茶叶中茶多酚含量的测定
茶叶中茶多酚类物质的提取与含量测定
茶叶中茶多酚类物质提取与含量测定系别：生物医药工程系班级：食品科学与工程一、目的要求1、了解茶叶中茶多酚及茶多酚的组成及性状；2、掌握溶剂提取法提取茶多酚的原理及方法；3、掌握萃取法分离有机溶剂中的茶多酚的操作方法；二、茶多酚总述1、组成：茶多酚是茶叶中酚类及其衍生物的总称，因此常称为多酚类。
其主要成分是黄烷醇类、羟基-4-黄烷醇类、花色甘类、黄酮醇类和黄酮类。
这些化合物都具有2-苯基苯并吡喃的基本结构，故统称为类黄酮物质。
茶叶中绿原酸、鸡鈉酸、咖啡酸等酚酸类化合物也是茶多酚的组分之一。
在茶多酚各组分之一黄烷醇类为主，黄烷醇类优异儿茶素类物质为主。
2、性状：茶多酚是介于淡黄色至茶褐色之间的无定型粉末，味涩，略有吸湿性，易溶于水，可溶于乙醇、甲醇、乙醚、丙酮、乙酸乙酯，微溶于油脂，不溶于氯仿及苯等有机溶剂。
茶多酚具有较好的耐酸性，在pH<7时较稳定，在pH>7时则不稳定且氧化变色加快，呈红色。
3.茶多酚的提取方法茶多酚提取工艺效果较好的是有机溶剂萃取法、离子沉淀提取法、树脂吸附分离法、超临界二氧化碳萃取法，其次是超声波浸提法、层析法、膜技术。
4.贮存方法：贮存于阴凉通风干燥环境，并与有毒、有气味的物品隔离，避免直接与三价铁离子及碱性物质接触。
三、实验原理有机溶剂萃取法：有机溶剂萃取法是传统的提取工艺。
是利用茶叶中不同化合物在不同溶剂中的溶解度不同进行提取分离。
在粗茶叶萃取溶液中，除含有茶多酚以外，还含有咖啡碱、酯质、色素、植物多糖、有机酸、以及悬浮物，且茶多酚含量仅为25%～40% ，所以大多数工艺用乙酸乙酯、氯仿等有机溶剂反复萃取的方法进一步除杂、纯化、精制。
茶水用氯仿萃取可得到水层和有机层，咖啡碱存在于有机层，而茶多酚则存在于水层中，根据萃取及过滤原理，将有机层和水层分别进行浓缩、萃取，即可得到相应粗产物。
溶剂萃取法一般的工艺路线图所示溶剂萃取法一般的工艺路线本法的优点是：稳定、可靠；缺点是：有效成分的含量和提取率较低，通过以上工艺获得的茶多酚含量通常仅能达到50%～65%。
茶叶中茶多酚的检测方法
茶叶中茶多酚的检测方法，我们必须对茶多酚有一个比较详细的了解茶多酚因为其独特的分子结构，有很强的氧化性以及螯合性，所以能很好的清除人体内的自由基，起到抗氧化、抗衰老的效果；同样也因为其分子结构中的酚羟基，所以茶多酚有很好的螯合性能，能够与蛋白质，金属离子相结合。
据了解，茶多酚能与20多种离子产生络合，与其中10多种产生沉淀，再者，络合产物很多会产生明显的色泽变化。
所以茶多酚的检测方法有很多：1，蛋白质沉淀法：利用与蛋白质的络合沉淀特征检测茶多酚的含量；2，金属例子螯合法：就像GB/T8313-2002茶叶和GB/T21733-2008茶饮料中的检测方法一样，利用多酚羟基与铁离子的螯合变成蓝紫色的特性，在540nm出进行检测；3，氧化法：高锰酸钾与茶多酚的氧化滴定，但是这种方法误差较大，所以目前已经用的很少了；再就是GB/T8313-2008的福林酚法，利用福林酚能将茶多酚氧化然后自己被还原呈蓝色的特征。
目前使用的比较多的就是GB/T8313-2002的酒石酸亚铁法与GB/T8313-2008中的福林酚试剂法！酒石酸亚铁法作为茶多酚检测的经典方法在国内被应用了几十年，采用3.913的经验系数进行茶多酚的检测，但是在“食品添加剂茶多酚”的检测标准中则是以没食子酸作标准曲线，系数2.78。
