞从冻存管中取出，加入适量的培养基中，并在37摄氏度的恒温培养箱中进行培养。
经过一段时间的培养，我们观察到细胞开始生长并形成细胞群落。
在观察细胞生长的过程中，我们注意到细胞的形态发生了变化。
初始时，细胞呈悬浮状态，形态较小而圆润。
随着培养时间的延长，细胞开始附着在培养皿上，并逐渐变得扁平而呈现典型的上皮细胞形态。
这是因为细胞在培养基中获得了足够的营养和生长因子，从而促进了细胞的增殖和分化。
我们还进行了细胞计数实验，以确定细胞的密度。
通过显微镜观察，在特定的视野范围内，我们计数了细胞的数量，并以此推算出整个培养皿中的细胞密度。
结果显示，随着培养时间的增加，细胞密度逐渐增加，细胞数量呈指数增长的趋势。
《动物细胞培养》实验内容(1).doc
《细胞工程实验技术》（动物细胞培养部分）目录实验一实验器材的清洗、包装和消毒 (2)实验二常用的仪器设备介绍 (3)实验三常用动物细胞培养用液的配制 (4)实验四组织块原代培养、传代培养及生物学检测 (6)实验五心肌细胞的原代培养、传代培养及培养细胞的常规检查 (8)实验一实验器材的清洗、包装和消毒一、实验目的1、掌握细胞培养常用实验器材的清洗要领、清洗步骤和注意事项。
2、掌握细胞培养常用器材的包装要领和要求。
3、掌握正压滤器的安装、使用和拆除方法及操作注意事项。
二、实验用品以组为单位包装物品1、量筒（100mL、500mL）2、大、小烧杯3个3、1000mL容量瓶×14、移液管1mL×3(灭菌)5、（100mL、250mL、500mL）盐水瓶、（500mL）广口瓶×各4(灭菌)6、眼科剪刀、眼科镊子各2把(灭菌)7、细胞培养瓶×3(灭菌)其它：饭盒、青霉素瓶、牛皮纸、离心管、滴管、注射器、磁棒、绳、标签纸等杂干。
三、实验内容（一）清洗1、要领：浸泡、刷洗、酸泡。
2、步骤：洗衣粉浸泡12h→刷洗→流水震荡冲洗15~20遍→漓水→蒸馏水洗荡2次→37℃烘干→待包装。
3、注意事项：(1)使用后的器材要立即投入水中。
(2)器皿内要充满液体，不得有气泡。
(3)器材要用流水震荡干净。
（二）包装1、大的器材如：量筒、广口瓶、培养皿、吸管等要包装。
2、小的器材如：注射器、剪刀、镊子放入饭盒。
3、注意事项：(1)包装时手指与器材接触面积要小，手指不能触及器材使用端。
(2)封闭器材使用端，标记器材手持端。
(3)小包装(4)玻璃管道口加棉花。
（三）湿热消毒：高压灭菌锅消毒四、作业1、清洗的要求为何较高？你认为该如何保证器皿中无杂质？2、器材包装有何要求？3、实验二常用的仪器设备介绍一、实验目的了解动物细胞培养中常用仪器设备的使用方法、注意事项和保养方法二、实验用品1）超净工作台2）自动双重纯水蒸馏器3）高压蒸气灭菌器4）过滤器5）电热恒温干燥箱6）二氧化碳培养箱7）冰箱8）倒置显微镜三、实验内容1、了解超净工作台的工作原理2、自动双重纯水蒸馏器结构、使用注意事项。
实验室培育细胞实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握细胞培养的基本原理和方法；2. 了解细胞培养过程中的无菌操作和细胞传代技术；3. 观察细胞在体外培养过程中的生长和变化。
二、实验原理细胞培养是将细胞从生物体中取出，在体外模拟生物体内环境，使其在适宜的条件下生长、繁殖和传代。
细胞培养技术是生物学研究的重要手段，广泛应用于医学、生物工程等领域。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：小鼠脾脏细胞、胰蛋白酶、细胞培养液、DMSO（二甲基亚砜）、培养瓶、移液器、细胞计数板、显微镜等。
2. 仪器：超净工作台、细胞培养箱、离心机、冰箱等。
四、实验步骤1. 细胞复苏：将冷冻保存的细胞复苏，解冻后用移液器吹打均匀，加入适量培养液，调整细胞浓度；2. 细胞接种：将复苏后的细胞接种于培养瓶中，放入细胞培养箱培养；3. 细胞传代：待细胞长满培养瓶后，用胰蛋白酶消化细胞，调整细胞浓度后，重新接种于新的培养瓶中；4. 细胞观察：定期观察细胞生长情况，记录细胞形态、数量和生长速度；5. 细胞冻存：将细胞传代后，取适量细胞加入DMSO，冷冻保存。
五、实验结果与分析1. 细胞复苏：复苏后的细胞呈圆形，细胞膜完整，无碎片；2. 细胞接种：接种后的细胞在培养箱中生长良好，细胞形态规则，细胞间连接紧密；3. 细胞传代：传代后的细胞生长迅速，细胞数量逐渐增加；4. 细胞观察：细胞在体外培养过程中，形态、数量和生长速度逐渐稳定。
六、实验结论1. 成功掌握了细胞培养的基本原理和方法；2. 掌握了细胞培养过程中的无菌操作和细胞传代技术；3. 观察到细胞在体外培养过程中的生长和变化。
