微生物遗传与育种复习资料
微生物遗传育种试题库
C. 转 导 前 供 体 菌 D. 转 导 后 受 体 菌 答：( ) 18.以 下 不 是 专 性 转 导 特 点 的 是： A. 必 须 是 原 噬 菌 体 状 态 B. 供 体 细 胞 中 的 任 何 染 色 体 基 因 片 段 都 有 机 会 被 转 移 到 受
体细胞中 C. 通 常 包 括 了 一 个 基 因 如 半 乳 糖 (gal) 基 因 的 重 组 D. 原 噬 菌 体 转 导 导 致 噬 菌 体 某 些 基Leabharlann 因 留 在 了 细 菌 的 基 因 组
26.在 性 转 导 中，下 列 正 确 的 说 法 是： A. 基 因 交 换 通 常 发 生 在 Hfr 和 F- 细 胞 之 间 B. 与 F 因 子 相 邻 的 染 色 体 基 因 被 转 移 到 F- 细 胞 中 C. F 因 子 通 常 被 插 入 到 F- 细 胞 中 的 染 色 体 上 D. 如 果 杂 交 被 中 断， 则 只 有 F 因 子 全 部 转 入 F- 中 答：( )
A. 青 霉 素 B. 紫 外 线 C. 丫 啶 类 染 料 D. 转 座 子 答：( ) 10. 在 大 肠 杆 菌 (E.coli) 的 乳 糖 操 纵 子 中 ， 基 因 调 节 主 要 发 生 在 __________ 水 平 上。 A. 转 化 B. 转 导 C. 转 录 D. 翻 译 答：( ) 11.转 座 子 ___________。 A. 能 从 DNA 分 子 的 一 个 位 点 转 移 到 另 一 个 位 点 B. 是 一 种 特 殊 类 型 的 质 粒 C. 是 一 种 碱 基 类 似 物 D. 可 引 起 嘌 呤 和 嘧 啶 的 化 学 修 饰 答：( ) 12.当 F+×F- 杂 交 时 A. F 因 子 几 乎 总 不 转 移 到 F+ 细 胞 中 B. F- 菌 株 几 乎 总 是 成 为 F+ C. 基 因 重 组 的 发 生 频 率 较 高 D. F 因 子 经 常 插 入 到 F- 细 胞 染 色 体 上 答：( ) 13.在 U 形 玻 璃 管 中，将 一 滤 片 置 于 二 株 菌 之 间 使 之 不 能 接 触，在 左 臂 发 现 有 原 养 型 菌 出 现， 这 一 现 象 不 是 由 于： A. 接 合 B. 转 化 C. 普 遍 转 导 D. 专 性 转 导 答：( ) 14.F 因 子 和 λ 噬 菌 体 是： A. 与 寄 主 的 生 活 能 力 无 关 B. 对 寄 主 致 死 C. 与 染 色 体 重 组 后 才 可 复 制 D. 仅 由 感 受 态 细 胞 携 带 答：( ) 15.细 菌 以 转 化 方 式 进 行 基 因 转 移 时 有 以 下 特 性： A. 大 量 供 体 细 胞 的 基 因 被 转 移 B. 包 含 有 F 质 粒 参 加 C. 依 靠 噬 菌 体 感 染 受 体 细 胞 D. 可 通 过 从 供 体 细 胞 中 提 取 DNA 片 段 来 完 成 答：( ) 16.一 个 大 肠 杆 菌 (E.coli) 的 突 变 株， 不 同 于 野 生 型 菌 株， 它 不 能 合 成 精 氨 酸， 这 一 突 变 株 称 为： A. 营 养 缺 陷 型 B. 温 度 依 赖 型 C. 原 养 型 D. 抗 性 突 变 型 答：( ) 17.转 导 子 是 指： A. 供 体 菌 B. 转 导 噬 菌 体
微生物育种复习题(答案)
微生物育种学复习题题型包括填空、选择、名词解释、简答题、问答题名词解释转换:嘌呤与嘌呤之间，嘧啶与嘧啶之间发生互换称为转换置换：在DNA链上的碱基序列中一个碱基被另一个碱基代替的现象称为置换颠换：一个嘌呤替换另一个嘧啶或一个嘧啶替换另一个嘌呤的现象称为颠换移码突变：碱基序列中有一个或几个碱基增加或减少而产生的变异。
