康乃馨植物组织培养

康乃馨植物组织培养实验报告
08级生物科学（2）班
刘姣姣
学号：200840810217
康乃馨植物组织培养
一、实验目的：
掌握植物离体快速繁育原理、方法和完整过程。

二、实验原理：
香石竹（学名：Dianthus caryophyllus）又名康乃馨,花色艳丽,开花时间长,装饰效果好,是世界上最畅销的切花之一,具有较高经济价值[1]。

由于病毒病侵害,常使植株矮化,花朵变小,花色产生斑点,退色甚至不开花,影响切花产量和质量。

通过茎尖分生组织培养,能够获得“无病毒”的健康植株,对于引进的少而新的脱毒种苗,再进行一次茎尖培养,进一步降低基础苗中的病毒含量,并通过组织培养的方法快速繁殖,在短期内,就可以获得大量的脱毒试管苗,使引入材料迅速在生产上推广应用,取得明显的经济效益。

三、实验仪器与材料：
仪器：超净工作台、酒精灯、电炉、烧杯、玻璃棒、镊子、解剖刀、不锈钢碟子、纱布、记号笔、标签纸
试剂：75%乙醇、0.1%升汞、无菌水、MS培养基、 IAA 0.1mg/L 、BA 0.5mg/L、pH5.8-6.0、蔗糖、琼脂
四、实验步骤：
培养基的配方
1、香石竹的生芽培养基
MS+ IAA (0.1mg/L) + BA( 2.0mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖（30g/L）
+琼脂(8g/L)，pH5.8-6.0,配制0.3L,用小培养瓶分装10~15瓶。

另外，需要制备无菌水20瓶（大培养瓶），每人3~4瓶，，纱布、碟子若干，后二者分别用报纸包好一同灭菌。

2、香石竹的继代培养基
MS+ BA( 0.3mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖（30g/L）+琼脂(8g/L), pH5.8-6.0,配制0.3L,用小培养瓶分装10-15瓶。

另外，需要制备无菌水20瓶（大培养瓶），每人3-4瓶，，纱布、碟子若干，后二者分别用报纸包好一同灭菌。

3、香石竹的生根培养基
MS+生根培养基为1/2MS+NAA(0.075mg/L)+蔗糖(30g/L)+琼脂(8g/L)，pH5.8-6.0,配制0.3L,用小培养瓶分装10-15瓶。

另外，需要制备无菌水20瓶（大培养瓶），每人3-4瓶，纱布、碟子若干，后二者分别用报纸包好一同灭菌。

香石竹的生芽培养
1、无菌操作准备
将培养基、无菌水、及各种接种用具放入超净工作台，开紫外灯，照射消毒20-30min,开送风开关，关紫外灯，通风10min后，打开照明日光灯。

洗手，用纱布吸取75%酒精擦手，擦拭超净台，擦拭培养基和无菌水瓶，点燃酒精灯，镊子、解剖刀、剪刀等接种工具灼烧灭菌，待冷却后使用。

2、外植体消毒
选取香石竹叶腋间生出的侧芽为外殖体,用自来水冲洗半小时,
将材料上的泥土和灰尘及杂质冲洗干净,用解剖刀切取所需组织，放入培养瓶中，用75%的酒精浸泡消毒30sec,将材料移入0.1%升汞溶液浸泡10分钟,然后在超净台内用无菌水冲洗3—4次。

材料消毒完成[2]。

3、外植体的制备
将消毒好的材料用无菌滤纸吸去多余的水份,然后在无菌超净工作台上，借助解剖刀剥离茎尖，剥取茎尖大小通常在0.3mm左右。

以上操作均需在酒精灯火焰旁进行。

4、外殖体接种
用灭菌过的镊子将切好的外植体接种到配置好的接种培养基上，每瓶接2-3（可以更多一些）块。

接种培养基为MS + IAA0.1mg/L + 6- BA 0.5mg/L,PH5.8,蔗糖3%,琼脂0.75%。

接种完成后盖上瓶盖，贴标签，注明材料名称、接种日期和姓名。

5、培养与观察
将培养瓶表面用酒精擦拭消毒，置于培养室培养。

整理，清洁超净工作台。

香石竹的培养条件为温度25±1℃,一昼夜光照16h,光照强度2000lx。

经过10天左右的培养,大部分茎尖开始萌动,逐渐长大,20天左右即可长成一小丛植株[3]。

定期观察培养情况，包括观察日期、生长情况、以及污染情况等，并做好记录。

香石竹的继代培养
1、无菌操作准备
将培养基及各种接种用具放入超净工作台，开紫外灯，照射消毒
20-30min,开送风开关，关紫外灯，通风10min后，打开照明日光灯。

