(完整word版)高效液相色谱法操作规程
(完整)Waters高效液相色谱仪标准操作规程
1.目的描述 Waters 高效液相色谱仪标准操作规程。
2.适用范围化验室3.责任者化验员应严格遵照该操作规程 , QC 主管负责监督本规程的实施。
4.定义HPLC High Performance Liquid Chromatography , 高效液相色谱仪。
5.安全注意事项5.1有机溶媒有害健康，各溶剂瓶口应封严。
5.2注意检查废液桶中废液应避光，防止废液桶满外溢。
6.规程6.1.Waters HPLC的组成：贮液器输液泵自动进样器分离柱 (柱温箱 )紫外检测器控制及数据处理系统 (Millennium 32化学工作站 )。
6.2. HPLC系统的打开及关闭顺序6.2.1打开顺序•对于分体式：请按泵、进样器、柱温箱、检测器的顺序打开开关，待各部分分别显示初始化完毕后，最后打开M i l l e nn i um32化学工作站。
泵与色谱工作站的连接：对于 510 泵，因为此泵与色谱工作站是单向联系，如要使泵在 Remote 状态下由工作站控制，首先要在泵的键盘上按 Menu 键，待显示屏切换至 Mode 状态下，其状态是Loca ，按 Edit/Enter 键，在 Local 的L 前有闪动的光标显示，按键，Local 转换成Rem，再按Edit/Enter 键，此命令已输入进去, 最后按Stop/Run 键，使泵处于Run 状态这时泵和工作站的连接即告成功。
泵的任何动作都可由工作站来控制。
还应注意这一步工作在每次开机时都要进行。
对于 Alliance 2690 系统：先打开 Alliance 2690 主机、检测器电源开关，待初始化完毕后，再进入 Millennium 32化学工作站。
对于流动相的要求：对于液体试剂应尽量采用色谱纯试剂；对于所用到的固体试剂应采用分析纯试剂；对于水，应采用经纯水机处理过的超纯水；流动相在使用前一定要经 0.45m 的滤膜（滤膜分为水相膜与有机相膜，确保使用正确的滤膜，参见附表 ) 过滤、超声真空脱气方可使用，严禁含盐的流动相未经过滤直接使用。
(完整word版)Agilent1260安捷伦高效液相色谱仪使用、清洁及维护保养操作规程
Agilent 1260（四元泵）高效液相色谱仪使用、清洁及维护保养操作规程Agilent 1260（四元泵）高效液相色谱仪使用、清洁及维护保养操作规程1目的建立1260（四元泵）高效液相色谱仪使用、清洁及维护保养操作规程，规范人员操作。
2 适用范围适用于Agilent（四元泵）高效液相色谱仪的使用与维护。
3 责任与监督检验人员负责执行本规程，部门负责人监督本规程的实施。
4 规程细则4.1仪器原理高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
4.2仪器操作4.2.1系统组成：本系统由四元梯度泵、VWD检测器、自动进样器、柱温箱及Openlab Chemstation工作站和台式电脑等组成。
4.2.2操作前准备：4.2.2.1流动相的选择分类：组成分——单组分和多组分极性-极性、弱极性、非极性常用溶剂：甲醇、水、乙腈、乙醇、乙酸乙酯、四氯化碳等。
（溶剂最好为HPLC级，水为纯化水）其中多采用二元或多元组合溶剂作为流动相，通过调节各组分的比例改变流动相的极性，已达到最佳的分离效果，对于部分情况还可以加入缓冲盐，调节出峰时间和达到改善峰型的效果。
4.2.2.2流动相的选择为了除去流动相中的杂质，保护系统和色谱柱，在流动相使用完，装入新的溶剂前应使用抽滤瓶对溶剂进行过滤。
4.2.2.3流动相的超声与脱气为了除去溶解在流动相中的气泡，降低基线噪音，在HPLC开机前应把各溶剂瓶在超声机中超声10-15min左右。
对于溶解在流动相中的极微气体，安捷伦1260HPLC四元泵中集合了脱气机，可以进一步对混合后的流动相进行脱气处理。
4.2.2.4流动相冷却流动相在超声机中长时间超声后，由于水分子振动摩擦，使水温上升，因此流动相瓶中的溶剂也会被加热。
(完整word版)高效液相色谱法操作规程
标准操作规程目的：建立高效液相色谱法的标准操作规程，保证正确操作。
范围：本标准适用于高效液相色谱法的操作。
责任者：QC主任，设备使用人员。
规程：依据：《中华人民共和国药典》2000年版二部。
1.定义及概述：1.1.高效液相色谱法是一种现代液体色谱法，其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液作为流动相，用高压输液泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱留或进行数据处理，得到测定结果。
