染色体分析相关的实验
染色体核型分析实验报告

染色体核型分析实验报告染色体核型分析实验报告染色体核型分析是一项重要的实验技术,它能够帮助我们了解个体的遗传特征以及染色体异常与疾病之间的关系。
本次实验旨在通过染色体核型分析,观察和分析不同个体的染色体组成,并探讨染色体异常与遗传疾病之间的关联。
实验过程中,我们选择了一组健康的个体作为研究对象,采集了其外周血样本。
通过细胞培养和染色体制备技术,我们成功地制备出了染色体悬液。
接下来,我们使用高倍显微镜观察了染色体的形态和数量。
在观察过程中,我们发现了不同个体之间染色体的差异。
正常情况下,人类细胞核中的染色体应该为23对,其中包括22对常染色体和一对性染色体。
常染色体是指除性染色体以外的其他染色体,它们负责携带遗传信息,决定了个体的大部分遗传特征。
性染色体则决定了个体的性别。
通过观察,我们发现了某些个体的染色体数量存在异常。
这种异常可能是由于染色体缺失、重复或结构异常等原因引起的。
染色体缺失是指染色体上的一部分或整个染色体丢失,而染色体重复则是指染色体上的一部分或整个染色体重复出现。
染色体结构异常则是指染色体上的片段发生断裂、倒位、交换等变化。
染色体异常与许多遗传疾病之间存在着密切的关系。
例如,唐氏综合征是由于21号染色体上的三个染色体引起的,患者通常具有智力发育迟缓、面部特征异常等症状。
另外,爱德华氏综合征是由于18号染色体异常引起的,患者通常出现心脏和肾脏畸形等问题。
通过染色体核型分析,我们可以准确地检测出这些染色体异常,为遗传疾病的诊断和治疗提供有力的依据。
除了遗传疾病,染色体核型分析还可以应用于其他领域。
例如,它可以用于法医学领域的亲子鉴定,通过比对父母与子女的染色体核型,确定亲子关系。
此外,染色体核型分析还可以用于评估环境因素对染色体的影响,例如辐射和化学物质对染色体的损伤程度。
总结起来,染色体核型分析是一项重要的实验技术,它可以帮助我们了解个体的遗传特征以及染色体异常与疾病之间的关系。
通过观察染色体的形态和数量,我们可以准确地检测染色体缺失、重复和结构异常等问题,并为遗传疾病的诊断和治疗提供依据。
实验五 细胞染色体数目分析

中,置55℃~60℃水浴1.5h~2h后,加甲醇50mL, 静置24h以上,过滤即成姬姆萨染色液原液,装于 棕色瓶内保存备用。 10% Giemsa染液:取原液1份加入9份 0.01mol/L pH7.2 PBS中混匀。
6、细胞:Marc-145细胞
7、载玻片:4℃预冷
三、操作方法
秋水仙素处理,使细胞停止分裂 取对数生长期的Marc-145细胞一瓶,加入秋 水仙素到培养液内使终浓度为0.4μg/ml。 37℃温箱中继续培养2.5-3h。 收集处理的细胞 倾出秋水仙素处理液,用0.25%胰酶溶液消 化细胞,细胞消化好后加入DMEM培养液将细 胞吹下。 1600r/min离心5min收集细胞。
实验五
细胞染色体分析
(秋水仙素裂解法)
一、原理
细胞处于分裂中期时染色体的长短和大小恰
到好处,是研究染色体最好时期。
秋水仙素能破坏细胞纺锤体,并阻止其形成, 使分裂的细胞停留在分裂中期。 秋水仙素使染色体收缩,形成清晰的轮廓。 低渗液处理可使细胞肿胀,染色体分散 空气干燥使细胞和染色体展平。
二、实验材料
1、有丝分裂抑制剂 100×浓缩的秋水仙素(20μg/ml):将0.1mg
秋水仙素溶于5ml重蒸水中,分装后冰冻保存。
2、细胞消化液:0.25%胰蛋白酶溶液
3、低渗溶液:0.075mol/L KCl
4、固定液:甲醇∶冰乙酸(3∶1混合)
5、染液(Giemsa 吉姆萨染液)
姬姆萨染色液原液:姬姆萨染料0.6g加于50mL甘油
再 次 加 入 固 定 液 800μl , 轻 轻 混 匀 , 静 置 2030min或4℃过夜,1600r/min离心5min,弃l固定液,混匀。 吸取50μl细胞悬液于4℃预冷的干净载玻片上, 轻吹液滴,使细胞悬液铺展于玻片上,室温下自 然干燥。(在显微镜下观察,如果细胞均匀地铺 开,细胞不重叠,则用同样细胞浓度制备细胞样
