教学设计5：5.3 血红蛋白的提取和分离
5.3 血红蛋白的提取与分离
2003年4月14日宣布人类基因组序列图完成 这标志着进入了后基因组时代。 人类基因组：指DNA分子所携带的全部 遗传信息。 蛋白质组：生物个体表达的蛋白质分子 的总和。主要是对蛋白质功能的研究。
需要获得纯度较高的蛋白质！
血红蛋白
基Байду номын сангаас知识
一、蛋白质的分离原理 蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所 带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的 亲和力，等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。 二、蛋白质的分离方法 （一）凝胶色谱法（也叫分配色谱法） 1、分离依据：相对分子质量的大小 2、凝胶：由多糖类化合物构成的微小多孔球体，如葡聚 糖或琼脂糖等。 3、分离原理：
齐→关闭出口→吸取样品加到色谱柱的顶端→打 开出口→样品完全进入凝胶层后→关闭出口→连 接磷酸缓冲液洗脱瓶→打开出口，进行洗脱→待 红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流 出液。
操作提示
1.红细胞的洗涤 洗涤次数（血浆蛋白）、离心速度与离心时间（白细胞） 2 . 色谱柱填料的处理 凝胶使用前需直接放在洗脱液中→沸水浴加热至接近沸 腾1-2h。可节约时间，并除去微生物，排除胶粒内的空气。 3. 凝胶色谱柱的装填 尽量紧密，降低空隙，不得有气泡存在。 气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。 不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象。 4. 蛋白质的分离 在蛋白质分离过程中，仔细观察红色区带在洗脱过程中的 移动情况。如果红色区带均匀一致地移动，说明色谱柱制作 成功。
1、凝胶色谱法是根据（ ）分离蛋白质的有效方法。 A．分子的大小 B．相对分子质量的大小 C．带电荷的多少 D．溶解度 2、用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质（ ） A．路程较长，移动速度较慢 B．路程较长，移动速度较快 C．路程较短，移动速度较慢 D．路程较短，移动速度较快 3、选用红细胞作为分离蛋白质的实验材料，有何好处（ ） A．血红蛋白是有色蛋白 B．红细胞无细胞核 C．红细胞蛋白质含量高 D．红细胞DNA含量高 4、血红蛋白的提取和分离实验方法及步骤正确的是（ ） A．凝胶色谱法；样品处理——粗分离——纯化——纯度鉴定 B．凝胶色谱法；样品处理——纯化——粗分离——纯度鉴定 C．PCR技术；样品处理——粗分离——纯化——纯度鉴定 D．PCR技术；样品处理——纯化——粗分离——纯度鉴定 5、下列是有关血红蛋白提取和分离的相关操作，其中正确的是（ ） A．可采集猪血作为实验材料 B．用蒸馏水重复洗涤红细胞 C．血红蛋白释放后应低速短时间离心 D．洗脱液接近色谱柱底端时开始收集流出液
血红蛋白的提取和分离教案
血红蛋白的提取和分离教案血红蛋白的提取和分离教案引言血红蛋白是存在于人类和其他脊椎动物血液中的一种蛋白质。
它具有运输氧气和二氧化碳的重要功能，并且是维持身体正常运作所必需的。
本篇文章将为您介绍血红蛋白的提取和分离方法，帮助您更好地理解和研究这一重要蛋白质。
一、血红蛋白的提取方法1. 在提取血红蛋白前，我们需要准备以下材料：- 外周血样本- 1M磷酸盐缓冲液（pH 7.4）- 过硫酸铵溶液- 冷冻离心管- 高速离心机- 冷藏离心机2. 提取步骤如下：- 将外周血样本收集到冷冻离心管中，并添加适量的1M磷酸盐缓冲液。
- 现将样本离心5分钟，以将红细胞与其他成分分离开。
- 小心地将上清液转移至新的冷冻离心管中。
- 向上清液中加入过硫酸铵溶液，使最终浓度达到约20%。
- 待浑浊沉淀形成后，使用高速离心机以12000g离心20分钟。
- 移除上清液，留下血红蛋白沉淀。
- 用冷磷酸盐缓冲液轻轻洗涤血红蛋白沉淀，以除去残留的过硫酸铵。
- 用冷磷酸盐缓冲液重新悬浮血红蛋白沉淀。
二、血红蛋白的分离方法1. 准备以下材料：- 细胞膜- 3M尿素溶液- 离心管- 高速离心机2. 分离步骤如下：- 将提取得到的血红蛋白沉淀加入3M尿素溶液中。
- 使其达到适当浓度，将溶液倒入离心管中。
- 将离心管放入高速离心机中，以12000g离心15分钟。
- 小心地移除上清液，保存血红蛋白沉淀。
- 将血红蛋白沉淀重新悬浮于适量的磷酸盐缓冲液中。
- 将悬浮液转至新的离心管中，在高速离心机中以12000g离心15分钟。
- 再次移除上清液，留下较纯的血红蛋白。
三、实验注意事项1. 在实验过程中，应注意安全操作，避免对自身和他人造成伤害。
2. 所用材料应严格按照规定使用，避免交叉感染或污染。
