分光光度法精选PPT课件
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分光光度计及其操作ppt课件
0.575
光源
单色器 吸收池 接收器
以下分别介绍各部件
6
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
1. 光源 用6～12V白炽灯 作用：提供光强一定的复合光(白光) 性能要求: 亮度稳定(以使入射光通量强度 故需电源电压稳定, 一般用稳压器提供稳压。
误差越小。 4.分光光度法，其他条件一定，ε越大，测定的灵
敏度越高。 5.朗伯-比尔定律不仅使用于可见分光光度法,也使
用于紫外分光光度法。 6. 透光率T与吸光物质浓度成反比。
16
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
721型分光光度计 应用
1. 测定组分浓度与含量: 依据A= -lgT= bc
2. 测定配合物的组成
14
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
小结
1.熟练掌握分光光度计的基本组成 部件 2.了解分光光度计的基本组成部件的作用 3.明确参比溶液的作用
作业:P232-10.12 15
自测题 为了规范事业单位聘用关系，建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度，保障用人单位和职工的合法权益 判断题 1.可见分光光度法所用参比溶液的作用是调A=0.00 2.可见分光光度法测定KMnO4时,应选紫色光为
入射光。 3.光度分析中,测定的吸光度越大,测定结果的相对
光源 参比
样品
超微量分光光度计ppt课件.ppt
仪器应用范围
K5500型微量分光光度计可用于测量： 核酸：核酸样品的浓度和纯度，包括双链DNA，单链
DNA和RNA。 蛋白质：①A280测蛋白质样品浓度，包括1Abs =
1mg/mL，BSA，IgG，Lysozyme；②试剂盒法 （Lowry法、BCA法、Bradford法）测定蛋白质浓度， 软件自动绘制标准曲线，直接给出浓度值。 常规紫外/可见全波长扫描：可进行紫外/可见全波长 （200～850nm）扫描。 细胞溶液：细胞溶液密度的测定。
样品需要稀释，测量浓 电磁阀调节)，样品无需稀释，测量
度范围小Βιβλιοθήκη 范围可达到常规分光光度计的50倍
与传统分光光度计的区别与优势
传统分光光度计
●灯源一般由氘灯（紫外） 和钨灯（可见）组成 寿命短 ●需要预热半个小时以上
K5500微量分光光度计
●氙气闪光灯为灯源 寿命长,性能稳定
●不需要预热，可随时检测
●显示吸光度值，不显示浓 度值
仪器特点
样品用量少（1～2µL）！ 无需比色皿！ 紫外-可见全波长扫描（200～850nm）！ 无需预热，可随时检测！ 检测速度快！ 直接显示浓度值！ 样品无需稀释，可测样品的浓度范围是常规紫外-
可见分光光度计的50倍！ 数据统计软件方便容易掌握！
与传统分光光度计的区别与优势
传统分光光度计
样品测量
（1） 以移液枪吸取样品（1～2µL）滴加到检测平台上。 （2 ）放下取样臂。 （3） 点击软件界面上的“Measure”按钮，即可得出样品参
数（吸光度和浓度）和图表。 （4 ）以干净的吸水纸擦去上下检测平台上的空白对照用溶
剂。
（5） 如需保存图表，可点击“Save Graph”按钮。
分光光度法专业知识课件
E1’ molecular vibration E1’’ molecular rotation E0 Ground level
互补（色）光
complementary colors
第一节 分光光度法 基本原理
若溶液选择性地吸收了某种颜色旳光， 则溶液呈吸收光旳互补色。
二．物质旳吸收光谱
用不同波长旳单色光依次
