双萤光素酶报告基因技术
双荧光素酶报告基因和单荧光素酶报告基因
双荧光素酶报告基因和单荧光素酶报告基因双荧光素酶报告基因是一种利用荧光技术对两种不同样本进行同时检测的技术。
这种技术通常用于检测基因表达水平差异或者鉴定基因变异。
双荧光素酶报告基因由两个不同的荧光报告基因组成，一个称为“参考荧光基因”，另一个称为“检测荧光基因”。
这两个基因都被置于同一个位点，通过一条多外显子基因互补的RNA链来实现对同一片DNA的双重检测。
参考荧光基因包括一个模板序列和一个感兴趣的序列，模板序列由参考荧光基因敲入DNA中，能够准确地定位感兴趣序列，这就是所谓的“特征序列”。
如果特征序列存在与基因片段中，那么参考荧光报告基因就会被激活，产生一定数量的荧光蛋白质，从而将荧光信号传递到另一端，即检测荧光基因。
检测荧光基因同样具有特征序列，以及一组检测序列，检测序列中包含与参考荧光基因“特征序列”配对的特征序列。
如果参考荧光基因产生的荧光信号与检测荧光基因的检测序列匹配，那么检测荧光基因也会被激活，产生荧光信号传递到检测荧光信号探测器。
这时，两个荧光报告基因产生的信号就会被比较，从而实现双荧光素酶报告基因的功能。
单荧光素酶报告基因是一种利用荧光技术监测基因活性的技术。
其基本原理是，在一个多外显子基因的载体上，编码一个荧光报告基因，将其茧入指定的基因片段，使其发挥不同的功能，例如检测基因表达水平、检测基因变异等。
单荧光素酶报告基因由一个荧光报告基因组成，其中包括一个特定的模板序列和一个感兴趣序列。
模板序列由单荧光素酶报告基因敲入DNA 中，能够准确地定位感兴趣序列，使其与检测序列特征相匹配，从而实现特定的功能。
当荧光报告基因成功敲入到DNA序列中时，它将引发激活，从而产生荧光蛋白质，从而向检测器传递荧光信号，从而实现单荧光素酶报告基因的功能。
此外，双荧光素酶报告基因和单荧光素酶报告基因都有其自身的优点和缺点。
双荧光素酶报告基因可以同时监测两个样本的变化情况，它的灵敏度更高，而且可以检测更广泛的基因表达情况，但是它也受受到一些偏差的影响，如果参考荧光基因和检测荧光基因的敏感度不同，就可能产生误差。
双荧光素酶报告
双荧光素酶报告引言。
双荧光素酶（Dual-Luciferase）报告是一种常用的生物化学技术，用于研究基因表达调控、信号转导和蛋白质相互作用等生物学过程。
该技术利用荧光素酶和荧光素酶作为报告基因，通过检测其荧光信号的强度来研究基因表达水平和转录因子活性。
双荧光素酶报告技术具有高灵敏度、高通量和高精度的特点，被广泛应用于生物医学研究、药物筛选和基因治疗等领域。
一、双荧光素酶报告的基本原理。
双荧光素酶报告技术是基于荧光素酶和荧光素酶的反应原理。
荧光素酶（Firefly luciferase）是一种生物发光蛋白，它能够氧化荧光素底物产生强烈的荧光信号。
荧光素酶（Renilla luciferase）是另一种生物发光蛋白，它也能够氧化荧光素底物产生荧光信号，但其光谱特性与荧光素酶不同。
利用这两种生物发光蛋白的不同特性，可以同时检测两种基因表达水平或蛋白质相互作用的活性。
二、双荧光素酶报告的实验步骤。
1. 克隆报告基因，首先需要将荧光素酶和荧光素酶的基因分别克隆到适当的表达载体中，以便在细胞中进行表达。
2. 转染细胞，将表达荧光素酶和荧光素酶的载体转染到目标细胞中，使其表达报告基因。
3. 应用底物，添加荧光素底物到转染的细胞中，观察荧光信号的强度。
4. 测量荧光信号，利用荧光素酶检测系统测量荧光信号的强度，得到荧光素酶和荧光素酶的活性。
三、双荧光素酶报告的应用。
1. 研究基因表达调控，双荧光素酶报告技术可以用于研究转录因子对基因表达的调控机制，从而揭示基因调控网络的结构和功能。
2. 研究信号转导通路，双荧光素酶报告技术可以用于研究细胞信号转导通路的活性和调控机制，从而揭示细胞内信号传递的分子机制。
3. 药物筛选，双荧光素酶报告技术可以用于筛选药物对基因表达和信号转导的影响，从而寻找潜在的药物靶点和药物候选物。
