2015 动物细胞培养技术实验报告
动物细胞传代培养试验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除篇一：细胞传代培养实验报告细胞传代培养一.实验目的初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程，为生物技术在医学上的应用打下基础。
二、原理从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。
细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗费少，比较经济，因此成为生物学研究的重要手段。
细胞培养可分为原代培养和传代（继代）培养。
直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。
细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。
所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、ph值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。
三、材料和试剂1、细胞:293细胞株2、试剂：0.25%胰酶、1640培养基（含10%小牛血清）3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、电动枪，培养板，吸液枪，5ml玻璃吸管、酒精灯等四、操作步骤1、将长满细胞的培养板中原来的培养液吸去。
2、加入1〜2m10.25%胰酶溶液，使板底细胞都浸入溶液中。
3、马上吸走胰酶液，再次加入2ml左右的胰酶，同样马上吸去，再加入几滴胰酶放入培养箱中消化几分钟4、用吸管将贴壁的细胞反复吹打成悬液，再按照观察的生长情况确定的传代比例传代5.根据确定的比例来取需要的量(剩余的细胞拿来做细胞计数)，加入4ml左右的培养液6.前后左右的来回震荡使细胞分散均匀后，将培养板放入培养箱7.收拾整理超净台附：消化液配制方法：称取2.5克胰酶蛋白酶，加入100m110xpbs+纯水溶解到1L,滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。
动物细胞实验报告
1. 掌握动物细胞融合的基本原理和方法。
2. 了解细胞融合技术在生物科学领域的应用。
3. 通过实验观察细胞融合现象，验证细胞融合技术的可行性。
二、实验原理动物细胞融合是指两个或多个动物细胞在特定条件下，通过细胞膜的相互接触、融合，形成一个新的细胞。
细胞融合技术广泛应用于基因工程、细胞工程、生物制药等领域。
本实验采用电穿孔法诱导动物细胞融合。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠成纤维细胞（小鼠胚胎成纤维细胞或小鼠胚胎成纤维细胞系）。
2. 试剂与仪器：胰蛋白酶、DMEM培养液、Hanks平衡盐溶液、FCS（胎牛血清）、Hepes缓冲液、电穿孔仪、显微镜、细胞培养皿、移液枪、超净工作台等。
四、实验方法1. 细胞培养：将小鼠成纤维细胞接种于培养皿中，在37℃、5%CO2的培养箱中培养至对数生长期。
2. 细胞收集：用胰蛋白酶消化细胞，收集细胞悬液。
3. 细胞洗涤：用Hanks平衡盐溶液洗涤细胞两次，去除未贴壁细胞。
4. 电穿孔：将细胞悬液加入电穿孔仪的电极室中，调整电穿孔参数，进行电穿孔处理。
5. 融合细胞培养：将电穿孔后的细胞悬液加入含FCS的DMEM培养液中，在37℃、5%CO2的培养箱中培养。
6. 观察融合细胞：在显微镜下观察融合细胞的形态变化，记录融合细胞的数量和形态。
五、实验结果1. 细胞融合现象：电穿孔处理后，部分细胞膜发生融合，形成融合细胞。
2. 融合细胞形态：融合细胞呈多核、多倍体状态，细胞质丰富，核膜模糊。
1. 电穿孔法诱导细胞融合的原理：电穿孔法是通过高电压脉冲在细胞膜上形成瞬时孔道，使细胞膜发生融合。
实验结果表明，电穿孔法能够有效诱导动物细胞融合。
2. 细胞融合技术的应用：细胞融合技术在生物科学领域具有广泛的应用，如制备杂交瘤细胞、生产单克隆抗体、基因工程等。