转导：由噬菌体将一个细胞的基因传递给另一细胞的过程。
它是细菌之间传递遗传物质的方式之一。
其具体含义是指一个细胞的DNA或RNA通过病毒载体的感染转移到另一个细胞中。
转染：指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。
常规转染技术可分为瞬时转染和稳定转染（永久转染）两大类。
端粒：是染色体末端的一个区域，该区域含有DNA重复序列，当体细胞衰老时，重复序列的数量将逐渐减少。
异核体：两株基因型不同的菌株菌丝体在培养过程中紧密接触，接触部分细胞壁溶解、联结、融合、细胞质交流，在共同的细胞质里存在着两个细胞核。
准性生殖：两个体细胞的核融合，及同源染色体的交换，直至基因重组，完成了和有性繁殖相似的繁殖过程。
原生质体：指在人为条件下，用溶菌酶除尽原有细胞壁或用青霉素抑制新生细胞壁合成后，所得到的仅有一层细胞膜包裹的圆球状渗透敏感细胞。
富集：某些物质通过水、大气和生物作用而在土壤或生物体内显著积累的作用。
基本培养基：仅能满足微生物野生型菌株生长需要的培养基，含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质的培养基。
选择培养基（及各种类培养基概念）：根据微生物的特殊营养需求或其对某些物理、化学因素的抗性而设计的培养基，用来将某种或某类微生物群体中分离出来，具有使混合菌样中劣势菌变为优势菌的功能，广泛用于菌种筛选等领域。
完全培养基:凡可满足一切营养缺陷型菌株营养需要的天然或半组合培养基。
补充培养基:凡只能满足相应的营养缺陷型生长需要的组合培养基。
富集培养：是在目的微生物含量较少时，根据微生物的生理特性设计一种选择性培养基，创造有利的生长条件，使目的微生物在最适环境下迅速生长繁殖，数量增加，由自然条件下的劣势种变成人工环境下的优势种以利分离到所需要的菌株。
《微生物遗传育种学》复习题A专升本
《微生物遗传育种学》复习题A（专升本）一、填空题1、工业微生物菌种的五大基本特征为：非致病性；；利于应用规模化产品加工工艺；；形成具有商业价值的产品或具有商业应用价值。
2、复制型转座涉及到两种酶：一是，作用在原来转座子的末端；二是，它作用在重复的拷贝上。
3、大肠杆菌的RecA蛋白在DNA 复制和损伤修复中共行使三种功能，即、和。
4、表达载体的四大结构要素：多克隆位点、、和。
5、反转录病毒RNA基因组是，因此反转录病毒具有二倍体基因组。
6、λ噬菌体侵入宿主细胞后5分钟内环化，环状DNA分子先进行复制，产生约20个DNA分子，约16分钟后进行复制产生多连体分子。
7、基因组序列的功能分析以及代谢途径的构建改造等都需要克隆目的 DNA，目前，获得大片段 DNA 序列的方法主要有：构建和筛选基因文库、PCR 扩增、、体外大片段 DNA 合成和组装，以及等方法。
二、判断题1、假基因是一段DNA序列，与正常基因相似，但丧失相应的正常功能。
2、R/M体系：即限制与修饰体系，用于保护外源DNA在细胞内稳定存在。
3、原核生物遗传物质复制时，需要多种酶参与，可形成灵活的多种相关酶的复合体结构。
4、DNA的碱基配对时，氨式的A和酮式的T配对，氨式的A异构化为亚氨式时和氨式的C配对。
5、在微生物工业应用中，微生物菌种工作主要包括以下四方面：菌种的分离筛选、菌种培育、菌种的保藏和退化菌种的复壮。
6、细菌染色体DNA 为环状形式，而真核生物中没有环状DNA。
7、目前发现的质粒都是cccDNA。
8、DNA结合蛋白常含有HTH结构。
9、Bam HI的酶切位点为G↓GATCC，Bgl II的酶切位点为A↓GATCT，所以可判断两者为同尾酶。
10、反义RNA指的是可以编码出目的蛋白的一段RNA序列。