4. 基因治疗，双荧光素酶报告技术可以用于评估基因治疗载体的转染效率和基因表达水平，从而优化基因治疗的疗效和安全性。
双荧光素酶报告基因
双荧光素酶报告基因引言。
双荧光素酶报告基因是一种常用的生物标记物，用于研究基因表达和调控。
它具有高灵敏度、快速检测和定量分析等优点，因此在生物医学研究和药物开发领域得到了广泛应用。
本文将从双荧光素酶报告基因的原理、应用和未来发展等方面进行综述，以期为相关研究提供参考。
一、双荧光素酶报告基因的原理。
双荧光素酶报告基因是一种能够产生荧光信号的基因，它通常由双荧光素酶（Dual-Luciferase）和报告基因组成。
双荧光素酶包括火榴石荧光素酶（Renilla luciferase）和荧光素酶（Firefly luciferase），它们分别与不同的底物反应产生荧光信号。
报告基因则是研究对象的基因序列，它与双荧光素酶组成一个转录单元，用于研究基因表达水平和调控机制。
双荧光素酶报告基因的原理是利用荧光素酶和火榴石荧光素酶分别与其底物反应产生荧光信号，通过检测这两种荧光信号的强度来分析报告基因的表达水平。
这种双荧光素酶系统具有高灵敏度和宽线性范围，能够准确测定低至飞阿尔茨海默病荧光素酶单位的荧光信号。
二、双荧光素酶报告基因的应用。
1. 基因表达调控研究。
双荧光素酶报告基因广泛应用于基因表达调控研究中，可以通过构建报告基因的启动子激活元件来分析转录因子的结合位点和调控机制。
研究人员可以利用双荧光素酶报告基因系统来研究基因的转录调控网络，揭示基因表达的调控机制。
2. 药物筛选和毒性评价。
双荧光素酶报告基因系统在药物筛选和毒性评价方面也有广泛应用。
研究人员可以利用该系统来筛选具有调控作用的化合物，评估药物的毒性和副作用，为药物研发提供重要参考。
3. 细胞信号转导研究。
双荧光素酶报告基因系统还可以用于细胞信号转导研究，通过构建信号通路相关基因的报告基因来分析细胞信号传导的机制和调控网络，为疾病治疗和药物开发提供理论基础。
4. 生物传感器开发。
双荧光素酶报告基因系统还可以应用于生物传感器的开发，通过构建特定的报告基因来实现对特定生物分子的高灵敏度检测，为环境监测和生物医学诊断提供新的手段。
双荧光素酶报告基因
双荧光素酶报告基因
双荧光素酶报告基因是一种常用的报告基因，用于研究生物体内特定基因的表达水平和转录活性。
双荧光素酶报告基因是由荧光素酶（Luciferase）和绿色荧光
蛋白（Green Fluorescent Protein，GFP）两个成分组成。
Luciferase是一种产生荧光的酶，能够将进入细胞内的底物荧
光素氧化为荧光产物，并发射出可见光。
GFP是一种随着基
因表达而绿色荧光的蛋白质，可以直接通过显微镜观察到。
双荧光素酶报告基因主要通过将荧光素底物注射至细胞内来观察特定基因的表达水平。
当目标基因活性高时，荧光素底物会被荧光素酶氧化产生荧光，并发射出可见光。
这样可以通过荧光观察到目标基因的表达水平。
同时，双荧光素酶报告基因还可以通过GFP的绿色荧光信号来观察细胞的活性，以及基因
在细胞中的定位。
利用双荧光素酶报告基因可以对基因表达进行定量和定位分析，进而研究基因调控和信号转导路径等生物学过程。
它在生物医学研究和药物筛选中广泛应用，为科学家们提供了一个有效的工具来研究基因功能和生物过程中的分子机制。
双荧光素酶报告基因实验步骤
双荧光素酶报告基因实验步骤引言。
双荧光素酶（Dual-Luciferase）报告基因实验是一种常用的分子生物学实验方法，用于研究基因表达调控、信号转导通路等生物学过程。
该实验利用双荧光素酶系统，通过测定荧光素酶和荧光素酶的活性，来研究目标基因的转录水平和调控机制。
本文将介绍双荧光素酶报告基因实验的步骤及相关注意事项，以供科研工作者参考。
实验步骤。
1. 选取适当的载体。
在进行双荧光素酶报告基因实验之前，首先需要选择适当的表达载体。
常用的载体包括pGL3基因表达载体和pRL-TK基因表达载体。
