卡那霉素所致小鼠耳蜗细胞凋亡途径的研究
联合应用卡那霉素和速尿的豚鼠耳蜗毒性实验观察
联合应用卡那霉素和速尿的豚鼠耳蜗毒性实验观察作者：贤芬杨仕明胡吟燕孙建和郭维韩东一【摘要】目的探讨卡那霉素和速尿联合用药对豚鼠耳蜗的毒性作用。
方法实验组25只豚鼠先行肌肉注射卡那霉素500 mg/kg，2小时后静脉注射速尿50 mg/kg，对照组4只豚鼠。
于药物注射后7天行听觉脑干诱发电位（ABR）仪检测试验组和对照组豚鼠耳蜗听功能，对阈值大于95 dB SPL豚鼠行耳蜗铺片免疫荧光染色和常规切片观察，并对耳蜗进行扫描电镜观察。
结果实验组25只豚鼠中有13只豚鼠ABR测试阈值高于95 dB SPL，将这些致聋豚鼠作为观察对象，发现毛细胞和神经纤维明显受损，以耳蜗第一、二回损伤明显。
结论卡那霉素和速尿联合用药可导致豚鼠毛细胞和神经纤维严重受损，是建立耳聋模型的一种快速而有效的方法。
【关键词】卡那霉素速尿听觉脑干诱发电位耳蜗组织病理学免疫荧光【Abstract】 Objective To investigate the ototoxicity of co-administration of kanamycin（KM） with the loop diuretic furosemide to guinea pigs. Methods Guinea pigs received an intramuscular injection of KM（500 mg/kg） followed 2h later by an intravenous infusion of furosemide（50 mg/kg）. Auditory brainstem responses（ABRs） were recorded to monitor the animals' hearing at the 7th day after the drug administration.Immunohistochemical and histopathological changes were observed by using light microscopy and scanning electron microscopy. Results Subsequent ABR monitoring showed that profound hearing loss was both bilateral and permanent. Histopathological examination showed an absence of all inner and outer hair cells in the basal cochlea. The extent of neurofiber lesion was also eveident at the basal cochlea and dependent on the period of survival following the deafening procedure. Conclusion The co-administration of KA and furosemide effectively produces a profound hearing loss in guinea pigs and it is an effective deafening method for acute animal experiments.【Key words】kanamycin（KM）; Furosemide; Auditory brainstem responses（ABRs）;; Cochlear histopathology 联合应用肌肉注射卡那霉素（kanamycin，KM）和利尿酸（ethacrynic acid，EA）进行动物耳聋造模具有单次给药诱导耳聋而不必刺激耳蜗或者圆窗的优点［1］。
耳蜗细胞死亡方式的鉴别
