动物细胞培养技术 思考题
细胞工程习题总结及参考答案
一．思考题1. 为什么要严格保持细胞工程操作环境和物品的无菌？答：植物组织培养中用到的培养基含有丰富的营养成分，有利于培养物的生长，然而各种杂菌同样也可以在上面迅速生长，所以植物组织培养过程中污染现象经常发生。
培养基一旦被污染，迅速生长的各种杂菌不但会和培养物争夺营养，而且这些杂菌生长的过程中会生成大量对培养物有害的物质，导致培养物迅速死亡。
2. 配制培养基时，为什么要先配制母液？答：1.方便配置其他培养基；2.保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取第三章一．思考题1. 胚状体与合子胚有何异同？答：异：体细胞胚又称胚状体，是指离体培养条件下没有经过受精过程而形成的胚胎类似物。
子胚是指由植物的雌雄配子融合形成的合子继而发育形成的胚，经过受精作用。
同：都含有一整套遗传信息,都可以发育成新一代生物个体.二．练习一、单选题1、植物组织培养是建立在___理论基础上的。
(B)A进化论 B植物细胞全能性C基因决定论 D细胞多样性2、植物组织培养的培养基不含___。
(C)A含N物质 B碳源 C血清 D生长素3、过滤除菌适用对象___。
(D)A玻璃器皿 B塑料器皿 C金属器皿D易被高温破坏的材料如抗生素、激素等试剂4、将___重新转移到成分相同的新鲜培养基上生长的过程称为继代培养。
(B)A外殖体 B愈伤组织 C 生根苗 D 幼苗5、下列植物细胞全能性最高的是（A）A. 形成层细胞B. 韧皮部细胞C. 木质部细胞D. 叶肉细胞6、植物组织培养过程中的脱分化是指（C）A. 植物体的分生组织通过细胞分裂产生新细胞B. 未成熟的种子经过处理培育出幼苗的过程C. 植物的器官、组织或细胞，通过离体培养产生愈伤组织的过程D. 取植物的枝芽培育成一株新植物的过程三、判断题•1、非胚性愈伤组织与胚性愈伤组织具有同样的再生能力（×）•2、一个细胞由分生状态转变为成熟状态的过程，叫脱分化。
（×）•3、所有的植物培养材料都必须高压灭菌锅灭菌121℃、15分钟。
高中生物(新人教版)选择性必修三课后习题：动物细胞培养(课后习题)【含答案及解析】
动物细胞工程动物细胞培养必备知识基础练1.(2021山东青岛高二期中)动物细胞培养是动物细胞工程的基础,科研人员将数量相等的动物肝脏肿瘤细胞和肝脏正常细胞分别置于相同培养液中培养。
下列叙述正确的是()A.在培养过程中通常要通入5%的CO2刺激细胞呼吸B.细胞培养液中通常含有维生素、激素、糖等多种能源物质C.定期更换培养液可以防止代谢产物的积累对细胞造成危害D.为了防止细菌污染,可向培养液中加入适量的干扰素5%的CO2,目的是维持培养液的pH,A项错误;维生素和激素不是能源物质,B项错误;定期更换培养液可以防止代谢产物的积累对细胞造成危害,C项正确;为了防止细胞培养过程中被细菌污染,可向培养液中加入适量的抗生素,D项错误。
2.右图表示动物细胞培养过程中,动物细胞增殖情况的变化曲线(图中B、D两点表示经筛选后继续培养),下列相关叙述错误的是()A.OA段的培养称为原代培养B.AB段可能发生了接触抑制C.BD段的培养需用胰蛋白酶处理和更换培养液D.动物细胞培养过程中,细胞可通过有丝分裂和减数分裂实现细胞增殖段的培养称为原代培养,为动物组织经处理后的初次培养,A项正确;AB段细胞几乎不再增殖,可能发生了接触抑制,需要用胰蛋白酶等处理,使组织细胞分散开来,形成单个细胞才能继续培养,B 项正确;BD段的培养需用胰蛋白酶处理和更换培养液,C项正确;减数分裂是有性生殖生物形成配子的方式,而动物细胞培养是通过有丝分裂实现细胞增殖的,D项错误。
3.下列关于动物细胞培养的有关叙述,正确的是()A.细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中B.动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素和动物血清等C.动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶处理D.动物细胞培养的目的是获得大量的细胞分泌蛋白,A项错误;动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、动物血清等,不需要生长素,B项错误;动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶处理,使细胞分散,C项正确;动物细胞培养的目的是获得细胞产物或细胞群,D项错误。
