葡萄糖酸钙含量测定
定量核磁共振波谱法测定葡萄糖酸钙原料药的绝对含量
中国医药生物技术2020年2月第15卷第1期Chin Med Biotechnol, February 2020, V ol. 15, No. 1 71 DOI: 10.3969/j.issn.1673-713X.2020.01.014·技术与方法·定量核磁共振波谱法测定葡萄糖酸钙原料药的绝对含量李怡然，朱明慧，朱志玲，姚静，山广志葡萄糖酸钙作为临床常用药物，主要起降低毛细血管渗透性的作用。
适用于过敏性皮肤病，如荨麻疹、湿疹、皮肤瘙痒症、接触性皮炎等。
作为产后出血的辅助用药使用，能够减少心血管不良反应[1-3]，同时也是一种膳食补充剂，用于儿童、孕妇、老年人钙的补充[4]。
葡萄糖酸钙的制备方法有电解氧化法、溴化法、金属催化合成法、发酵法等。
发酵法因工艺稳定，成本低廉，被多数厂家应用。
发酵法是以黑曲霉为生产菌种，经菌种逐级培养，发酵代谢的酶将葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，再经碳酸钙中和精制而成[5]。
《中国药典》2015 年版采用EDTA 滴定法测定葡萄糖酸钙制剂中钙的含量[6]，对葡萄糖酸基仅采用鉴别反应进行考察，未对其含量进行控制。
有文献采用HPLC 法[7]或离子色谱法[8]测定葡萄糖酸钙的含量，但由于葡萄糖酸在水溶液中存在糖酸和内酯的转化，容易造成测量误差。
自1963 年qNMR 法[9]应用于定量分析以来，其应用范围日益广泛，各国药典均收载了该方法。
qNMR 技术的优势在于不需要对照品，仅以已知含量的核磁对照品作为内标，扫描待测物的共振峰面积直接计算H 的个数，对化合物进行绝对含量的测定[10]，适用于无对照品原料药的首次定量。
本文采用qNMR 技术，利用无水氘代溶剂，排除了水分和残留溶剂及其他无机物干扰，准确测定了葡萄糖酸钙原料的绝对含量。
1 材料与方法1.1 仪器与试剂Bruker Avance III HD 600 MHz 核磁共振波谱仪（BBO 探头）购自德国布鲁克公司；Mettler Toledo MS105 电子分析天平购自瑞士梅特勒-托利多公司；氘代DMSO（批号：PR-28072/07206DM1）购自美国Cambridge Isotope Laboratories 公司；葡萄糖酸钙（批号：LC80Q34）购自北京百灵威科技有限公司；顺丁烯二酸（批号：BCBM8127V，NMR对照品级，纯度：99.94%）购自美国Sigma-Aldrich 公司。
(完整版)葡萄糖酸钙检验操作规程
1 感官要求取10g被测样品，置于洁净的白瓷盘中，用肉眼在自然光线下观察其色泽、组织形态、杂质，品尝其滋味，嗅其气味。
2一般规定本标准所用试剂除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和 GB/T 6682—2008中规定的三级水。
试验方法中所需标准滴定溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T 601、GB/T 603之规定制备。
3 鉴别试验3.1 试剂和材料3.1.1 冰乙酸。
3.1.2 苯肼：临用时蒸馏。
3.2 鉴别试验3.2.1 钙盐鉴别3.2.1.1 方法原理钙盐与草酸铵试液反应，生成白色沉淀，沉淀在乙酸中不溶解，但可溶解于稀盐酸。
3.2.1.2 分析步骤取约 1.0 g实验室样品，精确至 0.01 g，加 40 mL水溶解，必要时加热使溶解，取此溶液按《中华人民共和国药典》 2005年版二部附录Ⅲ一般鉴别试验钙盐项下（ 2），应显钙盐的鉴别反应。
3.2.2 葡萄糖的鉴别 3.2.2.1 方法原理样品在乙酸介质中，与苯肼共热，生成黄色葡萄糖酰苯肼结晶。
3.2.2.2 分析步骤取约 0.5 g 实验室样品，精确至 0.01 g ，置 10 mL 试管中，加 5 mL 水，溶解（必要时加热），加 0.7 mL 冰乙酸和 1 mL 苯肼，在水浴上加热 30min ，放至室温，用玻璃棒摩擦试管内壁，则析出黄色的结晶。
3.2.3 红外光吸收图谱鉴别采用溴化钾压片法测定，实验室样品的红外光吸收图谱应与对照的图谱《药品红外光谱集》465图）一致，对照图谱见附录 B 。
4 葡萄糖酸钙的测定 4.1 方法提要以钙紫红素为指示剂，用乙二胺四乙酸二钠标准滴定液滴定样品水溶液，根据乙二胺四乙酸二钠标准滴定液的用量，计算以 C12H22CaO14·H2O 计的葡萄糖酸钙的含量。
4.2 试剂与材料4.2.1 钙紫红素指示剂。
4.2.2 氢氧化钠溶液：40g/L 。
4.2.3 乙二胺四乙酸二钠标准滴定液：c(EDTA)=0.05mol/L 。
葡萄糖酸钙含量的测定
mL 的 EDTA 标 准 溶
第 2 份:
第 3 份:
填写下表：
编号
1
EDTA 溶液的浓度 cEDTA（mol/L）
EDTA 溶液浓度的平均值 cEDTA（mol/L） 相对偏差(%)
2.葡萄糖酸钙含 量计算 第Ⅰ份:
第Ⅱ份:
第Ⅲ份:
填写下表：
样品编号
Ⅰ
葡萄糖酸钙含量（ g/mL）
葡萄糖酸钙含量平均值（ g/mL）
相对偏差(%)
三、实训结果讨论 分析：
2
3
Ⅱ
Ⅲ
四、思考题： 1、标定 EDTA 标准溶液的基准物有哪些?选择时应注意什么？
2、用铬黑 T 做指示剂，为什么要控制在 pH≈10?