① c 一定, A∝b Lambert ② b 一定, A∝c Beer
A =εbc
三、Lambert-Beer定律
A =bc
溶液厚度b, 单位:cm
浓度c，单位molL-1
摩尔吸光系数，单位Lmol -1cm-1
若用质量浓度替代c
A = ab
质量浓度 , 单位: gL-1
质量吸光系数a, 单位: Lg -1cm-1
常用参比溶液
成份 溶剂 显色剂
溶剂空白 √ ×
试样
×
其他 合用范 围
× 显色剂、试 样均无吸收
试剂空白 √ √ 试样空白 √ ×
×
√ 试样无吸收 显色剂有吸
收
√
√ 显色剂无吸 收，试样有
吸收
第四节
提升测量敏捷度和精确度旳措施 自学 要点看： 分光光度法旳误差起源 显色剂旳选择 测定条件旳选择
本章小结
As，在相同条件下测出试样溶液旳吸光度 Ax，则试样溶液浓度cs可按下式求得：
Ax /As= cx / cs cx = cs Ax /As
参比（空白）溶液 blank
I 参比溶液旳作用：扣除一切不起源于 目旳产物旳光吸收。
如：消除吸收池、溶剂、试剂、干扰物旳影响。
常用参比溶液：
①溶剂空白 ②试剂空白 ③试样空白
分光光度法ppt课件
A
0.7 0.2
3.显色剂
显色剂的选择
• 灵敏度高,ε值大于104 • 选择性好 • 有色物组成确定且稳定 • 显色剂在测定波长处无明显吸收 显色条件的选择 •酸度 •显色剂用量
•显色时间和温度
（1）溶液的酸度 M+HR===MR+H+
* 影响显色剂的平衡浓度和颜色 * 影响被测金属离子的存在状态 * 影响络合物的组成 * pH与吸光度关系曲线确定pH范围。
B
电子能级
转动能级
振动能级
A
分子中电子能级、振动能级和转动能级示意图
由于光子的能量也是量子化的，所以 分子对光的吸收也是量子化的，即分 子只选择吸收能量与其能级间隔一致 的光子而不是对各种能量的光子普遍 吸收。
分子吸收光能后引起运动状态的变化称 为跃迁，跃迁产生吸收光谱
以吸收光强度为纵坐标,以波长为横 坐标作图,所得曲线即吸收光谱曲线
解：Cd的原子量为112.4，则
140×10-6
C Cd2+ = 112.4
=1.24×10-6mol·L-
A=εbc
ε =A/bc
0.220
ε=
=8.87×104 L·mol-1cm-1
2×1.24×10-6
朗伯-比尔定律的适用条件
1. 单色光
应选用max处或肩峰处测定
2. 吸光质点形式不变 离解、络合、缔合会破坏线性关系 应控制条件(酸度、浓度、介质等)
λ
电磁波谱
Hale Waihona Puke 二、物质对光的选择性吸收溶液呈现不同的颜色是由于它对不同 波长的光具有选择性吸收而引起的.用 白光照射某有色溶液,呈现出的是透射 光颜色.吸收的色光和透过光称为互补 色光.
紫外可见分光光度法(仪器分析课件)
吸收池（也叫比色皿、样品池）有玻璃和石英两种。玻璃吸收池只能用于可见光域内。石英吸收池可用于紫外、可见和近红外三个光域。常用的吸收池规格有：0.5cm、1.0cm、2.0cm、3.0cm、5.0cm等。
拿：只能捏两侧的毛玻璃面，不可接触光学面；洗：依次用自来水、溶剂、待装液各润洗3次；装：吸收池高度的2/3～3/4；4.擦：先用滤纸吸干外壁，然后用擦镜纸或丝绸擦干；5.查：内部溶液无气泡，光学面外壁无垃圾；6.放：光学面对光路，垂直放入吸收池架，用吸收池夹固定。
z
项目二 紫外（UV）-可见（VIS）分光光度法
项目二 紫外（UV）-（VIS）分光光度法
VIS & UV
教学目标
目录
Contents
3
吸收曲线
(Absorption Spectra)
用不同波长的单色光照射，测吸光度— 吸收曲线
紫外可见吸收光谱：分子价电子能级跃迁。电子跃迁的同时，伴随着振动能级、转动能级的跃迁。带状光谱。
0.1nm～
10nm~
780nm~0.1cm
0.1mm～1m
1m～1000m
10nm~200nm
200~400nm
