最新常用抗凝剂的配制和使用
常用抗凝剂的配制及用法
常用抗凝剂的配制及用法 Prepared on 22 November 2020在医学实验中常需动物的全身抗凝，采出的全血或血浆有的也需加入适当的抗凝剂抗凝。
对抗凝剂的要求是：用量少、溶解度大、不带进干扰实验的杂质。
一、肝素（1）肝素抗凝作用原理肝素的抗凝作用很强,作死亡复苏等实验时,常用它作动物全身抗凝剂，肝素的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力，阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用，从而使血液不发生凝固。
（2）配制和用量纯的肝素10mg能抗凝65~125 ml血液(按lmg等于125U，10~20U能抗1 ml血液计)。
但由于肝素制剂的纯度高低以及其保存时间长短不等，因而其抗凝效果也不相同。
一般可配成1％肝素生理盐溶液，用时取0．1毫升于试管内，100℃烘干，每管能抗凝5～10ml血液。
也可将抽血注射器用配好肝素湿润一下管壁，直接抽血至注射器内而使血液不凝。
在动物实验作全身抗凝时，一般剂量为：大白鼠2．5～3．0mg/200～300g体质量，兔10mg ／kg体质量，狗5～10mg／kg体质量。
肝素可改变蛋白质等电点，因此当用盐析法分离蛋白质作蛋白质各部分的测定时，不可采用肝素。
市售的肝素钠溶液每毫升含肝素12500U，相当于100mg。
二、草酸盐合剂（1）原理草酸胺能使血细胞略为膨大，而草酸钾能使血细胞微缩小，因此草酸铵与草酸钾按3：2比例配置，可使血细胞体积保持不变；加福尔马林则能防止微生物在血中繁殖。
此抗凝剂最适于作红细胞比积测定。
（2）配制方法及用量草酸铵1．2g、草酸钾0．8g、福尔马林1．0ml、蒸馏水加至100ml每毫升血加草酸盐合剂0．1ml(即相当草酸铵1．2mg，草酸钾0．8mg)。
根据取血量将计算好的草酸盐剂量加入玻璃容器内烤干备用。
如取0．5ml于试管，烘干后每管可使5ml血不凝固。
（3）注意事项草酸的作用在于能够沉淀血凝过程中所必需的钙离子，而达到抗凝目的。
用时注意加的量应适中，不能过多，以免妨碍去蛋白质血滤液的制取。
EDTA抗凝剂简易配制法
EDTA抗凝剂简易配制法【关键词】饱和;抗凝;溶解度常用EDTA-Na 2 抗凝剂的浓度是15g/L,每0.4ml干燥后可抗凝5ml血液 [1] 。
EDTA-Na 2 的溶解度较大,22℃时可达11.1克,其有效抗凝浓度为1~2mg/ml,通过计算得知100ul(约两滴)饱和溶液可抗凝5~10ml血液,由于EDTA-Na 2 的溶解度受Nac1影响不大,为防止溶血在实践中我们用500毫升生理盐水加56克EDTA-Na 2 配制成饱和溶液,每份标本滴加3~5滴直接使用,取得了令人满意的效果。
1.材料和方法1.1对象:1999年~2007年潍坊市无偿献血者。
1.2试剂:ELISA试剂盒HBsAg购自厦门新创和上海科华公司,抗-HCV购自厦门新创和上海科华公司,抗-HIV购自北京吉比艾和北京万泰公司,TP-ELISA购自北京中生和吉比艾公司,ALT活性试剂盒购自北京中生和浙江东瓯公司。
1.3仪器:TECAN全自动酶免加样器,FAME全自动酶免分析系统。
1.4方法:配制方法将EDTA-Na 2 粉末直接加入到生理盐水瓶内边加边摇匀直到瓶子底部有少许晶体不能再溶解为止,静置稳定片刻后即为EDTA-Na 2 饱和溶液。
本溶液用普通塑料滴管滴加2~3滴即可,当血液沿试管内壁下流时由于冲击作用自动与抗凝剂混合均匀勿需再人为摇匀。
每人留取两份标本,一份用本法抗凝,一份非抗凝,两份标本用同一种试剂和方法检验,阳性者均做双孔复试。
抗-HIV阳性标本是向同一个人的两份等量标本中加入等量抗-HIV阳性对照物制得。
将得到的结果对比分析。
所有操作均按试剂盒说明书和仪器操作规程严格进行。
2.结果(见表1)表1抗凝和非抗凝标本的检验结果比较注:各组阳性标本中均包含10例弱阳性标本。
3.讨论3.1由(上表可看出)抗凝标本和非抗凝标本检验结果完全相符,二者之间无差异。
