对流免疫电泳(免疫学实验)
临床免疫学检验 名词解释整理
抗原抗体反应：是指抗原与相应抗体在体内或体外发生的特异性结合反应。
抗原抗体间的结合力涉及静电引力、范德华力、氢键和疏水作用力，其中疏水作用力最强，它是在水溶液中两个疏水基团相互接触，由于对水分子的排斥而趋向聚集的力。
亲和性（affinity）：是指抗体分子上一个抗原结合点与一个相应抗原表位（AD）之间的结合强度，取决于两者空间结构的互补程度。
亲合力（avidity）：是指一个完整抗体分子的抗原结合部位与若干相应抗原表位之间的结合强度，它与亲和性、抗体的结合价、抗原的有效AD数目有关。
抗原抗体反应的特点：特异性、可逆性、比例性、阶段性。
带现象（zone phenomenon）：一种抗原-抗体反应的现象。
在凝集反应或沉淀反应中，由于抗体过剩或抗原过剩，抗原与抗体结合但不能形成大的复合物，从而不出现肉眼可见的反应现象。
抗体过量称为前带，抗原过量称为后带。
免疫原（immunogen）：是指能诱导机体免疫系统产生特异性抗体或致敏淋巴细胞的抗原。
免疫佐剂（immuno adjustvant）：简称佐剂，是指某些预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的物质。
半抗原（hapten）：又称不完全抗原，是指仅具有与抗体结合的能力(抗原性)，而单独不能诱导抗体产生（无免疫原性）的物质。
当半抗原与蛋白质载体结合后即可成为完全抗原。
载体（carrier）：结合后能给予半抗原以免疫原性的物质。
载体效应：初次免疫与再次免疫时，只有使半抗原结合在同一载体上，才能使机体产生对半抗原的免疫应答，该现象称为~。
单克隆抗体（McAB）：将单个B细胞分离出来，加以增殖形成一个克隆群落，该B细胞克隆产生的针对单一表位、结构相同、功能均一的抗体，即~。
多克隆抗体（PcAb）：天然抗原分子中常含多种不同抗原特异性的抗原表位，以该抗原物质刺激机体免疫系统，体内多个B细胞克隆被激活，产生含有针对不同抗原表位的免疫球蛋白，即~基因工程抗体（GEAb）：是利用DNA重组及蛋白工程技术，从基因水平对编码抗体的基因进行改造和装配，经导入适当的受体细胞后重新表达的抗体。
实验素材
一、ABO血型的测定（直接凝集玻片法)（一)实验目的了解ABO血型鉴定的原理；掌握玻片凝集试验的方法。
（二)实验原理已发现人类红细胞有20多种血型系统，其中ABO血型系统在输血中最为重要，必须血型相合才能输血。
血型鉴定是根据人类红细胞表面有不同的血型抗原，故用已知的抗A、抗B单克隆抗体作直接玻片凝集试验，可测定血型。
血型RBC表面抗原血清中存在的天然抗体A B AB OABA,B无A,无B抗B抗A无抗A,无抗B抗A, 抗B（三)实验材料1、诊断用抗A及抗B单克隆抗体试剂各一支。
2、玻片、无菌刺血针、消毒用碘酒、酒精、无菌棉签、牙签，记号笔等（四)实验方法1、取洁净玻片一张用蜡笔分成两半，分别标记A、B，然后A侧滴一滴抗A 抗体（蓝色)，B 侧滴一滴抗B抗体（黄色)2、被检者耳垂或手指用碘酒消毒，酒精脱碘并凉干后，用刺血针刺血。
3、用牙签刮取两滴血液充分与两种抗体混匀，即可观察结果（五)实验结果血型鉴定结果血型抗A抗体抗B抗体A型B型AB型O型+-+--++-（六)注意事项1、A、B两侧不能混，否则结果不可靠。
2、无菌观念：消毒按一定方向，以一点为中心，由内向外；注意酒精脱碘，否则损伤皮肤、色素沉着；酒精脱碘后，要晾干，否则进针会有烧灼疼痛；二、试管直接凝集（直接凝集试管法)（一)实验目的了解试管凝集的反应；掌握倍比稀释的方法和血清凝集效价的定义。