锌标准溶液的浓度（mol/L） 锌标准溶液的体积（mL）
滴定消耗 EDTA 溶液的体积（mL）
4.葡 萄 糖 酸 钙 含 量 的 测 定
样品的体积（mL） 滴定样品消耗 EDTA 溶液的体积（mL）
二、实训结果计算 ： 1 . EDTA 标准溶液的浓 度
g， 加入
mL1+1 盐酸，用
定容，
g， 配 成 1
贺州学院
项 目 实 训（验）报 告
Training Item Report
评
语
Comment
姓名 Name 项目编号 Item No. 课程名称 Course
成绩 Score
教师签字
日期
Signature of Tutor____________＿＿Date:_______
学时 Time
学号
Student No.
14
项目名称
Item
分析化学
班级 Class
葡萄糖酸钙含量的测定
葡萄糖酸钙含量的测定实验目的：1.强化滴定法的操作2.强化分析天平，容量瓶移液管，吸量管，滴定管 ，锥形瓶 ，溶液配制及转移容量仪器的洗涤干燥，滴定分析操作实验原理：)/(1000)()()(22L mmol V EDTA V EDTA C ca C ⨯⨯=+水样1，EDTA 是常用的螯合滴定剂，可滴定多种金属离子，与金属离子按1:1的比例结合2.在待测液中加入钙红指示剂（蓝色） 它与钙离子配位呈红色3.滴定时，EDTA 先与游离钙离子配位，然后夺取已和指示剂配位的钙离子，从而使指示剂被释放出来，达终点时，溶液由红色变为蓝色，此时可根据EDTA 标准溶液消耗量计算出钙离子的含量仪器与试剂:仪器：分析天平，100ml 容量瓶，5ml 吸量管 滴定管，锥形瓶 ，烧杯，滴定台，药勺,洗耳球，玻璃棒，胶头滴管试剂:待测葡萄糖酸钙粉末，钙红指示剂，蒸馏水，0.05 mol/L 的EDTA 标准溶液实验步骤:1，用分析天平称量3g葡萄糖酸钙粉末2.将葡萄糖酸钙粉末溶于10ml50～60℃的蒸馏水中3. 将葡萄糖酸钙溶液转移到100ml容量瓶中，用胶头滴管加入蒸馏水至刻度线4.从容量瓶中取出部分溶液到烧杯中，用吸量管吸取20.00ml溶液到锥形瓶中，0.05mol/L的EDTA标准溶液加入到滴定管中，记下初始读数，6.开始滴定，当溶液由红色变成蓝色时停止滴定，记下此时读数，7.再重复滴定两次数据记录与结果分析日期：温度：结实验编号 1 2 3 葡萄糖酸钙溶液V(EDTA)/mlV初(EDTA)/ml平均(EFTA)/ml相对平均偏差 /％葡萄糖酸钙含量/％讨论。
电位滴定法测定葡萄糖酸钙的含量
中国动物保健2022.08实践案例电位滴定法测定葡萄糖酸钙的含量王丽1，王小艳1，李娜1，袁聪1，张秋双1，张跃京1，臧合英1，邱富娜1，赵留涛2（1.河南省兽药饲料监察所郑州450015；2.郑州大学分析测试科技有限公司郑州450000）研究建立了混合型饲料添加剂中液态葡萄糖酸钙含量测定的电位滴定法，以改进混合型饲料添加剂中液态葡萄糖酸钙含量测定的方法。
通过对方法的准确度、精密度、耐用性、专属性试验的考察，实验结果表明该方法符合GB/T 27417-2017《合格评定化学分析方法确认和验证指南》要求，具有快速简便、定量准确的特点，可以用来检测混合型饲料添加剂中液态葡萄糖酸钙含量测定。
糖酸钙；电位滴定法；饲料添加剂混合型饲料添加剂中液态葡萄糖酸钙含量测定，目前检测依据GB 15571—2010《食品安全国家标准食品添加剂葡萄糖酸钙中葡萄糖酸钙的含量测定方法》，测定中采用滴定方法，滴定的终点判断标准为紫色转变为纯蓝色。
该判断主观差异大。