三、名词解释1、反向代谢工程2、Z-DNA3、严谨反应4、基因的回复突变5、操纵子6、自主转移质粒7、呼吸现象四、简答题1、T4噬菌体末端冗余ab的亲本病毒是怎样产生cd、de、ef等末端冗余的子代的？2、简述切除修复的流程。
微生物遗传育种知识点汇总
突变型：突变体的基因型或表型称为突变型，和其相对的原存在状态称为野生型。
第一节突变类型和基因符号
一、基因符号
1、基因符号：①每一基因座位用三个小写英文字母表示，它们来自说明这一基因特性的一个、两个或三个英文单词的前三个字母。②产生同一突变型表型的不同基因，用三个字母后面所加的一个大写字母表示。③同一基因的不同突变位点用基因符号后面所加的阿拉伯数字表示。如果位点所属的基因还不确定，那么大写字母用一短线表示。
3、染色体基础：非等位基因位于不同的染色体上，在减数分裂时独立分离，自由组合。
三、连锁与交换定律
1、连锁：位于同一染色体上的基因伴同遗传的现象。交换：由于同源染色体相互之间发生交换而使原来在同一染色体上的基因不再伴同遗传的现象。
2、染色体基础：连锁：受考察两基因间未发生断裂再接；交换：受考察两基因间发生了断裂再接。
（2）野生型和突变型。①野生型。②突变型最常见的是等位基因丧失功能，野生型对突变型而言是显性的。特殊情况：突变型等位基因是获得功能型，产生的蛋白赋予生物体以新的性状，突变型是显性的。
（3）非等位基因。①非等位基因：位于同一染色体的不同基因座，或位于不同染色体上的基因。②非等位基因之间也存在相互作用。
1、有性杂交：指不同遗传型的两性细胞间发生的接合和随之进行的染色体重组，进而产生新遗传型后代的一种育种技术。
2、准性杂交：在无性细胞中所有的非减数分裂导致DNA重组的过程，微生物杂交仅转移部分基因，然后形成部分重组子，最终实现染色体交换和基因重组。
3、原生质体融合：把两个不同亲本菌株的细胞壁，分别经酶解作用去除，而得到球状的原生质体，然后将两种不同的原生质体置于高渗溶液中，由聚乙二醇助融，促使两者高度密集发生细胞融合，进而导致基因重组，就可由此再生细胞中获得杂交重组菌株。
自考 生物工程 06709 微生物遗传与育种 自学考试辅导材料
微生物遗传与育种教学第一章微生物的遗传物质一、名词1 转化: 指一种生物由于接受了另一种生物的遗传物质而发生遗传性状的改变2 cccDNA——共价、闭合、环状 DNA3 复制子：指能独立进行复制的 DNA部分, 一个复制子包括复制起点及其复制区4 启动子(promoter)——是位于结构基因5’端,启始结构基因转录的DNA顺序。
它决定转录的准确启始,并与转录效率有关。
7 终止子(terminator) ——在结构基因的下游,能使转录终止的核苷酸序列8 内在终止子: 只要有核心酶和终止子即可终止转录9 依赖ρ因子的终止子: 必须依赖ρ因子才能终止转录10 开放阅读框(ORF)——在DAN链上，由启始密码子开始到终止密码子为止的一个连续编码序列11噬菌斑---噬菌体感染敏感宿主细菌后在含受体菌的涂布平板上形成的肉眼可见的透明圈。
可萌发长出新菌丝而完成无性世代的循环。
13准性生殖---是一种类似于有性生殖,但比它更为原始的两性生殖方式,它是一种在同种而不同菌株的体细胞间发生融合,它可不借减数分裂而导致低频率基因重组并产生重组子.14同义突变--- 这是指某个碱基的变化没有改变产物氨基酸序列的密码子变化，显然，这是与密码子的简并性相关的。
15营养缺陷型---- 一种缺乏合成其生存所必须的营养物的突变型，只有从周围环境或培养基中获得这些营养或其前体物(precursor)才能生长。
16\转导：是指以噬菌体为媒介，将一个细菌的染色体片断转移到另一个细菌的过程。
1证明核酸是遗传物质有哪些实验证据证明核酸是遗传物质的验证据有：①细菌的转化实验；②T2噬菌体的感染实验；③烟草花叶病毒的重建实验。