3. 实验室工作台面应保持干净整洁，及时清理实验废弃物。
4. 离心过程应注意离心管的平衡布置，以防离心过程中发生意外。
结论通过本文的介绍，我们了解到了提取和分离血红蛋白的基本方法。
【人教版】生物选修一：5.3《血红蛋白的提取和分离》教案设计
专题5 DNA与蛋白质技术课题5.3 血红蛋白的提取和分离一、【课题目标】（一）知识与技能1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白2、了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理（二）过程与方法体验血红蛋白提取和分离的实验的严格要求，注意按照操作提示进行相关步骤（三）情感、态度与价值观初步形成科学的思维方式，发展科学素养和人文精神二、【课题重点】凝胶色谱法的原理和方法三、【课题难点】样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填四、【教学方法】启发式教学五、【教学工具】多媒体课件六、【教学过程】（一）引入新课蛋白质是生命活动的主要承担者，是细胞内含量最高的有机化和物。
对蛋白质的研究有助于人们对生命过程的认识和理解。
所以需要从细胞中提取蛋白质进行研究。
怎样提取蛋白质呢？（二）进行新课1．基础知识蛋白质的物化理性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。
1．1凝胶色谱法（分配色谱法）：（1）原理：（图5－13a）分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。
（2）凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。
（3）分离过程：（图5－13b）混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子＊洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。
1．2缓冲溶液（1）原理：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成（如H2CO3－NaHCO3，HC－NaC，NaH2PO4/Na2HPO4等），调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。
（2）缓冲液作用：抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定。
1．3凝胶电泳法：（1）原理：不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。
（2）分离方法：琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺经胶电泳等。
《血红蛋白的提取和分离》名师教案
专题5 DNA与蛋白质技术课题5.3 血红蛋白的提取和分离辉县市第二高级中学李艳琴一、【课题目标】知识与能力目标1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白。
2、说出色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理。
学科素养1、基础知识（从血液中提取和分离血红蛋白；色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理）；2、基本技能（通过体验血红蛋白提取和分离的实验的严格要求，注意按照操作提示进行相关步骤，培养学生理论联系实际的能力）；3、基本思想（通过体验血红蛋白提取和分离的实验的严格要求，初步形成科学的思维方式，发展科学素养和人文精神）；4、基本活动经验（通过色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理的学习，关注学生科学态度的教育，拓展学生视野）。
二、【课题重点】凝胶色谱法的原理和方法三、【课题难点】样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填四、【教学方法】启发式教学五、【教学工具】多媒体课件六、【教学过程】（一）引入新课蛋白质是生命活动的主要承担者，是细胞内含量最高的有机化合物。
对蛋白质的研究有助于人们对生命过程的认识和理解。
所以需要从细胞中提取蛋白质进行研究。
怎样提取蛋白质呢？（二）进行新课1．基础知识蛋白质的理化性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。
1.1凝胶色谱法（分配色谱法）：（1）原理：（图5－13a）分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。
（2）凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。
