实验5 高效液相色谱分析HBIW产品纯度
高效液相色谱法测定注射用HB的有关物质
性感 冒等免 疫 系统 功 能低 下导 致 的疾 病 均有 一 定疗 效 与 预防 功 能 。 ｊ 笔者 用高 效液 相 色谱 （ Ｐ Ｃ 法 对其 有 关 物质 进行 控制 ， 道如 下 。 ＨＬ） 报 １ 仪 器 与 试 药
量瓶 中 ， 加适量 流 动相 使 Ｈ Ｂ溶解 ， 后加 ｌｍ ｌ ＬＮ Ｏ ｍ ， 然 ｏ／ ａ Ｈ ５ Ｌ 摇匀 ， 放置 ２ｈ 用 １ ｏ／ Ｃ 调至 中性 ， ２２项 下方 法检查 。 ， ｌ ＬＨ １ ｍ 照 ． 结
检 测 波 长 ：１ ｍ； ２ ０ｎ 柱温 ：０℃ ； ４ 进样 量 ：０ｔ 。 Ｂ主 成 分 、 剂 、 ２ Ｌ Ｈ ｘ 溶 合
２ ５ ％ ）其 中 ４号峰为未被破坏的 Ｈ 各杂质峰均能 与主峰很好 ．５ ； Ｂ，
地 分 离 ， 测 定 无影 响 。 此 ， 品宜 在 阴凉 处 保存 。 对 因 本 光 破 坏 ： 密 称 取样 品 （ 号 为 ２ ０ １ ２ ） 粉 适 量 （ 相 当于 精 批 ０５０９细 约 Ｈ ５ｍ ） 置 ５ Ｌ量 瓶 中 ， 紫 外 灯 下 照 射 ４ｈ 照 ２ ２项 下 检 Ｂ２ ｇ ， ０ｍ 置 ， ． 查 。 果 见 图 １Ｄ， 见 本 品在 紫外 灯 下 放 置 ４ｈ 有 关 物 质 有 所 增 结 可 ， 加 （ 归 一 化法 计 算 为 ２ ．２ ） 其 中 ２号 峰 为未 被 破 坏 的 Ｈ 各 按 ５４％ ； Ｂ， 杂 质 峰 均 能 与 主 峰 很 好 地 分 离 ， 测 定 无 影 响 。 此 ， 品 不 能 在 对 因 本
成 中间体及 降解 产物 的 Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ分离 检测表 明 ， 本条件 能有效地 分 离 主 成 分 、 间体 与 其 他 物 质 ， 不 干 扰 样 品 中有 关 物 质 的检 查 。 中 且
实验5 高效液相色谱分析HBIW产品纯度
高效液相色谱分析HBIW产品纯度一、实验目的1.理解高效液相色谱原理；2.了解高效液相色谱站工作原理；3.掌握HBIW的纯度分析方法。
二、实验原理高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）是20世纪60年代末，在经典也想色谱和气象色谱的基础上发展起来的一种具有高灵敏度、高选择性的高效快速分离分析技术。
与经典液相色谱相比较，HPLC采用微球填料（5-10μm），使用了高压输液泵，所以传质快、柱效高（可达20000-80000塔板/米），能分离多组分复杂混合物或性质及相近的同分异构体，并可实现快速分离。
高效液相色谱还可以称为高压液相色谱（high pressure liquid chromatography），高速液相色谱（high speed liquid chromatography）、高分力度液相色谱（high resolution liquid chromatography）或现代液相色谱（modern liquid chromatography）。
HPLC法原理：一固液色谱法为例。
固定相是固相吸附剂，它们是一些多孔性的极性微粒物，如硅胶、氧化铝等。
它们的表面存在着分散的吸附中心，溶质分子流动相分子在吸附剂表面呈现的吸附活性中心上进行竞争吸附，这种作用还存在于不同荣哲分子间，以及同一溶质分子中不同官能团之间。
由于这些竞争作用，便形成不同溶质在吸附剂表面的吸附、解吸平衡，这就是液相色谱具有选择性分离能力的基础。
本实验所采用的HPLC就是液相色谱。
HPLC色谱仪简介：高效液相色谱仪分为分析型和制备型，虽然它们的性能各异，应用范围不同，但其基本组件类似。
主要部件如下：储液罐、高压输液泵、进样装置、色谱柱、检测器数据处理装置等。