远紫外
近紫外
（真空紫外）
单色光,复合光
单色光
复合光
单一波长的光
由不同波长的光（不同能量的光子）组合而成的光
人们肉眼所见的白光（如阳光等）和各种有色光实际上都是包含一定波长范围的复合光。白炽灯灯光？
z
项目二 紫外（UV）-可见（VIS）分光光度法
项目二 紫外（UV）-（VIS）分光光度法
VIS & UV
教学目标
目录
Contents
分光光度法起源
拿：只能捏两侧的毛玻璃面，不可接触光学面；洗：依次用自来水、溶剂、待装液各润洗3次；装：吸收池高度的2/3～3/4；4.擦：先用滤纸吸干外壁，然后用擦镜纸或丝绸擦干；5.查：内部溶液无气泡，光学面外壁无垃圾；6.放：光学面对光路，垂直放入吸收池架，用吸收池夹固定。
z
项目二 紫外（UV）-可见（VIS）分光光度法
项目二 紫外（UV）-（VIS）分光光度法
VIS & UV
教学目标
目录
Contents
3
吸收曲线
(Absorption Spectra)
用不同波长的单色光照射，测吸光度— 吸收曲线
紫外可见吸收光谱：分子价电子能级跃迁。电子跃迁的同时，伴随着振动能级、转动能级的跃迁。带状光谱。
0.1nm～
10nm~
780nm~0.1cm
0.1mm～1m
1m～1000m
10nm~200nm
200~400nm
远紫外
近紫外
（真空紫外）
单色光,复合光
单色光
复合光
单一波长的光
由不同波长的光（不同能量的光子）组合而成的光
人们肉眼所见的白光（如阳光等）和各种有色光实际上都是包含一定波长范围的复合光。白炽灯灯光？
z
项目二 紫外（UV）-可见（VIS）分光光度法
项目二 紫外（UV）-（VIS）分光光度法
VIS & UV
教学目标
目录
Contents
分光光度法起源
分光光度法 PPT
可见光区：钨灯，碘钨灯(320 ～ 2500 nm) 紫外区：氢灯，氘灯(180 ～ 375 nm)
（2）. 单色器(monochromator)：将光源发出的连
续光谱分解为单色光的装置。
棱镜 光栅
玻璃350 ～ 3200 nm, 石英185 ～ 4000 nm
26
（3）.吸收池(cell):用于盛待测液及参比溶液 玻璃 — 能吸收UV光，仅适用于可见光区
(3) 操作简便快速，仪器设备简单。 (4) 应用广泛:几乎所有的无机离子和有机化合物都 可直接或间接地用吸光光度法进行测定。
6
物质对光的选择性吸收 （1）.光的基本性质
电磁辐射按波长顺序排列，称电磁波谱。 远紫外 近紫外 可见
(真空紫外)
近红外 中红外 远红外
10nm~ 200nm
200nm ~400nm
42
c
0.434T c T lg T
若透光度刻度的读数的绝对误差为∆T=1%，用不同的T 代入上式，可得相应浓度测量的相对误差∆c/c，作图。
10
c
c
(%)6
4 2
8
0.368
0
0.2 0.4 0.6
0.8 1.0 T
由图可见： 1、T = 36.8%(A =0.4343)，相对误差最小。 2、T在20%～65%(A=0.2～0.7)范围，相对误 差较小。 为了减小浓度的相对误差，提高测定的准 确度，一般应控制溶液吸光度A在最适宜读数 范围1.0～0.15。
17
入射光 I0
透射光 It
①. 朗伯定律(Lambert’s law)
A=lg(I0 /It )=Kb
②. 比尔定律(Beer’s law)
A=lg(I0 /I t )=Kc
（2）. 单色器(monochromator)：将光源发出的连
续光谱分解为单色光的装置。
棱镜 光栅
玻璃350 ～ 3200 nm, 石英185 ～ 4000 nm
26
（3）.吸收池(cell):用于盛待测液及参比溶液 玻璃 — 能吸收UV光，仅适用于可见光区
(3) 操作简便快速，仪器设备简单。 (4) 应用广泛:几乎所有的无机离子和有机化合物都 可直接或间接地用吸光光度法进行测定。
6
物质对光的选择性吸收 （1）.光的基本性质