3.2乙二胺四乙酸盐对血细胞和血小板形态影响很小,适用于一般血液学检查,稍微过量不影响检验结果。
常用抗凝剂的原理及其实际运用
5.用EDTA抗凝血制备的涂片对粒细胞形态 有影响，其影响程度与抗凝血放置时间和 抗凝剂浓度有关。EDTA的使用浓度为1.4～ 1.6g/L血液，迅速制备涂片，粒细胞形态特 征有微小的改变，有时细胞核分叶不见， 细胞肿胀。如果用放置时间较长的血液制 备的涂片可出现细胞浆内颗粒消失，胞浆 和细胞核有空泡，染色质模糊不清。用大 于1.5g/L血液浓度制备的血涂片，粒细胞可 完全变性，对淋巴细胞和单核细胞也有影 响，尤其是血小板，可出现肿胀、破裂而 产生碎片，影响其计数，造成结果偏高。
缺点
肝素具有抗凝血酶作用，不适合做血凝试 验。另外，肝素过量可引起白细胞聚集和 血小板减少，所以不适合做白细胞分类和 血小板计数，更不能用于止血检验。此外， 肝素抗凝血不能用于制作血涂片，因为瑞 士染色后出现深蓝色背景，影响显微镜减 产。肝素抗凝血应于短时间内使用，否则 放置过久血液又可凝固。
草酸盐的抗凝原理
临床应用：制作血液培养基
问题
1.EDTA盐抗凝管，肝素抗凝管，枸橼酸盐用于血
沉测定管和用于凝血功能测定管各试管的管盖的 颜色是什么？
2.枸橼酸钠用于血沉测定时其抗凝浓度是多少？ 与全血的比例是多少？
3.试述临床上测定血细胞比容用什么抗凝？
谢 谢 大 家 ！
草酸盐溶解后解离的草酸根离子与血液中
的钙离子形成草酸钙沉淀，使钙离子失去
凝血功能，阻止凝血过程。常用的草酸盐
抗凝剂有草酸钠，草酸钾和草酸铵。
配制方法及用量
草酸盐合剂：草酸铵1．2g、草酸钾0．8g、福尔 马林1．0ml、蒸馏水加至100ml每毫升血加草酸盐 合剂0．1ml (即相当草酸铵1．2mg，草酸钾 0．8mg)。根据取血量将计算好的草酸盐剂量加入 玻璃容器内烤干备用。如取0．5ml于试管，烘干 后每管可使5ml血不凝固。 草酸钾：取草酸钾10g，加蒸馏水少许使溶解，再 加蒸馏水至100ml。配制成10％水溶液，如每管加 0.1ml则可使5~10ml血不凝。
EDTA.2K抗凝剂
北京雷根生物技术有限公司
EDTA.2K 抗凝剂(10×)
简介：
乙二胺四乙酸二钾(EDTA ·2K ·2H2O ，分子量为404.47)能与血液中的钙离子结合形成螯合物，从而阻止血液凝固。
适用于全血细胞分析，尤其适用于血小板计数，但由于其影响血小板聚集和凝血因子的检测，所以不适用凝血象和血小板功能检查。
本试剂仅适用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 根据实验具体要求操作。
2、 一般情况下应10倍稀释后使用，即0.2ml 的EDTA.2K 抗凝剂(10×)可抗凝1.8ml 血液。
注意事项：
1、注意无菌操作。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
编号 名称 R10128 Storage EDTA.2K 抗凝剂(10×) 100ml RT 使用说明书 1份。
EDTA.2K抗凝剂
北京雷根生物技术有限公司
EDTA.2K 抗凝剂(10×)
简介：
乙二胺四乙酸二钾(EDTA ·2K ·2H2O ，分子量为404.47)能与血液中的钙离子结合形成螯合物，从而阻止血液凝固。
全血细胞分析时，一般1.5mg ～2.2mg 可以抗凝血液。
适用于全血细胞分析，尤其适用于血小板计数，但由于其影响血小板聚集和凝血因子的检测，所以不适用凝血象和血小板功能检查。
本试剂仅适用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 根据实验具体要求操作。
2、 一般情况下应稀释后使用，即EDTA.2K 抗凝剂(10×)可抗凝血液。
注意事项：
1、注意无菌操作。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： 12个月有效。
相关：
编号 名称 R10128 Storage EDTA.2K 抗凝剂(10×) 100ml 4℃ 使用说明书 1份 编号 名称
