抗肿瘤药物研究及新药筛选
抗肿瘤药物研究及新药筛选
抗肿瘤药物研究及新药筛选提纲一、化疗药物的发展二、肿瘤的药物治疗三、抗肿瘤药物筛选及评价四、体外抗肿瘤活性试验五、体内抗肿瘤活性试验一、化疗药物的发展•近代肿瘤化疗学始于20世纪40年代。
• 50年代通过动物筛选化疗药物发现了5FU、MTX、CTX等，化疗学有了发展。
• 60年代认识到肿瘤细胞动力学及化疗药药代动力学的重要性。
大部分目前所用的抗癌药已发现，有急淋、HD、睾丸癌等可化疗治愈。
• 70年代形成肿瘤内科学，更多肿瘤有了比较成熟的化疗方案。
• 80年代研究以生物反应修饰剂等药物来提高化疗疗效，探索抗药性产生的原因，5%肿瘤患者可治愈。
• 90年代新抗癌药进入临床，多药耐药基因发现，生物治疗，基因治疗辅助治疗改善等，疗效进一步提高。
二、肿瘤的药物治疗1、细胞毒类抗肿瘤药a、拓扑异构酶抑制剂原理：真核细胞DNA拓扑异构酶Ⅰ（Topo Ⅰ)是生物体内及其重要的细胞核内酶，参与DNA复制、转录和修复等所有关键的核内过程。
DNA拓扑异构酶Ⅰ已成为重要的抗肿瘤药物研究新靶点。
拓扑异构酶Ⅰ抑制剂已成为高选择性抗肿瘤药物研究的一个主攻方向。
代表药物：喜树碱类化合物对S期的毒性作用，这一作用需共价TopoI－DNA复合物的形成和DNA复制。
TopoI抑制剂诱导的细胞凋亡而非DNA断裂是引起细胞最终死亡的原因。
b、胸苷酸合成酶抑制剂原理：胸苷酸合成酶（TS）把单磷酸脱氧尿嘧啶（DUMP）转换成单磷酸胸腺嘧啶（TMP），在DNA复制和细胞生长过程中起着关键作用。
是已知抗肿瘤药物的重要有效靶点之一。
胸苷酸合成酶抑制剂导致了DNA断裂从而导致细胞死亡。
代表药物：培美曲塞它是一种结构上含有核心为吡咯嘧啶基团的抗叶酸制剂，通过破坏细胞内叶酸依赖性的正常代谢过程，抑制细胞复制，从而抑制肿瘤的生长。
体外研究显示，培美曲塞能够抑制胸苷酸合成酶、二氢叶酸还原酶和甘氨酰核苷酸甲酰转移酶活性，这些酶都是合成叶酸所必需的酶。
一旦培美曲塞进入细胞内，它就在叶酰多谷氨合成酶的作用下转化为多谷氨酸的形式。
中药抗肿瘤的新药研究选题思路之探讨
中药抗肿瘤的新药研究选题思路之探讨郎万吉【摘要】本文根据当今中医药治疗肿瘤的"带瘤生存",古人之"邪正相安"的治疗目的,探讨中药治疗肿瘤新药研究的选题定位,基本方的选择和来源作讨论.选题定位,以延长患者生存时间,提高生存质量为主;基本方的选择应以补益脾胃气血为主;选题来源应从古方和当今名中医方中进行选择.【期刊名称】《云南中医中药杂志》【年(卷),期】2006(027)002【总页数】2页(P36-37)【关键词】中药;肿瘤;新药研究;选题【作者】郎万吉【作者单位】云南省肿瘤医院,云南,昆明,650118【正文语种】中文【中图分类】R245-3中医药治疗肿瘤有着悠久的历史，历代医家以“积聚”、“癥瘕”、“乳癌”、“肠覃”、“石瘕”等名之。
中医治疗肿瘤以“虚”立论，治疗方法强调“扶正祛邪”，增强人体精、津、气、血的周流而“邪正相安”[1]，延长病人的生存时间和提高病人的生活质量。
1999年中华中医药学会肿瘤分会贵州会议制定的《中医药治疗常见恶性肿瘤临床诊断与疗效标准(第一部分·讨论稿)》的内容包括“带瘤生存”[2]。
根据在当今中医药治疗肿瘤疗效标准的要求，结合古人治疗肿瘤的思路方法。
笔者对中药治疗肿瘤的新药研究如何选题谈点看法，意在抛砖引玉，与同道一同探讨。
1 中医对肿瘤成因的认识和治疗许多中医古医籍中对肿瘤发病定义为“积聚”、“癥瘕”，记载早至《难经》，其发病机理都以“虚”论之。
隋·巢元方的《诸病源候论》卷三、卷十九对“积聚”的发病机理和临床症状都有论述[3]。
清初的陈歧在他的《医学专灯·积聚癥瘕痃僻痞块》条下详细记录着“血之所积；因名曰积，积久而发也。
气之所聚，因名曰聚，聚散不常之意也。
癥者，坚也，坚则难破。