本研究参考了部分文献[1-3]，采用电位滴定法测定葡萄糖酸钙的含量，实验结果表明其方法简便、准确可靠，重现性好，能够有效的控制混合型饲料添加剂中液态葡萄糖酸钙含量。
1材料与方法1.1仪器与试药1.1.1仪器设备全自动电位滴定仪：万通809型，钙指示电极，银氯化银参比电极；MILIPORE 超纯水处理器；METTLER XP205电子天平。
1.1.2试药试剂葡萄糖酸钙标准品含量：99.5%；乙二胺四乙酸二钠标准滴定溶液（0.05058mol/L ）；氢氧化钠溶液：40g/L ；试验中使用的水为超纯水，试剂均为分析纯。
样品为饲料加工厂提供的混合型饲料添加剂液态葡萄糖酸钙。
1.2方法与结果1.2.1分析步骤1）供试品溶液的制备。
称取样品2g ，精密称定，加水100mL ，使溶解，加15mL 氢氧化钠溶液，用乙二胺四乙酸二钠标准溶液滴定液滴定。
每1mL 的乙二胺四乙酸二钠滴定液相当于22.42mg 的C 12H 22CaO 14·H 2O 。
葡萄糖酸钙含量测定
葡萄糖酸钙含量测定
葡萄糖酸钙含量测定是一种常用的实验方法，用于检测物质中葡萄糖酸钙的含量。
通常采用考夫曼-福特试剂盒进行测定。
①准备工作：将试剂盒中的T1液和T2液按比例混合，形成反应液。
②样品准备：把样品加入反应液中，并用搅拌器混合，然后在室温下放置30分钟，以得到一个红色的悬液。
③测定：使用光度计测定悬液的吸光度，并凭此数值计算出葡萄糖酸钙的含量。
④结果处理：将计算得到的葡萄糖酸钙含量与标准值进行比较，以判断样品中葡萄糖酸钙的含量是否符合要求。
葡萄糖酸钙含量的测定思考题
葡萄糖酸钙含量的测定思考题
1、传统的滴定法：葡萄糖酸钙可以与适当的指示剂配合使用滴定试剂进行滴定，通过观察滴定终点的变化来确定含量。
思考如何选择合适的滴定试剂和指示剂，并确定滴定过程的适当条件。
2、分光光度法：葡萄糖酸钙溶液的吸光度可以在特定波长下测量，可以利用标准曲线来计算含量。
思考如何选择合适的测量波长和建立准确的标准曲线。
3、离子色谱法：通过离子色谱仪分析样品中的葡萄糖酸钙离子。
思考如何选择合适的色谱柱和流动相，并优化分析条件以实现准确的测定。
4、原子吸收光谱法：使用原子吸收光谱仪测量样品中钙离子的浓度，从而计算葡萄糖酸钙的含量。
思考如何选择合适的工作波长和优化样品的制备条件。
5、红外光谱法：通过红外光谱仪对葡萄糖酸钙样品进行分析。
思考如何解读红外光谱图并确定葡萄糖酸钙的含量。
试验七葡萄糖酸钙含量的测定
实验七葡萄糖酸钙含量的测定一、实训目的1．掌握 EDTA 滴定液的配制和标定方法。
2．了解酸度对配位平衡的影响，熟悉控制溶液酸度的方法。
3．掌握葡萄糖酸钙口服溶液的含量测定方法。
4．熟悉金属指示剂的变色原理。
二、实训原理葡萄糖酸钙口服溶液为D-葡萄糖酸钙盐－水合物(C12H22CaO14?H2O), 故可用配位滴定法滴定其中的钙离子，将供试品加水微热使溶解，加氢氧化钠试液与钙紫红素指示剂后用乙二胺四乙酸二钠滴定液滴定至溶液由紫色转变为纯蓝色即可 :滴定前： Ca2+＋HIn 2－CaIn－＋ H+纯蓝色酒红色终点前： Ca2+＋H2Y 2－CaY2－＋2H+终点时： CaIn－＋H22－CaY 2－＋ HIn2－＋H+Y酒红色纯蓝色三、仪器及试剂仪器：酸式滴定管〔50ml〕、容量瓶〔250ml〕、烧杯〔1000ml〕、试剂瓶〔1000ml〕、锥形瓶〔 250ml〕、移液管〔 25ml〕、托盘天平、分析天平或电子天平。