pGL3基因表达载体含有火萤酶（Firefly luciferase）报告基因，用于检测目标基因的转录水平；pRL-TK基因表达载体含有海洋光明蛋白（Renilla luciferase）报告基因，用作内参对照。
将目标基因的启动子区域克隆至pGL3载体中，构建双荧光素酶报告基因实验所需的表达载体。
2. 细胞培养和转染。
选取适当的细胞系进行实验，如HEK293、HeLa等常用的哺乳动物细胞系。
将细胞进行培养，待细胞生长至80%～90%的密度时，进行转染。
将构建好的双荧光素酶报告基因载体与转染试剂混合，加入到细胞培养基中，进行细胞转染。
根据实验需求，可以选择不同的转染试剂和转染时间。
3. 荧光素酶检测。
待细胞转染后，根据实验设计的需要，进行不同处理，如给予药物刺激、转染siRNA等。
处理后，收集细胞，用相应的细胞裂解液溶解细胞，离心收集上清液。
分别取一部分上清液进行火萤酶和海洋光明蛋白的活性检测。
使用荧光素酶检测试剂盒，按照说明书进行操作，测定两种荧光素酶的活性。
4. 数据分析。
将测得的荧光素酶活性数据进行比较和分析。
通常情况下，将火萤酶的活性作为目标基因的表达水平，而海洋光明蛋白的活性作为内参对照。
通过比较不同处理组和对照组的荧光素酶活性，可以得出目标基因的表达水平及其受到的调控。
注意事项。
1. 实验操作要严格遵守无菌操作规范，避免细菌和真菌的污染。
植物双荧光素酶报告基因实验步骤
植物双荧光素酶报告基因实验步骤引言：植物双荧光素酶（dual-luciferase reporter gene）是一种广泛用于研究基因表达和调控的实验技术。
这种技术主要基于荧光素酶酶促反应原理，通过测量两种荧光素酶的活性来评估靶基因的调控效应。
本实验将详细介绍植物双荧光素酶报告基因实验的步骤。
材料：1.载体DNA：包含荧光素酶的荧光素酶基因、荧光素酶底物和载体DNA。
2.受试基因DNA：靶基因的DNA序列。
3.发光底物：用于检测荧光素酶活性的底物。
实验步骤：1.载体构建a.将荧光素酶基因和荧光素酶底物的DNA序列分别克隆到载体DNA 上，构建荧光素酶报告基因载体。
b.对构建好的载体进行测序，确认序列的准确性。
2.细胞培养a.选择合适的植物细胞系进行培养，如人类表皮细胞（HEK293细胞）或真菌菌株（酵母）。
b.在无菌条件下，将细胞培养在含有适当培养基和抗生素的培养皿中。
3.转染a.将刚构建好的荧光素酶报告基因载体和受试基因DNA利用合适的转染试剂转染至目标细胞中。
b.转染条件需要根据所选细胞系的特性进行优化，如转染剂浓度、转染时间和转染温度。
4.荧光素酶检测a.收集转染后的细胞，以适当的方法裂解细胞膜并提取细胞内的蛋白质。
b.在离心管中先加入荧光素酶底物A，然后加入荧光素酶底物B，并加入含有缓冲液的发光底物。
c.利用荧光素酶检测仪测量反应体系的发光强度。
d.记录发光强度，并进行数据统计和分析。
5.数据分析a.根据荧光素酶底物的发光强度计算荧光素酶活性。
b.根据测得的荧光素酶活性，分析靶基因的调控效应。
c.可以利用多种方法对数据进行统计学分析，如方差分析和配对t 检验。
结论：植物双荧光素酶报告基因实验是一种有效的研究基因调控的实验技术。
通过测量荧光素酶的活性，我们可以评估靶基因在特定条件下的表达水平。
这项实验可以帮助我们更好地了解基因调控机制，为相关研究提供重要的数据支持。
双荧光素酶报告基因检测
双荧光素酶报告基因检测双荧光素酶报告基因检测是一种广泛应用于生物学研究和临床诊断的技术。
它利用双荧光素酶作为报告基因，通过检测其表达水平来研究目标基因的调控机制、信号转导通路以及疾病发生发展的相关机制。
本文将介绍双荧光素酶报告基因检测的原理、应用及其在科研和临床中的意义。
双荧光素酶报告基因检测的原理是利用双荧光素酶基因（Luciferase）和绿色荧光蛋白基因（GFP）等作为报告基因，将其与目标基因的启动子或调控元件相连，构建成表达载体，转染到细胞中。
当目标基因的启动子或调控元件被激活时，报告基因也会被激活，从而产生荧光素酶或绿色荧光蛋白，可以通过荧光素酶活性检测或荧光显微镜观察来检测目标基因的表达水平和细胞定位。