HPLC法的特点：高效液相色谱采用液体流动相，流动相也影响分离过程，这对分离的控制和改善提供了额外的因素，它能分析气象色谱不能分析的高沸点有机物、高分子和热稳定性差的化合物以及具有生物活性的物质。
高效液相色谱法实验报告
高效液相色谱法实验报告高效液相色谱法实验报告导言：高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种重要的分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
本实验旨在通过HPLC技术对某种药物样品进行分析，并探讨其应用的可行性和优势。
实验方法：1. 仪器设备：HPLC仪、色谱柱、样品溶液、流动相、检测器等。
2. 实验步骤：a. 样品制备：将药物样品粉末溶解于适当的溶剂中，制备成一定浓度的样品溶液。
b. 色谱柱准备：根据样品特性选择合适的色谱柱，并进行柱平衡处理。
c. 流动相制备：根据样品特性选择合适的流动相组成，并进行气泡排除和气体除湿处理。
d. 参数设置：根据样品特性和实验要求，设置适当的流速、温度、检测波长等参数。
e. 样品注射：使用自动进样器或手动注射器将样品溶液注入色谱柱。
f. 数据采集：通过检测器采集样品在色谱柱中的峰值信号，并记录相关数据。
g. 数据处理：利用计算机软件对采集的数据进行峰面积计算、峰高度计算等处理。
实验结果：通过HPLC技术对药物样品进行分析，得到了以下结果：1. 样品在色谱柱中产生了明确的峰值信号，峰形对称且峰高度适中。
2. 根据峰面积计算，得到了样品的浓度为X mg/mL。
3. 通过与标准品的比对，确认了样品的成分和含量。
讨论：1. HPLC技术在药物分析中的应用优势：a. 高灵敏度：HPLC技术能够检测到极低浓度的物质，对于药物分析中微量成分的检测非常重要。
b. 高选择性：通过调整流动相的组成和色谱柱的特性，可以实现对复杂样品中不同成分的分离和检测。
c. 高分辨率：HPLC技术能够有效地分离样品中的各个成分，提供准确的分析结果。
d. 自动化程度高：HPLC仪器配备了自动进样器和数据采集系统，能够实现实验过程的自动化操作和数据处理，提高了实验效率和准确性。
2. 实验中可能存在的误差和改进方法：a. 样品制备过程中的误差：药物样品的溶解度、稳定性等因素可能会对实验结果产生影响。
高效液相色谱实验报告
高效液相色谱实验报告一、实验目的。
本实验旨在通过高效液相色谱技术，对给定的混合物进行分离和分析，掌握高效液相色谱仪的操作方法，以及对不同成分的定量分析。
二、实验原理。
高效液相色谱（HPLC）是一种高效、灵敏、准确的分析技术，它利用高压泵将样品溶液以高压送入色谱柱，通过与填料相互作用而进行分离。
在色谱柱中，不同成分将因其在填料中的亲和力不同而被分离开来。
通过检测器检测各个组分的峰面积或峰高，从而进行定量分析。
三、实验步骤。
1. 样品制备，将待分析的混合物溶解于适当的溶剂中，并进行过滤处理。
2. 色谱柱准备，连接色谱柱，并进行平衡处理。
3. 仪器调试，将色谱仪的流动相、检测器等参数进行调试。
4. 样品进样，将处理好的样品通过自动进样器送入色谱柱。
5. 数据采集，通过色谱仪软件进行数据采集和记录。
6. 数据分析，根据色谱图进行各组分的峰识别和定量分析。
四、实验结果。
通过本次实验，我们成功地对给定的混合物进行了分离和定量分析。
得到了混合物中各组分的峰面积和峰高，并通过标准曲线进行了定量分析。
实验结果表明，本实验的色谱分离效果良好，各组分分离度高，定量分析结果准确可靠。
五、实验总结。
通过本次实验，我们掌握了高效液相色谱技木的基本操作方法，了解了色谱柱的选择和调试、样品的制备和进样、数据采集和分析等基本步骤。
同时，我们也认识到了高效液相色谱技术在化学分析中的重要性和广泛应用性。
希望通过今后的实验操作，能够进一步提高我们的操作技术和分析能力。
六、参考文献。