生物选修3主动训练2.2.1 动物细胞培养和核移植技术含解析
主动成长夯基达标1。
为了使用于培养的动物组织细胞分散开来以配制一定浓度的细胞悬浮液，选取动物组织后应先用哪种物质处理……（）A。
胃蛋白酶B.胰蛋白酶C.盐酸D。
胰脂肪酶解析：应先用胰蛋白酶来破坏细胞与细胞之间的连接，使细胞分散开。
答案:B2.在动物细胞培养中，所培养的动物细胞大都取自…（)A。
幼龄动物器官B。
老年动物器官C.中年动物器官D。
中年动物组织解析：动物细胞培养时应选用分裂能力较强的细胞.答案：A3。
下列有关动物细胞培养的叙述中正确的是( ）A.动物细胞培养的目的是获得大量的细胞分泌蛋白B.动物细胞培养前要用胰蛋白酶处理,以使细胞分散C。
细胞癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中D.培养到50代后的传代细胞称为细胞株解析：动物细胞培养的目的是多方面的，不只是为了获得分泌蛋白。
在细胞培养中,某些细胞癌变发生在50代以后，即传代培养过程中，这些细胞称为细胞系.答案:B4.下列动物细胞中，恢复其全能性相对较容易的是…（）A。
神经细胞B。
骨细胞C。
囊胚期细胞D.肝细胞解析:神经细胞、骨细胞和肝细胞属于体细胞,其分化程度高，恢复全能性相对十分困难。
囊胚期细胞属于动物胚胎细胞，其分化程度低,恢复其全能性相对容易。
答案：C5.下列不属于克隆的是（）A。
植物体通过体细胞进行的无性繁殖B.将某种瘤细胞在体外大量培养繁殖C。
扦插和嫁接D.将鸡的某个DNA。
片段导入小鼠的细胞中,并得以表达解析：将鸡的某个DNA片段导入小鼠的细胞中,并得以表达，属于基因工程；植物体通过体细胞进行的无性繁殖属于植物组织培养；将某种瘤细胞在体外大量培养繁殖属于动物细胞培养技术；扦插和嫁接属于无性生殖中的营养生殖。
答案:D6.动物细胞培养与植物组织培养的重要区别在于（）A。
培养基不同B。
动物细胞培养不需要在无菌条件下进行C。
动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株解析：动物细胞培养所需的营养物质与体内基本相同，由于人们对动物细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚，因此在使用合成培养基时，通常需加入血清、血浆等一些天然成分，而植物组织培养则不需要加上述物质.答案：A7.动物细胞工程常用的技术手段中，最基础的是（）A。
《动物细胞培养》思考题
《动物细胞培养》思考题1、细胞培养的一代生长过程如何？答：原代培养的过程就是动物细胞培养的第一代细胞。
原代培养是这样的：取出动物胚胎或者幼龄动物组织或器官后用胰蛋白酶使其分散为单个细胞，然后配置成一定浓度的悬浮液放入培养瓶（其液体培养基含动物血清）中置于培养箱中培养。
2、什么是原代培养、传代培养？答：原代培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。
传代培养是指当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养的过程。
3、细胞生长需要满足哪些条件？4、操作人员如何保持无菌？5、无菌操作的要点是什么？6、清洗的要求为何较高？你认为该如何保证器皿中无杂质？7、器材包装有何要求？8、叙述超净工作台的工作原理？9、正压过滤器为何会除菌？10、配制后液体呈黄色意味着液体的ph发生了什么变化？11、用于分离细胞的消化液为什么宜用无Ca、Mg离子的D－Hanks液或PBS液配制？Ca＋2、Mg＋2是细胞膜的重要组分，具有使细胞凝聚的作用。
因此，用于分离细胞的消化液宜用无Ca＋2、Mg＋2离子的D-Hanks液或PBS液。
12、L－谷氨酰胺在营养液中有何作用？L－谷氨酰胺属于生长因子的一种，是细胞生长所必需的。
13、营养液配制后为什么要小剂量分装？避免污染后全军覆没。
14、你认为心肌细胞培养的基本操作要点是什么？1）、首先用细胞分散法收获细胞，随时吸取少量消化液在镜下观察，并根据组织是否分散成细胞团或单个细胞，采取终止消化措施。
用筛网滤掉未消化的组织块。
2）、低速离心细胞悬液，弃掉上清液，加入含血清的培养液，轻轻吹打制成细胞悬液，计数并用培养液调整细胞密度。