（3）分离过程：（图5－13b）混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子＊洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。
1.2缓冲溶液（1）原理：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成（如H2CO3－NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等），调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。
生物：5..3《血红蛋白的提取和分离》教案(新人教版选修1)
血红蛋白地提取和分离思考1：分离生物大分子地基本思路是什么？选用一定地物理或化学地方法分离具有不同物理或化学性质地生物大分子.思考2：蛋白质地分离和提取地原理是什么？根据蛋白质各种特性地差异，如分子地形状和大小、所带电荷地性质和多少、溶解度和吸附地性质和对其他分子地亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质.思考3：高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质地何种作用，作用结果是什么被破坏？变性、变性、空间结构思考4：人们用鸡地红细胞提取DNA，用人地红细胞提取血红蛋白地原因是什么？鸡地红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA地提取，人地红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富便于提取血红蛋白一、基础知识：㈠凝胶色谱法<分配色谱法）：1、概念：根据被分离蛋白质地< ），利用具有网状结构地凝胶地分子筛作用，来分离蛋白质地有效方法.2、原理：当不同地蛋白质通过凝胶时，相对<）地蛋白质容易进入凝胶内部地通道，路程<），移动速度<），而< ）地蛋白质无法进入凝胶内部地通道，只能在<）移动，路程<），移动速度< ），相对分子质量不同地蛋白质因此得以分离.3、具体过程：A.地蛋白质由于作用进入凝胶颗粒内部而被滞留；地蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面，在了里之间迅速通过.B.<1）混合物上柱；<2）洗脱开始，地蛋白质扩散进入凝胶颗粒内；地蛋白质被排阻于凝胶颗粒之外；<3）地蛋白质被滞留；地蛋白质被向下移动.<4）不同地蛋白质分子完全分开；<5）地蛋白质行程较短，已从 中洗脱出来，地蛋白质还在行进中.㈡ 缓冲溶液：1、概念：在一定地范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH 发生明显变化地作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用地溶液叫做缓冲溶液.2、作用：能够抵制<）地对溶液地<）地影响，维持PH 基本不变.3、缓冲溶液地配制颗粒A通常由<）种缓冲剂溶解于水中配制而成.调节缓冲剂地<）就可以制得< ）使用地缓冲液.思考：说出人体血液中缓冲对？思考：在血红蛋白整个实验室中用地缓冲液是什么？它地目地是什么？使用地是磷酸缓冲液，目地是利用缓冲液模拟细胞内地PH 环境，保证血红蛋白地正常结构和功能，便于观察<红色）和材料地科学研究<活性）㈢电泳：1、概念：指带电粒子在电场作用下发生迁移地过程.2、原理：许多重要地生物大分子，如<）等都具有( > 在( >下，这些基团会带上< ） .在电场地作用下，这些带电分子会向着与其< ） 移动.电泳利用了待分离样品中各种分子< ）以及分子本身< ）、< ）地不同使带电分子产生不同地< ），从而实现样品中各种分子地分离.3、分类：琼脂糖凝胶电泳 聚丙稀酰胺凝胶电泳. 测定< 蛋白质相对分子质量 ）通常用十二烷基硫酸钠<SDS ）—聚丙稀酰胺凝胶电泳 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中地迁移率取决于它所带静电荷地多少以及分子地大小等因素.加入待分离地带电性质、分子大小和形状地 溶液凝胶电泳原理示意图为了消除静电荷对迁移率地影响可以在凝胶中加入(>.SDS能使蛋白质发生完全变性.由几条肽链组成地蛋白质复合体在SDS地作用下会解聚成单条肽链，因此测定地结果只是( >.SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷地量大大超过了蛋白质分子原有电荷量.因而掩盖了不同种蛋白质间地电荷差别，使电泳迁移率完全取决于( >.二实验操作蛋白质地提取和分离一般分为四步：样品处理——粗分离——纯化——纯度鉴定1.