瘕者，假也，假血成形。
……名色虽多，而痞块二字可以该之”。
“……积者，盖因饮食不消，着于气怒，痰行其处，必裹一层，血流过其处，必裹一层，痰血共裹，则不得不成块矣”。
抗肿瘤药物药效学实验方法及指导原则
抗肿瘤药物药效学实验方法及指导原则一、基本原则1. 抗肿瘤药物分类(1) 细胞毒类药物(cytotoxic agent)：包括干扰核酸和蛋白质合成、抑制拓扑异构酶及作用于微管系统的药物等；(2) 生物反应调节剂(biological response modifier)；(3) 肿瘤耐药逆转剂(resistance reversal agent)；(4) 肿瘤治疗增敏剂(oncotherapy sensitizer)；(5) 肿瘤血管生成抑制剂(tumor angiogenesis inhibitor)；（6）分化诱导剂(differentiation inducing agent)；(7) 生长因子抑制剂(growth factor inhibitor)；（8）反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide) 。
2. 抗肿瘤药物药效学需研究内容2.1 包括体外抗肿瘤试验，体内抗肿瘤试验。
2.2 评价药物的抗癌活性时，以体内试验结果为主，同时参考体外试验结果以做出正确的结论。
2.3 I类抗肿瘤新药应进行药物作用机制初步研究。
二、体外抗肿瘤活性试验1. 试验目的1.1 对候选化合物进行初步筛选；1.2 了解候选化合物的抗瘤谱；1.3 为随后进行的体内抗肿瘤试验提供参考，如剂量范围、肿瘤类别等。
2. 试验方法选用10-15株人癌细胞株，根据试验目的选择相应细胞系及适量的细胞接种浓度，按常规细胞培养法进行培养；推荐使用四氮唑盐MTT还原法、XTT 还原法、磺酰罗丹明B(SR染色法、或51Cr释放试验、集落形成法等测定药物的抗癌作用。
药物与细胞共培养时间一般为48-72 小时，贴壁细胞需先贴壁24 小时后再给药。
试验应设阳性及阴性对照组，阳性对照用一定浓度的标准抗肿瘤药，阴性对照为溶媒对照。
3. 评价标准以同一样品不同浓度对肿瘤细胞抑制率作图可得到剂量效应曲线，然后采用Logit法计算半数有效浓度(IC50值或EC50值)。
实验肿瘤药理学—抗肿瘤药物的药效学评价
3
3. 样品抗肿瘤活性的确证（二） ——体外筛选实验
3.1原理与基本操作要点 3.1.1实验原理 3.1.2基本操作要点 3.2常用的肿瘤细胞株介 绍 3.3抗肿瘤药物体外筛选 的实验设计
3.4常用的评价方法 3.4.1细胞拒染法 3.4.2生长曲线法 3.4.3克隆计数法 3.4.4MTT法 3.4.5SRB法 3.5其它评价方法
17
2.1概述
实验动物肿瘤模型根据获取肿瘤组织的不同，可以分为自发性肿瘤、 诱发性肿瘤以及移植性肿瘤。
小鼠常见高自发性肿瘤举例
动物品系 C3H DBA/1 A AKR PBA C57BL … 肿瘤组织类型 乳腺癌 乳腺癌 肺瘤（癌） 淋巴细胞性白血病 淋巴瘤 网织细胞肉瘤 … 发生率 99% 75% 90% 91% 100% 74.5% … 月龄 7.2 >12 >18 10 8.7 14 …
5532常用肿瘤细胞株概要细胞株名称生物学特点研究应用mel红白血病细胞hl60白血病细胞k562白血病细胞wehi3b白血病细胞b16黑色素瘤细胞a2780卵巢癌细胞mcf7乳腺癌细胞kb口腔癌细胞a549肺癌细胞ht1080纤维肉瘤细胞3t3l1成纤维细胞nb4白血病细胞dba2小鼠白血病人白血病人balbc小鼠c57bl6小鼠卵巢癌病人乳腺癌病人口腔癌病人肺癌病人纤维肉瘤病人3t3小鼠白血病人悬浮培养小细胞球状基本为二倍体有染色体异常细胞较大酸性磷酸酶阳性基本为三倍体ph染色体阳性培养条件不适可影响分化诱导的敏感性密度高过会自分化高低密度时细胞形态有变化可移植到动物体内对阿霉素及苯丙氨酸氮芥敏感上皮样生长单层上皮样生长上皮样生长上皮样生长倍增时间较长26小时非典型的肿瘤细胞达到饱和浓度时有接触性抑制具有人早幼粒细胞白血病所特有的典型的染色体异常分化诱导实验分化诱导实验分化诱导实验耐药分化诱导实验分化诱导或细胞杀伤实验细胞杀伤及耐药实验细胞杀伤实验细胞杀伤实验细胞杀伤实验细胞杀伤及抗侵袭实验分化诱导或细胞杀伤实验分化诱导实验5633样品初筛时应该注意三点