由于应用各种性质的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高，分析速度快的特点。
1.2.高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。
有的药品需要在色谱分离前或后经过衍生化反应，方能进行分离或检测。
常用的色谱柱填充剂有：硅胶用于正相色谱；化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中最常用的是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子对色谱离子交换填料，用于离子交换色谱，是有一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。
1.3.高效液相色谱仪基本由泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理机组成。
检测器最常用的为可变波长紫外检测器或紫外一可见检测器。
色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。
梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。
2.高效液相色谱仪的使用要求：2.1.按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室液相色谱仪检定规程（JJG705－90）”的规定作定期检定，应符合规定。
2.2，仪器各部件应能正常工作，管路为无死体积连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。
2.3.具体仪器在使用前应详细参阅各操作说明书。
3.操作前的准备：3.1.流动相的制备：用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水应为新鲜制备的高纯水。
高效液相色谱法含量测定操作规程全文编辑修改
精选全文完整版可编辑修改高效液相色谱法含量测定1检验方法高效液相色谱法2检验原理高效液相色谱法系采用高压输液泵，将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对样品进行测定的色谱方法。
注入样品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依此进入检测器，由数据处理系统记录和处理色谱信号。
3检验试剂甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、纯水（高纯水）、磷酸等。
4供试品溶液制备取要测试的供试品适量，参照《药典》及《制剂规范》，用规定的溶剂适宜的提取精制方法，配制成一定浓度的供试品溶液。
供试品溶液注入色谱柱前要经适宜的0.45nm的滤膜滤过。
5对照品溶液制备根据供试品所要测定的成分取相应的对照品，用适宜的溶剂配制成相应浓度的对照品溶液。
6流动相配制用高纯度的试剂配制流动相，水应为新鲜配制的高纯水。
配制好的流动相通过适宜的0.45nm 的滤膜滤过，用前脱气。
7操作7.1打开自动进样器、检测器、泵、柱温箱，进入工作站。
7.2自动进样器排气自动进样器排气用50%甲醇（用前脱气），点击自动进样器界面上的purge键，自动排气25分钟。
7.3泵排气分析界面中，设置方法参数，下载方法参数。
用流动相冲洗吸滤头，再把吸滤头浸入流动相中，逆时针旋转排气阀90-180度，点击purge键，排气3-4分钟，顺时针旋转排气阀90-180度，激活仪器。
7.4进样操作7.4.1.将对照品溶液和供试品溶液分别置于样品瓶中，盖上带有垫片的瓶盖，顺时针旋紧，7.4.2将样品瓶按顺序放置于样品瓶架上。
7.4.3设置方法参数，选择波长、柱温、流速、结束时间等，下载并保存方法文件，待色谱系统充分稳定，基线平直。
7.4.4设置批处理分析表。
分析界面主项目中，点击批处理分析，依次设置样品瓶号、样品瓶架号、样品名、方法文件、数据文件、进样体积，保存批处理分析表，点击批处理分析开始，开始数据采集。
7.4.5不同浓度的对照品溶液和同一浓度的供试品溶液应分别进样不少于5针。
(完整word版)高效液相色谱仪使用说明
高效液相色谱仪使用说明1. 型号：LC-10AT 产地日本岛津。
2. 用途：高效液相色谱法只要求样品能制成溶液, 不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。