样品处理(1>红细胞地洗涤①目地：去除<）②方法：<）离心<速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离地效果），然后用胶头吸管吸出上层透明地<），将下层< ）地红细胞液体倒入< ）再加入用< ）地<）质量分数为0.9％地氯化钠溶液洗涤⑤低速离心<低速短时间）⑥重复4、5步骤< ）次，直至上清液中已没有<），表明洗涤干净.利于后续血红蛋白地分离纯化，不可洗涤次数过少.(2>血红蛋白地释放加<）到< ）体积，再加40％体积地< ）< 溶解细胞膜），置于<）上充分搅拌10分钟<加速细胞破裂）, 细胞破裂释放出血红蛋白.(3>分离血红蛋白溶液：将搅拌好混合液转移到离心管内，以2000r/min地速度离心10 min ，试管中地溶液分为4层:第1层<最上层）：< ）甲苯层第2层<中上层）：< ）地沉淀层，<）色薄层固体第3层<中下层）：< ）地水溶液层，< ）地液体第4层<最下层）：其它杂质< ）地沉淀层(4>透析2.凝胶色谱制作1）凝胶色谱柱地制作①取长40厘M，内径1.6厘M地玻璃管，两端需用砂纸磨平.②底塞地制作：打孔挖出凹穴安装移液管头部覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好.a、选择合适地地橡皮塞，中间打孔；b、在橡皮塞顶部切出锅底状地<），在0.5ml地< ）头部切下< ）长地一段，插入橡皮塞孔内，上部不得超过橡皮塞地凹穴底面.c.剪尼龙网小圆片覆盖在<）上，用< ）地尼龙纱将橡皮塞<）包好，插到玻璃管一端.d、色谱柱下端用移液头部做<），连接一细地<），并用螺旋夹控制尼龙管地<），另一端放入收集< ）地收集器内③顶塞地制作：插入安装了玻璃管地橡皮塞④组装：将上述三者按相应位置组装成一个整体.⑤安装其他附属结构.2）凝胶色谱柱填料地处理<1）凝胶地选择：<）.<2）方法：配置凝胶悬浮液：计算并称取一定量地凝胶浸泡于<）中充分溶胀后，配成< ）.<3）凝胶色谱柱地装填方法①固定：将色谱柱处置固定在支架上②装填：将< ）一次性地缓慢倒入< ）内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀.③洗涤平衡装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在( >高地操作压下，用300ml 地20mmol/l地磷酸缓冲液<pH为7.0）充分<）12小时.3）样品加入与洗脱<1）加样前：打开下端出口，使柱内凝胶面上地< ）缓慢下降到与< ）平齐，关闭出口<2）加透析样品①调整缓冲液面：与凝胶面平齐②滴加透析样品：用< ）将1ml<）地样品加到色谱柱地<）③样品渗入凝胶床：< ）④洗脱：打开下端，用磷酸缓冲液洗脱⑤收集：待< ）接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每< ）收集一试管连续收集思考：与其它真核细胞相比，红细胞有什么特点？这一特点对你进行蛋白质地分离有什么意义？血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液.这使血红蛋白地分离过程非常直观，大大简化了实验操作.思考：你能描述血红蛋白分离地完整过程吗？血红蛋白提取和分离地程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定.首先通过洗涤红细胞、血红蛋白地释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即样品地处理；再经过透析去除分子量较小地杂质，即< ）；然后通过凝胶色谱法将相对分子质量较大杂质蛋白除去，即样品地< ）；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行< ）.3.SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳判断<）地蛋白质是否达到要求，需要进行蛋白质纯度地鉴定.SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白纯度电泳方法步骤1>根据厂家说明书安装电泳用地玻璃板 2）SDS—聚丙烯酰胺凝胶制备3）样品处理： 4）把凝胶固定于电泳装置上5>加样：按顺序加样，加样量通常为10—25 μL.样品可以多加几个，例如，血浆样品红细胞破碎后(即进行凝胶色谱分离之前>地样品和凝胶色谱分离之后地样品6>电泳 7）剥胶 8）染色 9>脱色 10>观察结果SDS电泳地成功关键之一是电泳过程中，待别是样品制备过程中蛋白质与SDS地结合程度.三实验结果分析与评价观察血液样品离心后是否分层，如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白地原因.此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净地红细胞，影响后续血红蛋白地提取纯度.如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确地话，能清楚地看到血红蛋白地红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离地效果不好，这与凝胶色谱柱地装填有关.讨论：如何测定蛋白质地分子量？使用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质地分子量时，可选用一组已知分子量地标准蛋白同时进行电泳，根据已知分子量地标准蛋白地电泳区带位置，用电泳迁移率和分子量地对数作标准曲线，可以测定未知蛋白质地分子量.申明：所有资料为本人收集整理，仅限个人学习使用，勿做商业用途.。