双荧光素酶报告基因检测在生物学研究中有着广泛的应用。
首先，它可以用于研究基因的调控机制。
通过构建不同长度或突变的启动子或调控元件，可以研究基因的启动子活性、转录因子结合位点以及信号通路的调控机制。
其次，它可以用于筛选药物或研究药物的作用机制。
通过将报告基因与目标基因共转染到细胞中，可以研究药物对目标基因表达的影响，从而筛选出具有特定生物学活性的化合物。
此外，双荧光素酶报告基因检测还可以用于研究基因的表达模式、细胞信号转导通路以及疾病发生发展的相关机制。
在临床诊断中，双荧光素酶报告基因检测也有着重要的意义。
例如，在肿瘤诊断中，可以利用双荧光素酶报告基因检测来研究肿瘤相关基因的表达水平，从而为肿瘤的分子诊断和靶向治疗提供依据。
此外，双荧光素酶报告基因检测还可以用于检测病毒感染、细胞凋亡、细胞增殖等生物学过程，为临床诊断和治疗提供重要参考。
总之，双荧光素酶报告基因检测作为一种重要的生物学检测技术，在科研和临床中有着广泛的应用前景。
它不仅可以帮助科研人员深入研究基因调控机制和疾病发生发展的相关机制，还可以为临床诊断和治疗提供重要的实验依据。
相信随着技术的不断进步和完善，双荧光素酶报告基因检测将在生物学研究和临床诊断中发挥越来越重要的作用。
双荧光素酶报告基因
双荧光素酶报告基因双荧光素酶（dual-luciferase）报告基因是一种常用的生物学工具，广泛应用于生物荧光信号的定量检测。
它可以帮助科研人员更准确地研究细胞的生物过程，如基因表达调控、蛋白质相互作用等。
本文将介绍双荧光素酶报告基因的原理、应用以及未来的发展方向。
双荧光素酶报告基因的原理基于荧光素酶（luciferase）的发光反应。
荧光素酶分为火焰荧光素酶（firefly luciferase，FLuc）和海蟑螂荧光素酶（Renilla luciferase，RLuc）两种。
FLuc是一种生物体内广泛存在的酶，能将底物D-荧光素磷酸酯（D-luciferin）氧化为产生黄绿色的荧光。
而RLuc则能将底物深海蟑螂荧光素酯（coelenterazine）氧化为产生蓝绿色的荧光。
双荧光素酶报告基因的主要用途是测定基因表达的活性。
在实验中，研究者将希望研究的基因启动子区域与荧光素酶报告基因FLuc或RLuc相连构建成转染载体。
接着，将该转染载体与内参基因载体同时转染至细胞中。
内参基因载体中含有RLuc基因，用于校正实验中的转染效率和细胞数的变化。
转染后，利用荧光素底物对FLuc和RLuc进行反应，测定二者的荧光强度。
通过确定FLuc和RLuc荧光强度的比值，可以消除转染效率和细胞数的影响，准确反映基因表达活性的变化。
双荧光素酶报告基因在生命科学中有着广泛的应用。
首先，在基因表达调控的研究中，双荧光素酶报告基因可以帮助研究者分析不同启动子的活性，揭示基因调控网络的机制。
此外，它还可以用于研究RNA干扰（RNAi）技术的效果，评估基因沉默的程度。
其次，双荧光素酶报告基因也被广泛应用于研究蛋白质相互作用。
通过将FLuc和RLuc融合到感兴趣的蛋白质上，可以实时监测蛋白质相互作用的强弱和时空分布。
此外，双荧光素酶报告基因还可以用于筛选药物分子，评估其对某一特定信号通路的影响。
未来，双荧光素酶报告基因技术还有许多发展方向。
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• 线形范围广 （在10-16 M(10pg/L)至10-8 M(1mg/L)范围内,光 强度与萤光素酶浓度成正比） • 一般比显微镜检测的荧光更灵敏 (对多孔板而言) • 生物萤光比荧光更稳定,因为自然界进化的酶能保护光子发 射器 • 通过基因工程可以延伸生物萤光的性能和能力
萤光素酶报告基因的使用
– 一管完成检测，样品不必分份
用两个萤光素酶做报告基因 （萤火虫+海肾）
实验质粒
萤火虫萤光素酶
对照质粒
海肾萤光素酶
用海肾萤光素酶作对照归一实验变化
归一反应 = 实验的 (萤火虫萤光素酶) 对照的（海肾萤光素酶)