耳蜗细胞死亡方式的鉴别丁大连;李鹏;高可雷;蒋海燕;孙虹;陈成芳;Richard Salvi【摘要】目的通过几种不同耳毒性药物离体培养实验和活体动物实验,以观察耳蜗细胞死亡的不同方式.方法应用Apoptosis-Necrosis Quantification Kit对正常或耳毒性药物处理过的离体培养耳蜗组织和活体耳蜗组织进行了染色.试剂盒中含有3种不同荧光标记的探针,其中绿色荧光标记的annexin V可鉴别活细胞内出现的凋亡改变,红色荧光标记的Ethidium homodimer Ⅲ可鉴别活细胞内出现的坏死改变,蓝色荧光标记的Hoechst 33342则可鉴别出健康细胞.结果在耳蜗离体培养实验中,细胞凋亡信号和坏死信号几乎同时出现在顺铂或庆大霉素处理的耳蜗外植体;在活体动物实验中,细胞凋亡信号和坏死信号也同时出现在急性卡那霉素损害模型和慢性卡那霉素损害模型.结论在细胞受损后的变性过程中,凋亡因子和坏死因子可同时出现而导致细胞的死亡.细胞凋亡的过程一般比较迅速而常常发生在急性损害阶段,而细胞坏死的过程往往比较缓慢而多见于细胞的慢性损害过程.在细胞死亡的最后阶段,细胞的最终破坏一般取决于哪种死亡方式抢先完成,但无论是哪种死亡方式占据了主导地位,都不能排除另外一种细胞死亡方式对细胞降解过程的协同作用.【期刊名称】《中国耳鼻咽喉颅底外科杂志》【年(卷),期】2015(021)003【总页数】6页(P178-183)【关键词】耳蜗;细胞凋亡;细胞坏死;细胞死亡;耳毒性药物【作者】丁大连;李鹏;高可雷;蒋海燕;孙虹;陈成芳;Richard Salvi【作者单位】中南大学湘雅医院耳鼻咽喉头颈外科,湖南长沙410008;中山大学附属第三医院耳鼻咽喉头颈外科,广东广州 510630;Center for Hearing and Deafness,University at Buffalo,USA;中山大学附属第三医院耳鼻咽喉头颈外科,广东广州 510630;Center for Hearing and Deafness,University at Buffalo,USA;中南大学湘雅医院耳鼻咽喉头颈外科,湖南长沙410008;Center for Hearing and Deafness,University at Buffalo,USA;Center for Hearing andDeafness,University at Buffalo,USA;中南大学湘雅医院耳鼻咽喉头颈外科,湖南长沙410008;Center for Hearing and Deafness,University at Buffalo,USA;山东省立医院耳鼻咽喉科,山东济南250014;中南大学湘雅医院耳鼻咽喉头颈外科,湖南长沙410008;Center for Hearing and Deafness,University at Buffalo,USA 【正文语种】中文【中图分类】R764细胞的死亡方式主要可以分为两大类，一类是被称之为凋亡(apoptosis)的程序化死亡方式(programmed cell death);另一类是被称之为坏死(necrosis)的非程序化死亡方式(unprogrammed cell death)。
卡那霉素对离体培养大鼠耳蜗毛细胞损害的实验研究
卡那霉素对离体培养大鼠耳蜗毛细胞损害的实验研究
李婷钰;王苹;杜波;杜宝东
【期刊名称】《中国老年学杂志》
【年(卷),期】2010(030)001
【摘要】目的观察并建立卡那霉素大鼠耳蜗毛细胞损伤的离体实验模型.方法应用耳蜗基底膜分离取材技术、耳蜗器官离体培养技术和毛细胞纤毛荧光染色技术定量观察了不同浓度及不同给药时间卡那霉素对新生大鼠耳蜗毛细胞的损害规律.结果卡那霉素对耳蜗毛细胞的损害程度随着剂量增加而加重,耳蜗毛细胞损害首先发生在外毛细胞,其病变规律是从耳蜗的底回向顶回发展.结论卡那霉素对离体培养耳蜗毛细胞损害的时间剂量曲线与在体损伤规律一致.