抗肿瘤药物的筛选方法
2）细胞传代
贴壁细胞生长3-5天，80%融合度。用胰酶消化 1-3 min后，离心，调节适当密度重新悬浮在培养 液中。
3）细胞计数
细胞计数板
5）细胞接种
3000-10000细胞接种在96孔板，贴壁 24小时，或对数生长期
6）加药处理72 h（指定时间点） 7）MTT溶液（5 mg/ml） ，孵育2-4小时 8）弃去培养液，加入DMSO溶解生成的
方法：裂解肿瘤细胞，消化蛋白，提取ＤＮＡ，上
凝胶电泳，ＥＢ染色后，ＵＶ灯下观察。
结果：凋亡细胞显示ＤＮＡ梯带。
CTL DRUG1 DRUG2 MARKER
３）PI/Annexin-Ｖ-FITC双染色分析
原理：调亡细胞磷脂酰丝氨酸（PS）暴露于细胞
表面，PS结合标记荧光素FITC的Annexin-V 但细胞膜仍然完整，荧光染料ＰＩ不能进 入，而调亡晚期的细胞可同时受Annexin-V 和PI的双标记。
结果处理：同ＭＴＴ法
Ｃ）细胞排染法（酞酚蓝） 原理：
细胞损伤或死亡后细胞膜完整性被破坏，正 常细胞排染，而死亡细胞染成蓝色。
伊红、苯胺黑 等染料
方法：
细胞悬液加入酞酚蓝染色液混匀，用细胞计数板， 分别计数活细胞（未染色）和死细胞数目（蓝色）
结果：
细胞死亡率= 对照组活细胞数－给药组活细胞数
（%）
方法：肿瘤细胞同时加入Annexin-Ｖ和ＰＩ染色，
用流式细胞仪分析。
PI
正常细胞
Annexin-V (-)
PI
(-)
晚期凋亡细胞
Annexin-V (+)
PI
(+)
早期凋亡细胞
Annexin-V (+)
新型抗肿瘤药物研究与开发
新型抗肿瘤药物研究与开发肿瘤是人类健康难以绕开的疾病，多年来，针对肿瘤的治疗方法呈现出多元化的局面，传统的手术、化疗、放疗等治疗方案被更多新型的抗肿瘤药物逐渐取代，其研究和开发也成为当今科研领域中不可或缺的组成部分。
本文将就新型抗肿瘤药物的研究和开发，以及其技术突破和应用前景进行探讨。
一、新型抗肿瘤药物的研究与开发概述细胞增殖和凋亡失衡是肿瘤发生的主要机制，新型抗肿瘤药物能够抑制、诱导或增强某些分子或信号通路的作用，从而实现对癌细胞的克制。
其中，基因治疗、免疫治疗、靶向治疗等方向成为近年的研究热点。
1. 基因治疗基因治疗是利用基因工程技术改变患者的基因，治疗某些疾病的一种新型治疗方法，对抗肿瘤也提供了新思路。
基因治疗的方法之一就是将修补后的基因整合到载体中，然后输送到人体内部，以改变患者的细胞基因组。
这种方法的优点在于，基因修复的目的高度特异性，能够从根本上解决肿瘤治疗方案中病因的问题。
目前，基因治疗在肿瘤治疗领域已经获得了突破性的进展。
2. 免疫治疗免疫治疗是借助免疫系统抑制或激活人体内的免疫反应过程，来达到清除癌细胞的目的。
免疫治疗具有免疫选择性、毒副作用较小等优点，在肿瘤治疗方案中得到越来越多的重视和应用。
特别是近年来通过基因工程技术开发出来的特异性为T细胞受体（TCR）的CAR-T细胞治疗，在血液疾病如白血病等方面已经取得了显著的疗效，也在其他肿瘤治疗领域展现出巨大的应用潜力。
3. 靶向治疗靶向治疗的最大特点是可以直接针对癌细胞特定的分子靶点，与传统治疗相比，具有更精准、更少的毒副作用的优势。
靶向治疗主要包括小分子靶向药物和单克隆抗体。