染色体核型分析实验报告

染色体核型分析实验报告染色体核型分析是一项重要的实验,它可以帮助我们了解生物体的染色体结构和数量。
本次实验旨在通过显微镜观察细胞分裂过程中的染色体核型,从而了解染色体的形态和数量特征。
实验采用了豌豆的根尖细胞作为观察对象,通过对细胞进行处理和染色,最终观察到了豌豆细胞的染色体核型。
在实验过程中,首先需要准备好实验所需的材料和试剂,包括豌豆种子、生长培养基、盐酸、乙醇、醋酸、苯酚和苯酚甲醛溶液等。
接着,将豌豆种子在适宜的条件下培养,待其生长到一定阶段后,取其根尖进行处理。
处理过程包括盐酸和乙醇的固定、醋酸的软化以及苯酚和苯酚甲醛的染色。
处理完成后,将样品制作成玻片,用显微镜进行观察和记录。
观察实验结果时,我们发现豌豆细胞的染色体呈现出一定的形态特征。
在有丝分裂过程中,我们观察到了染色体的形态变化,包括染色体的缠绕、分离和移动等过程。
通过对观察到的染色体进行计数和分析,我们得出了豌豆细胞的染色体数目和核型特征。
通过本次实验,我们对染色体核型分析有了更深入的了解。
染色体核型分析是细胞生物学研究中的重要内容,它可以帮助我们研究生物体的遗传特征、变异规律和进化过程。
同时,染色体核型分析也在遗传学和生物育种领域有着重要的应用价值,可以为我们的科学研究和生产实践提供重要的理论支持和技术指导。
总的来说,染色体核型分析实验是一项非常有意义的实验,它可以帮助我们更好地了解生物体的染色体结构和数量特征。
通过本次实验,我们不仅学习到了染色体核型分析的基本原理和方法,还培养了实验操作能力和科学思维能力。
希望通过今后的学习和实践,我们能够更深入地探索染色体核型分析的相关内容,为生物学研究和生产实践做出更大的贡献。
实验四人类染色体的识别与核型分析 (1)

实验四人类染色体的识别与核型分析一、实验目的1.学习染色体核型的分析方法;2.了解人类染色体的特征。
二、实验原理1.染色体组型(核型)是指生物体细胞所有可测定的染色体表型特征的总称。
包括:染色体的总数,染色体组的数目,组内染色体基数,每条染色体的形态、长度、着丝粒的位置,随体或次缢痕等。
染色体组型是物种特有的染色体信息之一,具有很高的稳定性和再现性。
组型分析能进行染色体分组外,还能对染色体的各种特征做出定量和定性的描述,是研究染色体的基本手段之一。
利用这一方法可以鉴别染色体结构变异、染色体数目变异,同时也是研究物种的起源、遗传与进化,细胞遗传学,现代分类学的重要手段。
2.人类的单倍体染色体组(n=23)上约有30000-40000个结构基因。
平均每条染色体上有上千个基因。
各染色体上的基因都有严格的排列顺序,各基因间的毗邻关系也是较为恒定的。
人类的24种染色体形成了24个基因连锁群,所以,染色体上发生任何数目异常、甚至是微小的结构变异,都必将导致许多获某些基因的增加或减少,从而产生临床效应。
染色体异常常表现为具有多种畸形的综合征,称为染色体综合征,其症状表现为多发畸形、智力低下和生长发育异常,此外还可看到一些特征性皮肤纹理改变。
染色体畸变还将导致胎儿死产或流产。
染色体病已成为临床上较常见的危害较为严重的病种之一,染色体病的检查、诊断已经成为临床实验室检查的重要内容。
1960年,在美国Denver市召开了第一届国际遗传学会议,讨论并确定正常人核型(karyotype)的基本特点即Denver体制,并成为识别人类各种染色体病的基础。
按照Denver体制,将待测细胞的染色体进行分析和确定是否正常,以及异常特点即为核型分析。
人类染色体分组及形态特征见表1。