电磁辐射按波长顺序排列，称电磁波谱。 远紫外 近紫外 可见
(真空紫外)
近红外 中红外 远红外
10nm~ 200nm
200nm ~400nm
42
c
0.434T c T lg T
若透光度刻度的读数的绝对误差为∆T=1%，用不同的T 代入上式，可得相应浓度测量的相对误差∆c/c，作图。
10
c
c
(%)6
4 2
8
0.368
0
0.2 0.4 0.6
0.8 1.0 T
由图可见： 1、T = 36.8%(A =0.4343)，相对误差最小。 2、T在20%～65%(A=0.2～0.7)范围，相对误 差较小。 为了减小浓度的相对误差，提高测定的准 确度，一般应控制溶液吸光度A在最适宜读数 范围1.0～0.15。
17
入射光 I0
透射光 It
①. 朗伯定律(Lambert’s law)
A=lg(I0 /It )=Kb
②. 比尔定律(Beer’s law)
A=lg(I0 /I t )=Kc
紫外可见分光光度PPT(完整版)课件
因此，可能的跃迁为σ → σ*、π→ π*、n→ σ* n→ π*等。
2023/10/14
10
Wavelength
2023/10/14
11
て
~104 10～100 100～300
k
~200 200～800
<200 ~150(<200)
Amax(nm)
<U<M<M<xD<U<*0<1<*1<0<*0<0
(red shift 或bathochromic
shift) 指取代基或溶剂效应引起吸收带 向长波方向的移动；
蓝移 ( blue shift 或 hypsochron sh ift) 或紫移： 吸收带向短
波方向移动
2023/10/14
16
常见助色团及其助色效应(红移)λ
-F<-Cl<-Br<-OH<-OCH₃<-N NHCH₃<-N(CH₃)₂<-NHC₆H₅<
6
分子中电子能级、振动能级和转动能级示意图
2023/10/14
不是任一波长的 光都可以被某一物质 所吸收，由于不同物 质的分子其组成结构 不同，它们所具有的 特征能级也不同，故 能级差不同，而各物 质只能吸收与它们内 部能级差相当的光辐 射，所以，不同物质 对不同波长的光吸收 具有选择性。
7
物质颜色与光吸收的关系
2023/10/14
29
四、 无机化合物的吸收光谱
金属离子 金属离子
配位体
d-d配位场跃迁
配位体
配位体π- π*
金属离子
配位体
电荷转移
2023/10/14
2023/10/14
10
Wavelength
2023/10/14
11
て
~104 10～100 100～300
k
~200 200～800
<200 ~150(<200)
Amax(nm)
<U<M<M<xD<U<*0<1<*1<0<*0<0
(red shift 或bathochromic
shift) 指取代基或溶剂效应引起吸收带 向长波方向的移动；
蓝移 ( blue shift 或 hypsochron sh ift) 或紫移： 吸收带向短
波方向移动
2023/10/14
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常见助色团及其助色效应(红移)λ
-F<-Cl<-Br<-OH<-OCH₃<-N NHCH₃<-N(CH₃)₂<-NHC₆H₅<
6
分子中电子能级、振动能级和转动能级示意图
2023/10/14
不是任一波长的 光都可以被某一物质 所吸收，由于不同物 质的分子其组成结构 不同，它们所具有的 特征能级也不同，故 能级差不同，而各物 质只能吸收与它们内 部能级差相当的光辐 射，所以，不同物质 对不同波长的光吸收 具有选择性。
7
物质颜色与光吸收的关系
2023/10/14
29
四、 无机化合物的吸收光谱
金属离子 金属离子
配位体
d-d配位场跃迁
配位体
配位体π- π*
金属离子
配位体
电荷转移
2023/10/14