同样的茶多酚检测，为什么会有不同的系数呢，很多人或许会疑惑？！但实际上3.913的的系数是以茶叶的乙酸乙酯分离物作为标定物质作标准曲线的，因为乙酸乙酯分离物中不仅仅包括了多酚类物质，还包括了一些其他内涵成分，所以检测结果会偏大，目前主要用于饮料行业中，而2.78的系数则主要用在植物提取物茶多酚领域，其主要区别在于采用的标定物不一致！当然酒石酸亚铁法也有自身的缺点：茶多酚是一种复合物，并非单一组分，其中包括了儿茶素，黄酮类，花青素等等，不同的组分与铁离子络合颜色并非完全一致，所以对于一般成分比较复杂的植物多酚并不适用！再来谈谈福林酚法：福林酚法主要利用福林酚的强氧化性，与多酚反应变蓝，在765nm处进行检测，当然了，福林酚还用于蛋白质的检测中，正是因为这点，所以福林酚并不能有效区分茶多酚，一些还原性氨基酸，植物中非多酚类酚性物质，抗坏血酸等等，这也是它的局限性。
茶叶中茶多酚含量的测定
本标准适用于茶叶中茶多酚含量的测定。
在茶叶水浸出物中与亚铁离子产生络合反应的酚性化合物,均称茶多酚。
1 原理茶叶中多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物。
用分光光度法测定其含量。
2 仪器和用具实验室常规仪器及下列各项:2.1 分析天平:感量0.0001g。
2.2 分光光度仪。
3 试剂和溶液所用试剂应为分析纯(AR),水为蒸馏水。
3.1 酒石酸亚铁溶液:称取1g (准确至0.0001g) 硫酸亚铁(GB 664-77)和5g (准确至0.0001g)酒石酸钾钠(GB 1288-81),用水溶解并定容至1L(溶液应避光,低温保存,有效期一个月)。
3.2 pH7.5磷酸盐缓冲液:3.2.1 1/15M磷酸氢钠: 称取23.377g磷酸氢二钠(GB 1263-77),加水溶解后定容至1L。
3.2.2 1/15M磷酸二氢钾: 称取9.078g磷酸二氢钾(GB 1274-77),加水溶解后定容至1L。
取上述1/15M的磷酸氢二钾溶液85ml和1/15m的磷酸二氢钾溶液15ml混合均匀。
4 操作方法4.1 取样按GB 8302-87《茶取样》的规定取样。
4.2 试样的制备按GB 8303-87《茶磨碎试样的制备及其干物质含量测定》的规定,制备试样。
4.3 测定步骤4.3.1 试液的制备按GB 8305-87《茶水浸出物测定》中3.4.1的规定,制备试液。
4.3.2 测定准确吸取上述(4.3.1)试液1mL,注入25mL的容量瓶中,加水4mL和酒石酸亚铁溶液(3.1)5mL,充分混合,再加pH7.5的缓冲液(3.2)至刻度,用10mm比色杯,在波长540nm处,以试剂空白溶液作参比,测定吸光度(A)。
5 结果计算5.1 计算方法和公式茶叶中茶多酚的含量,以干态质量百分率表示,按下式计算:A×1.957×2 L1茶多酚(％)＝──────×─────×100100 L2×M×m式中: L1——试液的总量,mL;L2——测定时的用液量,mL;M——试样的质量,g;m——试样干物质含量百分率,％；A——试样的吸光度;1.957——用10mm比色杯,当吸光度等于0.50时,每毫升茶汤中含茶多酚相当于1.957mg。
茶叶茶多酚含量的测定
茶叶茶多酚含量的测定茶叶茶多酚含量的测定方法（以农贸一班2组数据为例）一、以没食子酸含量做标准曲线进行计算：上图中的横坐标为每25ml没食子酸标准液中没食子酸的含量，纵坐标为吸光度值。
样品待测液含量对应关系：25ml待测液中茶多酚含量=10ml1/10=0.2g茶叶中茶多酚总含量的1/100。
由对应关系进行公式推导：茶叶样品中茶多酚含量（%）=浸提液中茶多酚的含量/（样品质量*干物质含量）浸提液中茶多酚的含量=1ml中茶多酚含量*10ml=10ml稀释液中茶多酚的含量*10*10ml=25ml待测液中茶多酚的含量*10*10ml茶多酚含量（%）=A*V*d/(L*m*m1*(10^6)),稀释因子d应该为10。
