临床标本的细菌学检查汇总
临床标本的细菌学检查-精品文档
法尿 和液 操标 作本 流细 程菌
检 验 方
Uricult 操作步骤
Uricult 菌落比密图
临床标本的细菌学检查
第一节 血液及骨髓标本
一 血液标本
血液标本的细菌培养是诊断菌血症或败血 症的基本方法。
如从患者血液中检出细菌，一般应视为病 原菌。
常见的病原菌主要有金黄色或表皮葡萄球 菌、链球菌（A、B群、肺炎链球菌等）、 肠球菌、产单核细胞李斯特菌、脑膜炎奈 瑟菌、伤寒及副伤寒沙门菌和厌氧菌等。
(2)结核分枝杆菌涂片检查 (3)新生隐球菌涂片检查 2. 分离培养 3. 报告方式 培养48小时，仍无菌生长者报告“培养 2天无细菌生长”。查见细菌报告细菌，报告菌名和 药敏结果。
第三节 呼吸系统标本
下呼吸道的痰液是无细菌的，而经口腔咳出的痰 带有多种上呼吸道的正常寄生菌（如草绿色链球 菌）。若从患者痰标本中查见致病菌或条件致病 菌，提示有上呼吸道感染。
脑脊液无论涂片或培养必须于 采集后立即送检不宜将其置于 冰箱保存，否则影响检出率。
法脑 和脊 操液 作标 流本 程细 图菌
学 检 验 方
（二）检验方法和操作流程
1. 涂片检查 (1) 一般细菌涂片检查： 例如：革兰阴性、凹面相对的球菌，可能是脑膜
炎奈瑟菌；链状排列的革兰阳性球菌；长丝状等多形 态性的革兰阴性杆菌，可能是流感嗜血杆菌。
验呼 方吸 法系 和统 操标 作本 流细 程菌
学 检
（二）检验方法和操作流程
1. 肉眼观察
2. 涂片检查 其一依据100×镜下观察白细胞和
上皮细胞数目多少来评定(如表)；其二是初步判 定是否有病原存在。
痰标本镜下分类
分级 A B C
白细胞（个） >25 >25 <10
临床标本的细菌检验
痰标本临床通常将正常人喉以上部位称之为上呼吸道，上呼吸道定植有大量的正常菌群，而气管以下包括气管、支气管和肺泡称下呼吸道，通常无菌或仅有少量细菌侵入。
在呼吸道标本细菌学检验中，上呼吸道标本（咽拭子）由于有正常菌群的存在，不易判断出何为与疾病有关的细菌，进行普通培养无特别意义《插入表上呼吸道存在的正常菌群》。
下呼吸道感染是最常见的呼吸道感染症，临床常取痰液标本进行细菌学检验，以明确感染病原及其药敏结果，有助于疾病治疗、流行病学调查和医院感染的监测。
痰标本须经上呼吸道排出，常受该处正常菌群的污染，因此，判断下呼吸道分泌物中是否有病原菌存在，须对上呼吸道的正常菌群有所了解。
上呼吸道的正常菌群有α、γ链球菌、微球菌、拟杆菌、梭杆菌、厌氧球菌、表皮葡萄球菌、奈瑟菌、嗜血杆菌、棒状杆菌。
标本的验收遇有不合格标本，应及时与临床联系，报告不合格标本拒收的具体理由。
拒收标准：a.肉眼观察痰标本呈水样或唾液样。
b.标本涂片白细胞数＜10/低倍镜和鳞状上皮细胞数＞25/低倍镜，表示该标本已污染正常菌群，建议重送标本。
c.容器错误标本容器必须符合规定，溢漏、无盖者拒收。
分离培养1．痰标本培养前处理（均质化）2．分离培养（1）一般细菌培养应同时划区接种（痰半定量原则）痰半定量方法：用接种坏将痰液在血平板和巧克力平板上作三区划线接种标本，进行培养。
痰半定量培养的临床意义三区划线法：首先用无菌棉签挑取痰液的脓或血性部分（或将接种坏通过火焰灭菌，冷却后挑取标本少许，尽量取有脓或血部分）然后将其涂布在平板第一区，并作数次划线，再在二、三区依次用接种环划线，每划一个区域，应将接种环烧灼一次，待冷却后再划下一区域。
1）血平板（5%CO2环境）适用于分离肺炎链球菌和其他细菌。
2）巧克力平板（5%CO2环境）适用于分离嗜血杆菌。
3）麦康凯/中国蓝平板（需氧环境）适用于分离革兰阴性杆菌。