（二)实验原理试管法是一种定量试验的经典方法。
可用已知抗原来检测受检血清中有无某抗体及抗体的含量。
用来协助临床诊断或供流行病学调查研究。
用已知的定量抗原与一系列倍比稀释的待检血清，在试管内混合，经一定的时间保温静止后，出现凝集，通过观察各管的凝集程度，可定量检测血清中的抗体水平。
通常以产生明显凝集现象的最高稀释度作为血清中抗体的效价，亦称为滴度（三)实验材料1、抗原：灭活伤寒杆菌“H”菌液一管2、抗体：伤寒杆菌H免疫学清3、生理盐水4、试管、吸管、试管架、水浴箱等（四)实验方法1、取试管7支，编号1-7,每加生理盐水0.5ml。
免疫学实验 对流免疫电泳
1
Ab
2 Ag
3
Ab：甲胎蛋白诊断血清 Ag：1、肝癌病人血清（阳性对照）
2、正常人血清（阴性对照） 3、待测血清
电泳
• 将加好样品的板置于电泳槽上，抗原孔置 负极端，抗体孔置正极端。琼脂板两端分 别用四层纱布与0.05mol/L、PH8.6的缓 冲液相连，接通电源。电流以玻片的宽度 计算，为4mA/cm；电压以玻片的长度计 算，为6V/cm；通电30-60min后，切断 电源，观察结果
实验二 对流免疫电泳
一、实验目的 1.掌握对流免疫电泳的原理。 2.掌握对流免疫电泳检测待测抗原的方法。
二、实验原理
• 对流免疫电泳实质上是定向加速的双向免 疫扩散技术。
• 在pH8.6的缓冲液中，蛋白质抗原带负电 荷向正极泳动；而抗体大部分属于Ig，由 于分子量大，暴露的极性基团较少，在离 子琼脂中泳动缓慢，同时受电渗作用的影 响向负极泳动，在抗原抗体相遇的最适比 例处形成乳白色沉淀线。
四、实验步骤
• 琼脂糖凝胶板的制备 • 打孔、加样 • 电泳 • 结果观察 • 影响结果的因素
制板、加样、打孔
• 用吸管吸取4ml加热溶化的琼脂铺在载玻片 上,待凝。
• 打孔:用打孔器在琼脂板上打孔(孔距4mm), 如图。
• 加样:将待测抗原样品约10ul加在阴极侧孔 内,抗血清加在阳极侧,加样时应加满小孔但 不能溢出
五、结果和讨论
• 将玻片对着光，先观察AFP阳性血清孔与 抗体孔之间的白色沉淀线，然后再观察待 检血清孔与抗体孔之间是否也有沉淀线出 现，如有沉淀线，则表示AFP试验阳性， 否则AFP试验为阴性。如沉淀线不清晰， 可把琼脂板放在湿盒中37℃数小时或置电 泳槽过夜再观察。
甲胎蛋白检测意义：
对流免疫电泳实验报告
对流免疫电泳实验报告对流免疫电泳实验报告引言：对流免疫电泳是一种常用于生物医学领域的实验技术，它结合了电泳和免疫学的原理，能够用于检测和分离复杂的生物样品中的蛋白质。
本实验旨在通过对流免疫电泳技术的应用，探索其在蛋白质分析中的潜力和应用价值。
实验材料与方法：1. 样品制备：从细胞培养物中收集蛋白质样品，并通过离心将细胞碎片去除，得到纯净的蛋白质溶液。
2. 凝胶制备：制备聚丙烯酰胺凝胶，根据所需分辨率选择合适的凝胶浓度。
3. 样品加载：将蛋白质样品加载到凝胶孔中，注意控制样品的加载量和均匀性。
4. 电泳条件：设置适当的电压和电流，进行电泳分离。
5. 免疫检测：将蛋白质迁移至膜上，进行免疫染色或免疫印迹分析。
实验结果与讨论：通过对流免疫电泳实验，我们成功地分离和检测了目标蛋白质。
在电泳过程中，蛋白质根据其分子量的大小迁移至凝胶不同位置，形成清晰的蛋白质条带。
通过免疫染色或免疫印迹，我们能够特异性地检测目标蛋白质，并确定其分子量和相对丰度。
对流免疫电泳的优势在于其高分辨率和高灵敏度。
凝胶孔的尺寸可以根据需要进行调整，以实现对不同大小蛋白质的分离。