【总页数】3页(P56-58)
【作者】李婷钰;王苹;杜波;杜宝东
【作者单位】吉林大学第一医院耳鼻咽喉头颈外科,吉林,长春,130021;吉林大学第一医院耳鼻咽喉头颈外科,吉林,长春,130021;吉林大学第一医院耳鼻咽喉头颈外科,吉林,长春,130021;吉林大学第一医院耳鼻咽喉头颈外科,吉林,长春,130021
【正文语种】中文
【中图分类】Q24;R978.1
【相关文献】
1.中药聪耳胶囊拮抗耳蜗毛细胞老年性损害的实验研究 [J], 宣伟军;黄力毅
2.大鼠耳蜗毛细胞前体细胞与耳蜗间质细胞共培养的实验研究 [J], 张媛;郭维;胡吟
燕;郑贵亮;翟所强
3.丁胺卡那霉素诱发豚鼠耳蜗外毛细胞凋亡的实验研究 [J], 巴云鹏;董明敏;董民场;汤文学
4.硫酸新霉素对新生大鼠离体培养耳蜗毛细胞的毒性作用研究 [J], 舒卫宁;杨仕明;赵立东;郭维维;张小兵
5.庆大霉素对小鼠耳蜗毛细胞损害的离体培养试验模型 [J], 侯秋来;丁大连;蒋海燕;Richard J.Salvi;尹绍文
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丁胺卡那霉素对豚鼠耳蜗毛细胞凋亡及听力阈值的影响
丁胺卡那霉素对豚鼠耳蜗毛细胞凋亡及听力阈值的影响巴云鹏;董明敏【期刊名称】《郑州大学学报（医学版）》【年(卷),期】2000(035)006【摘要】Aifr: To investigate the cochlear hair cell apoptosis induced by the ototoxic aminoglycoside antibiotic amikacinand the effect of hair cell apoptosis on heating loss in guinea pigs. Methods: Fifteen guinea pigs were randomly divided into 3groups, which had been intramuscularly injected with amikacin for 1 day, 3 days and 6 days respectively before they were put todeath. Auditory brainstem response (ABR) and the apoptosis of cochlea hair cells were examined with TdT-modided biotin-dUTPNick-end labeling( TUNEL) at different times. Results: ①In normal cochlear hair cells, no apoptic cell were generally noted. In3 groups the morphological changes of the cell apoptosis were noted at 1,3 and 6 days after injection with amikacin; ②ABRthreshold had no obvious changes 1,3 days after using amikacin while an elevation of ABR threshold was noted after using amikacinfor 6 successive days in guinea pigs. C orclusion: ① Amikacin can induce the apoptosis of the cochlear hair cells in guinea pigs.Cell apoptosis was a mode of hair cell loss after injection with amikacin in guinea pigs. ② The ototoxin mechanism of the amino-glycoside antibiotic may be related to apoptosis of the cochlear hair cell induced by itself.%目的：探讨丁胺卡那霉素作用于耳蜗系统时毛细胞凋亡现象及其在听力损伤中的作用。
卡那霉素耳中毒后豚鼠耳蜗细胞凋亡的研究
卡那霉素耳中毒后豚鼠耳蜗细胞凋亡的研究
陶泽璋;刘剑锋;肖伯奎
【期刊名称】《听力学及言语疾病杂志》
【年(卷),期】2001(009)004
【摘要】目的探讨卡那霉素耳中毒后耳蜗毛细胞有无凋亡.方法取听力正常豚鼠12只,实验组6只,对照组6只分别给予4000 mg@kg-1@d-1卡那霉素和生理盐水肌注,连续10天,停药一周后处死.取右侧听泡石腊包埋切片.用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)检测耳蜗细胞凋亡.结果实验组中Corti 器毛细胞及支持细胞,血管纹边缘细胞均有凋亡,而螺旋神经节细胞无凋亡;对照组均无凋亡.结论耳蜗细胞凋亡在卡那霉素所致耳蜗损害中起重要作用.