（2）分离培养血平板和巧克力平板置5%CO2环境，麦康凯平板/中国兰平板置普通孵箱，35℃孵育。
临床常见标本的细菌学检验
痰液的采集
采集指征
下呼吸道感染者可有发热、咳嗽和咳痰 可伴有胸痛、气急甚至呼吸困难，肺部可闻及湿罗音；
X线检查肺部有炎性浸润或胸腔积液 严重可致感染性休克和呼衰。
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痰液的采集和运送
采集方法
自然咳痰法 支气管镜采集法 防污染毛刷采集 法 支气管肺泡灌洗法 胃内采痰法 小儿取痰法
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痰液的采集和运送
涂片检查 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物试验 报告
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尿液的检验
菌落计数
定量接种尿液培养标本 根据细菌在平板上的生长情况 定量报告每毫升尿液中所含有的细菌数（CFU/ml）
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尿液标本常见的病原菌
病原菌
正常 菌群
G+
金葡 化脓性链球菌 肠球菌 结核分枝杆菌 葡萄球菌 枯草杆菌 非致病性棒状杆菌
注意培养时间
加做无菌对照
涂片染色检查
结合培养细菌的生长特点对照判断
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（四）检验程序
标本选择 采集（保存运送）
观察、前处理
直接 涂片
报告
快速 检验
报告
分离培养 （需、厌氧、CO2培养）
可疑菌落 (必要时先做培养)
增菌(需氧、厌氧、 CO2培养)
涂片检查 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物试验 报告
难辨梭菌
杆菌
G-
沙门菌 大肠埃希菌
志贺菌 霍乱弧菌 副溶血弧菌
弯曲菌 小肠结肠炎耶尔森菌
变形杆菌
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粪便检验的临床意义
肠道致病菌
霍乱弧菌-霍乱，志贺菌-细菌性痢疾，伤寒沙门菌-伤寒；
食物中毒
沙门菌、弯曲菌、葡萄球菌、副溶血弧菌。
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第二节 临床常见标本的细菌学检验
临床标本的细菌学检验
病种
标本
鼠 疫 痰，腺穿刺液
霍 乱 水样便
炭 疽 痰，渗出物
白 喉 假膜，咽拭子 淋 病 尿道/阴道分泌物 流 脑 脑脊液、瘀血癍 肺结核 痰 梅 毒 病变渗出液
方法
GS，亚甲兰染色 GS，制动试验 GS，亚甲兰染色/ 串珠试验 GS，亚甲兰染色 GS GS 抗酸染色 暗视野
结
果
G-两极浓染，多形态
——
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• 标本的采集和运送
腰椎或脑室穿刺，将脑脊液分别收集于3 只无菌试管内， 1-2ml/管 细菌学检查
化学和免疫学检查 细胞计数和分类 标本采集后置于无菌容器中立即送检，不 能保存于冰箱中。
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• 实验室检查