DC0032 Masson 三色染色液
NH0043 SSC 缓冲液(20×,pH7.0)
NH0053 变性鲑鱼精DNA(10mg/ml)
NR0001 DEPC 处理水(0.1%)
NR0042 RNase A(10mg/ml,DNase free)
PT0013 考马斯亮蓝快速染色液
TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD 比色法)。
常用抗凝剂及其配置法
常用抗凝剂的配制及用法在医学实验中常需动物的全身抗凝，采出的全血或血浆有的也需加入适当的抗凝剂抗凝。
对抗凝剂的要求是：用量少、溶解度大、不带进干扰实验的杂质。
一、肝素（1）肝素抗凝作用原理肝素的抗凝作用很强,作死亡复苏等实验时,常用它作动物全身抗凝剂，肝素的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力，阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用，从而使血液不发生凝固。
（2）配制和用量纯的肝素10mg能抗凝65~125 ml血液(按lmg等于125U，10~20U能抗1 ml 血液计)。
但由于肝素制剂的纯度高低以及其保存时间长短不等，因而其抗凝效果也不相同。
一般可配成1％肝素生理盐溶液，用时取0．1毫升于试管内，100℃烘干，每管能抗凝5～10ml血液。
也可将抽血注射器用配好肝素湿润一下管壁，直接抽血至注射器内而使血液不凝。
在动物实验作全身抗凝时，一般剂量为：大白鼠2．5～3．0mg/200～300g体质量，兔10mg／kg体质量，狗5～10mg／kg体质量。
肝素可改变蛋白质等电点，因此当用盐析法分离蛋白质作蛋白质各部分的测定时，不可采用肝素。
市售的肝素钠溶液每毫升含肝素12500U，相当于100mg。
（3）注意事项做全血DNA提取的时候抗凝剂不能采用肝素！因为肝素是聚合酶链式反应的抑制剂！二、草酸盐合剂（1）原理草酸胺能使血细胞略为膨大，而草酸钾能使血细胞微缩小，因此草酸铵与草酸钾按3：2比例配置，可使血细胞体积保持不变；加福尔马林则能防止微生物在血中繁殖。
此抗凝剂最适于作红细胞比积测定。
（2）配制方法及用量草酸铵1．2g、草酸钾0．8g、福尔马林1．0ml、蒸馏水加至100ml每毫升血加草酸盐合剂0．1ml(即相当草酸铵1．2mg，草酸钾0．8mg)。
根据取血量将计算好的草酸盐剂量加入玻璃容器内烤干备用。
如取0．5ml于试管，烘干后每管可使5ml血不凝固。
（3）注意事项草酸的作用在于能够沉淀血凝过程中所必需的钙离子，而达到抗凝目的。
[解答]生化常用抗凝剂
![[解答]生化常用抗凝剂](https://img.taocdn.com/s3/m/9f9c10d8a0c7aa00b52acfc789eb172ded6399aa.png)
常用抗凝剂阻止血液凝固的原理抗凝----应用化学或物理学的方法，抑制或除去血液中的某些凝血因子以阻止血液凝固的方法。
抗凝剂----能阻止血液凝固的化学试剂。
一、枸橼酸钠【原理】枸橼酸钠（柠檬酸钠）是枸橼酸钠的三钠盐。
它能与血液中的钙离子形成可溶性的螯合物，使Ca2+失去凝血作用，从而阻止血液凝固。
【应用范围】血沉、凝血象、血小板功能检查及血液保养液。
【用量】凝血象: 109mmol/L水溶液,与血液之比为1:9；血沉: 106mmol/L水溶液,与血液之比为1:4。
二、乙二胺四乙酸盐【原理】乙二胺四乙酸（EDTA）盐可与血液中的钙离子结合形成配位化合物，从而阻止血凝。
【应用范围】一般血液学检查和血液粘度测定。
不适于凝血象及血小板功能检查。
【用量】其有效抗凝浓度为1～2mg/ml血液。
血细胞分析仪用EDTA-K2作抗凝剂，用量为EDTA-K2•2H2O 1.5～2.2mg/ml血液。
三、肝素【原理】通过与抗凝血酶Ⅲ结合，增强抗凝血酶的作用，灭活丝氨酸蛋白酶，从而可阻止凝血酶的形成和阻止血小板聚集，阻止血液凝固。
【应用范围】血细胞比容测定、血液粘度测定和多种生化分析。
【用量】通常用肝素的钠盐或钾盐粉剂配成1g/L肝素水溶液。