【总页数】2页(P204-205)
【作者】陶泽璋;刘剑锋;肖伯奎
【作者单位】武汉大学人民医院耳鼻咽喉-头颈外科,;武汉大学人民医院耳鼻咽喉-头颈外科,;武汉大学人民医院耳鼻咽喉-头颈外科,
【正文语种】中文
【中图分类】R764.35
【相关文献】
1.卡那霉素耳中毒后豚鼠耳蜗热休克蛋白的表达 [J], 陶泽璋;肖伯奎;刘剑锋;曲秋懿
2.卡那霉素耳慢性中毒后豚鼠耳蜗细胞凋亡的观察 [J], 杨俊慧;刘兆华
3.JNK在豚鼠丁胺卡那霉素中毒后耳蜗毛细胞的激活表达 [J], 臧洪瑞;姜学钧;任树北;李巍
4.雏鸡耳卡那霉素中毒后耳蜗再生毛细胞超微结构的动态观察 [J], 向明亮;穆美云;迟放鲁;陈洁;程岚;侯东明
5.听力阈值变化与卡那霉素耳慢性中毒豚鼠耳蜗细胞凋亡 [J], 杨俊慧;王正国;朱佩芳;刘兆华
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17-DMAG体外诱导HSP70并保护卡那霉素引起的耳蜗毛细胞损伤
17-DMAG体外诱导HSP70并保护卡那霉素引起的耳蜗毛细胞损伤第一部分：耳蜗器官体外培养技术的建立目的：建立稳定的新生小鼠耳蜗器官(Corti’s Organ)的体外培养方法以及耳蜗毛细胞(hair cells)的组织学检查技术,为内耳研究提供新的条件和模型。
方法：在解剖显微镜下将出生后3-5天的小鼠基底膜完整的分离,用显微剪分成底回、中回和顶回三个节段,利用培养液的表面张力使基底膜节段贴培养皿底壁平铺培养。
应用荧光标记的鬼笔环肽特异性染色标记耳蜗毛细胞的静纤毛和表皮板,荧光显微镜观察。
结果：耳蜗器官经过24小时离体培养后,贴壁良好,外周可见明显新生的上皮细胞及成纤维细胞；经过2-4天的离体培养后,外周新生细胞继续增加,荧光显微镜观察显示毛细胞形态良好,纤毛排列整齐,成倒“V”字形。
三排外毛细胞(OHC)和一排内毛细胞(IHC)无缺失。
表皮板连接紧密。
内毛细胞每100微米纵向长度细胞个数为顶回8.92±0.665；中回10.67±0.606；底回11.58±0.585。
外毛细胞每100微米纵向长度细胞个数为顶回32.42±1.429；中回36.00±1.414；底回45.25±1.725。
结论：组织贴壁法体外培养小鼠耳蜗器官是一种理想的观察和评估耳蜗毛细胞的实验造模方法。
第二部分：17-DMAG及硫酸卡那霉素分别对体外培养的耳蜗毛细胞的作用目的：研究抗炎及抗肿瘤药物格尔德霉素的衍生物17-DMAG(17-(Dimeth y laminoethy lamino)-17-demethoxygeldanamycin)及硫酸卡那霉素两种药物对体外培养的耳蜗毛细胞的作用。
方法：体外培养新生小鼠耳蜗器官24小时后加入不同剂量的上述两种药物,继续培养24小时后,组织固定。
用荧光标记的鬼笔环肽特异性染色标记耳蜗毛细胞的静纤毛,荧光显微镜观察。
计数存活的毛细胞个数。
联合应用卡那霉素和速尿的豚鼠耳蜗毒性实验观察
联合应用卡那霉素和速尿的豚鼠耳蜗毒性实验观察张贤芬;杨仕明;胡吟燕;孙建和;郭维;韩东一【期刊名称】《中华耳科学杂志》【年(卷),期】2008(6)2【摘要】目的探讨卡那霉素和速尿联合用药对豚鼠耳蜗的毒性作用.方法实验组25只豚鼠先行肌肉注射卡那霉素500 mg/kg,2小时后静脉注射速尿50 mg/kg,对照组4只豚鼠.于药物注射后7天行听觉脑干诱发电位(ABR)仪检测试验组和对照组豚鼠耳蜗听功能,对阈值大于95 dB SPL豚鼠行耳蜗铺片免疫荧光染色和常规切片观察.并对耳蜗进行扫描电镜观察.结果实验组25只豚鼠中有13只豚鼠ABR 测试阈值高于95 dB SPL,将这些致聋豚鼠作为观察对象,发现毛细胞和神经纤维明显受损,以耳蜗第一、二回损伤明显.结论卡那霉素和速尿联合用药可导致豚鼠毛细胞和神经纤维严重受损,是建立耳聋模型的一种快速而有效的.