3. 影响细胞融合的因素：电穿孔参数、细胞浓度、培养条件等都会影响细胞融合效果。
本实验中，通过调整电穿孔参数和细胞浓度，获得了较好的融合效果。
动物细胞培养
实验一动物细胞培养细胞培养是用无菌操作的方法将动物体内的组织(或器官)取出，模拟动物体内的生理条件，在体外进行培养．使其不断地生长、繁殖，人们借以观察细胞的生长、繁殖、细胞分化以及细胞衰老等过程的生命现象。
细胞培养的突出优点，一是便于研究各种物理、化学等外界因素对细胞生长发育和分化等的影响；二是细胞培养便于人们对细胞内结构(如细胞骨架等)、细胞生长及发育等过程的观察。
因而细胞培养是探索和指示细胞生命活动规律的—种简便易行的实验技术，同时我们也不可忽略的另一个因素，那就是它脱离乐生物机体后的—些变化。
细胞培养技术目前已广泛地被应用于生物学的各个领域。
如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿痛学及病毒学等为此有必要使学生在细胞培养方面得到一些初步的感性知识，了解动物细胞培养的基本操作过程，观察体外培养细胞的生长特征，对原代细胞与传代细胞有一个基本概念。
本实验分两次进行．即清洗与消毒和传代细胞的培养与观察。
Ⅰ清洗与灭菌一、实验目的能独立地进行用于细胞培养的各种器皿的清洗与消毒，掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作，了解化学消毒法的使用方法。
二、实验原理清洗与消毒是组织培养实验的第一步，是组织培养中工作量最大，也是最基本的步骤。
体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌的要求程度很高。
细胞养不好与清洗不彻底有很大关系。
清洗后的玻璃器皿，不仅要求干净透明，无油迹，而且不能残留任何物质。
如有毒的化学物质，哪怕残留0．1个，也可能影响细胞生长。
灭菌手段的选择十分重要，对不同的物品需采用不同的灭菌方法。
假如选用的方法不对，即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。
以下在每种灭菌步骤中都介绍其使用范围。
三、实验材料、用品材料：无臭氧型紫外灯，微孔滤膜(直径25)：孔径为0．22μm，微孔滤膜(直径90)：孔径为0．22 μm，过滤器(直径25)。
药品：70％或75％酒精，0．1％新洁尔灭，煤酚皂溶液(来苏儿水)，0．5％过氧乙酸，乳酸，37％甲醛，高锰酸钾，NaOH，盐酸，重铬酸钾，浓硫酸(工业)，DEPC水[体积分数0．1％的焦炭酸二乙酯(diethylpyroearbonate)]。
动物细胞培养技术
动物细胞培养技术[适用对象] 环境科学专业[实验学时] 4学时一、实验目的掌握小白鼠细胞的培养技术，掌握显微镜直接计数法统计已知体积的培养基中的细胞数目。
二、预习与参考参考实验指导书，结合实验特色查阅相关文献资料进行实验设计。
三、实验内容1.取5个月龄的小白鼠一只，以最快的速度把小白鼠处死，处死之后应尽快对组织进行提取。
2.将小白鼠细胞放入培养基中培养，然后放入恒温培养箱培养。
3.拿出培养皿使用直接计数法统计已知体积的培养基中的细胞数目。
四、主要设备功能和材料清单恒温培养箱。
培养皿。
小白鼠。
五、实验要求正确使用显微镜，掌握培养计数法统计细胞数目。
六、实验报告要求1、根据实验要求，在实验时间内到实验室进行实验时，一边测量，一边记录实验数据。
报告要求准确、美观。
2、在实验中，如果发生实验测量数据与事先的计算数值不符，甚至相差过大，此时应该找出原因，不能不了了之。
同时要把通过实验所测量的数据与计算值加以比较，如果误差一般5％以下。
3、在报告的最后要完成指导书上要求解答的思考题。
七、思考题1.比较平板计数法与显微镜计数法的不同？2.培养基在培养箱中培养需要注意哪些事项？八、实验成绩评定办法本门实验课程考核成绩占课程总成绩的30％，考核分实验预习、实验过程操作、实验报告和实验技能等四个方面，其成绩计算为预习实验（包括资料搜集）占10%、实验过程操作（包括实验流程、调试过程）占25％、实验报告（包括原理描述、数据记录、实验结果和效果）占25％、实验技能考核（包括解决问题的能力）或考试占40％。
凡考核不及格者，应参加补考或重修。
动物细胞培养实验方案