同时，免疫检测使得我们能够选择性地检测特定蛋白质，而不受其他蛋白质的干扰。
这为我们研究蛋白质的功能和相互作用提供了有力的工具。
在实验中，我们还发现凝胶浓度对蛋白质分离的影响。
较低浓度的凝胶可分离较大分子量的蛋白质，而较高浓度的凝胶则适用于分离较小分子量的蛋白质。
这一发现提示我们在实验设计中需要根据目标蛋白质的特性选择合适的凝胶浓度，以获得最佳的分离效果。
除了分离和检测蛋白质，对流免疫电泳还可以用于研究蛋白质的修饰和变异。
通过将不同样品加载到同一凝胶中，我们可以比较它们之间的蛋白质差异，进而探索这些差异对蛋白质功能和疾病发展的影响。
这为我们深入了解蛋白质的多样性和复杂性提供了重要的手段。
然而，对流免疫电泳也存在一些局限性。
首先，样品的制备和加载过程可能引入一定的误差，影响实验结果的准确性。
对流免疫电泳的原理及应用
对流免疫电泳的原理及应用1. 引言对流免疫电泳是一种基于免疫反应原理的电泳技术，能够高效、高灵敏地检测特定的抗原或抗体。
本文将介绍对流免疫电泳的原理和应用。
2. 对流免疫电泳的原理对流免疫电泳基于电泳技术和免疫学原理，通过在电泳过程中，利用特定抗原与抗体间的免疫反应产生的沉淀来检测目标物质的存在与数量。
2.1 免疫反应免疫反应是机体对抗原刺激的免疫系统的反应。
在免疫反应中，抗原与抗体结合形成复合物，这种特异性结合是免疫反应的关键步骤。
2.2 电泳技术电泳技术是一种利用电场作用于带电粒子使其在电场中移动的技术。
在电泳过程中，带电粒子会根据其电荷和大小，在电场中产生移动。
2.3 对流免疫电泳原理对流免疫电泳将免疫反应和电泳技术相结合。
首先，将样品中的目标物与标记有荧光物质的抗体结合，形成复合物。
然后，将复合物置于电泳胶中，施加电场。
目标物与标记有荧光物质的抗体复合物会在电场作用下向电泳胶中移动。
在移动过程中，复合物会与其他成分发生免疫反应，形成可视化的沉淀带。
3. 对流免疫电泳的应用3.1 生物医学研究对流免疫电泳广泛应用于生物医学研究领域。
通过对特定抗原或抗体进行检测，可以研究疾病的发生机制，寻找新的诊断标志物以及监测疗效。
3.2 临床诊断对流免疫电泳在临床诊断中也有重要应用。
例如，可以通过对抗体的沉淀带进行定性和定量分析，检测出特定疾病的存在和严重程度，提供临床诊断的参考依据。
3.3 食品安全检测对流免疫电泳可用于食品安全检测。
例如，可以通过对食品中的特定抗原进行检测，及时发现并防止食品中的有害物质对人体健康造成的威胁。
3.4 环境监测对流免疫电泳还可以用于环境监测。
例如，可以检测水体中的污染物，帮助监测水质污染程度，保护环境和人类健康。
4. 结论对流免疫电泳是一种结合了免疫反应和电泳技术的高效、高灵敏的电泳技术。
它在生物医学研究、临床诊断、食品安全检测和环境监测等领域有着广泛应用。
对流免疫电泳的发展对于提高检测的灵敏度和准确性，推动科学研究和保障公众健康具有重要意义。
工作报告之对流免疫电泳实验报告
对流免疫电泳实验报告【篇一：实验十一免疫电泳】免疫电泳技术抗原与抗体的结合在沉淀反应中，呈一定的分子比例。
不同抗原和抗体之间的分子比例是不同的，但只有在分子比例合适时，才出现可见的沉淀。
所以沉淀能否出现并不完全反映抗原和抗体是否存在和发生结合。
抗原结合多个抗体分子，称抗原为多价；抗体一般只能结合两个抗原分子（igm类抗体分子通常可以结合5个抗原分子）的抗原决定法簇，故为二价。
只有在彼此的结合价饱和时，才出现大量的抗原-抗体复合物沉淀。
当抗原与抗体的比例合适时，即二者结合价彼此饱和，就可形成网状结构的大分子抗原-抗体复合物沉淀，称为等价带。