1. Skoog, D. A., Holler, F. J., & Crouch, S. R. (2017). Principles of instrumental analysis. Cengage Learning.2. Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Glajch, J. L. (2011). Practical HPLC method development. John Wiley & Sons.以上就是本次高效液相色谱实验的全部内容，希望对大家有所帮助。
高效液相色谱实验报告
高效液相色谱实验报告引言：高效液相色谱(HPLC)是一种基于溶液动力学的分析方法，广泛应用于药学、化学、生物学等领域。
本实验旨在通过HPLC技术，分离和鉴定复杂混合物中的化合物，并探究其分离机制。
实验方法：1. 样品制备：取一定比例的复杂混合物样品，将其溶解于合适的溶剂中，得到均匀的样品溶液。
2. 色谱柱选择：根据样品性质和分离目标，选择合适的色谱柱和填料。
3. 流动相选择：根据样品溶解度和分离效果，选择合适的流动相组成和pH值。
4. 色谱条件设置：设置适当的进样量、流速和温度等参数，优化分析条件。
5. 样品进样：通过自动进样器将样品溶液注入色谱柱。
6. 梯度洗脱：通过调节流动相组成或浓度梯度，实现目标化合物的分离。
7. 检测器选择：根据样品性质和目标化合物的特征，选择合适的检测器。
8. 数据分析：利用色谱软件分析检测到的信号，得到峰面积和保留时间等参数。
实验结果：本实验以植物提取物为样品，以色谱柱A为分离柱，以甲醇-水（70:30）为流动相，在室温下进行HPLC分析。
优化的分析条件为：进样量为10 μL、流速为1 mL/min、检测波长为254 nm。
在色谱图中，观察到多个峰出现，对比标准品峰的保留时间和UV-Vis吸收谱与该峰相似度，结合质谱分析，成功鉴定了4种化合物：峰1为黄酮类化合物，峰2为苯丙素类化合物，峰3为生物碱类化合物，峰4为酚类化合物。
讨论：通过本实验，我们可以看到HPLC技术的优势和应用价值。
首先，HPLC可以对复杂混合物进行高效、准确的分离和定量分析，为后续鉴定提供了重要数据。
其次，HPLC操作简便，结果可靠，且可适用于不同种类的样品。
此外，优化实验条件对提高分析效果至关重要，需要通过不断试验和调整，找到最佳条件。
然而，HPLC仍存在一些局限性。
首先，HPLC分析所需的仪器设备和耗材相对昂贵，需要较高的投资成本。
其次，样品制备和前处理过程可能引入误差，影响分析结果的准确性。
高效液相实验报告
一、实验目的1. 熟悉高效液相色谱（HPLC）的基本原理和操作方法。
2. 掌握液相色谱仪的构造及其各部分的功能。
3. 学习并运用高效液相色谱法对样品进行分离和定量分析。
二、实验原理高效液相色谱法是一种利用高压液体作为流动相，通过固定相对样品进行分离和分析的技术。
其原理基于不同物质在固定相和流动相之间的分配系数差异，从而实现分离。
实验中，样品经过高压泵送入色谱柱，在流动相的作用下，不同物质在色谱柱中停留时间不同，从而实现分离。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：高效液相色谱仪、色谱柱、流动相过滤器、样品瓶、高压泵、检测器、数据工作站等。
2. 试剂：乙腈、甲醇、水、磷酸、氨水等。
四、实验步骤1. 样品准备：准确称取一定量的待测样品，用适当溶剂溶解，配制成一定浓度的溶液。
2. 流动相配置：根据实验要求，配置合适的流动相，并进行过滤。
3. 色谱柱准备：将色谱柱安装在色谱仪上，用流动相进行冲洗，去除色谱柱中的杂质。
4. 上样：将配制好的样品溶液注入色谱仪，通过高压泵送入色谱柱。
5. 分离：在流动相的作用下，样品中的各组分在色谱柱中依次流出。
6. 检测：利用检测器对流出物进行检测，记录色谱图。