动物细胞培养实验方案一、实验目的：1.掌握动物细胞的培养技术；2.了解动物细胞的生长特点和培养条件要求；3.学习观察和分析动物细胞的形态变化和生长状态。
二、实验器材与试剂准备1.器材：细胞培养器皿（如培养皿、蜡烛罩、CO2培养箱等）、离心机、显微镜、细胞计数板、计时器等；2.试剂：细胞培养基、培养液添加剂（如酶、抗生素等）、PBS缓冲液、生长因子、染色剂等。
三、实验步骤1.细胞培养基的配制：按照制定的配方将培养基粉末加入适量的无菌去离子水中，搅拌均匀后，进行高温高压灭菌，冷却后分装至培养器皿中；3.细胞处理和接种：将收集到的组织先用PBS缓冲液洗涤，然后使用细胞裂解酶或胰酶等消化酶消化组织，使细胞分散，处理成单个细胞后，用细胞计数板计数，并将细胞悬液接种到预先准备好的培养器皿中；4.细胞培养条件的控制：将培养器皿置于CO2培养箱中，设定适当的温度（通常为37℃）、湿度和CO2浓度（通常为5%），并保持稳定；5.细胞培养的观察和记录：观察培养皿中细胞的形态变化和生长状态，记录细胞的外观、增殖情况、易于观察的指标等；6.细胞的子培养和冻存：当细胞达到一定密度时，可以进行子培养，即将细胞从一个培养皿中转移到新的培养皿中，以促进细胞的增殖和保存细胞生物资料。
此外，也可以将分散的细胞加入由培养液和冻存剂组成的试管中，通过冷冻的方式保存细胞，并用于后续的实验。
四、实验控制与常见问题的解决1.环境控制：细胞培养箱中的温度、湿度和CO2浓度的调整应尽量保持稳定；2.培养基的配制：根据细胞培养物的不同，可以选择不同配方的培养基，确保培养基的质量符合要求；4.洗涤步骤：组织或细胞的洗涤步骤应轻柔，避免对细胞的损伤；5.细胞的接种量：对于粘附性细胞，接种量应适当，以避免细胞过度堆积或过度稀释。
五、实验结果和分析观察培养皿中细胞的生长状态、细胞数量以及形态的变化，记录生长状态、增殖情况和其他可以观察到的指标，并进行数值化分析和统计。
动物细胞培养技术实验
实验十五动物细胞培养技术及其应用一．实验目的通过本实验使学生掌握细胞培养、细胞检测和细胞表达等成套技术的原理和方法。
二. 实验内容1.培养基配制、细胞培养、细胞冻存与复苏等基本技术；2.细胞生长曲线测定、细胞活性检测等常用技术；3.细胞污染检测方法与技术；4.病毒在细胞中的感染与增殖、重组病毒异源蛋白的细胞表达等实用技术。
三．实验用品1. 材料：Sf 细胞、Hi5 细胞等2. 器材：CO2培养箱、超净工作台、倒置显微镜、培养基抽滤装置、电泳仪、离心机、pH计、液氮罐（含液氮）、水浴锅、温度计、培养瓶、血清瓶、5 ml和10 ml 移液管、不锈钢移液管筒、大小不锈钢饭盒、酒精灯、吸耳球、血球计数板、96孔板、24孔板、无菌冻存管、离心管、记号笔、一次性过滤器、微量加样器、精密pH试纸、酒精棉球等3. 试剂与药品：Grace培养基、胎牛血清、甘油、DMSO、双抗（青霉素、链霉素）100 u/ml、Hank’s液、胰蛋白酶、台盼蓝、液氮、分析纯无水酒精、95%医用酒精、Tris碱、硼酸、EDTA、琼脂糖粉（电泳用）、dNTPs、Taq酶、支原体检测试剂盒、DNA提取试剂盒DNeasy Blood & Tissue kit （Qiagen）等。
四．实验方法与步骤（一）培养基配制、细胞培养、细胞冻存与复苏1. 缓冲液及培养基配制Hank’s液：KH2PO4 0.06g，NaCl 8.0g，NaHCO3 0.35g，KCl 0.4g，葡萄糖1.0g，Na2HPO4·H2O 0.06g，加H2O至 1000ml，高压灭菌。
4℃下保存。
胰蛋白酶液：称取0.25克胰酶蛋白酶（活力为1：250），加入100ml无Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解，滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。
4%台盼蓝染液：称取台盼蓝4克，加双蒸水至100 ml。
MTT溶液：MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液或无酚红的Hank’s液中。
动物细胞培养实验
实验一：实验器材准备【实验原理】细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作，避免微生物及其他有害因素的影响。
一般标准的细胞培养室应包括配液室、准备室和培养室。