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2021/3/8
Absorbance
1.0 350
0.8
Cr2O72-
525 545 MnO4-
0.6
0.4
未端吸收8
500
600
700 /nm
15
苯 (254nm)
甲苯 (262nm)
A
230
250
270
苯和甲苯在环己烷中的吸收光谱
2021/3/8
16
A
2021/3/8
2021/3/8
3
微粒性
光量子，具有能量。
Eh
h－普朗克(Planck)常数 6.626×10-34J·s
－频率
E－光量子具有的能量 单位：J(焦耳)，eV(电子伏特)
2021/3/8
6
波粒二象性
E = h c = h n
真空中:E h c
结论:一定波长的光具有一定的能量，波长越
长(频率越低)，光量子的能量越低。
A=lg(I0/It)=kbc
吸光度
介质厚
2021/3/8
度(cm) 28
T－透光率（透射比） T = I t
（Transmittance）
I0
A = lg (I0/It) = lg(1/T) = -lgT = kbc
T=10-kbc=10-A
2021/3/8
29
吸光度A、透射比T与浓度c的关系
波动性
光的传播速度: V = c =
2021/3/8
n
2
c－真空中光速 2.99792458×108m/s
~3.0 ×108m/s λ－波长，单位：m,cm,mm,m,nm,Å
1m=10-6m, 1nm=10-9m, 1Å=10-10m
ν－频率，单位：赫芝（周）Hz 次/秒 n－折射率，真空中为1
一、透光率和吸光度
2021/3/8
26
I0
2021/3/8
透光度
（transmittance)
It
T=It/I0
吸光度
Ia
(absorbance) A= -lgT
27
二、光吸收基本定律: Lambert-Beer定律
朗伯定律(1760)
A=lg(I0/It)=k1b
比尔定律(1852)
A=lg(I0/It)=k2c
/nm
KMnO4溶液的光吸收曲线
17
从图中可看出:
•高锰酸钾对不同波长的光的吸收程 度不同,在525处有最大吸收峰.该波 长称最大吸收波长(λMax)
•同一物质的吸收曲线是特征的,以此 作定性分析.
•浓度越大,吸收越强.
2021/3/8
18
分子吸收光谱的产生
在分子中，除了电子相对于原 子核的运动外，还有核间的相对振 动和分子绕着重心的转动。这三种 运动能量都是量子化的，并对应有 一定能级，下图为分子的能级示意 图
A
T
T =10-kbc
A=kbc
c
2021/3/8
30
K 吸光系数 Absorptivity
当c的单位用g·L-1表示时，用a表示，
A＝abc
a的单位: L·g-1·cm-1
当c的单位用mol·L-1表示时，用表示.
－摩尔吸光系数 Molar Absorptivity
A＝ bc
的单位: L·mol-1·cm-1
2021/3/8
21
以吸收光强度为纵坐标,以波长为横 坐标作图,所得曲线即吸收光谱曲线
由于不同的物质基态与激发态的能量 差不同,吸收光的波长不同.
根据吸收电磁波的波长范围不同，可将 分子吸收光谱分为远红外光谱、红外光 谱及紫外、可见光谱三类。
2021/3/8
25
第二节 紫外-可见分光光度法基 本原理
单色光：具有相同能量(相同波长)的光。
复合光：具有不同能量(不同波长)的光复合在
一起。
2021/3/8
7
按照波长将电磁波划分为不同的区域.
X
射 线
远 紫 外
近 紫 外
可红微 见外波 光
0.1 10
200 380 760 nm
λ
电磁波谱
2021/3/8
8
二、物质对光的选择性吸收
溶液呈现不同的颜色是由于它对不同 波长的光具有选择性吸收而引起的.用 白光照射某有色溶液,呈现出的是透射 光颜色.吸收的色光和透过光称为互补 色光.