小分子靶向药物可以通过与癌细胞中特定的靶点相结合和作用来控制癌细胞的生长，例如靶向酪氨酸激酶的EGFR抑制剂，靶向BRAF的抑制剂等。
单克隆抗体通过与癌细胞表面的特定抗原相结合，发挥细胞毒作用或者抑制作用，例如靶向HER2的Herceptin等，具有极强的专一性，因此是靶向治疗领域中的一种重要方法。
抗肿瘤药物筛选及临床实验
抗肿瘤药物筛选及临床实验责任编辑:luanchaojibing,作者：佚名文章来源：本站原创点击数：更新时间：2005-10-24 14:54:02(—)抗肿瘤药物的筛选1．体内筛选方法体内筛选方法是药物应用于有移植性肿瘤的动物进行实验的方法。
肿瘤模型是进行药物筛选的先决条件。
一个理想的用于药物筛选的肿瘤模型应具备的条件是：①对临床疗效有预告性；②快速、经济；③指标明确、客观；④重现性好，结果可信赖。
常用于鼠类，近年来在体内试验方面，裸鼠被广泛应用于抗肿瘤药物的筛选，目前已成功地将官颈癌、卵巢癌、乳腺癌、结肠癌、肺癌等10余种人体肿瘤移植于裸鼠，国内已成功地建立了卵巢癌裸鼠皮下移植瘤和腹水瘤模型，并已用于科研和临床。
在体内试验方面需注意：①给药途径。
因腹腔给药假阳性较多见，因此要筛选一种药物是否对一种移植肿瘤确实有效，需应用两种以上不同的给药途径，并且三次实验结果均显示标准抗癌活性时才能判定有效。
②在每一种给药途径中，还需观察不同剂量的抗肿瘤活性，以揭示有效抗肿瘤药物的量效关系。
2．体外筛选方法因体内筛选需要的技术条件高，故大批筛选或粗选时多采用体外筛选。
(1)人肿瘤集落形成法：该方法是将单细胞悬液，接种到含软琼脂的培养基中，培养一定时间后一部分肿瘤细胞能够在琼脂中生长，形成集落。
通过药物处理组和对照组的细胞集落生成数量比较，可作为肿瘤化疗的药物敏感试验。
每次可用多个平面筛选8一10种药物，以找出对肿瘤细胞最敏感的药物。
此法快速、经济、选择性高，而且结果可靠，故在临床用药选择和抗肿瘤药物开发上将得到广泛应用。
该方法缺点是活肿瘤组织单细胞悬液的制备比较困难，并且集落形成的成功率不够高，故在方法学上需待完善。
ALberts等以此法指导69例复发转移卵巢癌的治疗，结果临床有效率为54％；经验治疗组的有效率为20％；而以。
HCTA中抗药的药物治疗的有效率为8％。
(2)三磷酸腺苷生物发光法(ATP法)：其基本原理是ATP为细胞内能量的基本来源，其浓度与活细胞量有关。
抗肿瘤细胞凋亡诱导药物的研发现状与未来趋势分析
抗肿瘤细胞凋亡诱导药物的研发现状与未来趋势分析近年来，随着全球癌症发病率和死亡率的不断攀升，抗肿瘤药物的研发成为了医学界关注的焦点。
在众多抗肿瘤策略中，诱导肿瘤细胞凋亡作为一种高效且具有选择性的治疗手段，受到了广泛的重视。
细胞凋亡，又称程序性死亡，是细胞在基因调控下主动结束生命的过程，对于维持生物体的稳态至关重要。
当细胞凋亡机制失控时，可能导致包括癌症在内的多种疾病。
因此，通过药物干预来恢复或增强肿瘤细胞的凋亡过程，成为了抗肿瘤治疗的重要研究方向。
本文将从理论研究的角度，对抗肿瘤细胞凋亡诱导药物的研发现状与未来趋势进行深入分析。
一、抗肿瘤细胞凋亡诱导药物的作用机制1.1 细胞凋亡的基本途径细胞凋亡主要通过两条途径实现：内源性途径（线粒体途径）和外源性途径（死亡受体途径）。
内源性途径主要由线粒体介导，当细胞受到内部损伤信号刺激时，线粒体释放细胞色素c等促凋亡因子，激活caspase家族蛋白酶，进而引发细胞凋亡。
外源性途径则由细胞表面的死亡受体（如Fas、TNF受体等）介导，当这些受体与相应的配体结合后，可以激活caspase8等启动型caspase，进而触发细胞凋亡。
这两条途径最终都汇聚于效应型caspase（如caspase3、6、7），导致细胞结构的解体和凋亡小体的形成。