三室既相互连接又相对独立，各自完成培养过程中的不同操作。
【实验目的】①培养室的设置和设备。
②无菌概念和无菌操作要领。
【操作步骤】1．实验室设置（1）配液室（2）准备室（3）培养室培养室内要完全密闭，保持恒定的温度，在设计上要注意以下几点：①培养室的位置最好设在阴面，阳光不能直接照射的地方，防止室内温度增高。
②天花板的高度不要超过2米，以保证紫外灯的有效杀菌效应，③门一般用拉门，以防止空气流动。
④天花板、地板和四周墙壁要光滑无死角，要镶瓷砖或涂油漆，这样设计，一是便于清洗和消毒，另外也不易在墙角堆积灰尘。
2．实验室常用设备（1）准备室的设备①双蒸馏水蒸馏器：制备双蒸水。
②酸缸：盛洗液，浸泡玻璃器具。
③干燥箱：洗涤完的玻璃器皿用干燥箱烘干。
④高压锅：玻璃器皿、解剖用具、部分液体、塑料器具等灭菌。
不同物品其有效灭菌压力和时间不同。
⑤储品柜1：放置未消毒物品。
⑥储品柜2：放置已消毒物品。
准备室注意事项：①预防蒸馏器被烤干。
②勿将酸液溅到衣物或地面。
③勿将高压锅排气阀和安全阀堵塞。
④已消毒物品应与未消毒物品分柜存放。
（2）配液室的设备①天平（扭力天平和电子天平）：称量用②pH计。
③磁力搅拌器。
（3）细胞培养室的设备①超净工作台：超净工作台的种类很多，有单面单人、单面双人、双面双人或双面四人等，其工作原理是利用鼓风机，使通过高效滤气的空气，徐徐通过台面，这样使工作环境中具无菌而均匀的空气。
根据层流方式的不同，超净工作台主要分为水平层流式和垂直层流式两种，基本原理大致相同，都是将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱，再经高效空气过滤器，由此送出的洁净气流从一定的均匀的断面风速通过无菌，从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。
但两种净化台的气流方向不同。
动物细胞培养、计数、冷冻与复苏实验
动物细胞培养、计数、冷冻和复苏实验报告由于本次实验分三天进行，日期分别为10月31日（周一）、11月2日（周三）、11月4日（周五），实验内容分别为动物细胞培养、结束，动物细胞冷冻以及最后的动物细胞的复苏，又因为冷冻和复苏可视为连续环节，故本报告分成两个部分来记录本次实验，具体内容如下：I. 动物细胞的培养和计数一、实验目的由动物细胞表达和合成的蛋白质除了具有正确的氨基酸序列之外，在加工过程中还能以正确的方式进行折叠和修饰，且大多能以天然形式分泌到培养基中，从而确保了所生产的蛋白质具有与天然产物一致的生物活性、免疫原性和体内寿命，这些特点使得动物细胞成为工业化生产诊断和治疗用生物产品的理想宿主，如各类重组蛋白质和单克隆抗体等。
另外，目前方兴未艾的组织工程、干细胞工程等也是和细胞培养技术密切相关的，因此，可以说细胞培养技术是细胞工程、组织工程等研究领域的基础。
本实验的目的是让学生学习和了解动物细胞培养的基本操作，以及相关的细胞培养前准备工作、细胞培养的环境条件和其他有关注意事项；用血球计数板对培养瓶中的细胞进行计数以及用台盼蓝计细胞的存活率。
二、基本原理动物细胞与组织培养是从动物体内取出细胞或组织，模拟体内的生理环境，在无菌、适温和丰富的营养条件下，使离体的细胞或组织生存、生长并维持结构和功能的一门技术，是动物细胞工程的基础。
体外培养可分为原代培养和传代培养，原代培养是指将机体取出的细胞或组织进行实效培养的过程，这样的细胞称为原代细胞，原代细胞通常只能培养10－50代左右即退化死亡；由原代细胞通过变异、分化等手段筛选出来具有无限次代培养能力的细胞群称为细胞系，这类细胞的培养称为传代培养。
体外培养的细胞根据其生长方式，主要可分为贴附型细胞和非贴附型细胞两类，贴附型细胞必须贴附在某一固相表面才能生存和生长，非贴附型细胞可在培养液中悬浮生长，因而也叫悬浮型细胞。
动物细胞培养与微生物培养有很大不同，这主要是因为动物细胞无细胞壁，且大多数哺乳动物细胞只有附着在固体或半固体表面才能生长。
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一、实验目的
1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。
2、学习并掌握细胞传代培养的方法。