与试样预处理技术相配合，HPL C 所达到的高分辨率和高灵敏度，使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能，能够分离复杂相体中的微量成分。
随着固定相的发展, 有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。
由于HPL C具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用, 流出组分易收集等优点,因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。
高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。
3. 测定原理高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
4. 使用方法4.1 系统组成：本系统由1个LC-10ATvp溶剂输送泵、Rheodyne 7725i手动进样阀、SPD-10Avp紫外-可见检测器、色谱数据工作站和电脑等组成，另外还包括打印机、不间断电源等辅助设备。
4.2 准备4.2.1 准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声波脱气20min。
4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。
4.2.3 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。
3.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常，特别注意输液管道内是否有气泡。
高效液相色谱测定法标准操作规程
标准操作规程1目的：建立高效液相色谱测定法操作规程，以使检验操作规化。
2适用围：适用于高效液相色谱测定法检验操作全过程。
3责任：QC人员对本SOP实施负责。
4容高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入色谱柱，各组分在柱被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
4.1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。
色谱柱径一般为3.9~4.6mm，填充剂粒径为3~10μm。
超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。
4.1.1.色谱柱反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。
正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。
常用的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。
离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。
有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。
手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。
色谱柱的径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。
温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。
为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。
残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在 2〜8之间。
残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH 值小于2或大于8 的流动相。
高效液相色谱使用规程
高效液相色谱使用操作规程高效液相色谱法是60年代后期迅速发展起来的新型色谱分析技术，是分析、分离、纯化与制备物质的优良方法。
它具有应用范围广、分离效能高、分离速度快、分离时间短、分析灵敏度高和测定精度高等特点。
高效液相色谱仪，一般是由贮液槽、高压泵、梯度流洗装置、进样器、柱箱与柱、检测器、显示器以及数据处理系统等装置组成。
高效液相色谱法通常分为如下几种类型：液--固吸附色谱法、液--液分配色谱法、反相色谱、离子抑制色谱和离子对色谱、离子色谱法、离子交换色谱法、凝胶色谱法等。