1.2 抗肿瘤细胞凋亡诱导药物的作用靶点基于上述细胞凋亡途径，抗肿瘤细胞凋亡诱导药物主要针对以下几个靶点发挥作用：一是作用于线粒体，通过改变线粒体膜电位、促进细胞色素c释放等方式激活内源性凋亡途径；二是靶向死亡受体及其配体，通过模拟或增强死亡信号来激活外源性凋亡途径；三是直接激活caspase家族蛋白酶，尤其是启动型和效应型caspase，以加速凋亡进程。
还有一些药物通过调控凋亡相关基因（如Bcl2家族、IAPs等）的表达水平，间接影响细胞凋亡的发生。
二、抗肿瘤细胞凋亡诱导药物的研发现状2.1 现有药物概述目前，已有多款抗肿瘤细胞凋亡诱导药物获批上市或处于临床研究阶段。
抗肿瘤药物实验法
第1节 肿瘤细胞体外筛选方法
一、抗肿瘤药体外方法
动物模型在抗肿瘤药物的评价中起重要的 作用，但动物模型费用高，周期长使其不适 合大规模的抗肿瘤药物评价。因此抗肿瘤药 初步筛选首先应采用肿瘤细胞体外实验方法， 既节约成本又节省时间。
1.MTT法 【基本原理】活细胞线粒体中存在的脱氢酶能够 代谢还原黄色的溴化3-（4，5-二甲基噻唑-2） -2，5-二苯基四氮唑（MTT）为蓝紫色的甲臜； 而死细胞此酶消失，MTT不被还原。 用DMSO溶解甲臜后，570nm处酶标仪测定其吸光 度（OD值）。 OD值与活细胞数成正比，因此可 根据 OD 值推测出活细胞的数目，了解药物抑制 或杀伤肿瘤细胞的能力。
• 【操作步骤】
（1）0.25%胰酶消化对数生长期细胞，5%～10%NBS的RPMI 1640调细胞浓度50000个/ml。96孔板100ul/孔。设溶剂 对照，每组 3-6 平行孔。 37℃， 5%CO2 、 95% 空气的培养 箱中预培养24h，弃上清。 （2）加药物5个10倍稀释的浓度（溶剂常用的有二甲亚砜 和水)，通常为10-4、10-5、10-6、10-7、10-8mol/L。 （ 3 ）细胞连续培养 24 ～ 72h ，每孔加入 10μ l 5mg/ml 的 MTT溶液（以无血清培养基配制），继续培养4h。 （4）吸去上清。加入200μ l DMSO，轻轻振荡以使甲臜完 全溶解。570nm处用酶标仪测定OD值。 （5）计算抑制率(%)=（对照OD-药物OD）/对照OD*100%
（ 2 ）软琼脂集落形成：适用悬浮和贴壁生长细胞。
1）计数对数生长期细胞，15% NBS培养液配成1000个/ml细 胞悬液，37℃温育。 2）取33～35mm培养皿，3复皿，加受试药20μ l。 3）取37℃新鲜培养液9份，加沸水浴中融化的5%琼脂液1份， 摇匀，加入平皿，每个1ml，混匀置室温使琼脂凝固。 4）取预温的细胞悬液按每9.4ml加5%琼脂液0.6ml的比例混 匀，加入已铺底层琼脂的平皿中，每个1ml，置室温使琼 脂凝固。 5）将平皿置5%CO2，37℃孵育箱中培养7～10天。 6）镜下计数直径大于75μ m（50个细胞以上）的集落。
抗肿瘤药物临床试验技术指导原则
抗肿瘤药物临床试验技术指导原则一、概述恶性肿瘤是严重威胁人类生命的一类疾病，尽管现有治疗手段取得了一定疗效，但多数肿瘤患者生存时间有限，缺乏有效的可以治愈的药物，亟需开发新的药物来满足需要。
在抗肿瘤药物的风险效益评估中，医护人员和患者可能愿意承受相对较大的安全性风险，所以抗肿瘤药物的临床研究除遵循一般药物临床研究原则外，还应考虑其特殊性。
由于肿瘤生物学研究的进展，一些新的作用机制、作用靶点的抗肿瘤药物不断涌现，呈现出不同于以往传统细胞毒类药物的安全性和有效性特点；肿瘤疾病的药物治疗也从以往的单纯追求肿瘤缩小向延长患者的生存期、提高生存质量转变，这些改变使抗肿瘤药物临床疗效评价终点指标也出现较大改变。
因此，传统的抗肿瘤药物开发模式已经变得不适宜，需要更多地探索能加快和促进开发进程的临床研究策略。
本指导原则将对抗肿瘤药物临床研究一般考虑进行阐述，重点阐述在不同临床研究阶段中需要重点考虑的问题，旨在为抗肿瘤药物临床研究的设计、实施和评价提供方法学指导。