生物：5..3《血红蛋白的提取和分离》教案(2)(新人教版选修1)
课题3 血红蛋白的提取和分离一、学习目标：本课题尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解色谱法，电泳法等分离生物大分子的基本原理，为今后学习运用这些技术打下基础。
W6wF0QhZ0s二、重点：凝胶色谱法的原理和方法三、难点：样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。
【基础梳理】一、凝胶色谱法1、概念：也称做；是根据分离蛋白质的有效方法。
W6wF0QhZ0s2、原理<1）由构成的凝胶，内部有许多贯穿的的。
<2）当不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程，移动速度，而相对分子质量的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在移动，路程，移动速度，从而使不同的蛋白质分子得以分离。
W6wF0QhZ0s二、缓冲溶液1、作用：在一定范围内，抵制的对溶液pH的影响，维持pH 。
2、配制：由种缓冲剂溶解于中配制而成，通过调节缓冲剂的就可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。
W6wF0QhZ0s三、电泳1、概念：指在电厂的作用下发生的过程。
2、原理：在一定的下，、等生物大分子的可解离基团会带上或，在的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷的电极移动。
W6wF0QhZ0s3、作用：电泳利用了待分离样品中各种分子的差异及分子本身的、的不同，使带电分子产生不同的，从而实现样品中的分离。
4、方法：常用的电泳方法有和。
测定蛋白质分子量时通常使用。
W6wF0QhZ0s四、实验操作1、样品处理:通过、、等操作收集血红蛋白溶液。
(1>红细胞的洗涤：目的是。
分离时采取，直至上清液中没有，表明红细胞已洗涤干净。
W6wF0QhZ0s(2>血红蛋白的释放：在和的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。
(3>分离血红蛋白溶液：把离心后，将试管中的液体用过滤、除去，于中静置片刻后，分离出下层的。
2、粗分离：即透析(1>方法：将血红蛋白溶液装入，将放入一定量适宜浓度的中，透析。
教学设计3：5.3 血红蛋白的提取和分离
专题5 DNA和蛋白质技术课题3 血红蛋白的提取和分离一、课题目标本课题通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理，为今后学习运用这些技术打下基础。
二、课题重点与难点课题重点：凝胶色谱法的原理和方法。
课题难点：样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。
三、课题背景分析课题背景通过当今生物科学在蛋白质研究领域的进展，说明提取、分离高纯度的蛋白质的重要性和必要性，进而明确地提出课题目的：以血红蛋白为实验材料，学习蛋白质提取和分离的一些基本技术。
教师可以发挥学生的主动性，让学生介绍当前有关蛋白质研究的新进展，激发学生的学习兴趣，然后指出本课题的学习意义，让学生初步体会分离纯化蛋白质的过程和方法。
四、基础知识分析与教学建议（一）凝胶色谱法知识要点：1.凝胶色谱法的用途；2.凝胶色谱法分离蛋白质的原理。
教学建议：教师在介绍凝胶色谱法的基本原理时，可以结合教科书提供的插图，让学生对凝胶色谱法分离蛋白质的过程有一个直观的认识。
教师可以通过发动学生查阅资料，让学生了解有关凝胶色谱法的知识，如凝胶的种类、理化性质及凝胶的选择和保存，并结合实验操作，让学生分析实验中的注意事项。
教师还可以向学生介绍凝胶色谱法的其他用途，如测定生物大分子的分子量、蛋白质的脱盐等。
（二）缓冲溶液知识要点：1.缓冲溶液的组成和作用机理；2.熟悉一般缓冲溶液的配制方法；3．缓冲溶液广泛应用于生化实验、微生物的培养、组织切片和细菌染色以及酶的研究等方面。
教学建议：教师首先可以结合生活中的一些缓冲现象，让学生充分理解缓冲溶液的重要性。