7. 数据分析：利用数据工作站对色谱图进行分析，计算各组分的含量。
五、实验结果与分析1. 样品分离：实验中，样品中的各组分在色谱柱中得到了有效分离，分离效果良好。
2. 定量分析：根据标准曲线，计算各组分的含量，结果如下：| 组分名称 | 含量（%） || -------- | -------- || 组分1 | 2.5 || 组分2 | 1.8 || 组分3 | 0.9 || 组分4 | 0.5 |3. 误差分析：实验过程中，可能存在以下误差：- 仪器误差：色谱仪、检测器等仪器本身的精度和稳定性对实验结果有一定影响。
- 试剂误差：试剂的纯度和浓度对实验结果有一定影响。
- 操作误差：实验操作不规范、样品处理不当等因素可能导致误差。
高效液相实验报告
篇一：高效液相色谱实验报告高效液相色谱实验报告一、实验目的1了解液相色谱的发展历史及最新进展 2 学习液相色谱的基本构造及原理3 掌握液相色谱的操作方法和分析方法，能够通过hplc分离测定来对目标化合物的分析鉴定。
二、实验原理液相色谱法采用液体作为流动相，利用物质在两相中的吸附或分配系数的微小差异达到分离的目的。
当两相做相对移动时，被测物质在两相之间进行反复多次的质量交换，使溶质间微小的性质差异产生放大的效果，达到分离分析和测定的目的。
液相色谱与气相色谱相比，最大的优点是可以分离不可挥发而具有一定溶解性的物质或受热后不稳定的物质，这类物质在已知化合物中占有相当大的比例，这也确定了液相色谱在应用领域中的地位。
高效液相色谱可分析低分子量、低沸点的有机化合物，更多适用于分析中、高分子量、高沸点及热稳定性差的有机化合物。
80%的有机化合物都可以用高效液相色谱分析，目前以已经广泛应用于生物工程、制药工程、食品工业、环境检测、石油化工等行业。
三、高效液相色谱的分类吸附色谱法、分配色谱法、空间排阻色谱法、离子交换色谱法、亲和色谱法、化学键合相色谱法四、高效液相色谱仪的基本构造高效液相色谱至少包括输液系统、进样器、分离柱、检测器和数据处理系统等几部分。
1 输液系统：包括贮液及脱气装置、高压输液泵和梯度洗脱装置。
贮液装置用于存贮足够量、符合hplc要求的流动相。
高效液相色谱柱填料颗粒比较小，通过柱子的流动相受到的流动阻力很大，因此需要高压泵输送流动相。
2 进样系统：将待测的样品引入到色谱柱的装置。
液相色谱进样装置需要满足重复性好、死体积小、保证柱中心进样、进样时引起的流量波动小、便于实现自动化等多项要求。
进样系统包括取样、进样两项功能。
3 分离柱：色谱柱是色谱仪的心脏、柱效高、选择性好、分析速度快是对色谱柱的一般要求。
商品化的hplc微粒填料，如硅胶和以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球（包括离子交换树脂）等的粒度通常在3μm、5μm、7μm、以及10μm。
胡萝卜素含量的测定(精)
• m1：标样进样体积中β-胡萝卜素含量（mg）；
• m2：样品称样质量（g或mL）；• A1：标样峰面积值；• A2：样品峰面积；
• V1：样品进样质量（μL）；
• V2：样品定容体积（mL）。
实验注意事项
• 1、样品的预处理； • 2、流动相的过滤脱气处理； • 3、色谱条件的选择。
思考题：
β-胡萝卜素含量测定原理
β-胡萝卜素为脂溶性维生素A的前体，存在于各 种动植物体内，可以直接用有机溶剂提取后进行 检测，然后利用反相色谱法分析。
3、. 实验仪器和材料
仪器： 高效液相色谱仪 紫外检测器等。
试剂材料：β-胡萝卜素； 乙酸乙酯； 正己烷； 色谱甲醇； 新鲜胡萝卜。
4、实验操作步骤：
• 1、高效液相色谱仪的组成与工作主要 流程？
• 2、高效液相色谱的特点？ • 3、进行高效液相色谱仪检测β-胡萝卜素
时要对待测样品进行哪些预处理？ • 4、色谱图中β-胡萝卜素吸收峰峰高、峰
面积与样品中β-胡萝卜素浓度和纯度有 何关系？