试剂：乙二胺四乙酸二钠盐〔EDTA-2Na·2H2O， A·R〕、ZnO〔基准试剂〕、铬黑 T 指示剂、钙紫红素指示剂、稀盐酸、甲基红指示剂、氨试液、氨-氯化铵缓冲液〔 pH =10〕，葡萄糖酸钙口服溶液〔规格：10%〕。
四、实训内容〔一〕 EDTA 滴定液的配制和标定称取 EDTA 二钠 19g，加水适量使溶解，加水至 1000ml〔浓度约为 0.05mol/L 〕，摇匀待标定。
取于 800℃灼烧至恒重的基准氧化锌，精密称定，加稀盐酸30ml 使溶解，定容于 250 ml 容量瓶中，用移液管精密吸取 25ml 置锥形瓶中，加0.025%甲基红的乙醇溶液 1 滴，滴加氨试液至溶液显微黄色，加水25ml 与氨 -氯化铵缓冲液〔〕10ml ，再加铬黑 T 指示剂少量，用本液滴定至溶液由紫色变为纯蓝色，并将滴定的结果用空白试验较正，平行测定 3 次取平均值。
每1ml EDTA 滴定液〔 0.05000 mol/L〕相当于 4.069 mg 的氧化锌。
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葡萄糖酸钙含量测定
【实验目的】
1、熟悉掌握配位滴定法。
2、定量测出葡萄糖酸钙含量。
【实验原理】
葡萄糖酸钙含有钙元素，可凭借配位滴定法测定钙元素含量来间接测定葡萄糖酸钙含量。
取适量样品溶解，加NH3-NH4Cl缓冲溶液与EBT(铬黑T)指示剂，用EDTA滴定液滴定至溶液由紫红色转变为纯蓝色。
此时读出EDTA滴定液使用量，计算可得样品中钙元素的含量，由此则可以计算出葡萄糖酸钙的质量，与取用样品质量对比，则可得出样品的葡萄糖酸钙含量。
反应式如下：
Ca2++H2In-→CaIn-（红色）+2H+
Ca2++H2Y2-→CaY2-+2H+
H2Y2-+CaIn-→H2In-(蓝色)+CaY2-
【试剂与仪器】
试剂：蒸馏水、0.05mol/L EDTA滴定液、葡萄糖酸钙样品、0.100mol/LNH3-NH4Cl缓冲溶液、EBT(铬黑T)指示剂。
仪器：电子天平，200ml锥形瓶若干、三脚架、石棉网、酒精灯、25ml吸量管、酸碱两用滴定管、
100ml量筒。
【实验步骤】
1.用电子天平称取葡萄糖酸钙样品约0.500g，并记录准确称量数据为M。
2.加蒸馏水至100.0ml，微温，轻摇，使之溶解。
3.加0.100mol/L氢氧化钠试液15ml与钙紫红素指示剂约0.1g。
4.取装有0.05mol/LEDTA滴定液的滴定至溶液由紫色转变为纯蓝色，记录消耗EDTA滴定液的体积V1
（ml）。
计算Ca2+含量：c(Ca2+)=c（EDTA）×V1(EDTA)／V（水样）×1000(mmol·L-1)
5.计算得样品中Ca2+含量后可计算样品中的葡萄糖酸钙含量，记为m，计算百分含量，即m/M
6.重复测定4~6次，求均值。
【实验数据与表格】
日期：温度：相对湿度：
【思考题】
1.配位滴定中为什么要加入缓冲溶液？
2.通常使用乙二胺四乙酸二钠盐配制EDTA标准溶液，为什么不用乙二胺四乙酸？
3.在配位滴定中，指示剂应具备什么条件？
4.如果只用铬黑T指示剂，能否测定Ca2+的含量？如何测定？
5.配位滴定法与酸碱滴定法相比，有哪些不同点？操作当中应注意哪些问题？
【参考文献】
[1]北京师范大学无机化学教研室编.无机化学实验.第3版.北京：高等教育出版社，2001
[2]李雪华.基础化学实验.北京：人民卫生出版社，2002
[3]唐中珅，陈清原.医用化学实验.北京：科学出版社，2010
[4]张枫，房晨婕.医用化学基础.北京：中国协和医科大学出版社，2010。