若比例不合适时，抗体或抗原过量，则虽有抗原、抗体的结合，但不能大量形成网状结构的大分子复合物，沉淀量很少，甚至不出现沉淀。
在抗原、抗体数量关系曲线中，抗体过剩区域称为抗体过剩带，抗原过剩区域称为抗原过剩带。
如图1所示，在等价带的反应液中加入过量的抗原或抗体，沉淀复合物就会有部分溶解，甚至全部溶解的现象。
这是由于新加入的抗原或抗体竞争地结合相应的抗体或抗原，使网状大分子结构破坏，形成小分子复合物，致使沉淀出现溶解，沉淀量减少甚至完全消失。
在沉淀反应中，由于抗原过量而不出现沉淀的现象，称为前带现象。
此时不能误认为无沉淀就是无抗原存在，为了检测就必须稀释抗原。
抗体过量时，称为后带现象，同理需要稀释抗体进行检测。
图1的位置抗原与抗体的结合是依赖于两者分子结构的互补性，故其特异性高。
这种结合也是相当稳定的。
在一定条件下（过酸、过碱或浓盐存在下），二者可以分开，即结合是可逆的。
解离后的抗原、抗体的活性一般保持不变。
双向免疫扩散测定法原理双向扩散法(double diffusion)又称琼脂扩散法，是利用琼脂凝胶为介质的一种沉淀反应。
琼脂或琼脂糖凝胶是多孔的网状结构，大分子物质可以自由通过，这种分子的扩散作用可使分别处于两处的抗原和相应的抗体通过扩散相遇，形成抗原-抗体复合物，比例合适时出现沉淀。
TAE缓冲液应用于对流免疫电泳的实验
!"#!$%&$'(')*+&,-./&$01$21(3$&)%)(%(%3' E*)缓冲液应用于对流免疫电泳的实验效果分析张淑莉$4方佳妮)4康宝丽)4王丹炀)4刘欣雨)4高瑞鹏)%&西安医学院医学技术学院检验中心!陕西西安!.%))&%&&西安医学院医学技术学院医学检验技术%/'$班!陕西西安!.%))&%44摘4要 为了研究可用于对流免疫电泳的新型缓冲液来替代传统巴比妥2巴比妥钠缓冲液 本实验分别以巴比妥2巴比妥钠缓冲液 L8[缓冲液为电泳介质 电泳后观察抗原抗体复合物白色沉淀线情况 比较这两种缓冲液的电泳结果基本相当 但L8[缓冲溶液电泳沉淀线更为明显 试剂的安全性较高 实验成本较低 因此开展对流免疫电泳实验 L8[缓冲液完全可以替代巴比妥2巴比妥钠缓冲液关键词 对流免疫电泳 L8[缓冲液 巴比妥2巴比妥钠缓冲液 实验教学中图分类号 ]2(($44文献标识码 844对流免疫电泳*,S D-G B A/::D-S B_B,G A e;S A B F/F"W#[6+是可溶性抗原和抗体在双向免疫扩散的基础上与电泳相结合的定向加速免疫扩散技术#由于电泳技术的采用"使在缓冲液体系中带电的抗原抗体呈定向运动"加快了两者的结合"并且限制了抗原抗体在介质中向四周扩散的倾向"提高了反应时间"显著增加了实验灵敏度$$%"常用于抗原或抗体的定性分析&效价测定及纯度鉴定$)%#对流免疫电泳实验在临床检验和医学院校的临床免疫学检验教学中有很重要意义#对流免疫电泳的原理是在e>值为=&0的琼脂凝胶中"大部分蛋白质抗原等电点低"带较强负电荷"且分子量小"电泳力大于电渗力"在电场中向正极移动,而抗体绝大多数为#H Z"因其等电点偏高"在e>值为=&0时带微弱的负电荷"且分子量较大"移动速度慢#因此在电场中电泳力小于电渗力"在电场中移向负极"电泳时"将抗原孔放负极端"抗体孔放正极端"则抗原抗体相向运动"在两孔之间相遇"并在比例适当的部位形成肉眼可见的沉淀线#目前"对流免疫电泳实验广泛应用的缓冲液是巴比妥2巴比妥钠缓冲液$(%#但由于巴比妥2巴比妥钠是一类抑制中枢神经系统的药品"它具有镇定&催眠&麻醉等作用"近年来为国家管制类药品"存在一定安全隐患且价格较高"购买困难"影响了对流免疫电泳实验教学的开展#因此需要找到一种试剂安全性高&实验效果好&试剂成本低又环保的实验材料"来替代巴比妥2巴比妥钠缓冲溶液"在测试多种常见e>值为=&)R=&0的缓冲液后"笔者采用L8[缓冲液应用于对流免疫电泳实验并取得较好效果"并且可以作为医学院校对流免疫电泳实验教学中的新型缓冲液# %材料与方法$&$实验材料抗原!