在进行本课题的实验操作之前，可以让学生查阅相关资料，练习一些常用缓冲液的配制。
（三）电泳知识要点：1.电泳的基本原理；2.不同类型的电泳。
教学建议：电泳技术广泛应用于生化实验，在分离分析酶、蛋白质、核酸等生物大分子方面具有较高的分辨率。
2023高中生物人教版血红蛋白的提取和分离实验教案
2023高中生物人教版血红蛋白的提取和分离实验教案实验目的：通过提取和分离血红蛋白，加深对生物分离技术的理解，并掌握实验操作技能。
实验材料：1. 牛血液样品2. 细胞裂解液3. 盐溶液4. 酒精5. 去离子水6. 脱色剂实验步骤：一、制备细胞裂解液1. 取适量的牛血液样品，置于无菌试管中。
2. 加入等体积的生理盐水，轻轻混匀。
3. 用离心机将血液样品离心，分离血细胞沉淀。
4. 将血细胞沉淀取出，加入等体积的细胞裂解液，轻轻混匀。
5. 将混合液放置于冰箱中，静置30分钟，使细胞裂解液充分与血细胞反应。
二、提取血红蛋白1. 从冰箱取出上一步制备的混合液，放置于室温下10分钟。
2. 用移液管将混合液转移至离心管中。
3. 用离心机将离心管中的液体进行离心，使得血细胞沉淀。
4. 将离心管中的上清液倒出，将血细胞沉淀取出。
5. 加入适量的去离子水，轻轻混匀，使血细胞完全溶解。
6. 用滤纸滤除混合液中的杂质。
三、分离血红蛋白1. 将滤掉杂质的混合液均匀地倒入试管中。
2. 用移液管向试管中滴加脱色剂，混匀后放置10分钟。
3. 用离心机将试管中的液体进行离心，使得血红蛋白沉淀。
4. 用滴管将上清液吸尽，只保留沉淀。
实验注意事项：1. 实验过程中需注意无菌操作，以避免污染样品。
2. 实验仪器需提前清洗干净，确保实验结果的准确性。
3. 操作时需严格按照实验操作步骤进行，确保实验顺利进行。
4. 实验结束后，及时清理实验场地，并归还使用的实验器材。
实验结果与讨论：通过以上步骤，我们成功提取和分离了血红蛋白。
血红蛋白是一种重要的蛋白质，在血液中起着携氧和传递氧的功能。
通过本实验，我们学习到了血红蛋白提取和分离的基本原理和方法，并且掌握了相应的实验操作技能。
总结：本实验通过提取和分离血红蛋白，加深了对生物分离技术的理解，并学习到了相关的实验操作技能。
血红蛋白作为一种重要的蛋白质，在人体的氧气传递过程中发挥着重要的作用。
通过本实验的学习，我们不仅提高了实验技能，还深入了解了血红蛋白的结构和功能。
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课题3 血红蛋白的提取和分离
一、课题目标
1.知识目标
a.说出从血液中初步获取血红蛋白的原理和方法。
b.说明凝胶色谱法的原理和方法。
c.说出电泳的基本原理和方法。
2.能力目标
运用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离纯化。
3.情感目标
通过运用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离纯化，锻炼科学的思维方法，培养实事求是的科学态度。
二、课题重点
凝胶色谱法的原理和方法。
三、课题难点
样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。
一、基础知识
（一）蛋白质提取与分离的依据
引导学生回忆蛋白质的物理化学性质，指出其是蛋白质提取与分离的依据。
1.分子的形状、大小
2.电荷性质和多少
3.溶解度
4.吸附性质
5.对其他分子亲和力
（二）方法及原理
概述蛋白质分离的两种常用方法和原理，再分别详细讲解。
凝胶色谱法：根据相对分子质量的大小分离蛋白质
电泳法：根据分子带电性质的差异以及分子本身大小、形状的不同分离蛋白质
1.凝胶色谱法
（1）材料：凝胶
展示图解，讲解种类和特点。
多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。
（2）原理：指导学生观察教材图5-13凝胶色谱法分离蛋白质的原理，讲解分离过程。
步骤：混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子
原理：当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；
1.红细胞的洗涤：洗涤次数不能过少；低速、短时离心。
2.色谱柱的装填：装填尽量紧密，降低颗粒间隙；无气泡；洗脱液不能断流。
3.凝胶的预处理：沸水浴法时间短，还能除去微生物和气泡。
4. 色谱柱成功标志：红色区带均匀一致地移动。
四、结果分析与评价
讲解几个方面的结果分析与评价。
1.血液样品的处理：分层明显→样品处理完成
2.凝胶色谱柱的装填：放一支与凝胶柱垂直的日光灯直接检查加入大分子有色物质如蓝色葡聚糖—2000或红色葡聚糖，若色带均匀、狭窄、平整→装填成功。
3.血红蛋白的分离
血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随洗脱液缓慢流出，分离成功。
共同回顾本节要点：。