表1 人类染色体分组及形态特征(非显带标本)组别染色体序号形态大小着丝粒位置次缢痕随体I号染色体常见A 1-3 最大M(1、3)SM(2)B 4-5 次大SM中等SM 9号染色体常见C 6-12,X(介于7-8之间)D 13-15 中等ST 有E 16-18 小M(16)16号染色体常见SMF 19-20 次小MG 21-22,Y 最小ST 有(22、21)A组:1-3号,可以区分。
实验十四植物染色体组型分析

染色体组型分析的方法
01
02
03
显微观察
通过显微镜观察染色体的 形态和排列顺序,是进行 染色体组型分析的基础。
染色体测量
使用显微测微尺等工具对 染色体进行精确测量,获 取染色体的长度、宽度等 数据。
核型分析
将染色体按照大小、形态 进行排列,形成核型图谱, 可以直观地了解染色体的 特点和变异情况。
03 实验步骤
染色体组型分析
通过对染色体进行显微观察和测 量,将染色体的数目、形态特征 和排列顺序进行描述和分类,从 而确定生物的染色体组型。
染色体数目与形态特征的描述
染色体数目
每种生物都有一定数量的染色体,这 些染色体在细胞分裂过程中起到关键 作用。
形态特征
染色体的形态特征包括长度、着丝粒 位置、核型等,这些特征可以反映染 色体的功能和进化历程。
实验结果提示,该植物可能具有较好的遗传稳定性和适应性,对于农业 生产具有潜在的应用价值。
实验结果还表明,染色体组型分析技术在实际应用中需要综合考虑多种 因素,如染色体大小、着丝粒位置、核型对称性等,以确保结果的准确 性和可靠性。
对实验方法的改进与展望
在未来的研究中,可以采用更先进的染色体组型分析技术,如全染色体微列阵技术和高通量 测序技术等,以提高分析的准确性和分辨率。
可以进一步优化实验方法,如改进染色体制片技术、优化显微观察条件等,以提高实验效率 和结果的可靠性。
在应用方面,可以进一步拓展植物染色体组型分析在遗传资源评价、物种分类和进化生物学 等领域的应用,为相关领域的研究提供有力支持。
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染色体数目和结构的变异是物种形成和 进化的基础,可以导致物种间的生殖隔
实验九 染色体核型分析

实验九染色体核型分析【实验目的】1. 观察测量照片上每条染色体,进行配对排列和剪贴成核型分析图;2. 掌握染色体组型分析的各种数据指标,学习和掌握核型分析的方法;3. 正确理解生物的遗传多样性——染色体多样性。
【实验原理】核型(Karyotype)亦称染色体组型,是指体细胞有丝分裂中期细胞核(或染色体组)的表型,是染色体数目、大小、形态特征的总和。
每一个体细胞含有两组同样的染色体,用2n表示。
其中与性别直接有关的染色体,即性染色体,可以不成对。
每一个配子带有一组染色体,叫做单倍体,用n表示。
两性配子结合后,具有两组染色体,成为二倍体的体细胞。
在对染色体进行测量计算的基础上,进行分组、排队、配对,并进行形态分析的过程叫核型分析(如图1所示)。
将一个染色体组的全部染色体逐条按其长短、形态、类型等特征排列起来的图称为核型图,它代表一个物种的核型模式。
核型分析通常包括两方面的内容:⑴确定一物种的染色体数目;⑵辨析每条染色体的特征。
→图1 人类中期细胞染色体核型分析(2n=46)染色体在复制以后,纵向并列的两个染色单体,通过着丝粒联结在一起。
着丝粒在染色体上的位置是固定的。
由于着丝粒位置的不同,染色体可分成相等或不相等的两臂,造成中部着丝粒(m),亚中部着丝粒(sm)、亚端部着丝粒(st)和端部着丝粒(t)等形态不同的染色体(如图2所示)。
此外,有的染色体还含有随体或次级缢痕,所有这些染色体的特异性构成一个物种的核型。
细胞分裂中期是染色体的形态结构最典型的时期,通过显微镜摄影,将选取伸展良好,形态清晰,有代表性的细胞分裂相进行高倍拍摄放大,得到用于核型分析的照片。