数据处理举例
第一天 样品处理重复 对照 Ｆ 萤光素酶活性(RLU) Ｒ 比率 （F:R) 归一的活性 变化倍数
第一代
pRL-null pRL-TK pRL-SV40 pRL-CMV
Renilla 萤光素酶载体系列
MCS 内含子 hRL 基因 SV40 晚poly(A)
phRL-null
HSV TK 启动子
T7 启动子
phRL-TK
CMV即时早期增强子/启动子
phRL-CMV
SV40 早期 增强子/启动子
phRL-SV40
荧光
Fire
- Fluorescence
萤光
Worm
- Luminescence
萤光 （Bioluminescence）
荧光 （Fluorescence）
是化学发光（Chemilumi- nescence） 吸收来自光源的光，再发射 另一光子 的一种，激发能量来自化学反应
萤光发光计（Luminometer）
Δ活性倍数
11.52 5.82
1 2 3
第二天 对照
(F/R)样品
=
113.21 57.18
F/R)对照
１ ２ •
处理Ｃ
15,529 20,433 21,897 30,841 10,760 13,620 16,062 21,631 850,239 578,951 943,873 791,021 20,843 14,830 21,788 19,154
Renilla 萤光素酶载体系列
TK 启动子 hRL 基因 SV40 晚 poly(A)
phRL-TK(Int-)
三个读码框的 终止密码子
MCS
phRG-B
合成 poly(A) 信号 转录停止位点
三个读码框的 终止密码子
TK 启动子
phRG-TK
合成 poly(A) 信号 转录停止位点
用萤火虫和海肾两个萤光素酶做报告基因
SEAP（分泌性碱 性磷酸酶） CAT（氯霉素转乙 酰基酶） GFP（绿色荧光蛋 白）
•分泌性报告基因 (不需裂 解) -真核细胞没有背景表达 -易于使用 -设备现成(液闪仪,层析) •显微镜: 亚细胞定位 •不需底物
萤光素酶报告基因的主要优点
• • • • 非放射性 检测快（比CAT等） 灵敏度高（可比CAT检测灵敏度高100倍） 半衰期短（在理想条件下，可检测到10-20 摩尔的萤光素酶 分子。在哺乳动物细胞中半衰期3小时，在植物细胞中半衰 期3.5小时。而CAT在哺乳动物细胞中的半衰期约50小时）
= 55.81
0.73 0.99
GloMax ™ 20/20 Single tube luminometer
GloMax ™ 96 luminometer
White microplates for luminescence
Promega公司出品的双报告基因实验产品
• 质粒
– 萤火虫萤光素酶质粒 – 海肾萤光素酶质粒 – 叩头虫萤光素酶质粒
0.76 0.71 0.79 0.74
第二天处理Ｃ计算如下：
1.00
１
２ ３
处理D
Δ 活性倍数 (791,021/19,154) =
41,30 55,81
（16,062/21,631)
1
2 3
14,865 19,3-05 8,967 12,284 13,767 20,246 12,533 17,278
•细菌，血清等内源活性高 •需要底物
GUS（葡糖醛酸糖 苷酶）
•灵敏度好 •植物中内源活性低
• 90% 的 E.coli, 人／动物细胞中 有内源活性 •酶的扩散可引起 “过度报告” •需要底物
•在 HeLa , 癌 和其它细胞类型 中有高的内源活性 •需要底物 •放射性的 •灵敏度底 •50ｈ半衰期 •背景可能高 •折叠 “情形” 可导致信号差别
Firefly Renilla
为什么要使用双报告基因
报告基因 A (首要信号)
报告基因 B (第二信号)
特异生物学反馈 + 非特异生物学反馈
非特异生物学反馈 检测结果
比较首要与第二信号确定 特异生物学反馈
传统的双报告基因的缺点
• 细胞可能有内源脱乙酰基酶 -Gal 或 GUS 活性. • CAT, -Gal 和 GUS 检测是终点检测.