脑脊液离心沉淀，取其沉淀物接种于巧克力琼 脂平板、血琼脂平板和厌氧琼脂平板，分别置 需氧和厌氧环境中培养，对疑有真菌和结核分 枝杆菌感染的还应分别接种于相应专用培养基 上。孵育后根据菌落性状、生化反应作细菌学 鉴定。在细菌培养同时，取其沉淀物作涂片、 染色、镜检，以早期诊断感染的病原。
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Step4. 初次培养基上的分离物，可能存在
多种细菌： 区分正常菌群与致病菌 确定优势菌群
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化脓性链球菌菌落特征（β溶血）
铜绿假单胞菌菌落特征（血琼脂平板）
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• 快速
涂片检查
• 是“指南针”
• 对确诊报告提供参考意义
• 不要过分依赖、过分夸大它的作用
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血液、分泌物、排泄物、穿刺液、脑脊液等标本和 液体培养物可直接涂片镜检，有些细菌可做出初步诊断。
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脑膜炎类型
观察物
细菌性的 结核性的 真菌性的 病毒性的
优势白细 胞类型
临床微生物检验整理版
SPA:葡萄球菌A蛋白,是一种具有种属特异性的完全抗原,从人体分离出的金黄色葡萄球菌几乎都含有SPA.表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌则不具有.SPA可与IgG的Fc段能非特异的结合而不影响Fab段的免疫活性,故可用作检测各种抗原或抗体的实验诊断试剂.MRSA:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,对甲氧西林等常表现出异质耐药性.能产生b-内酰胺酶而使青霉素失效而表现出耐药性。
胆汁溶菌试验: 胆汁或胆盐可溶解肺炎链球菌,可能是由于胆汁降低细胞膜表面的张力，使细胞膜破损或使菌体裂解；或者是由于胆汁加速了肺链本身的自溶过程。
因此主要用于肺炎链球菌与甲型链球菌的鉴别，前者阳性，后者阴性。
凝固酶试验:血浆凝固酶是金葡菌产生的一种主要致病物质，能使含抗凝剂的人或兔血浆凝固，致病株大多数能产生，是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标，能使细菌抵抗体内吞噬细胞的吞噬；保护细菌不受血清中杀菌物质的破坏；并使感染易于局限化和形成血栓。
组织培养：将人或动物离体的活组织或分散的活细胞，在实验室的试管或培养基中，模拟体内的生理条件使之生存和生长，称之为组织培养。
包涵体：包涵体是病毒在增殖的过程中，常使寄主细胞内形成一种蛋白质性质的病变结构，在光学显微镜下可见。
多为圆形、卵圆形或不定形。
TCID50：50%组织细胞感染的病毒剂量，将待测病毒液作10倍系列稀释，分别接种单层细胞经培养后观察CPE等指标，以能感染50%细胞的最高稀释度的病毒量为终点，经统计学处理计算出TCID50。
抗酸染色法：用石碳酸复红染色后，用盐酸乙醇分色，再用美蓝进行对比染色，即不再脱色而呈现石碳酸复红的红色，分歧杆菌为阳性。
BCG:卡介苗，即将有毒力的牛型结核分枝杆菌在甘油胆汁马铃薯培养基上长期培养传代，得到减毒菌株，可用于预防结核菌感染。
郭霍现象（Koch phenomenon）:有毒TB初次感染GP，10－14天后注射局部溃烂、坏死，附近LN肿大，细菌扩散漫延至全身，甚至死亡。
市第一人民医院细菌室粪便标本的细菌学检验