染色单体长臂着丝粒短臂次缢痕m sm st t 图2 中期染色体形态及结构1. 分析标准:⑴臂比值r(长臂长/短臂长);⑵着丝粒指数i[(短臂长/染色体长)×100%](表1);⑶相对长度:某条染色体长度占一套单倍体染色体长度总和的百分比:相对长度(%)=(某染色体长度/单套染色体组总长)×100%(植物);或:相对长度(%)=[某染色体长度/(单套常染色体+X染色体)的总长]×100%(动物);⑷臂比指数(N.F.值):把具中部和近中部着丝粒的“V”形染色体计为2个臂,而把具近端和端部着丝粒的“J”或“I”染色体计为1个臂,以此统计核型中总臂数;⑸染色体长度比:根据染色体长度比[(最长染色体长/最短染色体长)×100%]。
染色体实验报告

一、实验目的1. 熟悉染色体的基本结构和功能。
2. 掌握染色体标本制作和观察的方法。
3. 学习染色体计数和核型分析技术。
二、实验原理染色体是生物体内具有遗传信息的结构,由DNA和蛋白质组成。
染色体在细胞分裂过程中具有重要作用,其结构稳定性和数目恒定性对于维持生物遗传信息的完整性至关重要。
本实验通过观察染色体的形态、结构和数目,了解染色体的基本特征。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:洋葱根尖、盐酸、酒精、醋酸、龙胆紫染液、载玻片、盖玻片、显微镜等。
2. 仪器:实验台、酒精灯、滴管、镊子、剪刀、解剖镜、显微镜等。
四、实验步骤1. 制备洋葱根尖细胞染色体标本(1)将洋葱根尖放入盛有盐酸和酒精的混合液(1:1)中,室温下处理30分钟。
(2)用镊子取出根尖,放入醋酸和酒精的混合液(1:1)中,室温下处理10分钟。
(3)用剪刀将根尖剪成约1mm长的小段,放入载玻片中央。
(4)用滴管加入适量的龙胆紫染液,覆盖根尖。
(5)室温下染色5-10分钟。
2. 观察染色体标本(1)用镊子夹取盖玻片,覆盖在染色后的标本上。
(2)用解剖镜调整标本位置,使其在载玻片上均匀分布。
(3)用显微镜观察染色体形态、结构和数目。
3. 计数和核型分析(1)在显微镜下观察染色体,记录染色体数目、形态和结构。
(2)对观察到的染色体进行分类和核型分析。
五、实验结果与分析1. 染色体形态:洋葱根尖细胞染色体呈长棒状,两端钝圆,染色体数目为8条。
2. 染色体结构:染色体由DNA和蛋白质组成,DNA位于染色体中央,蛋白质包裹在DNA周围。
3. 核型分析:洋葱根尖细胞染色体核型为二倍体,即2n=16。
六、实验结论通过本实验,我们成功制备了洋葱根尖细胞染色体标本,并观察到了染色体的形态、结构和数目。
实验结果表明,洋葱根尖细胞染色体呈长棒状,由DNA和蛋白质组成,核型为二倍体。
本实验为后续研究染色体的遗传机制和生物学功能奠定了基础。
七、实验讨论1. 实验过程中,盐酸和酒精的混合液对染色体有固定作用,有助于观察染色体的形态和结构。
人类染色体组型分析 实验报告

【实验题目】染色体组型分析【实验目的】1.掌握染色体组型分析的各种数据指标。
2.学习染色体组型分析的基本方法。
3.对照标准图型,学习识别人体各对染色体的带型特征。
4.初步掌握人体染色体组型带型分析方法。
5.了解染色体组型与带型分析的意义。
【实验材料与用品】1.器材:直尺、剪刀、胶水、计算器、白纸2.材料:人体细胞染色体放大图【实验原理】染色体组型又称核型,是指将动物、植物、真菌等的某一个体或某一分类群(亚种、种、属等)的体细胞内的整套染色体,按它们相对恒定的特征排列起来的图像。
核型模式图是指将一个染色体组的全部染色体逐个按其特征绘制下来,再按长短、形态等特征排列起来的图像。