【总页数】4页(P166-169)【作者】张贤芬;杨仕明;胡吟燕;孙建和;郭维;韩东一【作者单位】解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科,解放军总医院耳鼻咽喉科研究所,北京,100853;解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科,解放军总医院耳鼻咽喉科研究所,北京,100853;解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科,解放军总医院耳鼻咽喉科研究所,北京,100853;解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科,解放军总医院耳鼻咽喉科研究所,北京,100853;解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科,解放军总医院耳鼻咽喉科研究所,北京,100853;解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科,解放军总医院耳鼻咽喉科研究所,北京,100853【正文语种】中文【中图分类】R322.923;R994.11【相关文献】1.calpain1在卡那霉素致毒豚鼠耳蜗中的表达 [J], 马德菊2.依布硒啉对丁胺卡那霉素致豚鼠耳蜗毒性保护作用的实验研究 [J], 赵晨;杨宁;李巍;赵宁;惠莲;姜学钧3.卡那霉素和速尿联合用药后豚鼠耳蜗听功能研究 [J], 张贤芬;杨仕明;胡吟燕;孙建和;郭维;韩东一4.速尿与硫酸卡那霉素联合用药对大鼠内耳毒性的实验观察 [J], 袁分钱;杨仕明;孙建和;郭维维;刘会占;林昶5.速尿对豚鼠内耳血管纹影响的实验观察及其耳毒性机制的探讨 [J], 郎海南;孙连玉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
年龄相关性听力损失小鼠耳蜗毛细胞的凋亡机制
年龄相关性听力损失小鼠耳蜗毛细胞的凋亡机制张少强;李胜利;闫利英;李随勤;李白芽;朱宏亮;郑庆印【摘要】目的观察年龄相关性听力损失小鼠耳蜗毛细胞的死亡方式,探讨老年性聋的分子机制.方法随机选用5～7只28、30和60天龄的NMF308~(nmf/nmf)小鼠,应用ABR和DPOAE检测听功能,用免疫荧光染色组织化学技术TUNEL,Caspase-3和碘化丙啶(PI)染色标记并观察耳蜗毛细胞.结果NMF308~(nmf/nmf)小鼠从1月龄开始发生听功能减退和毛细胞改变,到2月龄时出现明显的TUNEL阳性标记,是毛细胞凋亡的最早表现;Caspase -3阳性表达的毛细胞凋亡现象稍晚出现;PI标记可见2～3月龄开始出现毛细胞细胞核固缩和碎片;到3月龄时听功能基本丧失,耳蜗毛细胞严重缺失.结论老年性聋的早期首先出现耳蜗毛细胞出现DNA单链断裂,随后Caspase-3信号途径激活,导致耳蜗毛细胞凋亡.【期刊名称】《听力学及言语疾病杂志》【年(卷),期】2010(018)001【总页数】5页(P43-47)【关键词】老年性聋;外毛细胞;凋亡;耳蜗;动物模型【作者】张少强;李胜利;闫利英;李随勤;李白芽;朱宏亮;郑庆印【作者单位】西安交通大学医学院第一附属医院耳鼻咽喉-头颈外科,西安,710061;西安交通大学医学院第二附属医院耳鼻咽喉科-头颈外科;西安交通大学医学院第二附属医院耳鼻咽喉科-头颈外科;西安交通大学神经科学研究中心;Case Western Reserve University School of Medicine,Department of OtolaryngologyHead & Neck Surgery,Cleveland,USA;西安交通大学医学院第一附属医院耳鼻咽喉-头颈外科,西安,710061;西安交通大学医学院第一附属医院耳鼻咽喉-头颈外科,西安,710061;西安交通大学神经科学研究中心;Case