正常人新鲜血清,抗体!购买商品*使用前用生理盐水分别做抗体原倍&$l)&$l3&$l=稀释度+"载玻片"打孔器"移液器及移液器吸头"打孔样纸"9:_刻度吸管"洗耳球"牙签"记号笔"湿盒#$&)主要器材电子分析天平"北京六一仪器厂直流稳压电泳仪*!h h20W+及配套水平电泳槽"湘仪离心机#$&(试剂巴比妥2巴比妥钠电泳缓冲液*e>值为=&0"离子强度%&%9+!先称取巴比妥$&=3克置于三角烧瓶中"加入)%%:_蒸馏水"加热溶解后加入巴比妥钠$%&(克"最后加蒸馏水至$%%%毫升*调e>值至=&0+,L8[缓冲液!称取L A/F3<=3H"^b)[!L8-)>)"%&133H"冰乙酸$&$3):f"加蒸馏水至$%%%:_,琼脂粉凝胶!称取琼脂粉分别加入L8[缓冲液和e>值为=&0的巴比妥2巴比妥钠缓冲液"使琼脂浓度为$%H*f"沸水浴中溶解至透亮澄清"放0%R1%v 水浴箱中保温备用#&方法*$+制板与打孔!取干净载玻片"将$i融化琼脂凝胶3&9:_浇于载玻片上"厚度约$&9R)&%::#待琼脂凝固后"按打样模板去打孔"标记抗原抗体方向#*)+加样!在加样孔中加入抗原$%/f和抗体$%/f#*(+电泳!将已经加好样的琼脂板平放于电泳槽中"琼脂板两端用纱布搭桥与电泳槽中缓冲液相连接"抗原孔接电源负极"抗体孔接正极"开启电源"调整电压和电流强度"通电9%R0%:/-#'实验结果电泳结束后关闭电源"在光线充足的情况下"将玻片对着光"观察载玻片上抗原抗体孔之间是否有白色清晰沉淀线出现"如果有沉淀线形成判定为阳性"无沉淀线出现%"%!科技风"#"$年%月理论研究Copyright©博看网. All Rights Reserved.为阴性#如果沉淀线不够清楚"将湿盒放置(1r W 保温箱中数小时"可增强沉淀线的清晰度#*$+以巴比妥2巴比妥钠缓冲液为介质对流免疫电泳电泳图谱见图$*自左上顺时针旋转分别为抗体原倍&$l )&$l 3&$l =稀释度+#*)+以L 8[缓冲溶液为介质对流免疫电泳电泳图谱见图)#图$以巴比妥2巴比妥钠缓冲液为介质电泳图谱图)以L 8[缓冲溶液为介质对流免疫电泳图谱44图$&图)分别是以巴比妥2巴比妥钠缓冲液&L 8[缓冲液为介质"人血清作为抗原进行的对流免疫电泳"电泳图谱如图$&图)所示!在抗体原倍&$l )&$l 3&$l =稀释度条件下均可见清晰白色沉淀线即为抗原抗体复合物#重复多次实验后"比较这两种缓冲液的电泳结果基本相当"但L 8[缓冲溶液电泳结果在$l =稀释度下比巴比妥2巴比妥钠缓冲液$l =稀释度下的沉淀线更为明显"反应结果更好# 