3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。
二、实验原理
细胞培养（cell culture）：细胞在体外条件下生长，细胞不再形成组织。
动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
由于细胞具有生长和自我复制的能力，为细胞体外培养和研究提供可能。
动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。
原代培养（primary culture）即直接从动物机体分离、获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法。
传代培养（subculture）当细胞生长增值达到一定密度，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。
高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的，但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则方便简单的多。
被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，因此，动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。
三、细胞培养相关设施及材料
1、细胞培养室
无菌操作区：只限于细胞培养及其它无菌操作，与外界隔离。
孵育区：培养箱设定的条件为37℃，5%CO2。
制备区：培养液及有关培养用液体的制备，液体制备后应该在净化工作台进行过滤除菌。
储藏区：包括冰箱、干燥箱、液氮罐等。
清洗区和消毒灭菌区：清洗区为相对污染区，消毒灭菌区与清洗区分开。
2、细胞培养常用基本设施：
荧光显微镜、超净工作台、孵箱、电热鼓风干燥箱、冰箱、液氮罐、消毒器、恒温水浴槽、滤器等。
细胞培养常用器皿：培养瓶、培养板、培养皿，玻璃瓶、吸管，离心管、冻存管，注射器，烧杯、量筒等。
3、细胞培养用品的清洗、消毒
新玻璃器皿要用5%稀盐酸浸泡，以中和其表面碱性物质：刷洗：
硫酸清洁液浸泡：浓硫酸+重铬酸钾+蒸馏水；
冲洗：流水冲洗15-20次，蒸馏水冲洗3次，三蒸水漂洗1-3次。
所有需灭菌的器械、物品灭菌前均需包装，防止灭菌后污染。
使用时放入超净工
作台后打开包装。
消毒灭菌：高压蒸汽灭菌（120℃，20min）；紫外线消毒：主要用于实验室房间空气及操作台。
四、细胞培养用液及培养基
1、培养用液：水（高度纯净）；缓冲液：平衡盐溶液，维持渗透压，调节PH值，供给细胞生存所需能量和无机离子成分；消化液：胰蛋白酶液，EDTA，胶原酶等。
2、培养基：维持体外细胞培养生存和生长的溶液。
（1）天然培养基：血清（胎牛血清、小牛血清、马血清、兔血清、人血清等）、血浆和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）水解乳蛋白；
（2）合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成。
如TC199、BME、MEM等。
主要成分：氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其他一些辅助物质。
五、动物细胞培养的条件
（1）无菌、无毒的环境：对培养液和所有培养用具进行无菌处理，通常还要在培养液中加入一定量的的抗生素，以防被污染。
此外应定期更换培养液，以便清除代谢产物防止细胞代谢产物累积对细胞自身产生危害。
（2）营养物质：无机物（无机盐、微量元素等），有机物（糖、氨基酸、促生长因等）血清和血浆，但血清和血浆不是营养物质。
（3）温度和PH：36.5±0.5℃，7.2-7.4。
所需要的特殊条件：
（4）血清：动物细胞离体培养常常需要血清。
最常用的是小牛血清。
血清提供生长必需因子，如激素、微量元素、矿物质和脂肪。
在细胞培养中的主要功能：1)提供维持细胞指数生长的激素、基础培养基中没有或量很少的营养物以及主要的低分子营养物等；
2)提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调整改变它们所结合的物质活力；
