HPLC法研究川芎_白芍单煎及共煎液中有效成分含量的变化

表 1 加样回收率试验（n＝6）
加 入 量 ／ mg 0.1638 0.1638 0.1638 0.1638 0.1638 0.1638 1.4329 1.4329 1.4329 1.4329 1.4329 1.4329
测 得 量 ／ mg 0.3252 0.3251 0.3237 0.3253 0.3244 0.3245 2.8646 2.8514 2.8263 2.8542 2.8621 2.8474
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福建中医药大学学报
第 20 卷
川芍约 2.5 g，处理方法同上。 白芍单煎液：称取白 芍约 2.5 g，处理方法同上。 3结果 3.1 系 统 性 适 用 性 试 验 精 密 吸 取 混 合 对 照 品 溶 液 （体 积 比 为 1∶1）10 μL，在 上 述 选 定 的 色 谱 条
件下进行测定， 结果阿魏酸的保留时 间约在 30.9 min， 芍 药 苷 的 保 留 时 间 约 在 25.1 min， 两 成 分 峰 计算色谱柱理论塔板均大于 2000，峰形对称，两峰 的分离度都达到基线分离（分离度均大于 1.5），见 图 1。
液，10 和 含量小于其在合煎液中的含量， 芍药 苷在白芍单
芍药苷含量的 RSD 分别 为 1.36％和 1.09％， 共煎 煎液中的含量亦小于其在合煎液中的含量， 表 明
液中阿魏酸和芍药苷含量的 RSD 分别为 1.54％和 2 味中药在 合煎之 后 有 利 于 其 有 效 成 分 阿 魏 酸 和
Aiglent 1200 高 效 液 相 色 谱 仪 ，G1329A 自 动 进样器，G1316A 柱温箱，G1315D 型二极管阵 列检 测器（DAD），G1311A 四元梯度泵 ，G1322A 在线脱 气机，Aiglent-Chemstation 化学工作站，美国Aiglent 公司。 川芎药材（产地：四川）、白芍药材（产地：安
福 建 中 医 药 大 学 学 报 2010 年 12 月 第 20 卷 第 6 期
Journal of Fujian University of TCM December 2010，20（6）
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·方药研究·
HPLC 法研究川芎-白芍单煎及共煎液中有效成分含量的变化
郑春松 1，叶蕻芝 1，刘献祥 1，罗美容 2，温雪芬 2，周常恩 1
材 ，按 照 “2.3”项 下 方 法 制 备 ，并 按 上 述 色 谱 条 件 醇-水、 乙腈-水、 乙腈-水-冰醋酸等洗脱系统比
进行测定，结果见表 2。 阿魏酸在川芎单煎液中的 较，且甲醇在低波长区吸收较为明显，采用最大吸
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福建中医药大学学报
第 20 卷
指标成分 阿魏酸
芍药苷
样 本 含 量 ／ mg 0.1616 0.1616 0.1616 0.1616 0.1616 0.1616 1.4371 1.4371 1.4371 1.4371 1.4371 1.4371
信 号 强 度 ／ mAU
图 2 川芎单煎液的色谱图（2-阿魏酸）
时间 ／ min
3.3 标 准 曲 线 的 制 备 精 密 吸 取 阿 魏 酸 对 照 品 储 备 液 （1.17 mg ／ mL） 各 1.8、1.2、0.8、0.4、0.2、0.1
归 方 程 为 ：Y＝51．989X－11.444（r＝0．9998）；芍 药 苷 在 16.1～966 μg ／ mL 范 围 内 线 性 关 系 良 好 ， 回
川芎-白芍源于《本草求真》中，为常用活血化 瘀“药 对 ” 。 ［3-4］ 据 报 道 ，阿 魏 酸 是 川 芎 药 材 水 溶 性 提取物中的主要单体活性成分， 具有抗血小板聚 集、抗炎等功能；芍药苷是白芍药材水溶性提取物 中的主要单体活性成分，具有扩张血管、抗血栓形 成、抗血小板聚集和逆转低血压等作用，其都在心 血管疾病方面有良好的疗效 。 ［5-7］ 本实验采用 RPHPLC 法研究和探讨川芎、白芍两味药物单煎与共 煎液中活性成分阿魏酸和芍药苷含量的变化，为 传统中药组方原理、 中药复方方剂分析和临床药 物治疗提供实验依据。 1 仪器与试药
关键词：川芎；白芍；阿魏酸；芍药苷；单煎；共煎；高效液相色谱 中图分类号 ：R284.1 文献标志码 ：A 文章编号 ：1004-5627（2010）06-0039－05
“药对”既是复方的一种特殊形式，又是复方的 组方基础。 通过“药对”化学成分的研究，有利于复 方的化学成分、特别是活性成分的研究，有利于复 方 的 剖 析 与 理 解 ，使 之 更 好 的 应 用 于 临 床 。 ［1-2］ 因 此，“药对”的研究将为中药复方的配伍研究提供最 基本的依据，并揭示配伍理论的规律。
收稿日期 ：2010-05-23 基 金 项 目 ：福 建 省 科 技 厅 重 点 项 目 （2010Y0029），福 建 省 教 育 厅 科 技 项 目 A 类 （JA09129），福 建 省 卫 生 厅 青 年 科 研 课 题 （2009-1-35），福 建