取0.5ml置小瓶中，37～50℃烘干后，能抗凝5ml血液。
四、草酸盐草酸盐也是常用的抗凝剂，优点是溶解度大，作用原理是溶解后解离的草酸根与标本中的Ca2+形成草酸钙沉淀，使Ca2+失去凝血功能，凝血过程被阻断。
血液采集中用何种抗凝剂1、乙二胺四乙酸（EDTA）EDTA有二钠、二钾和三钾盐。
均可与钙离子结全成螯合物，从而阻止血液Na2C10H14O8N2+CA2+CAC10H12O8N2+2NA++2H+ EDTA盐经1000C烘干，抗凝作用不变，通常配成15g/L水溶液，每瓶0.4ml，干燥后可抗凝5ml血液。
EDTA盐对红、白细胞形态影响很小，根据国际血液学标准公委员会（Internationalcommittee standard of hematology ,ICSH）1993年文件建议，血细胞计数用EDTA二钾作抗凝剂，用量为EDTA-K2。
抗凝剂的使用
几种常用抗凝剂的合理使用应用物理或化学方法，除掉或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，称为抗凝。
能够阻止血液凝固的化学试剂或物质，称为抗凝剂或抗凝物质。
抗凝剂的种类很多，性质各异。
因此，必须根据检验目的恰当选择，才能获得预期效果。
现将我院临床检验常用抗凝剂的种类及使用方法简介如下。
一、枸橼酸钠：枸橼酸钠可与血液中钙离子形成可溶性螯合物从而阻止血液凝固。
常用于临床检验中凝血象的检查，其使用浓度为109mmol/l，例如我实验室APTT、PT的检查，抗凝剂与血液比例为1：9。
也用于血沉的测定，抗凝剂与血液比例为1：4。
二、乙二胺四乙酸盐（EDTA）：EDTA的二钠、二钾和三钾盐，均可与血中钙离子形成螯合物，从而阻止血液凝固。
通常配成15g/l水溶液，用于实验室使用。
EDTA盐对血小板形态和血细胞形态影响很小，因此适用于血液常规检查，特别是血小板计数，但影响血小板聚集和白细胞吞噬功能，故不适于做凝血象检查和血小板功能试验。
此外，此抗凝剂特别适用于红细胞比积测定，室温放置48小时红细胞体积不变。
因此，我实验室EDTA—K2抗凝的全血用于血常规检查。
三、肝素：肝素与抗凝血酶Ⅱ一起，低浓度时抑制凝血因子IXa5、PF3之间的作用，加强抗凝血酶Ⅲ（AT—Ⅲ）灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成，抑制凝血酶的自我催化及抑制因子Ⅹ的作用。
因此，肝素具有抗凝能力强，不影响血细胞体积，不易溶血等优点，是一种较好的抗凝剂。
可用于红细胞计数、血红蛋白测定、红细胞比积测定和多种生化分析，也是抗血栓药物之一。
但过量肝素可引起白细胞聚集和血小板减少，故不适用于白细胞分类和血小板计数，更不能用于凝血象检查。
由于肝素抗凝时间短，久置易失效，价格昂贵，所以凡能使用普通抗凝剂者，一般不用肝素。
如用肝素抗凝的血液，就应在短时间内完成检测。
我实验室血流变检测和血气分析用肝素作为抗凝剂。
四、草酸钠：草酸钠可与血中钙离子生成草酸钙沉淀，从而阻止血液凝固。
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常用抗凝剂的配制及用法
在医学实验中常需动物的全身抗凝，采出的全血或血浆有的也需加入适当的抗凝剂抗凝。
对抗凝剂的要求是：用量少、溶解度大、不带进干扰实验的杂质。
一、肝素
（1）肝素抗凝作用原理
肝素的抗凝作用很强,作死亡复苏等实验时,常用它作动物全身抗凝剂，肝素的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力，阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用，从而使血液不发生凝固。
注意事项：做全血DNA提取的时候抗凝剂不能采用肝素！因为肝素是聚合酶链式反应的抑制剂！
（2）配制和用量
纯的肝素10mg能抗凝65~125 ml血液(按lmg等于125U，10~20U能抗1 ml血液计)。
但由于肝素制剂的纯度高低以及其保存时间长短不等，因而其抗凝效果也不相同。