3）、用吸管吸取一定量的细胞悬液，加到培养瓶中。
4）、将培养瓶放入37℃恒温箱中培养。
5）、每隔2到3天更换培养液一次或根据培养液颜色的变化确定换液时间。
15、培养瓶移入CO2恒温培养时，瓶盖为何要稍松？拧紧瓶盖无法进行气体交换，瓶盖稍松才能为细胞生长提供必要的氧气和二氧化碳，尤其是二氧化碳特别重要，细胞在酸性培养液中生长的更好16、如何初步判断胰蛋白酶的消化时间？17、细胞培养到一定时间为何要传代？18、你认为该如何操作才能保证培养过程中无微生物污染？19、你认为组织培养成功需要哪些条件？20、原代细胞和传代细胞培养有哪些区别？。
大规模动物细胞培养的问题及对策
大规模动物细胞培养动物细胞培养开始于本世纪初，到1962 年规模开始扩大，发展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法，利用动物细胞培养生产具有重要医用价值的酶、生长因子、疫苗和单抗等，已成为医药生物高技术产业的重要部分。
由于动物细胞体外培养的生物学特性、相关产品结构的复杂性和质量以及一致性要求，动物细胞大规模培养技术仍难于满足具有重要医用价值生物制品的规模生产的需求，迫切需要进一步研究和发展细胞培养工艺。
目前，世界众多研究领域集中在优化细胞培养环境、改变细胞特性、提高产品的产率并保证其质量和一致性上。
1. 细胞培养环境细胞培养环境中抑制因素的积聚是提高细胞密度的主要限制因素。
体外动物细胞培养中氨离子的积累是抑制细胞生长的主要因素之一。
氨的积聚使细胞内UDP氨基己糖(UDP-N-乙酰葡糖胺和UDP-N-乙酰半乳糖胺)增加，影响细胞的生长及蛋白的糖基化过程。
氨抑制Gln 代谢途径，使Asp 和Glu 消耗增加。
细胞消耗Asp 增加，可能是细胞线粒体膜上苹果酸－天冬氨酸泵转运NADH 加快，使细胞维持糖酵解途径的需要。
Asp 消耗增加可能会从Gln 代谢多经天冬氨酸转氨酶途径而不是丙氨酸转氨酶或谷氨酸脱氢酶途径得以补偿。
氨来源于两方面：一是直接来源于培养基，一是细胞代谢所产生。
但两者都涉及谷氨酰胺，因此需要防止培养基中Gln 自然分解，限制Gln 用量，并尽量去除培养基中的氨。
乳酸是细胞糖代谢的产物。
高浓度乳酸会抑制乳酸脱氢酶(LDH )，从而减少乳酸产生。
LDH 受抑制后阻止了NADH 向NAD 的再生及其偶联的丙酮酸/乳酸转换，从而导致NADH 增加。
NADH 增加，部分抑制糖酵解。
乳酸抑制糖酵解也导致低浓度丙酮酸，从而导致Gln 消耗减少。
由于糖酵解和Gln 的分解速度降低，能量产生减少，更多的能量用于维持离子浓度梯度，因此高乳酸浓度必将抑制细胞生长。
氨和乳酸对细胞的毒性作用已在多种不同的细胞系有大量报道，不同细胞系对于这两种代谢产物的耐受性差别很大，原因可能是不同细胞系葡萄糖和谷氨酰胺代谢过程中关键酶的敏感性不同，或者在不良生长环境下，细胞转换代谢途径，特别是氨基酸代谢的改变。
生物技术导论思考题及答案
思考题1、什么是生物技术，生物技术的基本内容包括哪些，这些基本内容之间的关系如何？答：生物技术是指人们以现代生命科学为基础，结合其他基础学科的科学原理，采用先进的工程技术手段，按照预先的设计改造生物体或加工生物原料，为人类生产出所需产品或达到某种目的。
生物技术的基本内容：基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程和蛋白质工程。
它们之间的关系：这五项技术并不是各自独立的，它们彼此之间是互相联系、互相渗透的。
其中，基因工程技术是核心技术，它能带动其他技术的发展。
2、基因工程的定义及其研究的基本理论依据和基本技术路线是什么？答：基因工程的定义：通过体外DNA 重组和转基因技术，有目的改造生物种性，实现有的物种在短时间内趋于完善，创造出更符合人们需求得新生物类型，或者利用这种技术对人类疾病进行基因治疗。
基因工程的理论依据： （1）不同基因具有相同的物质基础， （2）基因是可以切割的， （3）基因是可以转移的，（4）多肽与基因之间存在对应关系， （5）遗传密码是通用的，（6）基因可以通过复制把遗传信息传递给下一代。
基本技术路线：获得目的基因和克隆载体→目的基因与克隆载体结合，得到重组DNA 分子→将重组DNA 分子导入受体细胞→克隆子的筛选→重组子的鉴定基因工程工程菌 细胞工程蛋白质或酶发酵工程优良动植物品系蛋白质工程或酶工程微生物产品动植物个体或细胞3、基因工程的目的基因的分离基本途径包括哪些？答：（1）利用限制性内切核酸酶酶切法直接分离目的基因；（2）利用PCR 直接扩增目的基因； （3）目的基因的化学合成；（4）通过构建基因组文库或cDNA 文库分离目的基因。