2 1928年, F Griffith 发现转化现象的过程3 1944年，Avery证明DNA是遗传物质的过程4 1952年，Hershey 和 Chase 证明T2噬菌体的遗传物质是DNA的过程5 1957年, H Fraenkel-Conrat等通过重建实验证实烟草花叶病毒（TMV）的遗传物质是RNA的过程12试述真核生物基因组结构的特点。
微生物遗传育种考试题
微生物遗传育种考试题微生物的基因组组成复杂，一般是由近200个基因和几百个非编码 DNA组成。
具有染色体的生物种类很多，有的能形成完整、稳定的遗传结构，有的则只有几个基因或一段 DNA。
细胞和动物中存在着很多不稳定细胞。
有些细胞，比如细胞核内含有许多蛋白质、脂肪、氨基酸和激素等，这些蛋白在分裂和生长过程中会发生变化，最终形成蛋白复合物。
当蛋白质复合物受外部环境影响时可能会引起基因表达改变等反应，从而导致遗传缺陷。
如果用微生物遗传育种技术将可使植物、动物细胞或 DNA分子发生变异，从而可得到更好的后代()。
目前生物遗传育种技术已经在一些作物上进行应用。
1.()是植物基因组的一部分。
解析：题干中, A项错误。
微生物可以产生大量的 DNA (脱氧核糖核酸),这些 DNA可以被用作营养物质生产媒介细胞和某些微生物分泌的有机物质的运输媒介，而微生物通过控制其他物质合成与代谢而产生对这些物质具有重要影响的物质。
A项错误，微生物可以利用 DNA合成各种蛋白质，因此，微生物参与植物育种具有重要意义。
B项错误，微生物具有多样性，在自然界中，多种植物都可以利用微生物产生物质用于生产。
C项错误，微生物有不同特征，比如菌丝体与宿主有特定关系，有些微生物可以产生糖类、淀粉等物质，这些物质可以为植物生长发育提供养分，促进植物生长。
D项错误，微生物除了能产生物质外还能够合成其他营养物质，所以具有很高营养价值。
生物遗传育种技术不属于植物基因组研究的范畴。
2.()是动植物遗传育种的核心技术之一。
解析：本题考查植物生物学。
植物遗传育种的核心技术是“生物基因组学”，基因编辑是这一育种方法在农业领域的具体应用。
植物基因组学的研究范围很广，从植物组织发育和生理状态的观察，到植物染色体组形成的研究，到植物变异的研究，到对作物分子设计育种中发生作用机制的研究，都可以在其中发挥重要作用。
植物基因组计划能利用各种形式的植物 DNA序列资料来构建遗传谱系，并通过分子标记来定位在各种植物中进行育种，这是最古老、最成功的植物分子育种计划。
微生物遗传育种期末复习总结
微生物遗传育种期末复习总结2011-1-2绪论1、了解微生物遗传学的发展过程：2、20世纪40年代以前和20世纪40年代以后的主要科学发现第一章微生物遗传的物质基础1、大肠杆菌φ×174噬菌体2、大肠杆菌染色体DNA和质粒DNA3、真核微生物的遗传物质----染色质和核小体结构第二章基因突变1、了解基因命名规则2、突变率计算方法：固体（固体）培养基中培养突变率计算方法3、碱基类似物引起的诱变：以5-BU 2-AP和为例说明碱基替代过程。
说明图2.16的含义。
4、了解亚硝基胍（NTG）的作用，和图2.16的含义第二章基因突变5、DNA经过辐射处理通常的变化、电离辐射（直接作用和间接作用）和非电离辐射。
6、嵌合剂引起移码突变7、DNA损伤、修复：了解光修复、切除修复、重组修复、SOS系统基本含义。