一般可配成1％肝素生理盐溶液，用时取0．1毫升于试管内，100℃烘干，每管能抗凝5～10ml血液。
也可将抽血注射器用配好肝素湿润一下管壁，直接抽血至注射器内而使血液不凝。
在动物实验作全身抗凝时，一般剂量为：大白鼠2．5～3．0mg/200～300g体质量，兔10mg／kg体质量，狗5～10mg／kg 体质量。
肝素可改变蛋白质等电点，因此当用盐析法分离蛋白质作蛋白质各部分的测定时，不可采用肝素。
市售的肝素钠溶液每毫升含肝素12500U，相当于100mg。
二、草酸盐合剂
（1）原理
草酸胺能使血细胞略为膨大，而草酸钾能使血细胞微缩小，因此草酸铵与草酸钾按3：2比例配置，可使血细胞体积保持不变；加福尔马林则能防止微生物在血中繁殖。
此抗凝剂最适于作红细胞比积测定。
（2）配制方法及用量
草酸铵1．2g、草酸钾0．8g、福尔马林1．0ml、蒸馏水加至100ml每毫升血加草酸盐合剂0．1ml(即相当草酸铵1．2mg，草酸钾0．8mg)。
根据取血量将计算好的草酸盐剂量加入玻璃容器内烤干备用。
如取0．5ml于试管，烘干后每管可使5ml血不凝固。
（3）注意事项
草酸的作用在于能够沉淀血凝过程中所必需的钙离子，而达到抗凝目的。
用时注意加的量应适中，不能过多，以免妨碍去蛋白质血滤液的制取。
不适用于血液内钙或钾的测定，也不能用于血液非蛋白氮测定。
三、枸櫞酸钠
常配成3～5%水溶液。
也可直接加粉剂，每毫升血加3～5mg，即可达到抗凝目的。
枸櫞酸钠可使钙失去活性，防止凝血。
但其抗凝作用较差，碱性较强，不宜作化学检验之用。
仅可用于红细胞沉降速度测定。
急性血压测定实验所用枸櫞酸钠为5～6％溶液。
四、草酸钾
（一）原理和注意事项
草酸钾为最常用的抗凝剂。
其与血液混合后可迅速与血液中的钙离子结合，形成不溶解的草酸钙，使血液不凝固。
常用于非蛋白氮测定，但不适用于测定钾和钙。
草酸盐能抑制乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶和淀粉酶的活性，故应注意。
（二）配制及使用方法
取草酸钾10g，加蒸馏水少许使溶解，再加蒸馏水至100ml。
配制成10％水溶液，如每管加0.1ml则可使5~10ml血不凝。
一般如作微量检验，用血量较少，可配制成2％溶液，如每管加0．1ml 可使1~2ml血液不凝。
五、乙二胺四乙酸二钠盐（EDTA）
EDTA对血液中钙离子有很大的亲和力，能与钙离子络合而使血液抗凝。
每0.8mg可抗凝1ml 血液。
除不能用于血浆中钙、钠及含氮物质之测定外，适用于多种抗凝。
六、（酸性）柠檬酸葡萄糖溶液B（ACD）（用于新鲜抽提或者是冻存的血样品，实验室常用）
柠檬酸钠：1.32%（M/V）
柠檬酸：0.48%（M/V）
葡萄糖：1.47%（M/V）
ACD抗凝剂为：柠檬酸0.48g、柠檬酸钠1.32g、葡萄糖1.47g，加水至100ml，灭菌后备用
一般20ML新鲜血液中加入3.5ML ACD抗凝剂。
比例依次类推！！
血液可以在0度条件下保存数天，或者是零下70度条件下无限期保存！
注意事项：做全血DNA提取的时候抗凝剂不能采用肝素！因为肝素是聚合酶链式反应的抑制剂！
从全血中制备基因组DNA，ACD做为抗凝剂要优于EDTA，因为他更加能保存高分子质量的DNA，然而，血样常常被收集于用定量EDTA作为抗凝剂的小管中。
在大多数美国的医院中，收集血样的小管均用颜色标明是否含有抗凝剂，紫色顶管盖的小管一般含有抗凝剂，通常是EDTA的干粉。
黄色顶盖的小管不含抗凝剂。
在分子克隆实验中，前者一般用于收集血样用于制备基因组的DNA，后者用于收集血样作为用EB病毒的永生化淋巴细胞的来源。
这些永生化的细胞可以作为可更新的来源来制备大量的DNA 以备后用，如进行遗传学的研究等等！
阿氏液配方：
葡萄糖 2.05克柠檬酸钠 0.8克柠檬酸 0.055克氯化钠 0.42克
加蒸馏水至100毫升，调PH值至6.1，115度，10分钟灭菌。
4度保存。
PBS 1L配方pH7.4：
磷酸二氢钾(KH2PO4)：0.28g，磷酸氢二钠(Na2HPO4)：1.15g，
氯化钠(NaCl)：8g，加去离子水定容到1L。