结论'临床免疫学检验技术(主要通过研究免疫学理论和免疫学技术并将其应用于临床样本的定性&定量检测"辅助临床对相关疾病进行诊断的一门重要医学学科"该课程不仅理论性强&技术应用广&实用性强"还与临床微生物学检验&临床血液学检验&临床生物化学检验&临床寄生虫学检验等多学科既广泛联系"又相互交叉"是医学检验专业本科生必修的一门重要的主干课程"临床免疫学检验不仅是临床医生对免疫相关性疾病进行分析和诊断的依据"还对免疫相关疾病的治疗效果和病情判断上有很重要的价值"对临床检测工作起重要指导作用$3%#医学检验专业毕业生大多数从事医学检验相关的工作岗位"实验操作技能是毕业生立足社会的基本能力#所以实验教学是临床免疫学检验教学的重要组成部分"其在培养学生扎实的理论基础和专业技能"建立系统的临床检验思维方面具有重要作用$9%#通过开展临床免疫学检验的实验教学"使学生掌握了各项免疫学技术的检测原理&操作方法&注意事项&临床应用等"了解临床免疫学检验的各种新技术新方法"拓宽学生临床免疫学检验方面的知识视野"不但培养学生熟练的动手操作能力&综合分析问题&解决问题的能力以及科研创新能力"还有助于调动学生学习的主动性和积极性"激发学生学习的兴趣$021%"提升学生认识并解决在以后学习和工作中遇到的各种实际问题"以培养适应)$世纪医疗卫生发展需要的高质量&应用型医学检验专业技术人才#目前关于对流免疫电泳缓冲溶液优化的研究并不多见"现就近年来的研究进展进行综述#早期杨瑞景$=%根据电解质的导电性能"尝试使用%&$9i 的氯化钠溶液替代巴比妥2巴比妥钠缓冲液对乙型肝炎抗原和胎甲蛋白进行检测"该替代缓冲液的优点为经济&快速&简便#其中"氯化钠溶液比巴比妥2巴比妥钠缓冲液价格便宜(19倍"并且在临床试验中取得了较好的结果#但在电泳过程中"^b W _缓冲液会被电解产生氯气"对实验者存在一定危害性"因此氯化钠溶液替代巴比妥2巴比妥钠缓冲液的方法并未得到广泛普及#张立红$'%在技术上进行了改进后"选用电泳槽理论研究科技风 年 月Copyright ©博看网. All Rights Reserved.缓冲液e>值为=&0"离子强度由%&$巴比妥盐酸缓冲液或e>值为=&0"离子强度%&%0巴比妥缓冲液"该方法不需要昂贵的仪器设备和专供试剂盒"一般实验室就能开展抗原或抗体检测"此方法简便快速&经济"节省了试剂"缩短了实验时间#近年来周瑞雪$$%%等人从常用缓冲液中筛选出0种e>值在=&0的缓冲液进行电泳后研究表明"L A/F2>W_&巴比妥2巴比妥钠&L8[&Z_E2^b">和^b W_2^b">缓冲液均可作为对流免疫电泳的缓冲液#但从电泳后抗原抗体形成白色沉淀线的结果来看"L A/F2>W_缓冲液在对流免疫中效果最好"它作为缓冲液不仅能产生白色沉淀线"而且有很好的抗体浓度依赖趋势#巴比妥2巴比妥钠&L8[&Z_E2^b">&^b W_2^b">电泳效果依次次之"L Z J缓冲液电泳效果最差"没有白色沉淀线出现"最终认为在对流免疫电泳中"L A/F2>W_缓冲液替代传统巴比妥2巴比妥钠缓冲液效果最好#因此认为免疫学实验课中可以将L A/F2>W_作为对流免疫电泳的缓冲液#L A/F2>W_缓冲溶液&^b W_2^b">缓冲溶液替代巴比妥2巴比妥钠缓冲液"虽然实验原料易获取"且经济实用"实验效果良好"但对流免疫电泳目前主要应用于教学实验中"这两种缓冲液在实验过程中可能会电解生成有毒气体氯气"以及有强酸&强碱的使用"实验安全性不高"实验过程中可能会危害到实验人员的健康#而L8[缓冲液*L8[T D@@B A+是由三羟甲基氨基甲烷*L A/Fdb F B+&乙酸*b,B G/,b,/a+和乙二胺四乙酸*[!L8+按一定比例配制组成的缓冲液"经过多次重复实验证明"L8[缓冲液的电泳效果较好"在保证对流免疫电泳实验教学质量的前提下"安全性较高"没有强酸"强碱的使用"也没有有毒气体生成"并且实验成本较低"在对流免疫电泳实验中有清晰免疫沉淀线"完全能够替代巴比妥2巴比妥钠缓冲液在对流免疫电泳实验中的使用#本次成功使用L8[缓冲液替代巴比妥2巴比妥钠缓冲液"同时在操作中我们还注意了以下几个方面!