七、实验讨论1. 细胞培养过程中，无菌操作至关重要，应严格遵循无菌操作规程；2. 细胞传代时，应选择合适的胰蛋白酶浓度和消化时间，以减少对细胞的损伤；3. 细胞培养过程中，应定期观察细胞生长情况，及时调整培养条件，以保证细胞生长良好。
八、实验总结本次实验成功进行了细胞培养，掌握了细胞培养的基本原理和方法，为后续的细胞学研究奠定了基础。
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一、实验目的
1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。
2、学习并掌握细胞传代培养的方法。
3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。
二、实验原理
细胞培养（cell culture）：细胞在体外条件下生长，细胞不再形成组织。
动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
由于细胞具有生长和自我复制的能力，为细胞体外培养和研究提供可能。
动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。
原代培养（primary culture）即直接从动物机体分离、获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法。
传代培养（subculture）当细胞生长增值达到一定密度，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。
高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的，但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则方便简单的多。
被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，因此，动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。
三、细胞培养相关设施及材料
1、细胞培养室
无菌操作区：只限于细胞培养及其它无菌操作，与外界隔离。
孵育区：培养箱设定的条件为37℃，5%CO2。
制备区：培养液及有关培养用液体的制备，液体制备后应该在净化工作台进行过滤除菌。
储藏区：包括冰箱、干燥箱、液氮罐等。
清洗区和消毒灭菌区：清洗区为相对污染区，消毒灭菌区与清洗区分开。
2、细胞培养常用基本设施：
荧光显微镜、超净工作台、孵箱、电热鼓风干燥箱、冰箱、液氮罐、消毒器、恒温水浴槽、滤器等。
细胞培养常用器皿：培养瓶、培养板、培养皿，玻璃瓶、吸管，离心管、冻存管，注射器，烧杯、量筒等。
3、细胞培养用品的清洗、消毒
新玻璃器皿要用5%稀盐酸浸泡，以中和其表面碱性物质：刷洗：
硫酸清洁液浸泡：浓硫酸+重铬酸钾+蒸馏水；
冲洗：流水冲洗15-20次，蒸馏水冲洗3次，三蒸水漂洗1-3次。
所有需灭菌的器械、物品灭菌前均需包装，防止灭菌后污染。
使用时放入超净工
作台后打开包装。
消毒灭菌：高压蒸汽灭菌（120℃，20min）；紫外线消毒：主要用于实验室房间空气及操作台。
四、细胞培养用液及培养基
1、培养用液：水（高度纯净）；缓冲液：平衡盐溶液，维持渗透压，调节PH值，供给细胞生存所需能量和无机离子成分；消化液：胰蛋白酶液，EDTA，胶原酶等。
2、培养基：维持体外细胞培养生存和生长的溶液。
（1）天然培养基：血清（胎牛血清、小牛血清、马血清、兔血清、人血清等）、血浆和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）水解乳蛋白；
（2）合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成。
如TC199、BME、MEM等。
主要成分：氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其他一些辅助物质。
五、动物细胞培养的条件
（1）无菌、无毒的环境：对培养液和所有培养用具进行无菌处理，通常还要在培养液中加入一定量的的抗生素，以防被污染。
此外应定期更换培养液，以便清除代谢产物防止细胞代谢产物累积对细胞自身产生危害。
（2）营养物质：无机物（无机盐、微量元素等），有机物（糖、氨基酸、促生长因等）血清和血浆，但血清和血浆不是营养物质。
（3）温度和PH：36.5±0.5℃，7.2-7.4。
所需要的特殊条件：
（4）血清：动物细胞离体培养常常需要血清。
最常用的是小牛血清。