4、因工程中用于转化的受体细胞应具备哪些基本的条件？答：应具备的条件有：（1）便于重组DNA 分子的导入和筛选克隆子； （2）重组DNA 分子在受体细胞能稳定维持；（3）适于外源基因的高效表达，表达产物的分泌或积累，对于真核目的基因的高效表达，应具有较好的翻译后加工机制；（4）遗传性稳定，对遗传密码的应用上无明显偏倚性；（5）易于扩大培养或发酵生长，具有较高的生产应用价值和理论 研究价值；（6）安全性高，不会对外界环境造成生物污染。
《动物细胞培养》课堂反思
《动物细胞培养》课堂反思一、教学目标简述动物细胞培养的过程、条件及应用。
二、教学重点、难点1. 教学重点动物细胞培养的过程及条件。
2. 教学难点动物细胞培养的过程及条件三、教学过程【课堂导入】师：烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？生：取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后再移植师：如何获得大量健康的自体皮肤来治疗？【新知学习】请同学们阅读课本后，简述动物细胞培养的基本过程？学生结合图2-16简述细胞培养的过程，教师强调其中原代培养和传代培养的含义，及细胞贴壁和接触抑制现象。
师：结合以上过程思考以下问题1、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？2、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的吗？3、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？4、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？5、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成分？6、细胞膜的主要成分是什么？7、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？8、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？9、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？10、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？11、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？12、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？13、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？14、如何理解原代培养和传代培养？15、传代培养的细胞能一直传代下去吗？16、有些为何能一直传下去吗？17、动物细胞培养就是为了得到这些细胞吗？18、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？同桌之间相互讨论后回答，教师点评或指正。
师布置任务：1﹑请同学根据以上内容总结出动物细胞培养的定义2﹑多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，请根据所学的知识，分析体外培养细胞应该模拟内环境的哪些内容？同桌之间相互讨论后回答，教师点评或指正。
2.2 动物细胞工程(第1课时 动物细胞培养)