•
（1）标准溶液的配制：精确称取100mg的含量为30%的β-胡 萝卜素标准品用乙酸乙酯溶解定容到100mL的棕色容量 瓶中。进样时取1ml，稀释定容到100ml。
（2）样品的制备：取样品，捣碎成浆状，称取10g，加甲醇、 正己烷各10ml研磨。过滤后，滤液以及用乙酸乙酯洗 涤渣的滤液一并接收在三角瓶中，提取液放入100ml棕 色容量瓶中，乙酸乙酯定容到100ml。
高效液相色谱 法测定 β—
胡萝卜素含量
实验指导
一、实验目的 二、实验原理 三、实验仪器材料 四、实验操作步骤 五、实验结果 六、实验思考题
1、实验目的
1、理解高效液相色谱法的目的和意义； 2、理解和掌握高效液相色谱法的原理和方法； 3、掌握高效液相色谱仪的操作。
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高效液相色谱分析HBIW产品纯度
一、实验目的
1.理解高效液相色谱原理；
2.了解高效液相色谱站工作原理；
3.掌握HBIW的纯度分析方法。
二、实验原理
高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）是20世纪60年代末，在经典也想色谱和气象色谱的基础上发展起来的一种具有高灵敏度、高选择性的高效快速分离分析技术。
与经典液相色谱相比较，HPLC采用微球填料（5-10μm），使用了高压输液泵，所以传质快、柱效高（可达20000-80000塔板/米），能分离多组分复杂混合物或性质及相近的同分异构体，并可实现快速分离。
高效液相色谱还可以称为高压液相色谱（high pressure liquid chromatography），高速液相色谱（high speed liquid chromatography）、高分力度液相色谱（high resolution liquid chromatography）或现代液相色谱（modern liquid chromatography）。
HPLC法原理：一固液色谱法为例。
固定相是固相吸附剂，它们是一些多孔性的极性微粒物，如硅胶、氧化铝等。
它们的表面存在着分散的吸附中心，溶质分子流动相分子在吸附剂表面呈现的吸附活性中心上进行竞争吸附，这种作用还存在于不同荣哲分子间，以及同一溶质分子中不同官能团之间。
由于这些竞争作用，便形成不同溶质在吸附剂表面的吸附、解吸平衡，这就是液相色谱具有选择性分离能力的基础。
本实验所采用的HPLC就是液相色谱。
HPLC色谱仪简介：高效液相色谱仪分为分析型和制备型，虽然它们的性能各异，应用范围不同，但其基本组件类似。
主要部件如下：储液罐、高压输液泵、进样装置、色谱柱、检测器数据处理装置等。
HPLC法的特点：高效液相色谱采用液体流动相，流动相也影响分离过程，这对分离的控制和改善提供了额外的因素，它能分析气象色谱不能分析的高沸点有机物、高分子和热稳定性差的化合物以及具有生物活性的物质。
在全部有机化合物中，仅有20%的样品可用气相色谱分析，其它80%的样品可用高效液相色谱分析。
HPLC易于对样品定量回收，这对任何规模的植被突然别有利。
在很多情况下，HPLC不仅是作为分析方法，更多的是作为一种分离手段，用以提纯和制备具有足够纯度的单一物质。
HPLC谱有多种定量分析方法，如：峰面积（高峰）百分比法；校正归一化法；外标法和内标法。
HBIW纯度分子方法：本实验采用反相液相色谱法，它是以极性物质做流动相，非极性物质作固定相的一种色谱方法。
反相液相色谱分析中常用的流动相有甲醇、乙腈、四氢呋喃和水。
本实验采用四氢呋喃/水为流动相。
三、实验步骤
实验材料：纯净水（用前须过滤）；甲醇（分析纯，用前须过滤）；四氢呋喃（分析
纯，用前须过滤）；HBIW（自制）。
仪器设备：高效液相色谱；色谱柱：填料SinoChrom ODS-BP，不锈钢柱φ4.6mmＸ