同时由于：A=K*X+b,所以此公式应该调整为：茶多酚含量（%）=[(A-b)*V*d/(L*m*m1*(10^6))]*100A----待测液平均吸光度b----标准曲线公式中的常量，本实验为-0.0134V----浸提液体积本实验为10mld----稀释因子，在以没食子酸含量为横坐标的计算方法中，d=10L----标准曲线斜率m----样品质量，本实验为0.2m1----样品干物质含量，本实验为80%详细过程如下：A1=0.885 A2=0.822 A3=0.784平均光度值A=（A1+A2+A3）/3=0.830将A值带入公式:茶多酚含量（%）= [( A-b)*V*d/(L*m*m1*(10^6))]*100,可以求得茶叶样品中茶多酚的含量=13.5%二、以没食子酸浓度作标准曲线上图中的横坐标为没食子酸标准溶液的浓度，纵坐标吸光度A此时的计算公式推导过程为：茶叶样品中茶多酚含量（%）=0.2g茶叶中茶多酚含量/（0.2*干物质含量）0.2g茶叶中茶多酚的含量为=浸提液浓度*10浸提液浓度=10ml稀释液浓度*10010ml稀释液浓度=25ml待测液浓度*25ml/10ml25ml待测液浓度可以由标准曲线公式：A=L*X+b测得。
茶叶中茶多酚的检测
茶叶中茶多酚的检测一、原理：茶叶磨碎样中的茶多酚用70%的甲醇在70℃的水浴中提取，福林酚试剂氧化茶多酚中-OH基团并显蓝色，最大吸光度波长λ为765nm，用没食子酸做矫正标准定量茶多酚。
二、仪器分析天平：感量0.001g；水浴：70℃±1℃；离心机：转速3500r/min分光光度计三、试剂本标准所用水均为重蒸馏水，除特殊规定外，所用试剂为分析纯。
1、甲醇2、碳酸钠3、甲醇水溶液（体积比）：7+34、福林酚试剂：试剂甲（①4%碳酸钠溶液；②0.2NNAOH溶液；③1%硫酸铜溶液；④2%酒石酸钾钠；（1)将试剂①和②等体积混合；（2)将试剂③和④等体积混合；（3）将（1）和（2）混合溶液按50:1比例混合。
）试剂乙（取10ml1%的乙液于100ml的容量瓶，加水定容）。
（4）将试剂甲和试剂乙按1:1的比例现配成福林酚。
5、将（4）中的福林酚20ml转移到200ml容量瓶中，用水定容并摇匀。
6、7.5%碳酸钠（质量浓度）：称取37.50g±0.01g碳酸钠，加适量水溶解，转移至500ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀。
7、没食子酸标准储备溶液（1000μg/ml)：称取0.110g±0.001g没食子酸（GA，相对分子质量188.14），于100ml容量瓶中溶解并定容至刻度，摇匀（现配）。
8、没食子酸工作液：用转移管分别移取1.0，2.0，3.0，4.0,5.0ml的没食子酸标准储备液溶液于100ml容量瓶中，分别用水定容至刻度，摇匀，浓度分别为10,20,30,40,50μg/ml。
四、操作方法1、供试液的制备母液的制备：称取0.2g（精确到0.0001g，本次实验0.2331g）均匀磨碎的式样于10ml的离心管中，加入在70℃中预热过的70%的甲醇溶液ml，用玻璃棒充分均匀湿润，立即移入70℃水浴中。
浸提10min（隔5min搅拌一次），浸提后冷却至室温，转入离心机在3500r/min转速下离心10min，将上清液转移至10ml容量瓶。
实验2 茶叶茶中多酚含量的测定
红茶
红茶： 是一种全发酵茶（发酵程度大于 80% ）。红茶的名
字得自其汤色红。 著名的红茶：安微祁红、云南滇红、湖北宣红、四川川红。
黑茶
黑茶：原来主要销往边区，原料粗老，加工时堆积发酵时
间较长，使叶色呈暗褐色，是藏、蒙、维吾尔等兄弟民族不可 缺少的日常必需品。
云南普洱和湖南安化黑茶就是中国传统的经典黑茶。
花茶
花茶：利用茶善于吸收异味的特点，将有香味的鲜花和新
茶一起闷，茶将香味吸收后再把干花筛除，制成的花茶香味浓 郁，茶汤色深，深得偏好重口味的中国北方人喜爱。 花茶主要以绿茶、红茶或者乌龙茶作为茶坯、配以能够吐 香的鲜花作为原料，采用窨制工艺制作而成的茶叶。
分为茉莉花茶、玉兰花茶、桂花花茶、珠兰花茶等，以茉莉花茶为最。
10 µg/mL没食子酸（m/v）
三、实验步骤