(一)描述染色体的四个参数:×100 (相对长度可以用来表示每条染色体的长度)1.相对长度= 每条染色体长度单倍常染色体之和+X2.臂指数= 长臂的长度 q短臂的长度 p 为了更准确地区别亚中部和亚端部着丝粒染色体,1964年Levan 提出了划分标准:1.0-1.7之间,为中部着丝粒染色体(M )1.7-3.0之间,为亚中部着丝粒染色体(SM ) 3.0-7.0之间,为压端部着丝粒染色体(ST )④ 7.0以上,为端部着丝粒染色体(T )3.着丝粒指数 = 短臂的长度 p 染色体全长 p+q按Levan 划分标准: 50.0-37.5之间为M37.5-25.0之间为SM25.0-12.5之间为ST ④ 12.5-0.0之间为T4.染色体臂数(NF ):根据着丝粒的位置来确定。
a .端着丝粒染色体(T ),NF=1;b .中部、亚中部、亚端部着丝粒染色体(M ,SM ,ST ),NF=2。
(二)人类体细胞染色体的分类标准及其主要特征类别包括染色体的序号 主要特征 A 群第1-3对 体积大,中部着丝粒;第2对着丝粒略偏离中央 B 群第4-5对 体积大,中部着丝粒;彼此间不易区分 C 群 第6-12对,X 中等大小,亚中部着丝粒。
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染色体分析相关的实验第三章染色体分析相关的实验目前染色体的研究几乎深入到每个学科的每一个领域,因为染色体是把细胞与分子联系起来的重要桥梁,故在遗传学研究中或者在医学研究中被广泛重视及应用。
近几年相继出现了脆性位点、热点、重排与癌基因激活及抑癌基因丢失,癌基因定位、抑癌基因定位及杂合位点缺失等与染色体相关的理论;另一方面与染色体畸变有关的各类遗传病的研究也使临床上染色体的分析上了一个新的台阶。
染色体分析相对较简单,细胞通常采用循环血中的淋巴细胞,胎儿采用羊膜液中的羊膜细胞或胎盘绒毛膜细胞。
细胞经过培养,再用植物凝集素(PHA)刺激细胞分化。
当每个染色体都复制成两个染色体单体时,随后加入秋水仙素,在分裂中期阻止细胞有丝分裂。
位于载玻片上的细胞随后被染色,在显微镜下拍照或用计算机进行图像分析。
根据染色体形态大小,剪下照片上的染色体,按序分类排贴在纸上,进行核型分析。
染色体显带通常通过G显带或Q(荧光)显带染色技术进行,增加其他染色方法可提高细胞遗传学诊断的准确性。
新的分子生物学技术使用DNA探针(含有荧光标记)来定位染色体上特定基因和DNA序列,荧光素标记的原位杂交技术可用于鉴别基因结构和寻找染色体缺失,重排及复制。
实验3-1 人类染色体标本的制备一、实验目的掌握人类外周血细胞培养方法及染色体标本的制备方法。
观察人类染色体的形态和数目。
二、实验原理血液中的T淋巴细胞在体外培养中经一定剂量的植物血凝素(PHA)刺激,可以返幼进行细胞分裂,用秋水仙素积累分裂相,用0.075 mol/L-1KCI进行低渗后,经固定、染色,可见到分散的染色体。
三、实验准备超净工作台、酒精灯、无菌注射器(1ml、2ml、5m1)、针头、培养瓶、橡皮塞、75%酒精棉球、离心机、定时钟、试管架、量筒、刻度离心管、冰凉玻片,毛细滴管、恒温水浴锅、RPMI1640、小牛血清、肝素、秋水仙素、植物血凝素(PHA)、固定液(甲醇:冰乙酸为3∶1,现用现配)、0.075mol。
L-1KCI低渗液、Giemsa染液、pH6.8磷酸缓冲液、恒温培养箱、吹风机、粗天平、5%NaHCO3、显微镜。
四、实验方法与步骤(一)接种取500单位/lml的肝素0。
2ml湿润针筒后,取静脉血1~2ml,转动针筒以混匀肝素;随后立即插入灭菌小瓶内,送入超净工作台(消毒、灭菌等略),在火焰旁将血液滴入2~3个盛有5ml培养液(4ml RPMIl640、lml小牛血清,5mg PHA,用5%的NaHCO3调pH至7.0~7.4)的培养瓶内,每瓶0.2~0.3ml(7号针头13滴),盖上橡皮塞,轻轻摇动以混匀。
(二)培养1.将培养瓶放在37℃恒温箱内培养72h。
2.在终止培养前2~4h,将0.01%的秋水仙素1~2滴(7号针头)加入培养瓶内,轻轻摇匀.放回温箱内,继续培养2~4h。
(三)收获1.用吸管充分吹打瓶壁,吸取培养物移入刻度离心管内,相对离心管平衡后放入离心机,离心8min(1000转/分),吸去上清液,留下沉淀物。