200mm,粒径5μm；检测器：UV230+紫外-可见检测器，波长连续可调；P230型高压恒流泵：
流量范围0.001mL/min-9.999mL/min ，设定步长0.001 mL/min ，最高工作压力40MPa （0.001 mL/min-5.000 mL/min ）、20MPa （5.000 mL/min -9.999mL/min ）。
株箱：具有恒温装置。
实验条件：流动相为四氢呋喃/水=90/10，流速
1.000mLmin ，进样量10μl ，柱温
40℃,波长254mm 。
具体操作步骤：
1.采用纯甲醇或者纯乙腈冲洗色谱柱（本实验采用纯甲醇）30-60min ，至基线水平。
2.停止高压输液泵的运行，将纯甲醇换成流动相（本实验四氢呋喃/水）冲洗色谱柱30-60min 至基线水平。
3.清洗注样针3-4次，配制待测样品溶液（本实验采用四氢呋喃溶液）。
4.注样5-10μl ，触发数据采集，记录数据，分析。
5.待测样品测试完毕，采用纯甲醇冲洗色谱柱30-60min ，至基线水平。
四、 实验结果
材料:Hyper 0DS2 C18 流速:1.0 ml/min 流动相: THF:H2O=9:1 压力:10.0 MPa 柱长:200 mm 检测器: UV 254 nm 柱径:4.6 mm 进样量: 10 ul
由于分两次合成，故相应做了两组检测。
分别记为A 组、B 组。
（其中A 组即首次合成产率较低组）结果如下：
A
[m v ]
积分后得A 组纯度为99.94%。
B
积分后得B 组产率为99.71%。
五、 思考题
1、 针对高效液相色谱法，色谱定量分析方法有哪些？各有什么优点和缺点？
答：（1）峰面积（高峰）百分比法；计算各杂质峰面积及其总和，并求出占总
峰面积的百分率。
要求检测器对各组分均有相应，且相应校正因子较为接近。
操作较为简单，但测定误差较大，一般只用于粗略考察产品中杂质含量，且不宜用于微量杂质检查。
（2）校正归一化法；优点是简便准确，当操作条件如进样量、流速改变时对结果影响不大，缺点是要求各组分都能流出色谱柱且检测器均有相应，各组分的相对校正因子已知，条件较为苛刻。
（3）内标法；内标法是以待测组分和内标物的峰高比或峰面积比求算试样含量的方法。
使用内标法可以抵消仪器稳定性差、进样量不够准确等原因带来的定量分析误差，且不像归一化法受限。
但是每次分析必须准确称量内标物和被测物，不适合做快速分析。
（4）外标法；外标法是以对照品的量对比求算试样含量的方法。
只要待测组分出峰、无干扰、保留时间适宜即可用外标法进行定量分析。
优点：操作简单，计算方
[m v ]
便。
缺点：结果的准确性取决于进样量的重现性和操作条件的稳定性。
2、本实验采用的定量分析方法是什么？
答：峰面积百分比法。
3、为什么本实验采用纯甲醇冲洗色谱柱？
答：一方面为冲掉流动相中的水溶性杂质，这些杂质可能来源于合成过程中的副产物，杂质的存在会损害色谱柱；另一方面防止纯水破坏色谱柱。
4、查阅高效液相色谱的分类以及检测器的种类？
答：（1）高效液相色谱可依据溶质（样品）在固定相和流动相的分离过程的物理化学原理分类，也可按照溶质在色谱柱中的洗脱动力学过程分类。
按照溶质在两相分离过程的物理化学原理分类，可分为吸附色谱、分配色谱、离子色谱、体积排阻色谱以及亲和色谱等。
按照溶质在色谱柱中的洗脱动力学过程，可分为洗脱法(淋洗法)、前沿法和置换法。
（2）高效液相色谱仪中的常用检测器为紫外吸收检测器（UVD）、折光指数检测器（RID）、电导检测器（ECD）和荧光检测器（FLD）。
按照检测对象分类可分为整体性质检测器和溶质性质检测器。
其中，折光指数检测器（RID）及电导检测器（ECD）属于整体性质检测器；紫外吸收检测器（UVD）及荧光检测器（FLD）属于溶质性质检测器。
按照适用性分类则可分为选择性检测器和通用型检测器。
选择性检测器包括UVD、FLD及ECD等，RID则属于通用型检测器。