3.2.1染色检查：将米泔样的标本涂2张片用乙醇固定后染色，目的观察弧菌有无呈鱼群状排列。
3.2.2悬滴检查取患者粪便制成悬滴涂片，霍乱弧菌和EI tor弧菌均呈现极活泼的穿梭状运动。
3.2.3制动检验运动活泼的弧菌涂片加人霍乱弧菌诊断血清后，在显微镜下观察，若原运动活泼的现象停止，为制动试验阳性。
市第一人民医院细菌室粪便标本的细菌学检验
1.粪便标本中常见病原菌
金黄色葡萄球菌
伤寒及其它沙门菌
结核分支杆菌
志贺菌属
难辨梭菌
致病大肠埃希菌
白色念珠菌
弧菌属菌种
气单胞、
邻单胞菌种
小肠结肠炎耶尔森菌
弯曲菌
2.标本采集
2.1自然排便采集法自然排便后，挑取脓血、粘膜部分的粪便2～3g，液体粪便取絮状物置于大便培养管或增菌液中送检。
2.2直肠肛管法用大便培养用的肛管直接插入肛门成人4～5cm，幼儿2～3cm，轻轻在直肠内旋转数次，目的是使直肠表面粘液能通过肛管孔进入肛管内。然后拔出放入大便培养管中送检。
3.检验步骤
3.1涂片检查粪便标本因各种正常菌群含量甚多而一般不作直接涂片找致病菌，只有怀疑霍乱弧菌及菌群失调所致腹泻时，才作直接涂片检查。
5.粪便中培养出霍乱弧菌、沙门氏菌、志贺氏菌、致病性大肠杆菌时应作为急值报告，并填写几危急值报告单。
3.5霍乱弧菌的培养，直接取患者米泔样粪便0.5ml，接种于碱性蛋白胨水增菌液和4号平板，35℃培养6～8h，再转种一只4号平板。35℃培养18～24h后形成较大、菌落中间为灰黑色、有光泽、隆起、湿润的菌落，如泼水状。挑取可疑菌落5～10个与霍乱多价“O”诊断血清作玻片凝集试验，如为阳性，则立即报告，并将可疑菌送成都市疾病控制中心确认。
常见临床标本细菌学检验简述
分离培养
将标本接种在适宜的培养 基上进行细菌分离培养。
注意事项
01 确保采集工具的无菌性，避免交叉感染。
02 采集足够的标本量，以保证检验结果的准 确性。
03
及时送检，避免延误检验时间。
04
注意个人防护，避免感染。
PART 02
临床标本细菌学检验方法
分离培养
分离培养
将临床标本接种于适宜的固体或 液体培养基上，在适宜的温度和 环境下进行培养，使细菌得以生
免疫学鉴定
利用抗原-抗体反应的原理 ，通过免疫学方法进行细 菌的鉴定。
药敏试验
纸片扩散法
将含有不同抗菌药物的纸片贴在已接 种细菌的平板上，观察细菌的生长情 况，以判断细菌对抗菌药物的敏感程 度。
稀释法
E试验
将细菌接种在含有抗菌药物的平板上 ，通过测量抑菌圈的大小来判断细菌 对抗菌药物的敏感程度。
通过不断增加抗菌药物的浓度，观察 细菌的生长情况，以判断细菌对抗菌 药物的敏感程度。
结果解读
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解读临床意义
根据细菌培养和药敏试验结果，判断细菌种类、 感染部位及病原体对抗生素的敏感性，为临床医 生提供诊断和治疗依据。
鉴别病原菌
通过细菌形态、染色、生化反应等实验手段，鉴 别不同病原菌，有助于针对性地选择抗菌药物。
3
判断耐药性
监测细菌对抗生素的耐药性，预测治疗效果，为 临床医生提供抗菌药物选择的参考依据。
伤口分泌物标本
用无菌棉签擦拭伤 口表面分泌物。
血液标本
采集静脉血液，常 用无菌注射器抽取 。
呼吸道标本
采集鼻咽拭子或痰 液，用无菌棉签擦 拭鼻咽部或咳痰。
粪便标本
采集新鲜粪便，避 免污染。
临床常见标本的微生物检验ppt课件
• 研究显示，国内常规痰标本中约半数存在 唾液严重污染现象。
（一）采集指征
• 凡是发热、咳嗽和咳痰，痰呈脓性、粘稠或血性， 并伴有胸痛、气急，肺部闻及湿罗音，外周白细 胞总数及中性粒细胞比例明显增高，X线检查提 示肺部有炎性浸润或胸腔积液，甚至出现感染性 休克和呼吸衰竭等患者，应采集痰液或下呼吸道 标本。