Western Reserve University School of Medicine,Department of Otolaryngology Head & Neck Surgery,Cleveland,USA;西安交通大学神经科学研究中心;Case Western Reserve University School of Medicine,Department of Otolaryngology Head & Neck Surgery,Cleveland,USA【正文语种】中文【中图分类】R764.43~+6为了探讨老年性听力损失的内耳组织和毛细胞死亡的分子机制，常选择一些具有快速老化和听力损失的动物作为老年性聋研究的动物模型。
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２ １ 年 １月 第 ３ ０１ ２卷第 １ 期
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（ 稿 日期 ： ０ ０—０ ２ 编 辑 ： 华 ） 收 ２１ ６— ０ 祝
卡 那 霉 素 所 致 小 鼠耳 蜗 细 胞 凋 亡 途 径 的 研 究 冰
５ ｆ ，汤 浩 －＇ Ｊ ，王 爱 梅
辽 宁医学院生理 教研 室（ 宁锦 州 １ １０ ） ２中国医科 大学生理教研 室（ 宁沈 阳 １００ ） 辽 ２０ １ ； 辽 １０ １ 【 摘要 】 目的 探 讨卡那霉素所致 小鼠耳毒性的 细胞 凋 亡机 制 。方 法 采 用 小鼠耳毒 性模 型， 结合 形 态学
和 听 力 学研 究 方 法 ， 究卡 那 霉 素 所 致 小 鼠耳 毒 性 的 凋 亡 机 制 。结 果 小 鼠 的 听 觉功 能 呈 时 间依 赖 性 的损 害 ； 研 耳 蜗 内细 胞 凋 亡 是 小 鼠听 觉功 能损 害 的机 制 之 一 ， ａｐｓ ３ Ｂ ｌ 、 ａ ｃｓａｅ一 、 ｃ 一２ Ｂ ｘ等 细 胞 凋 亡信 号 转 导 途 径 都 不 同 程 度 地 参 与 了这 个 过 程 。 结 论 卡 那 霉 素 所 致 小 鼠 听 觉 损 害 的 机 制 之 一 是 耳 蜗 内细 胞 经 多 种 途 径 最 终 发 生 凋 亡 的
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２ ０ ５ １ ６） １ ４ பைடு நூலகம் ７， ８ （ ： １ ３—１ ５ ． １ ０
结果。
【 关键词 】 卡 那霉素 ； 耳毒性 ； 耳蜗 ；凋亡
氨 基 甙 类 抗 生 素 （ ｍ ｎｇ ｃｓ ｅ ｎ ｂｏ ｃ， Ａ ｉｏｌ ｏｉ ｓＡ ｔ ｉ ｉ ｙ ｄ ｉ ｔｓ
组 ｌ ０只。按 ７ ０ｍ ／ ｇ的剂量 ， ５ ｇ ｋ 皮下 注射 给药 ， 天 每
两次 ， 间 ８ ｈ １ ３ ２ 实验 动 物 的 听 觉 功 能 检 测 腹 腔 注 射 ２ 戊 ． ． ％
Ａ Ａ） ｍ ｎ 广谱 、 高效 、 价格低廉 、 易产生耐药性 ， 不 曾被 广
泛 用 于治 疗 革 兰 阴 性 菌感 染 的 疾 病 。但 氨 基 糖 甙 类 抗
生 素 可 引 起 严 重 耳 蜗 毒 性 、 庭 功 能 紊 乱 甚 至 肾毒 性 前
等 不 良反 应 ， 也 严 重 限制 这 类 药 物 的应 用 。然 而 ， 这 在
ｓ ｍ ｅ ｎ ｒ ａ ｅ ｕ ｏ ｃ ｏ ｅ ｓ ｌｌ ａ ｉ ｅ ｓ ｎ ｉ ｒ ｖ ｓ ｔ ｅａ ｏ ｓ ｉ ｃ ｅ ｓ ｓ ｔ ｍ ｒ ｍｉ ｒｖ ｓｅ ｅ ｋ ｎ ｓ ａ ｄ ｍｐ ｏ ｅ ｈ ｒ —
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