8、营养缺陷型诱变筛选步骤及方法1）营养缺陷型浓缩：抗生素法、菌丝过滤法、差别杀菌2）营养缺陷型检出：逐个检出法、影印平板培养法、夹层培养法3）营养缺陷型鉴定：生长谱法9、诱变选育：诱变处理需要注意的环节，高产菌株筛选方法第三章孟德尔式遗传1 产生有性孢子的微生物遗传分析1）按顺序排列四分体的遗传分析①判断第一次分裂分离和第二次分裂分离②计算着丝粒距离③计算重组频率④四分体来源与染色体交换2）非按顺序排列四分体的遗传分析2 大肠杆菌的遗传学分析细菌接合过程的分析: F 因子与接合作用、细菌接合的三种方式、中断杂交试验及基因定位3 真菌的准性生殖1）什么是准性生殖的基本过程2）异核体的形成和图3.21的含义3）二倍体的获得方法4）体细胞重组体和非整倍体的检出方法5）体细胞重组体的来源6）有丝分裂定位：表3.11的含义4链霉菌遗传分析方法：图3.28的含义5 转化1）图3.29的含义2)感受态图3.31的含义3)转化因子的吸收和整合的基本过程4）共转化及图3.32的含义，表3.15的含义6转导1）图3.34和、图3.35、图3.37的含义、表3.19的含义2）局限性转导、稳定转导、不稳定转导、高频转导3）普遍性转导、完全转导、流产转导4）利用共转导进行基因定位7重组机制1）断裂重接模型和复制选择模型2）用部分杂合双链说明基因转变机制（图3.49的含义、表3.21的含义）3）Holliday模型含义4）重组的类型第四章非孟德尔式遗传一质粒1 质粒的命名原则2质粒的类型3质粒的大小和数量：图4.19的含义4不亲和群：图4.18的含义、质粒的相容和不相容性5质粒的复制：1）质粒的复制受到双重控制的证明2）一个能复制的和一个不能复制的复制子相结合后，复制由前者所控制3）两个都能进行复制的复制子结合后，复制的控制，表4.9和表4.10的含义6 质粒的转移：自主转移和诱动转移（F质粒诱动CoLE1质粒转移模型图）二、转座因子1转座因子种类：图4.22的含义2转座机制互补测验：图4.24的含义、图4.25的含义3 Tn3转座模型:图4.26的含义,图11-29转座作用的一种模型三、真核微生物的核外遗传物质1细胞质遗传，以粗糙脉孢菌生长缓慢的突变型为例说明母体遗传现象2酵母菌小菌落突变种类和原因第五章结构基因一、一个基因一种酶假说1、几个非等位基因突变产生同一营养缺陷型的现象如何解释？1）遗传代谢性障碍:以氨基酸D的缺陷型为例说明2）互养：图5.2 的含义2、一个基因一种酶假说的初步验证交叉反应物质：证明失活酶存在的实验过程、图5.3 的含义二、顺反子和互补群1 互补测验1）异核体形成测验2）顺反位置效应测验（重组实验、互补实验）2、互补测验系统：1 ）杂基因子测验：2）流产转导测验3）F因子转导测验。
微生物育种复习资料
第一章绪论一、微生物遗传育种对野生型菌株或低产菌株进行遗传操作和分离筛选，从大量突变体中筛选出性状优良的菌株，并对其发酵条件加以优化，得到适合发酵工业生产的优良菌种（产量、质量、新产物）。
二、微生物遗传育种的具体目标:1、提高产量生产效率和生产效益总是排在一切商业发酵首位的目标2、提高产物的纯度，减少副产物如色素；提高有效组分3、改变菌种形状，改善发酵过程，如改变和扩大菌种的原料结构；改善菌种生长速率；提高斜面孢子化程度；降低需氧量和能耗；耐不良环境；耐目的产物；改变细胞透性，提高产物分泌4、遗传性状特别是生产性状稳定5、改变生物合成途径，获得新产物三、优良发酵菌株应具备哪些特性1、遗传稳定2、易于培养：营养谱广、培养条件易达到3、易于保存（如孢子丰富或产生休眠体）4、种子生长旺盛5、发酵周期短，产量高，产物单一6、产物易于分离纯化第二章微生物遗传学基础一、名词解释：基因：遗传信息的基本单位。
一般指位于染色体上编码一个特定功能产物（如蛋白质或RNA分子等）的一段核苷酸序列。
转化：受体细胞直接吸收了来自供外源DNA片断，并把它整合到自己的基因组中，细胞部分遗传性状发生变化的现象叫转化。
转导：外源遗传物质通过噬菌体的携带进入受体细胞，并与受体染色体发生基因重组接合：供体菌通过性菌毛传递不同长度的单链DNA给受体菌，在后者细胞中发生交换、整合，从而使后者获得新的遗传性状的现象。
菌种衰退：菌种在培养或保藏过程中，由于自发突变的存在，出现某些原有优良生产性状的劣化、遗传标记的丢失等现象，称为菌种的衰退。