血清提供生长必需因子，如激素、微量元素、矿物质和脂肪。
在细胞培养中的主要功能：1)提供维持细胞指数生长的激素、基础培养基中没有或量很少的营养物以及主要的低分子营养物等；
2)提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调整改变它们所结合的物质活力；
3)有些情况下其结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用；
4)新生牛血清是细胞贴壁、铺展在塑料、玻璃等培养基质上所需因子的来源；
5)构成缓冲系统，调节酸碱平衡；
6)提供蛋白酶抑制剂，在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害；
（5）支持物：大多数动物细胞有贴壁生长的习惯。
离体培养常用玻璃、塑料等作为支持物。
（6）气体交换：二氧化碳和氧气的比例要在细胞培养过程中不断进行调节，不断维持所需要的气体条件（95%的空气+5%的CO2混合气体），其中5%CO2气体是为保持培养液的PH稳定。
六、实验内容
1、用倒置荧光显微镜观察细胞形态
2、动物细胞传代
（1）培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代；
（2）准备好所需材料，先将手及超净工作台用酒精消毒，点燃酒精灯，将滴管用火焰烧，将PBS、培养基、胰酶准备好，要避免滴管交叉污染；
（3）将培养基喷酒精消毒，拿入超净工作台，用滴管把原有培养基吸掉；
（4）加入PBS吹洗培养皿（由于培养基中血清对胰酶消化有抑制作用，所以先用PBS洗），不要使劲吹，细胞贴壁不好，然后吸出PBS；
（5）加入适当的胰蛋白酶（使成单细胞悬液），消化30s，可快速在荧光显微镜下观察细胞形态，吸出胰酶；
（6）加入含有血清的培养基终止胰酶消化，用滴管吹打细胞，让细胞悬浮起来；
（7）根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中，一般癌细胞分5个，正常细胞传3个，放入孵箱继续培养；
（8）把超净工作台消毒收拾干净，将用过的滴管拿出超净工作台。
七、实验数据及分析
倒置荧光显微镜下HaCaT细胞形态
倒置荧光显微镜下A375细胞形态
HaCaT细胞为永生化人表皮细胞，来源于人皮肤，正常的细胞形态为上皮样，贴壁生。
传代用胰酶消化时，先用胰酶润洗，吸出后，孵育5min。
A375细胞为黑色素瘤细胞。
胰酶消化时，在倒置荧光显微镜下可观察到细胞变圆变亮，不再贴壁，成为单细胞。
八、实验注意事项
1、实验进行前，无菌室及无菌操作台以紫外灯照射30-60分钟灭菌，以70%乙醇擦拭无菌操作台面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后，才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。
实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70%乙醇擦拭无菌操作台面。
操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株的操作。
2、无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。
验用品以70%乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。
实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。
3、小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。
勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，不要在打开的容器正上方操作实验。
容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
4、实验人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。
操作过程中小心毒性药品，例如DMSO及TPA等，并避免尖锐针头之伤害等。
5、定期检测下列项目：CO2钢瓶中CO2压力；CO2培养箱中CO2浓度、温度、及水盘是否有污染（水盘的水用无菌水，每周更换）；无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000
小时/HEPA）；定期更换水槽的水。