3)有些情况下其结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用；
4)新生牛血清是细胞贴壁、铺展在塑料、玻璃等培养基质上所需因子的来源；
5)构成缓冲系统，调节酸碱平衡；
6)提供蛋白酶抑制剂，在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害；
（5）支持物：大多数动物细胞有贴壁生长的习惯。
离体培养常用玻璃、塑料等作为支持物。
（6）气体交换：二氧化碳和氧气的比例要在细胞培养过程中不断进行调节，不断维持所需要的气体条件（95%的空气+5%的CO2混合气体），其中5%CO2气体是为保持培养液的PH稳定。
六、实验内容
1、用倒置荧光显微镜观察细胞形态
2、动物细胞传代
（1）培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代；
（2）准备好所需材料，先将手及超净工作台用酒精消毒，点燃酒精灯，将滴管用火焰烧，将PBS、培养基、胰酶准备好，要避免滴管交叉污染；
（3）将培养基喷酒精消毒，拿入超净工作台，用滴管把原有培养基吸掉；
（4）加入PBS吹洗培养皿（由于培养基中血清对胰酶消化有抑制作用，所以先用PBS洗），不要使劲吹，细胞贴壁不好，然后吸出PBS；
（5）加入适当的胰蛋白酶（使成单细胞悬液），消化30s，可快速在荧光显微镜下观察细胞形态，吸出胰酶；
（6）加入含有血清的培养基终止胰酶消化，用滴管吹打细胞，让细胞悬浮起来；
（7）根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中，一般癌细胞分5个，正常细胞传3个，放入孵箱继续培养；
（8）把超净工作台消毒收拾干净，将用过的滴管拿出超净工作台。
七、实验数据及分析
倒置荧光显微镜下HaCaT细胞形态
倒置荧光显微镜下A375细胞形态
HaCaT细胞为永生化人表皮细胞，来源于人皮肤，正常的细胞形态为上皮样，贴壁生。
传代用胰酶消化时，先用胰酶润洗，吸出后，孵育5min。
A375细胞为黑色素瘤细胞。
胰酶消化时，在倒置荧光显微镜下可观察到细胞变圆变亮，不再贴壁，成为单细胞。
八、实验注意事项
1、实验进行前，无菌室及无菌操作台以紫外灯照射30-60分钟灭菌，以70%乙醇擦拭无菌操作台面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后，才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。
实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70%乙醇擦拭无菌操作台面。
操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株的操作。
2、无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。
验用品以70%乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。
实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。
3、小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。
勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，不要在打开的容器正上方操作实验。
容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
4、实验人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。
操作过程中小心毒性药品，例如DMSO及TPA等，并避免尖锐针头之伤害等。
5、定期检测下列项目：CO2钢瓶中CO2压力；CO2培养箱中CO2浓度、温度、及水盘是否有污染（水盘的水用无菌水，每周更换）；无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）；定期更换水槽的水。