动物蛋白质的提取和含量测定

温馨提示：
若短时间不用，可置于4℃保存。 较长时间不用，可置于-20 ℃或更低 温度保存。 防止提取出的蛋白质变性失活
提取： • 二、化学方法： 1.水溶液wk.baidu.com取法 提取动物组织蛋白质一般采用各种水溶液。 稀盐和缓冲体系的水溶液对蛋白质稳定性 好、溶解度大，是最常用的溶剂。稀盐溶 液（一般用氯化钠溶液）可促进动物蛋白 质溶解，同时因盐离子与蛋白质部分结合， 具有保护蛋白质不易变性的特点。
动物蛋白的含量测定
测定：
1.荧光光度法： 荧光是发射光,是分子、原子吸收光辐射被 激发,接着再发射出与吸收波长相同或波长 更长的光,是光致发光现象。
测定： 利用荧光技术测定蛋白质的方法有两类,一是测 定蛋白质的自身荧光,利用外加物质使蛋白质自 身荧光猝灭;二是利用荧光指示剂即荧光探针进 行测定。 常使蛋白质与荧光探针作用,多是一些荧光染料, 有时也用其他试剂,与蛋白质结合后,光谱呈现出 能量转移特征,引起荧光增强或减弱,即敏化荧光 和荧光猝灭现象,由增强或减弱的程度来测定蛋 白质的含量。
测定：
温馨提示
此法操作简便迅速，消耗样品量少， 但不同蛋白质之间差异大，且标准曲 线线性差。高浓度的尿素、甘油、蔗 糖、丙酮、硫酸铵和去污剂时测定有 干扰。缓冲液浓度过高时，改变测定 液pH值会影响显色。
其它方法：
双缩脲法、 紫外吸收法、 等离子共振法、 微量凯氏定氮法、 Folin试剂法（Lowry法）
组员：LS、GLL、ZXJ、XA、 LBN
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蛋 白 质
小知识
1.蛋白质是由氨基酸以“脱水缩合”的方式 组成的多肽链经过盘曲折叠形成的具有一 定空间结构的物质。 2.蛋白质有一级、二级、三级、四级结构。 3.功能： 结构蛋白：作为细胞的结构，如膜蛋白， 染色体蛋白等。
蛋白质是生命的物质基础，没有蛋 白质就没有生命。
功能蛋白： 1.物质运输：如载体蛋白，血红蛋白 2.催化功能：如绝大多数酶 3.信息交流：如受体（糖蛋白），蛋白质 类激素 4.免疫：如抗体，淋巴因子等免疫分子
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1.蛋白质的提取、分离和鉴定工作是生物工程 中一项十分艰巨的任务。要想分离提纯某一特 定的蛋白，首先必须把蛋白质从组织活细胞中 以溶解的状态释放出来。 2.动物组织或动物细胞可用电动捣碎机或匀浆 器破碎，细菌和植物细胞可用超声波、高压挤 或砂研磨等方法进行破碎。 3.大多数蛋白质均可溶于水，稀酸或稀碱溶液 中，可采取不同溶剂提取，分离及提纯蛋白质。
提取：
2.有机溶酶法 粉碎后的新鲜材料在0℃以下加入5～ 10倍量的丙酮，迅速搅拌均匀，可破 碎细胞膜，破坏蛋白质与脂质的结合。 蛋白质一般不变性，被脱脂和脱水成 为干燥粉末。用少量乙醚洗，经滤纸 干燥，如脱氢酶等可保存数月不失去 活性。
提取： 3.有机溶剂提取法 一些蛋白质和酶与脂质结合比较牢固或 分子中非极性侧链较多，不溶于水、稀盐、 稀酸或稀碱溶液，可用乙醇、丙酮和丁醇 等有机溶剂提取。它们具有一定的亲水性 和较强的亲脂性，是理想的提取脂蛋白质 的溶剂，但必须低温操作。
动物蛋白的提取
提取：
一、物理方法：
1.取新鲜组织称重，用眼科手术刀将组织 剪成小块放入试管中。 2.加入动物蛋白裂解缓冲液，并转移到匀 浆器中 3.在冰浴条件下用匀浆器低速匀浆至组织 完全裂解 4.裂解液于预冷的离心机中以12000rmp离 心13分钟，上清液立即转移入新的离心 管中保存。
提取：
测定： 温馨提示： 荧光法具有灵敏度高、选择性好的特点,且 简单快速、取样量少,在生理科学上广泛应 用。20世纪80年代以来荧光光度法已广泛 进入生物、化学、医药、环保等方面。
测定： 2.考马斯亮蓝G-250染色
法：
实验原理： 利用蛋白质与颜料结合 的原理，定量测定微量 蛋白质浓度。
测定：
• 考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中为棕红色，当它 与蛋白质通过范德华键结合后，变为蓝色，且在 蛋白质一定浓度范围内符合比尔定律，可在 595nm处比色测定。2—5分钟即呈最大光吸收， 至少稳定1小时。