黄曲霉毒素检测方法
黄曲霉素检测法
食品中黄曲霉毒素的测定—免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法1 范围本标准规定了免疫亲和层析净化—高效液相色谱法和免疫亲和层析净化—荧光光度法测定食品中黄曲霉毒素的条件和详细分析步骤。
本标准适用于玉米、花生及其制品（花生酱、花生仁、花生米）、大米、小麦、植物油脂、酱油、食醋等食品中黄曲霉毒素的测定。
样品中黄曲霉毒素的检出限：免疫亲和层析净化—高效液相色谱法和免疫亲和层析净化—荧光光度法为1mg/kg；免疫亲和层析净化—荧光光度法测定酱油样品中黄曲霉毒素检出限为2.5mg/kg。
2 免疫亲和层析净化高效液相色谱法2.1 方法提要试样经过甲醇-水提取，提取液经过滤、稀释后，滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和层析净化，此抗体对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2具有专一性，黄曲霉毒素交联在层析介质中的抗体上。
用水或吐温/PBS将免疫亲和柱上杂质除去，以甲醇通过免疫亲和层析柱洗脱，洗脱液通过带荧光检测器的高效液相色谱仪柱后碘溶液衍生测定黄曲霉毒素的含量。
2.2 试剂和溶液除非另有规定，仅使用分析纯试剂、重蒸馏水。
2.2.1甲醇（CH3OH）：色谱纯2.2.2甲醇-水（7+3）：取70mL甲醇加30mL水2.2.3 甲醇-水（8+2）：取80mL甲醇加20mL水2.2.4甲醇-水（45+55）：取45mL甲醇加55mL水2.2.5 苯：色谱纯2.2.6乙腈：色谱纯2.2.7苯-乙腈（98+2）：取2mL乙腈加98mL苯2.2.8氯化钠（NaCl）2.2.9磷酸氢二钠（Na2HPO4）2.2.10磷酸二氢钾（KH2PO4）GB/T 18979-20032.2.11氯化钾（KCl）2.2.12 PBS缓冲溶液：称取8.0g氯化钠，1.2g磷酸氢二钠，0.2g磷酸二氢钾，0.2g氯化钾，用990mL纯水溶解，然后用浓盐酸调节pH值至7.0，最后用纯水稀释至1000mL。
2.2.13 吐温-20/PBS溶液（0.1%）：取1mL吐温-20，加入PBS缓冲溶液并定容至1000mL。
黄曲霉的检测方法
黄曲霉的检测方法黄曲霉是一种常见的真菌，它能够在多种环境中生存并繁殖，包括食物、土壤和空气中。
黄曲霉产生的黄曲霉毒素对人体健康有一定的威胁，因此对黄曲霉的检测非常重要。
下面将介绍几种常用的黄曲霉检测方法。
1. 气相色谱法：气相色谱法是一种常用的检测黄曲霉毒素的方法。
该方法将样品中的黄曲霉毒素提取出来，然后使用气相色谱仪进行分析。
由于不同的黄曲霉毒素具有不同的化学性质，所以可以通过检测毒素的特定化合物来确定样品中是否存在黄曲霉毒素。
2. 高效液相色谱法：高效液相色谱法也是一种常用的检测黄曲霉毒素的方法。
该方法将样品中的黄曲霉毒素提取出来，然后使用高效液相色谱仪进行分析。
与气相色谱法相比，高效液相色谱法对样品的处理过程相对简单，分离效果较好。
3. 免疫学方法：免疫学方法是一种常用的检测黄曲霉的方法。
该方法使用特异性抗体与样品中的黄曲霉结合，然后通过标记物的信号来检测黄曲霉的存在。
常见的免疫学方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫荧光法。
免疫学方法具有操作简单、灵敏度高的特点，可以用于大规模的样品检测。
4. PCR法：PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的检测黄曲霉的方法。
该方法利用黄曲霉的DNA进行扩增，并通过特定的引物和探针进行检测。
PCR法具有高灵敏度、高特异性和高快速性的特点，可以快速检测出样品中的黄曲霉。
5. 传统培养法：传统培养法是一种直接检测黄曲霉的方法。
该方法将样品培养在含有特定营养物质的培养基上，然后通过观察菌落形态、颜色和特点来确定是否存在黄曲霉。
尽管传统培养法操作相对简单，但其结果需要较长时间才能得到。
除了以上提到的方法，还有其他一些新兴的检测黄曲霉的方法，如纳米技术、蛋白质质谱法等。
这些方法在样品处理、快速性、灵敏度和特异性等方面都有所改进和突破，可以更好地用于黄曲霉的检测。
总之，对于黄曲霉的检测，可以选择适合的方法进行，根据需要和实际情况选择不同的方法。
不同的方法有其优缺点，需要根据实际应用需求进行选择。
食品中黄曲霉毒素检测方法概述
食品中黄曲霉毒素检测方法概述黄曲霉毒素是由黄曲霉菌（Aspergillus flavus和Aspergillus parasiticus）产生的一类有害物质，可存在于多种食品中，包括谷物、豆类、坚果、麦芽、果蔬等。
长期摄入含有黄曲霉毒素的食品可能对人体健康造成严重影响，如致癌、免疫毒性、肝毒性等。
对食品中的黄曲霉毒素进行检测具有重要意义。
目前，根据国内外相关标准和技术，已经发展了各种不同的黄曲霉毒素检测方法。
常用的黄曲霉毒素检测方法主要包括物理方法、生化方法和分子生物学方法。
一、物理方法：1. 目视法：通过观察食品外观和质地等特征，判断食品是否受到黄曲霉毒素污染。
这种方法简单易行，但只适用于一些直观的食品，如坚果。
2. UV检测法：利用紫外光的特性，根据黄曲霉毒素的吸收特征，通过分析样品吸收的紫外光谱，间接判断样品中黄曲霉毒素的含量。
二、生化方法：1. 水溶性黄曲霉毒素试纸法：将食品样品与特定试剂反应，产生特定的颜色反应，通过颜色的变化判断样品中黄曲霉毒素的阳性与阴性。
这种方法操作简单、快速，可用于野外快速检测，但精确度有限。
2. 高效液相色谱法（HPLC）：通过将样品中的黄曲霉毒素分离和定量测定，实现样品中黄曲霉毒素的检测。
HPLC方法精确度高，可靠性强，被广泛应用于黄曲霉毒素的检测与分析。
三、分子生物学方法：1. PCR法：利用聚合酶链反应（PCR）技术，通过选择性引物扩增样品中黄曲霉毒素基因的特异序列，最终实现对黄曲霉毒素的检测。
2. 免疫学方法：包括酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫扩散法。