2.2 动物细胞工程第1课时动物细胞培养一、单选题1.下列相关植物细胞工程和动物细胞工程的对比叙述不合理的是（）A. 动物细胞可以传代培养而植物细胞不能B. 动物细胞培养和植物组织培养所用培养基不同C. 动物细胞培养和植物细胞培养都需要在无菌的条件下进行D. 烟草叶片离体培养能产生新个体，小鼠杂交瘤细胞可以离体培养增殖2.下列关于细胞工程的叙述，错误的是（）A. 动物细胞培养体现了动物细胞的全能性B. 去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理C. 小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B淋巴细胞融合可制备单克隆抗体D. 电刺激可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合3.关于细胞工程的下列叙述正确的是（）A. 二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的B. 动物细胞核移植的受体细胞必须是卵细胞C. 克隆动物的性状与供体动物完全相同D. 用于核移植的供体细胞一般都选用10代以内的培养细胞4.下表细胞工程技术应用中各组所选择的实验材料及材料特点与实验目的匹配错误的是（）A. 1和2B. 2和3C. 3和4D. 1和45.对某种动物的肝肿瘤细胞进行细胞培养，下列说法错误的是（）A. 在利用肝组织块制备细胞悬液时，可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理B. 在合成培养基中，通常需加入血清、血浆等天然成分C. 为了防止动物细胞培养过程中的污染，可向培养液中加入适量的抗生素D. 动物细胞培养应在含5% CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是刺激细胞呼吸6.2017年11月27日，世界上首个体细胞克隆猴在上海诞生。
如图是克隆过程，下列相关叙述错误的是（）A. a细胞是卵细胞B. 克隆猴的性状与乙相同C. 重组细胞具有全能性D. ①过程运用了细胞核移植技术7.治疗性克隆有希望最终解决供体器官的短缺和器官移植出现的排斥反应。
下图表示治疗性克隆的过程，下列说法正确的是（）A. 图示过程利用了动物细胞培养和动物体细胞融合技术B. 图示过程实现了动物细胞的全能性，其优点是用上述方式获得的各种脏器组织细胞、神经细胞等进行移植降低了免疫排斥反应C. ①过程的细胞学基础是细胞的增殖和分化D. ①②过程需要进行DNA复制和蛋白质合成，同时还需要在培养液中不断补充细胞所需ATP8.下列有关动物细胞培养的叙述中，正确的是（）A. 动物细胞培养的目的就是获得大量的分泌蛋白B. 对动物组织块和分散的细胞进行培养，效果是基本相同的C. 细胞遗传物质的改变发生于原代培养过程中D. 培养高度分化的动物体细胞一般不能发育成幼体9.下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是（）A. 胰蛋白酶能消化细胞中的胶原纤维和其他成分，获得单细胞悬液B. 动物细胞只能贴壁生长，不能进行悬浮培养C. 细胞进行一次传代培养所需时间等于一个细胞周期的时间D. 能连续传代的细胞通常具有异倍体核型，其贴壁性下降10.作物脱毒、改善畜产品的品质、抗除草剂作物、可保存的干扰素、检测有毒物质、性别鉴定依次是下列哪项生物技术的应用（）①基因工程②细胞工程③蛋白质工程④胚胎工程A. ①②②③④④B. ②①①③②④C. ②①②③②④D. ②①②④③②11.下列有关细胞工程的说法正确的是（）A. 在愈伤组织形成过程中，除适宜的温度、pH和无菌条件外，还需要有植物激素进行调节B. 植物体细胞杂交前需要用酶去除细胞壁获得原生质体，然后再用灭活的病毒促进融合C. 利用动物体细胞核移植的方法得到克隆动物是培育新物种的一种方式D. 动物细胞培养应在含5%CO2的恒温箱中培养，CO2的作用是为细胞提供碳源12.下列叙述，不正确的是（）A. 每一个B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体B. 在动物细胞培养过程中，贴壁细胞会出现细胞的接触抑制现象C. 哺乳动物细胞核移植可分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植D. 植物组织培养、动物细胞培养、植物体细胞杂交和动物细胞融合得到的都只是细胞或杂交（种）细胞13.某研究小组对某种动物的肝肿瘤细胞（甲）和正常肝细胞（乙）进行培养，下列叙述正确的是（）A. 制备肝细胞悬浮液时先用剪刀剪碎肝组织，再用胃蛋白酶B. 肝细胞培养过程中通常在培养液中通入5%的CO2刺激细胞呼吸C. 为了防止培养过程中杂菌的污染，可向培养液中加入适量的干扰素D. 用血球计数板计数的方法，可推断乙细胞比甲细胞增殖周期长14.关于动物细胞培养和植物组织培养的叙述，错误的是（）A. 动物细胞融合过程中可用灭活的病毒、聚乙二醇（PEG）等B. 