申请人在进行临床研究时，还应当参照国家食品药品监督管理局（以下简称SFDA）既往发布的相关指导原则和《药物临床试验质量管理规范》（GCP）要求进行，对于一般药物临床研究需要遵从的原则以及与其他指导原则重复内容在本文中不再赘述。
本指导原则主要适用于抗肿瘤新化合物的临床研究，抗肿瘤生物制品也可参考部分内容，不适用于中药制剂。
药物类别上主要针对细胞毒类抗肿瘤药物临床研究，由于非细胞毒类药物（如信号传导抑制剂，生物反应调节剂，激素类等）是目前新药开发的主要方向，本指导原则也将尽可能对此类别药物临床研究的不同之处进行阐述。
本指导原则中的观点仅代表SFDA当前对抗肿瘤药物临床研究的一般性认识，不能涵盖在新药研发中遇到的所有情况，申请人在研究中应始终坚持具体问题具体分析的原则。
尤其应注意的是，抗肿瘤药物研究理论和技术的快速发展，很可能对将来抗肿瘤药物开发模式产生影响，因此申请人可以积极探索更为科学合理的研究方法，并及时寻求SFDA 药品注册部门的建议。
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Design oligos which can specifically bind to the transcription factor JUN/ATF and block downstrean multiple oncogenes expression
c、RNA干扰
RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是由双链 RNA(double-stranded RNA，dsRNA)引发的转录后基 因静默机制. RNAi是真核生物中普遍存在的抵抗病毒入 侵、抑制转座子活动、调控基因表达的监控机制。由 于RNA干扰是针对转录后阶段的基因沉默，相对于传 统基因治疗对基因水平上的敲除，整个流程设计更简 便，且作用迅速，效果明显，为基因治疗开辟了新的 途径。其总体思路是通过加强关键基因的RNAi机制， 控制疾病中出现异常的蛋白合成进程或外源致病核酸 的复制及表达。
EXTRACELLULAR
PGP170 ATP
INTRACELLULAR
Drug
ATP
Drug
Plasma Membrane
环胞菌素A(CsA)是一种从真菌属中提取的天然药物， 具有选择性的免疫抑制功能，广泛用于器官移植后的 抗排斥反应及治疗免疫性疾病。它能竞争性的和Pgp结 合，阻断Pgp泵出药物的功能，提高胞内药物浓度，从 而对抗MDR，通过进一步研究表明，CsA的作用机制并 非单一，除了通过结合Pgp而调节药物浓度外，还可通 过与细胞内，靶结构之间的相互作用而增加化学敏感 因子自身的细胞毒性。CsA在MDR中可调节药物的运输， 使抗癌药在细胞内积累增加，外排减少，从而增加抗 肿瘤药物的敏感性。
7、单克隆抗体药物
单克隆抗体(单抗)药物就是通过淋巴细胞杂交瘤技术或基因工程 技术制备的抗体。起初用于诊断剂或检测剂，后来用于治疗肿瘤、 病毒性感染、心血管病以及其它疾病。治疗肿瘤的优越性： （1）单抗药物对肿瘤细胞的选择性杀伤作用 （2）单抗药物具有更高的疗效 （3）单抗药物对肿瘤相关靶点的特异性作用 其研究重点主要集中在将抗体与化学药物、酶、放射性核素、毒 素和生物诱导剂等耦联后直接杀伤肿瘤或者利用抗体促进肿瘤细 胞凋亡和抑制肿瘤血管生成等方面。目前，国际上与肿瘤治疗相 关的抗体研究主要集中在将抗体与耦联物作用后直接杀伤肿瘤细 胞，利用抗体促进肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管生成等方面。