均质检测
发光
细胞+培养基
添加试剂
非均质检测
发光
细胞+培养基
除去培养基
清洗细胞
裂解细胞
添加试剂
Dual-Luciferase®报告基因检测系统组分
• • • • • 检测缓冲液II 底物（冻干粉） Stop&Glo®缓冲液 Stop&Glo®底物,50X 被动裂解液,5X
Dual-Luciferase®报告基因检测步骤
荧光计（Fluorometer）
液闪仪（Scintilation Counter） 电荷耦合装置光学成像系统 （CCD opitical imaging system）
荧光显微镜
各种报告基因的优点和缺点
报告基因 萤光素酶 优点
•优越的灵敏度 –高信号值 –无内源活性
•灵敏度好
பைடு நூலகம்
缺点
•需要底物
ß-gal
• 不能同时对在一个管中组合了萤光素酶和CAT,或Gal ,的两个报告基因的检测都灵敏而快速．
双萤光素酶报告基因系统比用CAT和ß-Gal做内对照 的优点
• 速度
– 样品不需预处理，不需孵育。两次检测在几秒种内 完成
• 灵敏
– 两个萤光素酶的线性范围超过7个酶浓度数量级。内 源萤光素酶背景极低
• 方便
• 步骤
前一天：接种细胞，六孔板X3 第二天：共转染：pGL3-Try14A和pRL-SV40 （分成两组） pGL3-Control 和 pRL-SV40 pGL3-Basic 和 pRL-SV40
裂解细胞，测量萤光
Dual-Glo™萤光素酶检测系统
检测特点 •均质检测，为高通量检测而设计
•萤光信号稳定，2hrs内检测
操作步骤
• 试剂制备简单 – 将Dual-Glo™ 萤光素酶缓冲液倒入 Dual-Glo™ 萤 光素酶底物中 – 用Dual-Glo™ Stop &Glo® 缓冲液按1:100 稀释 Dual-Glo™ Stop &Glo® 底物 – 所有的缓冲液存于室温, 所有的底物存于 –20°C • 两步加入试剂: 加, 读, 加, 读 • >10,000 倍信号分离 (淬灭)
Passive lysis buffer
Stop&Glo Reagent
DLRTM For HTS
DLR™双报告基因检测系统应用举例
α－黑色素刺激激素(α-MSH)对由人酪氨酸酶启动子／增 强子控制的萤光素酶的表达的诱导(Promega eNotes)
• 目的：监测细胞对α-MSH诱导的应答 • 材料： 实验载体：pGL3-Try14A:人酪氨酸酶启动子／增强子＋Luc(+) 阳性对照：pGL3-Control 阴性对照：pGL3-Basic 内对照：pRL-SV40 B16-F1细胞（鼠黑素瘤细胞系CRL-6323) DLR ™双萤光素酶检测试剂盒
– Stable luminescence signals for both reporters (t1/2 ~ 3.5 hrs.) – >10,000-fold signal separation between the firefly and Renilla bioluminescence
Dual-Glo assay-选择性淬灭萤火虫萤光
pGL3-Enhancer Map
pGL3-Promoter Map
内对照载体可能存在的问题
辅助报告基因的相对萤光单位 (RLU)
启动子交叉交谈或互相干扰 实验刺激给辅助报告基因的不必要的调节
•
•
•
载体 - 海肾萤光素酶报告基因载体
第二代
phRL-null phRL-TK phRL-TK (int-) phRL-SV40 phRL-CMV phRG-B phRG-TK
Report Smartly
－萤光素酶报告基因技术
自然界的萤光
发光真菌
发光节虫
发光海星
发光甲壳虫
自然界的萤光
发 光 鱼
发 光 甲 虫
自然界的萤光
萤 火 虫
报告基因的作用
• • • • • • 细胞信号转导途径 启动子/增强子 受体结合 病毒/细胞相互作用 转录因子 药物诱导作用或”效果”
Luminescence vs. Fluorescence
• 裂解细胞
– 被动裂解
• 除去培养基..PBS洗..加1XPLB, 振荡15分钟..检测
– 主动裂解
• 除去培养基..PBS洗..在1XPLB中刮下细胞..细胞转移到试 管或小瓶中..1-2次冻融..检测
• 检测
双萤光素酶检测方案
1 支试管 2 步检测 30 秒钟