同时采集2~3套（不同部位）血培养标本。（即 双瓶双臂同时采集血培养标本。）
婴幼儿患者，推荐同时采集2次（不同部位） 血培养标本。
为什么要求多次采血？
• （1）菌血症有“持续性”和“暂时性”之分，多次采血可 提高阳性检出率，减少漏检； 两瓶或以上血培养以上血培养结果阳性，细菌鉴定结果相 同，判断为感染菌，作药敏并报告临床。 送检两瓶或以上血培养，仅1瓶结果为阳性，且为潜在的污 染菌（如表皮葡萄球菌、微球菌、气球菌、棒状杆菌等）， 一般作为污染菌。 出现多种细菌在排除污染可能后，可考 虑“复数菌”败血症的诊断。 仅送检1瓶血培养，且培养出上述潜在的污染菌。则其临床 意义不能确定，需与临床医生讨论其可能的临床价值。
经支气管镜抽吸法（支气管肺泡灌洗液、防污染样本毛刷等）
• 直接从肺部感染病灶采集高浓度的病原菌，较为安全，但不能避免咽喉部正 常菌群污染。
•
经人工气道吸引分泌物（导管吸痰、防污染灌洗等）
• 较为采用，但人工气道常有致病菌或定值菌存在，建议采集前先做细胞血筛 查。
•
经气管穿刺吸引物
• 采集到的下呼吸道标本不受上呼吸道污染，常用于厌氧菌培养，但患者不易 接受。
中，剧烈振荡5-10s，然后用接种环将沉淀于管底 的脓痰小片沾出，再放另一个无菌试管中，将同 样的方法反复2次。
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二 生殖道标本
正常的内生殖器是无菌的，而外生殖器 （包括男性尿道口和女性阴道）有多种细 菌寄生。 查见病原菌提示有细菌感染。 常见的病原菌主要有葡萄球菌、肠球菌、 链球菌、淋病奈瑟菌、大肠埃细菌、变形 杆菌等。
（一）标本采集 1.女性生殖道标本 2.男性生殖道标本 3.梅毒螺旋体标本
第五节 泌尿、生殖道标本
一 尿液标本
中段尿培养加计数对于泌尿道感染的诊断有重要 价值。细菌培养必须结合菌落计数辨别是否为病 原菌。 有致病菌或条件致病菌生长，菌落计数>105/ml， 提示感染（膀胱炎，肾盂肾炎、肾或膀胱结核 等）。 常见病原菌主要有大肠埃希菌、葡萄球菌、链球 菌、变形杆菌和伤寒沙门菌等。
（2）男性
（一）标本采集
1. 中段尿标本采集法 （1）女性：
（3）儿童、婴儿
（4）两侧肾盂尿
（5）膀胱穿刺
（二）检验方法和操作流程 ■1.涂片检查 （1）一般细菌及淋病奈瑟菌 （2）念珠菌 （3）结核分枝杆菌 ■ 2.一般细菌培养 如培养2d无细菌生长，即可弃 去。 （1）倾注平板法 （2）平板接种环法 （3）标准接种环法：若定量接种环含量为.001ml， 则整个平板菌落数超过100个，可报告“菌落数 >105/ml”。 （4）Uricult 半定量法
法尿 和液 操标 作本t 操作步骤
Uricult 菌落比密图
Uricult 细菌种类标准模式 图
4.特殊菌落培养 （1）淋病奈瑟菌培养 （2）厌氧菌培养 （3）结核分枝杆菌培养 5.报告方式 培养48h无细菌生长，报告“2 天无细菌生长”。查见细菌，报告菌名及 其菌落计数（菌落数/ml）和药敏结果。
（二）检验方法和操作流程
1.涂片检查 （1）革兰染色镜检 （2）梅毒螺旋体涂片检查 2.分离培养 （1）普通细菌培养 （2）淋病奈瑟菌培养 （3）阴道加特纳菌培养 （4）报告方式：如查见淋病奈瑟菌、阴道加特 纳菌等病原菌，报告菌名和药敏结果。
验生 方殖 法道 和标 操本 作细 流菌 程学 检
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