高效液相色谱仪属于精密化验仪器，使用时必须严格遵守该仪器操作规程。
1、液相色谱仪必须安装在干燥、清洁、温度相对恒定、有固定台面的化验室内。
力避受热、受潮、受振动、受污染。
2、进入色谱仪室前，必须换脱鞋、穿上工作服。
3、严格按照如下规程进行操作：（1）先打开输液泵，通入纯流动相（甲醇）30分钟；换待测物所需流动相，继续通入30分钟。
（2）打开检测器，预热30分钟。
（3）打开微机，进入色谱工作站，查看基线。
（4）进样分析，平行2--3次，相邻两次误差控制在0。
5--1%，取平均值，记录原始化验结果，开化验报告单。
（5）关机时，先关检测器，再更换纯流动相冲洗柱子30分钟，最后关闭输液泵。
4、色谱柱使用注意事项：（1）新买到的柱子，都需用标准试验混合物，在标准试验色谱条件下进行检验，此数据将作为检定柱子性能变化的参数依据。
（2）色谱柱在任何情况下都不能碰撞、弯曲或强烈震动。
（3）当柱子和色谱仪连结时，配件（阀件、管路）一定要清洗干净，否则易出现无名峰。
（4）配制两种或两种以上洗脱液时，一定要先脱气，再使用，以免产生气泡，影响分析工作的正常进行。
（5）柱子与进样阀、检测器连接时，不要用力过大，以免压紧螺丝时折断。
以不漏液为宜，通常先用手拧紧，再以搬手旋紧1/4到1/3扣即可。
（6）由脂溶性溶剂（如己烷）换成水溶性溶剂（如甲醇）时，要用泵打入两性溶剂二氯甲烷或异丙醇过渡一下。
高效液相色谱仪标准操作规程
目的：建立高效液相色谱仪的标准操作程序，以使操作者正确使用。
范围：本文件适用于高效液相色谱仪的标准操作。
职责：质量管理部QC化验员负责本文件的起草、修订及实施。
程序：1接通电源，打开电脑。
按LC-20AT 上“POWER”键及RID-10A上“POWER”键，接通电源。
接通柱温箱的电源，并设置柱温箱温度为40℃。
2 双击电脑桌面上“LC Solution”，点击“1”进入采集窗口。
3 点击“Advanced”进行高级设置。
在“Pump”项中选择“Flow”模式；流速设置为0.5ml/min，泵压0～1.5MPa；在“Detector A”中选择“Analytical”模式，柱温设置为40℃。
设置完成后点击保存图标。
4 点击“Download”下载该方法。
5 将LC-20AT上旋钮“Draw”逆时针旋转180°，按Purge键，仪器自动清洗泵头，约3分钟后听到提示音（轻微长鸣声）后，顺时针旋转“Draw”180°至原位。
6 按LC-20AT上“Pump”键启动泵。
7 点击“R Flow ON/OFF”图标，系统开始运行，约20—30分钟后，点击“Balance RID （Detector A）”平衡系统。
8 基线平稳后，点击“◇”进行样品信息设置，设置完成后点击“确定”。
9 在进样器中吸入样品后插入手动进样口，将进样阀手柄调至“Load”位置，迅速将样品注入液相色谱仪，再将进样阀手柄调至“Inject”位置，开始采集数据。
10 分析完成后，点击红色的“〇”停止分析。
11 分析不同样品时，可重复“8-10”的操作，直至所有的样品均分析完毕。
12 所有的样品均分析完毕后，将流动相换成水继续运行至基线平稳，将色谱柱及系统中残留的物质清洗干净。
13 点击“R Flow ON/OFF”图标，系统停止运行，关闭采集页面。
按LC-20AT上“POWER”键及RID-10A上“POWER”键，关闭电源。
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标准操作规程目的：建立高效液相色谱法的标准操作规程，保证正确操作。
范围：本标准适用于高效液相色谱法的操作。
责任者：QC主任，设备使用人员。
规程：依据：《中华人民共和国药典》2000年版二部。
1 •定义及概述：1.1高效液相色谱法是一种现代液体色谱法,其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液作为流动相，用高压输液泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱留或进行数据处理，得到测定结果。
由于应用各种性质的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高，分析速度快的特点。
1.2高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。
有的药品需要在色谱分离前或后经过衍生化反应，方能进行分离或检测。