用人工薄膜将胚状体、愈伤组织等分别包装可制成人工种子C. 植物体细胞杂交过程中，需用不同浓度的细胞分裂素和生长素培养杂种体细胞D. 动物细胞培养可用于检测有毒物质，茎尖培养可用于植物脱除病毒15.下列关于细胞工程的相关判断正确的有（）A. 去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理B. 乳腺细胞比乳腺癌细胞更容易进行离体培养C. 培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞D. 动物杂交瘤细胞产生单克隆抗体体现了细胞的全能性16.下列有关动物细胞培养技术应用的说法错误的是（）A. 利用动物细胞培养技术可以生产病毒疫苗B. 动物细胞是基因工程中常见的受体细胞C. 利用培养的动物细胞可以生产抗癌药物D. 培养的动物细胞可以用于检测有毒物质17.下列实验中相关操作的叙述正确的是（）A. 在接种酵母菌的新鲜葡萄汁中通入无菌空气制作果酒B. 在植物体细胞杂交中加入灭活的病毒诱导原生质体融合C. 用胰蛋白酶处理后的动物细胞需在生理盐水中进行传代培养D. 植物组织培养实验中需使用无菌水对消毒后的外植体进行多次漂洗18.某生物兴趣小组的同学从资料上获知：二氯二乙胺能够阻止参与DNA复制的酶与DNA相互作用。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
《动物细胞培养技术》复习思考题
1.动物细胞培养的实验器皿清洗要求为何较高？你认为该如何保证器皿中无杂质？如果
器皿中有杂质，会对细胞培养产生什么样的影响？
答：①离体细胞对各种毒物都很敏感，若所用器材清洗效果未达到要求，各种毒物会损坏细胞影响实验。
②器皿使用高压灭菌锅，121.3℃，20~30分钟，在取拿的时候用经过高压灭菌后的镊子取拿，避免造成污染。
③
2.叙述超净工作台的工作原理？
答：超净工作台最主要的是空气循环过滤的过程，在这个过程中风机起到了心脏的作用。
鼓风机驱动空气通过高效过滤器得以净化，净化的空气被徐徐吹过台面空间而将其中的尘埃、细菌甚至病毒颗粒带走，使工作区构成无菌环境。
3.正压过滤器为何会除菌？
答：正压式过滤器没有内置灭菌灯，正压式过滤器利用的是两层0.22um孔的过滤膜，这层膜可以将细菌阻挡在膜上，过滤的液体流下去就基本上完成了灭菌过程
4.各种细胞培养用液的配制需要很精确吗？如果不精确，会导致什么后果？请举例说明。
你认为精确配制各种溶液？
答：
5.配制后平衡盐溶液呈黄色意味着液体的pH发生了什么变化？
答：配制后的液体应呈桃红色，PH值为7.4左右。
苯酚红的变色域：1.2（橙）~3.0（黄），6.5（棕色）~8.0（紫色），若为黄色，则液体呈酸性，不利于细胞的生存。
6.用于分离细胞的消化液为什么宜用无Ca、Mg离子的D-Hanks液或PBS液配制
答：Ca＋2、Mg＋2是细胞膜的重要组分，具有使细胞凝聚的作用。
因此，用于分离细胞的消化液宜用无Ca＋2、Mg＋2离子的D-Hanks液或PBS液。
7.L-谷氨酰胺在营养液中有何作用？
答： L－谷氨酰胺是细胞的能量来源；是一种必须氨基酸，是使物体合成核酸、蛋白质、嘌呤、嘧啶的重要前体，也是蛋白质合成分解的调节物；是细胞内氨的清除剂，氨对一些细胞有毒性。
8.HEPES溶液的作用机理？
答：它是一种氢离子缓冲剂。
主要作用是防止培养基pH迅速变动
9.平衡盐溶液的组成与基本作用？小牛血清在细胞培养中有哪些作用？
答：①平衡盐溶液主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH 稳定及提供简单的营养.主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。
②作用：a提供能促使细胞指数生长的激素、基础培养基中没有或含量微小的营养物，以及某些低分子营养物质；b提供结合蛋白，识别维生素、脂类、金属离子，并与有毒金属和热源物质结合，起解毒作用；c是细胞贴壁、铺展生长所需因子的来源；d起酸碱度缓冲液作用；
e提供蛋白酶抑制剂，细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受损伤。
10.营养液制备后为什么要小剂量分装？
答：避免营养液被污染后，全部的营养液都被污染。
营养液一次用完过后，下一次的实验就不能用，会引起污染，影响实验，若冷冻营养液，则营养液的营养成分会有所损失，影响细胞的生长