2.低渗处理:加8ml预温(370C)的0.075mol。
L-1KCI低渗液,用吸管打匀使细胞悬浮于低渗液中,放回37℃恒温水浴锅中,静置15~20min,使白细胞膨胀,染色体分散、红细胞解体。
3.预固定:加入固定液1~2ml打匀。
4.再离心:1000转/分离心8min,吸去上清液,留下沉淀物。
5.固定:沿离心管壁加入新配固定液8ml打匀,固定30min。
6.再离心:1000转/分离心8min,弃去上清液,留下沉淀物。
7.再固定:再加入新配固定液8ml,打匀,静置30min。
8.再离心:1000转/分离心8min,弃去上清液。
9.第四次固定:加入新配固定液0.5~lml打匀成细胞悬液。
10.制片:用滴管吸细胞悬液2~3滴,滴在冰水预浸泡的洁净载玻片上,立即用口吹散,在酒精灯上过几次,吹风机吹干或气干。
11.染色:Giemsa染液(原液∶pH6.8磷酸缓冲液为1∶9)染色10 min~20min、自来水冲洗、晾干。
(四)镜检低倍镜下找到分散良好的分裂相后,换高倍镜、油镜、认真观察。
(五)注意事项1.PHA是体外淋巴细胞培养成败的关键问题,因此,要考虑它的质量和浓度。
盐水提取物一般冰冻保存的时间不宜过长,时间长了效价减低。
2.浓度一般用1%~2%,每毫升培养液加0.2~0.4ml;浓度过高可能会导致红细胞凝集。
3.秋水仙素溶液浓度和处理时间。
一般最终浓度每毫升培养液0.1~0.2μg为宜,作用时间为3~5h,一般秋水仙素溶液的浓度与处理时间有一定的关系。
如果处理时间太短,则标本中的分裂细胞就少,相反,如果处理时间太长,则标本中的分裂细胞虽多,但其染色体缩得太短,以致形态特征模糊。
4.培养温度应严格控制在37℃+0.5℃。
5.双蒸水必须用玻璃蒸馏器制备,pH应在6~7之间。
6.低渗步骤极为重要,关系到染色体分散的好坏,因此,低渗液浓度与低渗的时间应掌握适当。
7.离心机最好用水平式的,速度不宜过快。
速度太快细胞团不易打散,反之分裂相易丢失;固定液应在临用时新鲜配制,固定一定要彻底、均匀。
若打散不够,则细胞在玻片上易集结。
8.若吹打时用力过猛,细胞易破碎,以致染色体数目不完整;培养液的pH值应掌握在7.4土0.1左右,pH值偏酸发育不良,偏碱时细胞出现轻度固缩。
9.玻璃器皿都要十分干净、无酸,所用试剂以分析纯为好。
10.操作过程应保持高度无菌概念,严防细菌和病毒污染;在外周血培养中,PHA对淋巴细胞的作用,个体差异较大。
同样方法和条件,分裂相多少及分散情况不一样。
因此,若首次失败,应充分考虑到这些因素。
(五)预期实验结果及分析将制作好的片子在油镜下仔细观察,选择较好的分裂相进行照相、剪贴、分组,将照片上的核型进行剪贴,写出实验报告与实验结果。
染色体数目为46XX,(XY)为人类正常核型。
若某对染色体少了一条(2n-1),细胞染色体数目为45;或某一对染色体多了一条(2n+1),细胞染色体数目为47;若为两种核型,46,XX/46,XXY 称为嵌合体。
以上三种为异常核型。
(吴白燕)实验3-2、染色体显带技术一、实验目的了解G显带标本的制作过程;并通过G显带核型分析,初步掌握各号染色体G带的带型特征。
二、实验原理染色体显带技术是在非显带染色体的基础上发展起来的,它能显示染色体本身更细微的结构,有助于准确的识别每一条染色体及诊断染色体异常疾病。
显带染色体是染色体标本经过一定程序处理,并用特定染料染色,使染色体沿其长轴显现明暗或深浅相间的横行带纹,称为染色体带,这种染色体显带的技术,称为显带技术。
通过显带技术,使各号染色体都显现出独特的带纹,这就构成了染色体的带型。
每对同源染色体的带型基本相同而且稳定,不同对染色体的带型不同。
在所有的显带技术中,G显带(G banding)是最常见的显带技术,它是将染色体标本用碱、胰蛋白酶或其它盐溶液处理后,再用Giemsa 染液染色,在普通显微镜下,可见深浅相间的带纹,称G带(G band)。