第十章 紫外－可见分光光度法
分光光度法 利用物质对光的选择性吸收对物质进
行定性、定量的分析方法
特点: 灵敏度高,测定下限可达10-5～10-6mol/L,
准确度: 一般0.5％
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1
第一节 光谱分析的基本概念
一、电磁辐射与电磁波
电磁辐射又称电磁波,光是一种电磁 波，是一种以高速通过空间而不需要 任何传播介质的光子流。同时具有波 动性和粒子性。
当c的单位用g·100mL-1表示时，用
E
1% 1cm
表示，
A＝
E
1 1
% cm
bc，
E
1 1
% cm
叫做比消光系数
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31
例 已知含Cd2+140gL-1的溶液，用双 硫腙比色测定镉，比色皿厚度为2cm， 在波长520nm处测得吸光度为0.220， 计算摩尔吸光系数。
解：Cd的原子量为112.4，则
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9
红
紫
橙
蓝
白光
黄
青蓝
绿
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青
10
三、分子吸收光谱及其产生
吸收光谱
若用一连续辐射的电磁波照射某有色溶 液，测量每一波长下有色液对该波长的 吸收程度，然后以波长为横坐标，以吸 光度 为纵坐标作图，得到一条曲线—— 吸收曲线,亦称吸收光谱。
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Cr2O72-、MnO4-的吸收光谱
离解、络合、缔合会破坏线性关系
应控制条件(酸度、浓度、介质等)
3. 稀溶液
浓度增大，分子之间作用增强
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36
x104
亚甲蓝阳离子
单体 max= 660 nm 二聚体 max= 610 nm
(nm)
亚甲蓝阳离子水溶液的吸收光谱 a. 6.36×10-6 mol/L b. 1.27×10-4 mol/L c. 5.97×10-4 mol/L
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B
电子能级
转动能级
振动能级
A
分子中电子能级、振动能级和转动能级示意图
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由于光子的能量也是量子化的，所以 分子对光的吸收也是量子化的，即分 子只选择吸收能量与其能级间隔一致 的光子而不是对各种能量的光子普遍 吸收。
分子吸收光能后引起运动状态的变化称 为跃迁，跃迁产生吸收光谱
140×10-6
C Cd2+ = 112.4
=1.24×10-6mol·L-
A=εbc
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ε =A/bc
32
0.220
ε=
=8.87×104 L·mol-1cm-1
2×1.24×10-6
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朗伯-比尔定律的适用条件
1. 单色光
2.
应选用max处或肩峰处测定
2. 吸光质点形式不变
Absorbance
1.0 350
0.8
Cr2O72-
525 545 MnO4-
0.6
0.4
未端吸收8
500
600
700 /nm
15
苯 (254nm)
甲苯 (262nm)
A
230
250
270
苯和甲苯在环己烷中的吸收光谱
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16
A
2021/3/8
2021/3/8
3
微粒性
光量子，具有能量。
Eh
h－普朗克(Planck)常数 6.626×10-34J·s
－频率
E－光量子具有的能量 单位：J(焦耳)，eV(电子伏特)
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波粒二象性
E = h c = h n
真空中:E h c
结论:一定波长的光具有一定的能量，波长越
长(频率越低)，光量子的能量越低。
A=lg(I0/It)=kbc
吸光度
介质厚
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度(cm) 28
T－透光率（透射比） T = I t
（Transmittance）
I0
A = lg (I0/It) = lg(1/T) = -lgT = kbc
T=10-kbc=10-A
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吸光度A、透射比T与浓度c的关系
波动性
光的传播速度: V = c =
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n
2
c－真空中光速 2.99792458×108m/s
~3.0 ×108m/s λ－波长，单位：m,cm,mm,m,nm,Å
1m=10-6m, 1nm=10-9m, 1Å=10-10m
ν－频率，单位：赫芝（周）Hz 次/秒 n－折射率，真空中为1
一、透光率和吸光度
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I0
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透光度
（transmittance)
It
T=It/I0
吸光度
Ia
(absorbance) A= -lgT
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二、光吸收基本定律: Lambert-Beer定律
朗伯定律(1760)
A=lg(I0/It)=k1b
比尔定律(1852)
A=lg(I0/It)=k2c
/nm
KMnO4溶液的光吸收曲线
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从图中可看出:
•高锰酸钾对不同波长的光的吸收程 度不同,在525处有最大吸收峰.该波 长称最大吸收波长(λMax)
•同一物质的吸收曲线是特征的,以此 作定性分析.
•浓度越大,吸收越强.