洗手，用纱布吸取75%酒精擦手，擦拭超净台，擦拭培养基和无菌水瓶，点燃酒精灯，镊子、解剖刀、剪刀等接种工具灼烧灭菌，待冷却后使用。

2、无菌操作接种
酒精灯火焰旁打开香石竹芽苗培养基，用镊子取出香石竹芽苗，置于无菌不锈钢碟子，用解剖刀将芽苗簇切割成含2~3芽苗，然后切去芽苗的上端[3]。

3、培养
将培养瓶表面用酒精擦拭消毒，置于培养室进行光照培养。

整理、清洁超净工作台。

4、观察记录
定期观察培养情况，包括观察日期、生长情况、以及污染情况等，并做好记录。

香石竹芽苗的诱导生根
1、无菌操作准备
将培养基、无菌水、及各种接种用具放入超净工作台，开紫外灯，照射消毒20-30min,开送风开关，关紫外灯，通风10min后，打开照明日光灯。

洗手，用纱布吸取75%酒精擦手，擦拭超净台，擦拭培养基和无菌水瓶，点燃酒精灯，镊子、解剖刀、剪刀等接种工具灼烧灭菌，待冷却后使用。

2、无菌操作接种
酒精灯火焰旁打开香石竹培养瓶，用镊子取出香石竹芽苗，置于无菌不锈钢碟子，用解剖刀将芽苗的每个小芽分开。

用镊子将单个小芽插入生根培养基，每瓶接3个。

盖上瓶盖，贴上标签，注明材料名称、接种日期和姓名。

3、培养
将培养瓶表面用酒精擦拭消毒，置于培养室进行黑暗培养。

整理、清洁超净工作台。

4、观察记录
定期观察培养情况，包括观察日期、生长情况、以及污染情况等，并做好记录。

缓苗移栽
试管苗在移栽前几天一般都需要进行炼苗，让它有个逐步适应环境的过渡阶段，一般方法是先将培养瓶从培养室拿到常温下放置，然后将试管苗容器口上包扎的塞子或纸去掉放置几天，此时需注意保持空气湿度，并防止杂菌污染，尤其是在炎热的夏季，由于气温较高，当封口打开后，该容器就由原来的无菌状态转为有菌状态，杂菌容易很快生长而污染试管苗。

在去掉封口时采用培养基上加薄层水的处理效果较好，即可提高湿度又可减少杂菌生长，但若放置时间较长则需换水。

待试管苗逐步适应外界的光照、温度和湿度后再进行移栽，即可提高移栽成活率。

(二)移栽技术
移栽时，首先将试管苗从所培养的瓶中取出，取时要用镊子小心地操作，切勿把根系损坏，然后把根部粘附的琼脂漂洗掉，要求全部除去，而且动作要轻，以减少伤根伤苗。

琼脂中含有多种营养成份，若不去掉，一旦条件适宜，微生物就会很快滋生，从而影响植株的生长，甚至导致烂根死亡。

移栽前，先将基质浇透水，并用一个筷子粗的竹签在基质中开一穴，然后再将植株种植下去，最好让根舒展开，并防止弄伤幼苗。

种植时幼苗深度应适中，不能过深或过浅，覆土后需把苗周围基质压实，也可只将容器摇几下待基质紧实即可，以防损伤试管苗的细弱根系和根毛。

移栽时最好用镊子或细竹筷夹住苗后再种植在小盆内，移栽后需轻浇薄水，再将苗移入高湿的环境中，保证空间湿度达90%以上。

五、实验结果与分析
参考文献：
[1]王莲英，朱秀珍，虞佩珍.中国名贵花卉鉴赏与栽培[M].合肥：安徽科学技术出版社，1997.推广应用,取得明显的经济效益。

[2]周丽华，吕华飞，吴健宇，等.茎尖分生组织获得无病毒康乃馨植株的研究[J].云南农业大学学报，1994，（4）：32-35
[3]聂庆娟，王进茂，梁海勇，等.康乃馨的繁殖[J].河北林果研究，1997，（1）：50-52.。