二、突变型的种类形态突变型、生化突变型、条件致死突变型、致死突变型、抗性突变型。
三、试质粒的性质及其在基因工程中的应用性质：自我复制、拷贝数高、不相容性、转移性。
应用：基因工程中作为载体将目的基因带入宿主细胞；其所带抗性基因可作为标记基因；降解复杂有机化合物；合成限制性内切酶或修饰酶。
第三章遗传与变异一、基因组对于原核生物来说，就是它的整个染色体；对于二倍体的真核生物来说，是能够维持配子或配子体正常功能的最低数目的一套染色体。
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微生物遗传与育种复习资料第二章基因突变及其机制1.1染色体畸变和基因突变的不同？答：①染色体畸变指染色体结构的改变，由于染色体断裂、重新排列而产生的染色体的缺失、重复、倒位、易位，往往涉及多个基因。
②基因突变是指一个基因内部的遗传结构或 DNA 序列的改变，由于一对或少数几个核苷酸的缺失、插入或置换而产生的碱基置换、移码突变。
通常只涉及一个基因。
③染色体畸变是发生在染色体水平的突变，基因突变是发生在基因水平的突变。
④染色体畸变涉及到DNA分子上较大的变化，有可能使细胞致死。
基因突变一般只涉及DNA上一对或几个核苷酸的缺失。
1.2化学诱变剂的种类、适用范围及如何终止反应？答：①碱基类似物（ⅰ5-溴尿嘧啶（5-BU）诱发AT←→GC GC→AT更容易ⅱ2-氨基嘌呤（2-AP）诱发AT←→GC AT→GC更容易）一般要经过两轮复制才能形成稳定的可遗传突变。
只对生长的微生物起作用，对静止的细胞如细胞悬液、孢子悬液、芽孢悬液不起作用。
可通过从含有碱基类似物的培养基中挑取菌落移植到正常培养基中培养终止反应。
②碱基修饰剂（ⅰ脱氨剂如HNO2诱发AT←→GC 还可以氨基的交联作用ⅱ羟化剂如羟胺诱发GC←AT）可以通过改变pH终止反应。
③移码突变剂（ⅰ吖啶类染料ⅱ溴化乙锭ⅲICR 类化合物）移码诱变剂的嵌入并不导致突变，必须通过 DNA的复制才能够形成突变，因此只能用于生长态细胞。
可通过从含移码突变剂的培养基中挑取菌落移植到正常培养基中培养终止反应。
1.3紫外线的诱变机制及操作方法？答：诱变机制：DNA 分子尤其是嘧啶强烈吸收紫外线，造成相邻的胸腺嘧啶形成稳定的二聚体（T=T）—— T与T 之间形成化学键连接，对热和酸都稳定→DNA 分子在复制时，两条链之间的 T=T 会阻碍双链的分开，导致复制无法正常进行→同一条链上的 T=T 会阻止 A 的正常掺入，导致复制停止或错误进行，最终形成突变。
操作方法：①取已培养好的新鲜斜面菌种，用无菌生理盐水洗下，接于盛有玻璃珠的100毫升三角瓶中，充分摇动10分钟，使菌体均匀分散，用滤纸过滤，即为菌悬液②取上述菌悬浮液计数，调整菌悬浮液密度为108 个/毫升，吸取 1 毫升菌悬浮液于 9 毫升无菌水中，稀释后再计数一次，取3ml至平皿中③照射处理前，先开紫外线灯20分钟，使灯的功率稳定（如灯的功率为15瓦，则照射距离为15～30厘米，灯的功率为30瓦，则照射距离为30～50厘米）④将待处理的菌悬液放于培养皿中，置于电磁搅拌器上，放在紫外线灯正中下方，先将整个平皿照射1分钟后，打开皿盖，此时开始记时并启动电磁搅拌器，准确计算照射时间。
1.4 DNA的修复？答：①复制修饰系统（I、DNA 聚合酶的校读功能。
II、N-糖基酶修复系统。
III、错配修复系统）②损伤修复（I、光复活。
II、切除修复。
III、重组修复IV、SOS修复系统（唯一一个导致突变的修复）。