常用的色谱柱填充剂有：硅胶用于正相色谱；化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中最常用的是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子对色谱离子交换填料，用于离子交换色谱，是有一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。
1.3高效液相色谱仪基本由泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理机组成。
检测器最常用的为可变波长紫外检测器或紫外一可见检测器。
色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。
梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。
2. 高效液相色谱仪的使用要求：标准操作规程2.1按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室液相色谱仪检定规程（JJG705-90）”的规定作定期检定，应符合规定。
2.2,仪器各部件应能正常工作，管路为无死体积连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。
2.3具体仪器在使用前应详细参阅各操作说明书。
3. 操作前的准备：3.1流动相的制备：用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水应为新鲜制备的高纯水。
对规定PH值的流动相，应使用精密PH计进行调节。
配制好的流动相应通过0.45a m。
适宜的滤膜滤过，用前脱气。
应配制足量的流动相及时待用。
3.2供试溶液的配制：供试品用规定溶剂配制成供试溶液。
定量测定时, 对照品溶液和样品供试溶液均应分别配制2份。
供试溶液在注入色谱仪前，一般应经0.45a m适宜的滤膜滤过。
必要时，在配制供试溶液前，样品需经提取净化，以免对色谱系统产生污染。
3.3检查上次使用记录和仪器状态:检查色谱柱是否适用于本次试验，色谱柱进出口位置是否与流动相的流向一致，原保存溶剂与现用流动相能否互溶，流动相的PH值与该色谱柱是否相适应，仪器是否完好，仪器的各开关位置是否处于关断的位置。
4操作：4.1泵的操作；用流动相冲洗滤器，再把滤器浸入流动相中，启动泵。
打开泵的排放阀，用专用注射器从阀口抽出流动相约20ml,设置高流速（9ml/min）或用冲洗键PURGE进行充泵排气，观察出口处流动相呈连续液流后，将流速逐步回零或停止（STOP冲洗，关闭排放阀。
4.1.3将流速调节至分析用流速，对色谱柱进行平衡，同时观察压力指示应稳定，用干燥滤纸片的边缘检查柱管各连接处应无渗漏。
初始平衡时间一般约需30分钟，如为梯度洗脱，应在程序器上设置梯度状态，用初始化比例的流动相对色谱柱进行平衡。
4.2紫外可见光检测器和色谱数据处理机的操作。
4.2.1开启检测器电源开关，选择光源（氘灯或钨灯），选定检测波长，标准操作规程待稳定后，测试参比和样品光路的信号应符合要求，设置吸收度方式和检测响应时间（一般不大于1秒），设置满刻度吸收值（适用于记录仪）。
422开启色谱处理机，设定处理方法，初步设定衰减、纸速、记录时间、最小峰面积等参数，或设定记录仪的纸速和衰减。
423进行检测器回零操作，检查处理机的电平（LEVEL），应符合要求，或检查记录仪的笔应处在设定的起始位置，如有变动，可继续加零操作直至符合要求。
424记录基线，待稳定后，进行处理机斜率测试符合要求方能进行操作。
4.3进样操作（六通阀式进样器）4.3.1把进样器手柄放在载样位置（LOAD ）。
4.3.2用供试溶液清洗配套的注射器，再抽取适量，如用定量环（LOOP）载样，则注射器抽取量应不少于定量环容积的5倍，用微量注射器定容进样时，进样量不得多于环容积的50%。
在排除气泡后方能向进样器中注入供试溶液。
4.3.3把注射器的平头针直插至进样器的底部，注入供试溶液，除另有规定外，注射器不应取下。
4.3.4把手柄转至注样位置（INJECT）,定量环内供试溶液即被流动相带人流路。
4.4色谱数据的收集和处理：441注样的同时启动数据处理机，开始采集和处理色谱信息，如采用记录仪，则注样同时按一下记号键，作起始记号。
4. A.2最后一峰出完后，应继续走一段基线，确认再无组分流出，方能结束记录。
4.4.3根据第一张预试的色谱图，适当调整各有关参数，使色谱峰信号在色谱图上有一定强度。
4.4.4含量测定的对照溶液和样品供试液每份至少注样2次，由全部注样结果（n>4）求得平均值，相对标准偏差（RSD）应不大于1.5%o4.4色谱系统适用性试验应符合中国药典的要求，如按指定峰计算的理论板数（n）和拖尾因子（T）,分高度（R）以及重复性。