代表药物：曲妥珠单抗（trastuzumab， Herceptin ） Trastuzumab为靶向结合HER2的人IgG1类单抗，HER2为酪 氨酸激酶受体，在约20%～25%的进展期乳腺癌患者过表达。 HER2分子具有以下的特点，因此成为乳腺癌治疗的靶分子： ①HER2的表达水平与乳腺癌的发病机理及预后相关； ②肿瘤的HER2表达水平及基因拷贝数远高于正常组织，有效的 减轻了HER2靶向治疗药物的毒性； ③HER2表达阳性的肿瘤细胞比例很高，而且在肿瘤细胞表面高 表达，因此在患者体内可以靶向大多数的肿瘤细胞； ④HER2在原发肿瘤及转移灶均有表达，因此HER2靶向治疗对原 发及转移病灶均有效。
c、铂类抗肿瘤药物
原理： 铂络合物产生抗肿瘤活性的原因，是由于其与 肿瘤细胞DNA结合，从而干扰DNA的复制，抑 制肿瘤细胞的分裂。 代表药物：顺铂和奥沙利铂
2、以细胞信号转导分子 为靶点的抗肿瘤药物
a、蛋白酪氨激酶（PTK）抑制剂 b、表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂 C、法尼基转移酶抑制剂
a、蛋白酪氨激酶（PTK）抑制剂
1、细胞毒类抗肿瘤药
a、拓扑异构酶抑制剂 b、胸苷酸合成酶抑制剂 c、铂类抗肿瘤药物
a、拓扑异构酶抑制剂
原理： 真核细胞DNA拓扑异构酶Ⅰ（Topo Ⅰ)是生物体内及其 重要的细胞核内酶，参与DNA复制、转录和修复等所 有关键的核内过程。DNA拓扑异构酶Ⅰ已成为重要的 抗肿瘤药物研究新靶点。拓扑异构酶Ⅰ抑制剂已成为 高选择性抗肿瘤药物研究的一个主攻方向。
药物：Vitravene
mRNA
5’-ACGCT-3’ 3’-TGCGA-5’
RNAse H
Antisense DNA
b、Decoy核酸
Decoy核酸是与靶转录因子具有高亲和性的双链寡聚 核酸 ,通过竞争性抑制转录因子与调控区域的结合 ,调 控转录来改变下游基因的异常表达 ,从而抑制肿瘤恶性 增殖 . 体外筛选结合转录因子AP2的decoy核酸药物 ,结果 K102对多种肿瘤细胞生长有显著的抑制作用 ,在异植 人肿瘤细胞NCI－H460的裸鼠模型中 ,静脉注射高中 低三剂量组的decoy核酸K102 ,抑瘤率分别达 71.8%、64.4 %及 57.3%.通过凝胶阻抑试验 ,验 证了K102与转录因子产生特异性结合 .实验结果为 decoy核酸转录调控药物的研究提供了依据。
抗肿瘤药物研究及新药筛选
赵万洲 博士
南京凯基生物科技发展有限公司 2009.10.30
提纲 •化疗药物的发展 •肿瘤的药物治疗 •抗肿瘤新药的发现和治疗靶点 •抗肿瘤药物筛选及评价
化疗药物的发展
近代肿瘤化疗学始于20世纪40年代。 50年代通过动物筛选化疗药物发现 了5FU、MTX、CTX等，化疗学有了 发展。 60年代认识到肿瘤细胞动力学及化 疗药药代动力学的重要性。大部分 目前所用的抗癌药已发现，有急淋、 HD、睾丸癌等可化疗治愈。
b、表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂 原理：通过扩散进入肿瘤细胞，与 EGFR 的胞内段激 酶结合区结合，从而抑制 EGFR 受体的磷酸化，阻断尼的作用通过上调 P27KIP1和 P21CIP/WAF1 的表达，导致细胞 G1 期阻滞或诱导细 胞凋亡。
"Right now we lump patients together and treat them with the same drugs and then deal with their variable response to treatment. We're essentially treating different diseases with the same medicine.” Richard Klausner, 1997