11.10万U/mL单位青霉素、链霉素的配制方法？
答：用注射器吸10毫升双蒸水溶解100万单位的链霉素，弃去2ml，用剩余的8ml链霉素溶解80万单位的青霉素，配制成每毫升青霉素、链霉素各10万单位的母液。
12.细胞培养过程中对无菌的要求很高，你认为该如何操作才能保证培养过程中无微生物污
染？请详细阐述。
答：①实验进行前，无菌室及无菌操作台（laminarflow）以紫外灯照射30-60分钟灭菌，以70%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后，才开始实验操作②无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。
勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验③进无菌室前要彻底洗手④使用培养液前不宜过早开瓶，开瓶后的培养液应保持斜位，避免直立，以防止下落细菌的污染。
⑤操作时尽量不要谈话，咳嗽以防止来自唾沫和呼出的气流所造成的污染。
⑥）吸取培养液、细胞悬液时，应专管专用⑦⑧
13.你认为组织块培养成功需哪些条件？你们小组为了实验成功采取了哪些具体的措施？
你在本次实验中做了什么工作？
答：①实验所用的器材必须保证无菌无毒，用胰蛋白酶（浓度适中）消化的时间不宜过长和过高、营养、温度
14.组织块培养的基本原理如何？
答：细胞增殖
15.何时须更换培养基进行传代？可否使用与原先培养条件不同之血清种类来进行后期的
培养？
答：①一般两天换一次,如果细胞贴壁率变化不大,可以适当延长,到细胞贴壁率达到85左右,可以传代②不能。
血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。
来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
16.培养细胞时不用CO2或使用5 % 或10% CO2是否都可以？说明原因？
答：不是。
一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH 的缓冲系统,而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度.当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g时,细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5g时,则应使用5 %CO2培养细胞.
17.你认为心肌细胞培养的基本操作要点是什么？你在其中参与了什么操作？有什么体
会？
答：①要点：1）、首先用细胞分散法收获细胞，随时吸取少量消化液在镜下观察，并根据组织是否分散成细胞团或单个细胞，采取终止消化措施。
用筛网滤掉未消化的组织块。
2）、低速离心细胞悬液，弃掉上清液，加入含血清的培养液，轻轻吹打制成细胞悬液，计数并用培养液调整细胞密度。
3）、用吸管吸取一定量的细胞悬液，加到培养瓶中。
4）、将培养瓶放入37℃恒温箱中培养。
5）、每隔2到3天更换培养液一次或根据培养液颜色的变化确定换液时间。
18.培养瓶移入CO2恒温箱培养时，瓶盖为何要稍松？又如何避免细胞污染？如果细胞污染
有何挽救措施？
答：①拧紧瓶盖无法进行气体交换，瓶盖稍松才能为细胞生长提供必要的氧气和二氧化碳，尤其是二氧化碳特别重要，细胞在酸性培养液中生长的更好②
19.胰蛋白酶的消化原理如何？如何初步判断胰蛋白酶的消化时间？
答：①原理：细胞外含有多种胞外蛋白,如胶原蛋白；使细胞间或细胞与培养瓶内壁粘连起来.用胰蛋白酶分解这些蛋白质后就可以使它们分开了! ②显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再链接成片，表明此时细胞消化适度。
2~10分钟
20.细胞培养到一定时间为何要进行传代？能一直传代下去吗？阐述其机理。
答：①因为进入衰亡期,细胞发生接触抑制,营养逐渐耗尽,有毒废物积累,细胞变大自溶.这时就要重新接种培养。
②不能。
正常细胞每分裂一次端粒会逐渐缩短，分裂次数过多会衰老直至死亡。
但肿瘤细胞除外。
（注：专业文档是经验性极强的领域，无法思考和涵盖全面，素材和资料部分来自网络，供参考。
可复制、编制，期待你的好评与关注）。