）2、第三章工业微生物生产菌的分离筛选2.1从土壤中取样的方法？答：将表层 5cm 左右的浮土除去→取 5 ～ 25 cm 处的土样 10～25g，装入事先准备的塑料袋内扎好→给塑料袋编号并记录地点、土壤质地、植被名称、时间及其他环境条件→将土样去除石块、草根，在无菌研钵中研磨压碎，称取5g →加入含 45ml 无菌水的三角瓶，振荡 10min 静置30s，的 10-1 土壤悬液→取 4 支装有9ml无菌水的试管，依次稀释成10-2、10-3、10-4、10-5的菌悬液→取10-5、10-4、10-3菌悬液各0.5ml，涂布于培养基表面，每个浓度梯度涂布3块平板。
2.2如何选择采样地点及时间？答：（一）、根据微生物的营养类型（如ⅰ森林土——富含纤维素，能分离纤维素酶的生产菌；ⅱ肉类加工厂和饭店排水沟附近的土壤——能分离到蛋白酶和脂肪酶的生产菌；ⅲ面粉厂、糕点厂、淀粉加工厂及酒厂附近的土壤——能分离到淀粉酶、糖化酶的生产菌）（二）、根据微生物的生理特征（如ⅰ筛选高温菌——到温泉、火山口等地采集；ⅱ筛选低温菌——到南北极、冰窖、深海等初采；ⅲ耐压菌——到深海采集ⅳ耐高渗透压菌——到甜果、花蜜、蜜饯等处采集）秋季土壤中的微生物种类和数量最多，为最佳采样时间。
2.3厌氧微生物的分离？答：1、加还原剂分离培养基内加入还原剂，如半胱氨酸、D型维生素、硫化钠等→快速划线分离→立刻置于事先抽真空的容器，或事先充满 CO2、N2 的密闭容器中适温培养2、焦性没食子酸法先将焦性没食子酸放在容器内→将含有厌氧菌的培养皿架空放入容器内→加入 NaOH 溶液→立即盖上盖子，并用凡士林密封，适温培养3、平皿厌气培养法取一套无菌培养皿，在皿盖上倒入分离培养基，凝固后，在皿底一侧放焦性没食子酸固体，另一侧放 10% NaOH，二者不混→快速将样品液在分离培养基上划线，盖上皿盖并密封→摇动平皿，是焦性没食子酸和 NaOH 混合发生化学反应，出去皿中的氧气，适温培养。
2.4菌种分类鉴定主要步骤？答：①对要鉴定的菌株进行纯化。
②测定一系列必要指标（包括ⅰ细胞形态和习性：形态特征、运动、酶反应、营养要求及生长条件等。
ⅱ细胞组分水平:细胞成分、氨基酸库、脂类、醌类、光合色素等分析。
ⅲ蛋白质水平:氨基酸序列分析、凝胶电泳分析和血清学反应等。
ⅳ基因或DNA水平：核酸分子杂交、（G+C）mol % 、转化和转导16SRNA寡核苷酸序列分析、DNA或RNA核苷酸序列分析等）③查找权威鉴定手册（1.原核生物分类系统（伯杰氏系统细菌学手册）2. 真菌界分类系统很多，较多人接受的是Ainsworth的纲要。
3.微生物数码分类表（统计分类法））3、第四章工业微生物菌种复壮与保藏3.1菌种退化的原因？答：①基因突变——导致菌种退化的主要原因。
②质粒丢失。
③连续传代——加速菌种退化的直接原因。
④培养和保藏条件的影响。
3.2菌种退化的防止？答：①尽量减少传代。
②菌种经常纯化。
③创造良好的培养条件。
④用单核细胞移植传代。
⑤采用有效的菌种保藏方法。
3.3菌种复壮的主要方法.答：①纯种分离纯种分离法菌落纯细胞纯平板表面涂布法平板划线分离法琼脂培养基倾注法用“分离小室”进行单细胞分离用显微操纵器进行单细胞分离用菌丝尖端切割法进行单细胞分离②淘汰法淘汰已衰退的个体，如采用 -10～-30℃处理产放线菌素的Streptomyces microflauus的分生孢子5～7 天，死亡率 80%，存活下来的是未退化的健壮个体，达到复壮的目的。
③宿主体内复壮法对于寄生性微生物的退化菌株，可通过接种相应的昆虫等动、植物体内的措施来提高他们的活性。
3.4菌种保藏的原理、步骤及条件？答：原理：根据微生物的菌种生理、生化特性，在人工创造的条件下尽量降低微生物细胞的代谢强度，使细胞基本处于休眠状态，生长繁殖受到抑制但不至于死亡，以减低菌种的变异率。
低温、干燥、缺氧、缺乏营养能抑制微生物的代谢作用。