70年代形成肿瘤内科学，更多肿瘤 有了比较成熟的化疗方案。 80年代研究以生物反应修饰剂等药 物来提高化疗疗效，探索抗药性产 生的原因，5%肿瘤患者可治愈。 90年代新抗癌药进入临床，多药耐 药基因发现，生物治疗，基因治疗 辅助治疗改善等，疗效进一步提高。
肿瘤的药物治疗
1、细胞毒类抗肿瘤药 2、以细胞信号转导分子为靶点的抗肿瘤药物 3、肿瘤新生血管生成抑制药物 4、肿瘤耐药逆转剂 5、分化诱导剂 6、基因调节药物 7、单克隆抗体药物
c、法尼基转移酶抑制剂
原理： 法尼基转移酶是近年来发现的与Ras蛋白异戊 二烯化修饰密切相关的一种必需酶。抑制法尼 基转移酶活性，阻止Ras蛋白的活化，可以有 效地抑制肿瘤细胞的增殖
代表药物：替匹法尼
3、肿瘤新生血管生成抑制药物
原理： 原发肿瘤的生长和转移是依赖于新生血管生成的，开发和研究能够破坏 或抑制血管生成、有效地抑制肿瘤生长和转移的药物（称为TA 抑制 剂），是新型抗肿瘤药物研究的活跃领域之一。 代表药物：angiostatin和endostatin Avastin Endostatin可直接与血管内皮细胞受体结合抑制内皮细胞的增生； 可与肝素样的硫酸蛋白结合，抑制血管生成； 可抑制VEGF等血管生长因子，从而抑制内皮细胞的增殖 与肿瘤 的生长； 可抑制抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-x1,促使血管内皮细胞凋亡加速。
代表药物：喜树碱类化合物
对S期的毒性作用，这一作用需共价TopoI－DNA复合 物的形成和DNA复制。TopoI抑制剂诱导的细胞凋亡而 非DNA断裂是引起细胞最终死亡的原因。
b、胸苷酸合成酶抑制剂
原理： 胸苷酸合成酶（TS）把单磷酸脱氧尿嘧啶（DUMP）转换成单磷 酸胸腺嘧啶（TMP），在DNA复制和细胞生长过程中起着关键作 用。是已知抗肿瘤药物的重要有效靶点之一。胸苷酸合成酶抑制 剂导致了DNA断裂从而导致细胞死亡。 代表药物：培美曲塞 它是一种结构上含有核心为吡咯嘧啶基团的抗叶酸制剂，通 过破坏细胞内叶酸依赖性的正常代谢过程，抑制细胞复制，从而 抑制肿瘤的生长。体外研究显示，培美曲塞能够抑制胸苷酸合成 酶、二氢叶酸还原酶和甘氨酰核苷酸甲酰转移酶活性，这些酶都 是合成叶酸所必需的酶。一旦培美曲塞进入细胞内，它就在叶酰 多谷氨合成酶的作用下转化为多谷氨酸的形式。多谷氨酸存留于 细胞内成为胸苷酸合成酶和甘氨酰胺核苷酸甲酰转移酶的抑制剂。 多谷酸化在肿瘤细胞内呈现时间-浓度性过程，而在正常组织内浓 度很底。多谷氨酸化代谢物在肿瘤细胞内的半衰期延长，从而也 就延长了药物在肿瘤细胞内的作用时间。
4、肿瘤耐药逆转剂
原理： 根据肿瘤耐药的特点可分为原药耐药(PDR)和多药耐药(MDR)两大类。前者只对 诱导药物产生耐药性而对其它药物不产生交叉耐药性，如抗代谢药甲氨蝶呤 (MTX)，5-氟尿嘧啶(5-Fu)等；后者则是指肿瘤细胞一旦对某种化疗药物产生耐 药性，同时对其它结构上无关、作用机制各异的药物也产生交叉耐药性，这是一 种独特的广谱耐药现象。许多天然来源的抗肿瘤药物如秋水仙碱、紫杉醇等及蒽 环类抗癌抗生素如阿霉素、柔红霉素都极易发生MDR。 肿瘤耐药产生的可能原因是药物代谢障碍、DNA修复机制障碍、DNA多聚酶活性 改变等。另外，耐药是凋亡抑制的表现。一些与凋亡抑制相关的癌基因(如bcl2,bcr/abl,NF/KB等)的表达产物可阻断或阻碍多种因素(如化疗药物、辐射、激 素等)诱导的肿瘤细胞凋亡，产生耐药性。 研究表明MDR的产生是由于细胞内药 物积聚发生障碍，此后研究证实细胞内药物积聚降低的同时，有一分子量约为 170 000细胞膜蛋白过度表达，称之为P-糖蛋白(Pgp) 代表药物：钙拮抗药（维拉帕米及其衍生物）、钙调蛋白拮抗药（包括氯丙嗪等 吩噻嗪类衍生物）、环孢素类（环孢素及其衍生物PSC833，SDZ280-466等） 及抗雌激素类化合物（他莫昔芬）等。