*$+加样时孔内不要有气泡"孔内加入抗原或抗体时以加满为宜"尽量不要外溢,血清标本要尽量新鲜不能用溶血或陈旧标本#*)+电泳时电压不要太大"免得蛋白质变性"出现假阳性或者假阴性"干扰实验结果#*(+抗原抗体的含量和比例要合适"否则不会出现明显可见沉淀线#*3+电泳所需要的时间与孔间距有关"孔间距越大"电泳时间越长#*9+电场强度&电泳缓冲溶液的e>值&溶液离子强度等对检测结果均有影响"电泳速度与电场强度成正比"电场强度越高"带点颗粒移动速度越快,溶液的e>值高于颗粒的等电点时颗粒带负电荷"溶液e>值离某物质的等电点越远"该物质所带电荷量越多"分子量越小"泳动越快,缓冲溶液的离子强度越高"电泳速度越慢#在对流免疫电泳实验中电泳介质本实验室一直首选用琼脂粉"在这次实验中也尝试着将电泳介质琼脂粉换成琼脂糖"实验结果显示"琼脂粉的电泳效果均好于琼脂糖"与周瑞雪等研究发现琼脂糖实验效果好于琼脂粉的研究结果不符"这还有待于进一步的探索论证#综上所述"本文选用L8[缓冲液同传统巴比妥2巴比妥钠缓冲液的电泳结果都有明显沉淀线"但L8[缓冲溶液电泳效果要好于巴比妥2巴比妥钠缓冲液"L8[缓冲液的试剂原料经济安全且容易获取"并且使用琼脂粉作为电泳介质的结果优于琼脂糖"在对流免疫电泳实验教学中作为新型缓冲液完全能替代巴比妥2巴比妥钠缓冲液"目前已经应用于临床免疫学检验实验教学中"取得了良好的实验教学效果"值得推广使用#参考文献%$&吕世静!李会强&临床免疫学检验%V&&第三版&北京)中国医药科技出版社!)%%3)9$29)&%)&刘辉&临床免疫学检验技术实验指导%V&&北京)人民卫生出版社!)%$9)320&%(&庞森!米会芳!张孟霞!等&对,对流免疫电泳-实验影响因素的探究%g&&信息化建设!)%$9'$()3(233&%3&高戈!李闻文!侯珏&初探综合性大学中医学临床免疫学教学改革与实践%g&&中国免疫学杂志!)%$)!)='=()191219'&%9&顾江!罗萍!郭刚!等&临床免疫学及检验第二课堂对培养学生和教师综合素质的作用%g&&国际检验医学杂志!)%$)!(('$%()$)192$)10&%0&马华!汪洪涛!夏晓影!等&0临床免疫学检验1实验教学方法的优化与改进%g&&齐齐哈尔医学院学报!)%$0!(1'($()('9(2('93&%1&徐军发!吕世静!杨维青!等&0临床免疫学检验1实验课教学改革尝试%g&&西北医学教!)%%=!$0'9()'$(2'$9&%=&杨瑞景&氯化钠溶液代替巴比妥缓冲液%g&&新医学!$'=)'3()))3&%'&张立红&对流免疫电泳技术改进%g&&山西医药杂志!$''$!)%'3())9%&%$%&周瑞雪!李冬菊!隋鲜鲜&对流免疫电泳缓冲液及电泳介质的筛选%g&&实验科学与技术!)%)$!$''$()$$92$$=&基金项目 西安医学院)%)$年校级大学生创新创业训练计划科研项目'项目编号$)$9)$$$3(作者简介 张淑莉'$'1$*4(!女!汉族!陕西西安人!本科!高级实验师!研究方向)医学检验教育教学"科技风 年 月理论研究Copyright©博看网. 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对流免疫电泳实验报告
对流免疫电泳实验报告对流免疫电泳是一种常用的蛋白质分离和检测方法，通过电泳和免疫学技术的结合，可以对复杂的蛋白质混合物进行分离和定量分析。
在本次实验中，我们将对流免疫电泳应用于血清蛋白的分离和检测，通过实验结果来验证其有效性和准确性。