省 中 医 药 科 研 重 点 课 题 （WZZG0901），福 建 省 自 然 科 学 基 金 （2010J01196） 作 者 简 介 ：郑 春 松 （1982— ），男 ，硕 士 ，主 要 从 事 骨 性 关 节 炎 中 药 研 究 。 通 信 作 者 ：刘 献 祥 （1963— ），教 授 ，博 士 生 导 师 。 E-mail：liuxianxiang@
第6期
郑春松等：HPLC 法研究川芎-白芍单煎及共煎液中有效成分含量的变化
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信 号 强 度 ／ mAU
信 号 强 度 ／ mAU
图 3 白芍单煎液的色谱图（1-芍药苷）
时间 ／ min
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图 4 川芎和白芍共煎液的色谱图（1-芍药苷，2-阿魏酸）
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1.37％。
芍药苷的溶出。
3.6 稳 定 性 试 验 取 同 一 供 试 品 溶 液 ， 分 别 于 4 讨 论
0，2，4，8，12，24 h 进 样 测 定 ， 单 煎 液 中 阿 魏 酸 的 4.1 检 测 波 长 的 选 择 经 过 二 极 管 阵 列 检 测 分
RSD 为 0.65％，芍药苷的 RSD 为 0.56％，共煎液中 析，阿魏酸在 324 nm 处有最大吸收，芍药苷在233
徽）均购于福州惠好药店，由福建中西医结合研究 院中药生药室叶蕻芝副研究员鉴定。 芍药苷对照 品 （批 号 ：110736-200933）、阿 魏 酸 对 照 品 （ 批 号 ： 110773-200611）均为 中国药品生 物制品检定 所产 品。 乙腈、甲醇为色谱纯，液相用水为超纯水，其余 试剂均为分析纯。 2方法 2.1 色 谱 条 件 色 谱 柱 ：Phenomenex Gemini C18 （250*4.6 mm，5 μm） 色谱柱； 流动相：A-乙腈，B0.2% 的 磷 酸 梯 度 洗 脱 ：0～5 min 5%-10% ，5～25 min 10%-20%，25～45 min 20%，45～60 min 20%100%；流 速 ：0.8 mL ／ min；检 测 波 长 ：阿 魏 酸 为 324 nm，芍药苷为 233 nm；柱温：35℃；进样量：10 μL。 2.2 对 照 品 溶 液 的 制 备 精 密 称 取 阿 魏 酸 对 照 品 29.25 mg，30%的甲醇定容到 25 mL， 即得 1.17 mg ／ mL 的溶液 ；芍药苷对照 品 40.25 mg，30%的甲 醇 定 容 到 25 mL， 即 得 1.61 mg ／ mL 的 溶 液 ， 作 为 各自的对照品储备液。 2.3 供试品的制备 川芎-白芍合煎液： 称取川 芎 、白 芍 各 约 2.5 g，混 匀 ，用 10 倍 量 的 纯 水 浸 泡 40 min 后，回流 1 h；倾出提取液后，药渣用 8 倍量 的纯水回流提取 1 h，合并 2 次提取液，浓缩后的 样品用 30%甲醇定容为 25 mL。 川芍单煎液：称取
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时间 ／ min
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图 1 混合对照品的色谱图（1-芍药苷，2-阿魏酸）
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3.2 专 属 性 试 验 分 别 精 密 吸 取 供 试 品 溶 液 各 10 μL，注入液相色谱仪测定，单煎、合煎液中的其
他成分不干扰阿魏酸和芍药苷的测定。 结果见图 2～图 4。
归 方 程 为 ：Y＝15.201X－29.802 （r＝0．9999 ） 。 3.4 精 密 度 试 验 取 供 试 品 溶 液 （ 川 芎 白 芍 合 煎，批号为 20100411）连续进样 6 次，每次 10 μL， 测 定 阿 魏 酸 和 芍 药 苷 峰 面 积 积 分 值 ，RSD 分 别 为 0.29%和 0.55%，表明仪器具有良好的精密度。 3.5 重复性试验 取同一批川芎、白芍、川芎-白 芍 样 品 各 6 份 ， 按 “2.3” 项 下 方 法 制 备 供 试 品 溶
mL 置 1 至 6 号 10 mL 棕色量瓶中，再从芍药苷对 照 品 储 备 液 中 （1.61 mg ／ mL） 精 密 吸 取 6.0、4.0、 2.5、1.0、0.5、0.1 mL 分别置上述量瓶中 ，用 30％甲 醇定容。 依次取上述溶液各 10 μL 进样检测分析， 分别以阿魏酸和芍药苷的色谱峰面积 （Y）为纵坐 标 ，其 对 应 浓 度 （X） 为 横 坐 标 进 行 线 性 回 归 ， 阿 魏 酸在 11.7～210.6 μg ／ mL 范围内线性关系良好，回
芎白芍合煎样品 6 份， 分别精密加入含阿魏酸和 测分析煎煮液中的阿魏酸和芍药苷的含量变化。
芍药苷的对照品溶液适量， 按照同样方法测定并 4.2 流 动 相 和 梯 度 的 选 择 流 动 相 中 加 入 少 量
计算回收率，结果见表 1。
磷酸后，阿魏酸和芍药苷峰形都比较理想。 在煎液
3.8 样品测定 分别取不同批次的川芎、白芍药 中芍药苷峰附近的杂峰较多干扰比较大， 经过甲