步骤：1.挑选特征典型的纯菌菌落2、确定保藏的合适菌体形态——最好是休眠体如分生孢子、芽孢等3、选择最适宜的保藏方法4.定期对所保藏的菌种进行检查，观察其是否出现变化，如果出现变化，必须改变保藏方法5、保藏期满应及时进行移种条件：A、干燥 B、低温 C、缺氧 D、避光 E、缺乏营养 F、添加保护剂、酸度调节剂。
3.5菌种保藏的方法？答：1、斜面保藏法（一般置于4℃保藏，1～3个月移接一次，继续保藏）2、液体石蜡油保藏法（一般置于4℃保藏，3～5年传代一次）3、干燥保藏法（针对会产生孢子的放线菌、霉菌以及能产生芽孢的细菌，孢子或芽孢在干燥环境中抵抗力强，处于休眠状态，不易死亡，可保藏 2～5 年，有的甚至长达 20 年）4、冷冻干燥保藏法（可保藏 5～10 年）5、真空干燥法6、液氮超低温保藏法（保藏时间最长）7、液相保藏法8、工程菌的保藏注：大家选择一种保藏方法并记住其步骤。
4、第五章基因突变的应用4.1诱变育种的一般过程？答：出发菌株的选择↓↓原种特征考察摇瓶初筛摇瓶培养(活化和同步培养) ↓对照组↓挑选高产菌株→菌种保藏制备单孢子或单细胞悬液↓↓活菌计数传种斜面活化诱变培养↓↓活菌计数,计算致死率摇瓶复筛(可反复进行多次) 后培养↓对照组↓挑选高产菌株稀释涂布平板↓↓进行稳定性试验和菌种特性考察→优化培养条件平板预筛,挑取单菌落接种斜面,观察并记录其形态特点↓发酵罐中试,终筛→优化培养条件↓大规模生产放大试验↓进一步诱变注：具体问题结合上述过程回答。
4.2出发菌的选择要求？答：1、尽量选择既往诱变史少的高产菌株2、挑选纯系菌株3、选择对诱变剂敏感的菌株4、选择单倍体的单核细胞5、采用多出发菌株——在不了解出发菌株对诱变菌敏感性的情况下，可考虑6、更换出发菌株——当某一选育谱系经过长期诱变处理效果不理想时，可考虑4.3诱变剂的选择要求？答：A、尽量选择毒性小、易于防护、安全性强的诱变剂B、尽量选择操作简便易行、便宜易得到诱变剂C、尽量选择不易发生回复突变的诱变剂D、在反复使用同一诱变剂进行长期诱变处理后，应换其他诱变剂进行处理4.3采用紫外线与光复合复合处理的原因？答：通过光复活酶的修复作用，导致嘧啶二聚体解体恢复原来的 DNA 结构，甚至一些接近死亡的菌体也会恢复基本的生活能力，但它们中的某些代谢失调现象不一定能得到调整，即群体中那些突变体将保留下来，提高了突变率。
4.4琼脂块大通量筛选突变菌株的一般过程？答：将诱变后的菌悬液涂布培养，每皿控制 30～50个菌落，适温培养到刚刚长出针尖样菌落——还未产生抗生素或酶↓用内径为 6mm 的打孔器，将菌落连同下面的琼脂培养基一起取出，转移到无菌的空白平皿内↓适温培养到所有菌落的产物达到高峰期，将琼脂块移到检定板上，温育，测定并比较形成的抑菌圈或水解圈的大小，挑出高产菌株（可淘汰95%的低产菌株）4.5检出营养缺陷突变菌株的方法？答：ⅰ、逐个检出法将处理液在 CM 平板上培养分离→将菌落用无菌牙签一一对应地点种在 MM、CM 平板上相应的位置→培养一段时间后，逐个对照，在 CM 上生长而在 MM 上不长的菌株，初步认为是营养缺陷型菌株ⅱ、夹层检出法先在培养皿内倒一层 MM 作底层→冷凝后，再倒一层含菌的MM →冷凝后，在倒一层MM →培养一段时间，在长出菌落的部位在皿底做记号→在上面再加一层 CM →培养一段时间，找出新长出的菌落，即可能是营养缺陷型ⅲ、限量补充检出法将经过处理的菌液接种在含有微量蛋白胨（≤ 0.001%) 的 MM 上培养→野生型迅速长成大菌落，而营养缺陷型只能缓慢生长，形成小菌落ⅳ、影印培养法与逐个检出法类似，但操作简单得多，用灭菌的绒布制成“印章”，在一块涂布了菌液并培养出菌落的CM 平板上印一下，依次转接到一块 MM 和一块 CM 平板上，观察菌落的生长情况，可以初步判断出营养缺陷型菌株4.6反馈抑制和反馈阻遏的不同点？答：①反馈抑制是终产物对代谢过程中酶的抑制是在酶的水平，反馈阻遏是合成代谢的相关酶的基因组成操纵子，其表达受到终产物的阻遏，是在基因的表达水平。