1、准确称取0.2 g已磨碎茶叶试样，置于10 ml离心管中， 加入5 ml 70%甲醇，放入水浴锅（70º C）中，浸提10 min，冷 却后，于4000 r/min转速下离心10 min，转移上清液至10 ml离
心管中。
2、待测液：取浸提液1 ml定容至100 mL，备测。 以表1浓度测定没食子酸标准液系列的吸光度，以其为纵坐 标，浓度为横坐标绘制没食子酸的标准曲线。
附录：茶叶中茶多酚含量标准
项目 红茶 绿茶 茶多酚， 乌龙茶 mg/kg 花茶 其它 茶饮料 ≥300 ≥500 ≥400 ≥300 ≥300 ≥400 ≥150 ≥150 调味茶饮料 复（混）合茶 饮料 奶 奶味 其他
《绿色食品 茶饮料》NY/T 1713-2009
思考题
1．茶叶的种类及其代表性产品？ 2．茶多酚的组份及其功能？
表1 没食子酸标准曲线浓度
实验四茶叶中茶多酚含量的测定
实验四茶叶中茶多酚含量的测定——高锰酸钾直接滴定法一、目的：掌握高锰酸钾直接滴定法测定茶叶中茶多酚含量的原理及操作二、原理茶叶中茶多酚易溶于热水，在用靛红作指示剂的情况下，样液中能被高锰酸钾氧化的物质基本上都属于茶多酚物质。
根据消耗1mL 0.318g/mL的高锰酸钾相当于5.82mg茶多酚的换算系数，可计算茶多酚的含量。
三、仪器与试剂仪器：分析天平、电动磁力搅拌器、电热水浴锅、500mL白瓷皿。
试剂：1、0.1%靛红溶液：称取靛红1g加入少量水搅匀后，再慢慢加入相对密度为 1.84的浓硫酸50mL，冷却后用蒸馏水定容至1000mL，如果靛红不纯，可下法磺化处理是：称取靛红1g，加浓硫酸50mL，在80℃烘箱或水浴中加热磺化4~6h，用蒸馏水定容至1000mL，过滤后贮于棕色瓶中。
2、0.630%草酸溶液：准确称取草酸6.3034g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。
3、高锰酸钾标准溶液：称取AR的高锰酸钾1.27g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。
准确吸取0.630%草酸溶液10mL，放入250ml锥形瓶中（平行3份），加入蒸馏水50mL，再加入相对密度为1.84的浓硫酸10mL，摇匀，在70~80℃水浴中保温5分钟，取出后用高锰酸钾进行滴定。
开始慢滴，待红色消失后再滴第二滴，以后可逐渐加快，边滴边摇，待溶液出现淡红色保持1分钟不变即为终点。
计算高锰酸钾溶液的百分比浓度。
四、测定步骤1、供测试液的准备：准确称取茶叶磨碎样品1g，放在250mL锥形瓶中，加入沸蒸馏水80mL，在沸水浴中浸提30分钟，然后抽滤、洗涤，滤液倒入100mL容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至100mL，摇匀。
2、测定：取200ml蒸馏水放入白瓷皿中，加入0.1%靛红溶液5mL，再加入供测试液5mL，开动磁力搅拌器，用已标定的高锰酸钾溶液边搅拌边滴定，滴定速度以1滴/s为宜，接近终点时应慢滴。
直到溶液由深蓝色转变为亮黄色为止，记下消耗的高锰酸钾毫升数。
茶茶多酚测定
茶茶多酚测定茶茶多酚测定Tea—Determination of tea polyphenols contentGB/T8313—2002代替GB/T8313—19871 范围本标准规定了对茶叶中茶多酚测定的原理、仪器和用具、试剂和溶液、操作方法及结果计算方法。
本标准适用于茶叶中茶多酚含量的测定，不适用于茶叶提取物制品中茶多酚的测定。
2 引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。
本标准出版时，所示版本均为有效。