首先，我们准备了实验所需的试剂和设备，包括对流免疫电泳槽、聚丙烯酰胺凝胶、血清样品、抗体和标记物等。
接着，我们将血清样品进行处理，包括蛋白质沉淀、洗涤和溶解，以获得高纯度的蛋白质样品。
然后，我们将样品加载到凝胶槽中，进行电泳分离。
在电泳结束后，我们将凝胶转移至膜上，并进行免疫印迹实验，以检测目标蛋白质。
实验结果显示，对流免疫电泳可以有效地分离血清蛋白，并且具有较高的灵敏度和准确性。
通过免疫印迹实验，我们成功地检测到了目标蛋白质，并获得了其相对定量的结果。
这表明对流免疫电泳在蛋白质分离和检测方面具有很高的应用价值。
在实验过程中，我们也发现了一些问题和改进的空间。
例如，在样品处理过程中，需要更加严格地控制温度和时间，以确保蛋白质的完整性和稳定性。
此外，在电泳分离和转膜过程中，也需要加强操作技巧和注意事项，以避免可能的失误和影响实验结果的因素。
总的来说，对流免疫电泳是一种有效的蛋白质分离和检测方法，具有很高的应用潜力。
通过本次实验，我们验证了其在血清蛋白分离和检测中的可行性和准确性，同时也发现了一些需要改进的地方。
希望通过不断的实验和研究，可以进一步完善该技术，为生物医学研究和临床诊断提供更加可靠和准确的工具和方法。
通过本次实验，我们对对流免疫电泳有了更深入的了解，也对其在蛋白质分离和检测中的应用有了更多的认识。
相信在今后的研究和实践中，对流免疫电泳会发挥越来越重要的作用，为生命科学领域的发展和进步做出更大的贡献。
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四、结果观察 断电后，将玻板置于灯光下，衬以黑色背景 观察。阳性者则在抗原抗体孔之间形成一条 清楚致密的白色沉淀线。如沉淀线不清晰， 可把琼脂板放在湿盒中37℃数小时或置电泳 槽过夜再观察。
五、注意事项 1．抗原抗体浓度的比例 当抗原抗体比例不适 合时，均不能出现明显可见的沉淀线。 2．适当的电渗作用在对流免疫电泳中是必要 的。当琼脂质量差时，电渗作用太大，而使血 清中的其它蛋白成分也泳向负极，造成非特异 性反应。在某些情况，琼脂糖由于缺乏电渗作 用而不能用于对流免疫电泳。 4．当抗原抗体在同一介质中带同样电荷或疫电泳来检查。
二、对流免疫电泳 即双扩+电泳技术 用途：同双扩 优点：快、敏感性高 缺点：分辨力低
三、操作方法
1．制琼脂板 以pH8.6离子强度0.05巴比妥缓冲液配成 1%～1.5%琼脂凝胶板，厚度2mm～3mm。 2．打孔 琼脂冷却后，按图打孔，打成对的小孔数列， 孔径0.3cm～0.6cm，孔距0.4cm～1.0cm。挑去孔内琼 脂，封底。 3．加样 一对孔中，一孔加抗原，另一孔加抗体。 4．电泳 将抗原孔置于负极端。电流强度3mA/cm～ 6mA/cm，电泳时间30min～90min。
对流免疫电泳
一、基本原理
在pH值8.6的琼脂凝胶中，抗体球蛋白只带有微弱的负 电荷，而且它分子又较大，所以泳动慢，受电渗作用 的影响也大，往往不能抵抗电渗作用，故在电泳时， 反而向负极倒退。而一般抗原蛋白质常带较强的负电 荷，分子又较小，所以泳动快，虽然由于电渗作用泳 动速度减慢，但仍能向正极泳动。如将抗原置阴极， 抗体置阳极，电泳时，两种成分相对泳动，一定时间 后抗原和抗体将在两孔之间相遇，并在比例适当的地 方形成肉眼可见的沉淀线。这样由于电泳的作用，不 仅帮助抗体定向移动，因而加速了反应的出现，而且 也限制了琼脂扩散时，抗原抗体向四周自由扩散的倾 向，因而也提高了敏感性，本法比琼脂扩散法的灵敏 度要高 10～ 16 倍，而且反应时间短，可用于各种蛋白 的定性和半定量测定。