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分子吸收光谱的产生
在分子中，除了电子相对于原 子核的运动外，还有核间的相对振 动和分子绕着重心的转动。这三种 运动能量都是量子化的，并对应有 一定能级，下图为分子的能级示意 图
A
T
T =10-kbc
A=kbc
c
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K 吸光系数 Absorptivity
当c的单位用g·L-1表示时，用a表示，
A＝abc
a的单位: L·g-1·cm-1
当c的单位用mol·L-1表示时，用表示.
－摩尔吸光系数 Molar Absorptivity
A＝ bc
的单位: L·mol-1·cm-1
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以吸收光强度为纵坐标,以波长为横 坐标作图,所得曲线即吸收光谱曲线
由于不同的物质基态与激发态的能量 差不同,吸收光的波长不同.
根据吸收电磁波的波长范围不同，可将 分子吸收光谱分为远红外光谱、红外光 谱及紫外、可见光谱三类。
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第二节 紫外-可见分光光度法基 本原理
单色光：具有相同能量(相同波长)的光。
复合光：具有不同能量(不同波长)的光复合在
一起。
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按照波长将电磁波划分为不同的区域.
X
射 线
远 紫 外
近 紫 外
可红微 见外波 光
0.1 10
200 380 760 nm
λ
电磁波谱
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二、物质对光的选择性吸收
溶液呈现不同的颜色是由于它对不同 波长的光具有选择性吸收而引起的.用 白光照射某有色溶液,呈现出的是透射 光颜色.吸收的色光和透过光称为互补 色光.
第十章 紫外－可见分光光度法
分光光度法 利用物质对光的选择性吸收对物质进
行定性、定量的分析方法
特点: 灵敏度高,测定下限可达10-5～10-6mol/L,
准确度: 一般0.5％
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第一节 光谱分析的基本概念
一、电磁辐射与电磁波
电磁辐射又称电磁波,光是一种电磁 波，是一种以高速通过空间而不需要 任何传播介质的光子流。同时具有波 动性和粒子性。
当c的单位用g·100mL-1表示时，用
E
1% 1cm
表示，
A＝
E
1 1
% cm
bc，
E
1 1
% cm
叫做比消光系数
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例 已知含Cd2+140gL-1的溶液，用双 硫腙比色测定镉，比色皿厚度为2cm， 在波长520nm处测得吸光度为0.220， 计算摩尔吸光系数。
解：Cd的原子量为112.4，则
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红
紫
橙
蓝
白光
黄
青蓝
绿
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青
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三、分子吸收光谱及其产生
吸收光谱
若用一连续辐射的电磁波照射某有色溶 液，测量每一波长下有色液对该波长的 吸收程度，然后以波长为横坐标，以吸 光度 为纵坐标作图，得到一条曲线—— 吸收曲线,亦称吸收光谱。
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Cr2O72-、MnO4-的吸收光谱
离解、络合、缔合会破坏线性关系
应控制条件(酸度、浓度、介质等)
3. 稀溶液
浓度增大，分子之间作用增强
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x104
亚甲蓝阳离子
单体 max= 660 nm 二聚体 max= 610 nm
(nm)
亚甲蓝阳离子水溶液的吸收光谱 a. 6.36×10-6 mol/L b. 1.27×10-4 mol/L c. 5.97×10-4 mol/L
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B
电子能级
转动能级
振动能级
A
分子中电子能级、振动能级和转动能级示意图
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由于光子的能量也是量子化的，所以 分子对光的吸收也是量子化的，即分 子只选择吸收能量与其能级间隔一致 的光子而不是对各种能量的光子普遍 吸收。
分子吸收光能后引起运动状态的变化称 为跃迁，跃迁产生吸收光谱
140×10-6
C Cd2+ = 112.4
=1.24×10-6mol·L-
A=εbc
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ε =A/bc
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0.220
ε=
=8.87×104 L·mol-1cm-1
2×1.24×10-6
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朗伯-比尔定律的适用条件
1. 单色光
2.
应选用max处或肩峰处测定
2. 吸光质点形式不变