所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GB/T8302—2002 茶取样GB/T8303—2002 茶磨碎试样的制备及其干物质含量测定GB/T8312—2002 茶咖啡碱测定3 定义本标准采用下列定义。
茶多酚 tea polyphenols茶叶水浸出物中与亚铁离子产生络合反应的酚类化合物。
4 原理茶叶中多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物。
用分光光度法测定其含量。
5 仪器和用具实验室常规仪器及下列各项：5．1 分析天平：感量0.001g。
5．2 分光光度仪。
6 试剂和溶液所用试剂应为分析纯（AR），水为蒸馏水。
6．1 酒石酸亚铁溶液：称取1.0g硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）和5.0g酒石酸钾钠（C14H4O6KNa·4H2O），用水溶解并定容至1L（低温保存有效期10天）。
6．2 PH7.5磷酸盐缓冲液6．2．1 1/15mol/L磷酸氢二钠：称取23.9g十二水磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O），加水溶解后定容至1L。
6．2．2 1/15mol/L磷酸二氢钠：称取经110℃烘干2h的磷酸二氢钠（KH2PO4）9.08g，加水溶解后定容至1L。
取上述1/15mol/L的磷酸氢二钠溶液85mL和1/15mol/L的磷酸二氢钾溶液15mL混合均匀。
7 操作方法7．1 取样按GB/T8302的规定。
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茶叶中茶多酚的含量测定
1、实验目的：掌握实验操作的趣味性，了解实验内容在实际生活中的应用，充
分理解和掌握茶多酚含量在现实生活中的作用，进一步熟悉茶叶中茶多酚测定的原理及操作。
2、实验原理：茶叶中多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物。
用分光光
度法测定其含量。
3、
仪器和用具：分析天平(感量0.0001g). 分光光度仪及实验常用仪器
4、
试剂和溶液：
所用试剂应为分析纯(AR),水为蒸馏水。
在茶叶水浸出物中与亚铁离子产生络合反应的酚性化合物，均称茶多酚。
5、
操作方法：秤取5g茶叶加入100mL水煮沸，静止冷却20分钟，加压过滤，量取滤液体积记为V1 酒石酸亚铁溶液：称取1g (准确至0.0001g) 硫酸亚铁和5g (准确至0.0001g)酒石酸钾钠，用水溶解并定容至1L(溶液应避光，低温保存，有效期一个月)。
6、
pH7.5磷酸盐缓冲液：磷酸氢钠: 称取23.377g磷酸氢二钠，加水溶解后定容至1L。
磷酸二氢钾：称取9.078g磷酸二氢钾，加水溶解后定容至1L。
取上述磷酸氢二钾溶液85ml和磷酸二氢钾溶液15ml混合均匀。
7、
准确称取上述试液1mL ，注入25mL容量瓶中加水4mL和酒石酸亚铁溶液5ml 充分混合，再加入pH=7.5的缓冲溶液至刻度，用10mm比色皿，在波长等于540nm 出，以试液空白溶液做参比溶液，测定吸光度为A.
8、
茶叶中茶多酚的含量，以干态质量百分率表现，按下式计算：
A×1.957×2 V1
茶多酚(％)＝────────× --------- ×100 结果=
1000 1×m
式中——滤液体积记为V1 mL
m——试样的质量，g；
A——试样的吸光度；此次实验测定A=
1.957——用10mm比色杯，当吸光度等于0.50时，每毫升茶汤中含茶多酚相当于1.957mg。
注意：a. 应取两次测定的算术平均值作为标准。
同一样品的两次测定值之差，每100g试样不得超过0.5g。
b.应用的法子；用分光光度法测定其含量.
c.测定的结果(取小数点后一位)；
化学化工学院环境工程XX班
学生：XXX
2010/11/03。