计算公式为：标准操作规程t R(1) n =5.54 ( ------ ) 2W h/2其中：tR 为保留时间;Wh/2为半高峰宽，取相同单位。
W o.O5(2) t= ------------2d i其中:W0.05为离基线5%峰高处的峰宽,di 为峰上升边离5%峰高处的距离。
(3) R =(t R2_ t R1) /(W 1 +W 2)其中：tR1和tR2分别为相邻前后二峰的保留时间；W1和W2则分别为其峰 的底宽，t 和W 取相同单位；W 为峰1, 2的半高峰宽。
(4)重复性，取各品种项下对照溶液，连续进行进样5次，除另有规 定外，其峰面积测定值的相对标准偏差应不大于2.0%。
也可按各品种校正因 子项下，配制相当于80%、100% 120%的对照品溶液，加入规定量的内标 准溶液，配成三种不同浓度的溶液，分别进样3次，计算平均校正因子，其 相对标准偏差也应不大于2.0%。
4.测定结果处理：4.1峰面积归一法，按药品标准有关项下进行峰面积归一法求组分含量的按下式计算： 百分含量[C%] =[刀Ai /刀A]X 100%其中：E Ai 为被测含量组分峰面积，刀A 为参与计算的全部峰面积之和。
4.2内标法：用含对照品和内标物质的对照溶液所得色谱峰响应值，按下式算出校正因子(f )：As/msAr/mr标准操作规程其中：As 和Ar 分别为内标物质和对照品的峰面积或峰高；ms 和mr 分别为 加入内标物质和对照品的量。
再根据含内标物质的供试品溶液色谱峰响应值， 计算含量(mi)AiMi=f x ——As/ms其中：Ai和AS分别为供试品和内标物质的峰面积或峰高，ms为加入内标物质的量。
4.3外标法：用含对照品的对照溶液所得色谱峰响应值，按下式计算比值(r)：r=Cr/Ar其中：Cr和Ar分别为对照品的浓度和相应的峰面积或峰高。
再根据供试品溶液的色谱峰响应值，计算供试品中被测成分的浓度(Ci)：Ci=r XAi其中：Ai为供试品溶液中被测成分的峰面积或峰高。
清洗和关机：5.1分析完毕后，先关检测器和数据处理机，再用适当经滤过和脱气的溶剂清洗色谱系统，正相柱一般用正己烷，反相柱如使用过含盐流动相，则先用水洗，然后用甲醇一水冲洗，冲洗前先按4.1.1—4.1.2操作，再用分析流速冲洗，各冲洗溶剂一般冲洗15-30分钟，特殊情况应延长冲洗时间。
5.2冲洗完毕后，逐步降低流速至0,关泵，进样器也应用相应溶剂冲洗，可使用进样阀所附专用冲洗接头。
5.3关断电源，作好使用登记，内容包括日期、检品、色谱柱、流动相、柱压、使用小时数、仪器完好状态等。
6.注意事项：6.1色谱柱与进样器及其出品端与检测器之间应无死体积连接，以免试样扩散影响分离。
6.2新住或被污染柱用适当溶剂冲洗时，应将其出口端与检测器脱开，避免污染。
6.3使用的流动相应与仪器原保存溶剂互溶，如不互溶，则先取下上次的色谱柱，照4.1.1-4.1.2的方法用异丙醇冲洗过渡，过渡完毕后，接上相应标准操作规程的色谱柱，换上本次使用的流动相，再按4.1.1顺序操作。
6.4压力表无压力显示或压力波动时不能进行分析,应检查泵中气泡是否已排除，各连接处有无漏液，排除故障后方能进行操作。
如压力升高，甚至自动停泵，应检查柱端有无污染堵塞，可小心卸开柱的进口端螺帽，挖出被污染填冲剂后，补入同类填充剂，仔细安装好，再进行操作。
6.5发现记录基线波动，出现毛剌等现象，首先应检查检测器流通池中是否有气泡或污染，如不是流通池引起，可等待氘灯稳定，同时检查仪器的接地是否良好，必要时换上新的氘灯。
仪器稳定后方能进行操作。
6.6进样前，色谱柱应用流动相充分冲洗平衡，如系统适用性并不符合规定，或填充剂已损坏，则应更换新的同类色谱柱进行分析，由于同类填充剂的化学键合相的键合度及性能等存在一定差异，往往依法操作达不到预定的分离时，可更换另一牌号的同类色谱柱进行试验。
6.7以硅胶作载体的化学键合相填充剂的稳定性受流动相pH值的影响，使用时，应详细参阅说明书，在规定的pH值范围内选用流动相，一般PH 范围为（2.5—7.）。
使用高PH值流动相时，可在泵与进样器之间连接一硅胶短柱，以饱和流动相，保护分析柱，并尽可能缩短在高PH值下的使用时间，用后立即冲洗。
6.8各色谱柱的使用应登记，以方便选择和更新。
6.9色谱流路系统，从泵、进样器、色谱柱到检测流通池，在分析完毕后，均应按1.充分冲洗，特别是用过含盐流动相的，更注意先用水，再用甲醇一水，充分冲洗。
如发现泵漏液等较严重的情况，应请有经验的维修人员进行检查、维修。
6.10上述操作法为通用方法，各该仪器的特殊操作要求，详见说明书及SOP-QC-238-0设备的操作规程。