G显带方法简便,带纹清晰,染色体标本可以长期保存,因此被广泛用于染色体病的诊断和研究。
一套单倍体染色体带纹数仅有320条带。
70年代后期,由于技术的改进,可以从早中期、前中期、晚前期细胞得到更长、带纹更丰富的染色体。
一套单倍体染色体即可显示550~850条或更多的带纹。
即在原有的带纹上分出更多的带,这种染色体称为高分辨显带染色体(high resolution banding chromosome,HRBC)。
三、实验准备(材料、试剂、仪器)染色体显带技术的实验准备除必要的器材(普通光学显微镜、37℃水浴箱、普通冰箱、立式染缸、直头小吸管、橡皮吸头、pH试纸、吸水纸、扣染玻璃板、擦镜纸、镊子)和试剂(0.9%生理盐水、0.025%胰蛋白酶溶液、Giemsa染液、3.8%NaHCO)外,应选择已制片的染色体标本背景干净、分裂相较多、染色体分散良好的玻片。
片龄2~5天最宜,此制片需经80℃烘烤四、实验方法与步骤(一)实验步骤1.首先将配制好的0.025%胰酶溶液装入立式染色缸中并调pH 值7~7.2,并将其放入37℃恒温水浴箱中预温。
2.取染色体制片一张置胰酶缸中处理15sec左右,迅速投入0.9%生理盐水缸中漂洗数sec(可准备两缸盐水,做两次漂洗)。
3.用自来水稀释后的Giemsa染液(自来水∶吉姆萨原液=8∶1)扣染15min~20min。
4.将标本用自来水冲洗、晾干,必要时可封片、镜检。
镜检时,先在低倍镜下选择分散好、长度适中的分裂相,然后转换油镜观察其显带的情况,选择显带好的标本进行G显带核型分析。
5.挑选出分裂相数目完全且带纹清晰的分裂相,进行显微照相、冲洗、放大,制成人外周血淋巴细胞G显带中期分裂相照片。
(二)G显带核型分析准备G显带中期分裂相照片一张,将各条染色体逐一剪下,根据其大小、带型特点和着丝粒位置,依次分组、配对和排列组合,待检查无误后,贴在报告纸上。
写出核型的简式(繁式)。
(三)注意事项1.如在滴片后第二天进行G显带,可在胰酶处理前,将染色体制片置80℃烤箱烤片两h。
2.胰酶预温时要注意预温温度,温度过高,胰酶变性失效。
3.胰酶溶液需在使用前新配制。
染色体在胰酶中的处理时间可因制片质量、片龄不同而不同。
在不同个体的染色体制片中也可有差异,此外,不同厂家生产的胰酶或不同批号的胰酶,在处理时间上都可有差别,故每次进行染色体G显带时,最好先试做一张制片,摸索胰酶处理时间,以保证获得最好的染色体G显带标本。
(四)预期实验结果及分析1.获得带纹清晰的G显带染色体标本。
2.在显微镜下观察染色体G显带核型,分析染色体的数目和结构3.结合实验体会,写出实验报告交老师。
(吴白燕)实验3-3 姐妹染色单体技术姐妹染色单体交换(sister chromatid exchange,SCE)技术,是20世纪70年代继染色体显带技术之后,细胞遗传学研究中展现的的又一新技术。
SCE交换技术是指能够显示姐妹染色单体在相同位置上同源对称片断的交换。
由于SCE比染色体畸变敏感,一时间成为评价染色体损伤修复的一项遗传学指标,广泛的应用于研究DNA修复不完全综合症,细胞周期动力学分析及检测致突变物质和致癌物质等领域。
SCE技术方法中所选择的材料根据研究目的不同而有差异,在毒理实验中体外实验多采用可贴壁生长的细胞,如CHO、V79和CHL 细胞,也可以用悬浮生长的细胞,如人外周血淋巴细胞、骨髓液等;在体内动物实验中,一般要设计三个剂量组及阴、阳性对照组,选择的动物常用3~5月龄的小鼠,可选择骨髓细胞,睾丸生殖细胞,再生肝细胞,肺巨噬细胞等进行SCE试验。
大量研究证明,哺乳动物的各种细胞的SCE数,在一定实验条件下几乎是恒定的,称为自发的SCE,通常以每个M2中期有丝分裂细胞中所见的SCE数表示(简写为SCE/C)。