ELISA法通过特异性抗体与黄曲霉毒素结合，形成抗原-抗体复合物，通过测定复合物的光学密度来判断样品中黄曲霉毒素的含量。
总结而言，食品中黄曲霉毒素检测方法多种多样，根据不同的需求可以选择适当的方法进行检测。
无论采用何种方法，都必须满足准确、快速、灵敏、可靠的检测要求，以确保食品的安全性。
陈皮中黄曲霉毒素的测定法_液相条件摸索
测黄曲霉毒素方法：一．（1）色谱条件色谱柱：Kromasil C18柱，150*4.6mm，5um流动相：甲醇：乙腈：水（40:18:42）荧光检测器：激发波长365nm，发射波长450nm；光化学柱后衍生法流速：0.8ml/min进样量：20ul(2)色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=0.5:0.125: 0.5:0.125 (ng/ml)533 色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=5: 125: 5: 125 (ng/ml)602 色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=10: 2.5: 10: 2.5 (ng/ml)603（二）（1）色谱条件色谱柱：Kromasil C18柱，150*4.6mm，5um流动相：甲醇：乙腈：水（40:18:42）荧光检测器：激发波长365nm，发射波长450nm；光化学柱后衍生法流速：0.5ml/min进样量：20ul（2）色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=0.5:0.125: 0.5:0.125 (ng/ml)544 色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=1:0.25: 1:0.25 (ng/ml)545色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=1:0.25: 1:0.25 (ng/ml) cromasil150柱604（三）（1）色谱条件色谱柱：依利特C18柱，150*4.6mm，5um流动相：甲醇：乙腈：水（40:18:42）荧光检测器：激发波长365nm，发射波长450nm；光化学柱后衍生法流速：0.3ml/min进样量：20ul（2）色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=0.5:0.125: 0.5:0.125 (ng/ml)594 (四)（1）色谱条件（到此方法时，荧光灯的灯能量快不行了。
峰面积也受影响了。
）色谱柱：Kromasil C18柱，150*4.6mm，5um流动相：甲醇：乙腈：水（30:14:56）荧光检测器：激发波长365nm，发射波长450nm；光化学柱后衍生法流速：0.8ml/min进样量：20ul（2）色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=0.5:0.125: 0.5:0.125 (ng/ml)534 色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=1:0.25:1:0.25 (ng/ml)535 色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=10:2.5:10:2.5 (ng/ml)598（五）（1）色谱条件（从这一步开始，换了新的荧光灯）色谱柱：Kromasil C18柱，150*4.6mm，5um流动相：甲醇：乙腈：水（30:14:56）荧光检测器：激发波长365nm，发射波长450nm；光化学柱后衍生法流速：0.6ml/min进样量：20ul（2）色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=10: 2.5:10:2.5 (ng/ml)611（六）（1）色谱条件色谱柱：Kromasil C18柱，150*4.6mm，5um流动相：甲醇：乙腈：水（30:14:56）荧光检测器：激发波长365nm，发射波长450nm；光化学柱后衍生法流速：0.5ml/min进样量：20ul（2）色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=5: 1.25:5:1.25. (ng/ml)608 色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=10: 2.5:10:2.5(ng/ml) cromasil150柱609（七）（1）色谱条件色谱柱：Kromasil C18柱，150*4.6mm，5um流动相：甲醇：乙腈：水（30:14:56）荧光检测器：激发波长365nm，发射波长450nm；光化学柱后衍生法流速：0.3ml/min进样量：20ul(2)色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=1:0.25:1:0.25 (ng/ml).597（八）（1）色谱条件色谱柱：Kromasil C18柱，150*4.6mm，5um流动相：甲醇：水（45:55）荧光检测器：激发波长365nm，发射波长450nm；光化学柱后衍生法流速：0.8ml/min进样量：20ul（2）色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=5:1.25:5:1.25 (ng/ml)538 陈皮样品色谱图（一）（1）色谱条件色谱柱：Kromasil C18柱，150*4.6mm，5um流动相：甲醇：乙腈：水（30:14:56））荧光检测器：激发波长365nm，发射波长450nm；光化学柱后衍生法流速：0.6ml/min进样量：20ul（2）陈皮色谱图2个重复616617（二）（1）色谱条件色谱柱：Kromasil C18柱，150*4.6mm，5um流动相：甲醇：水（45:55）荧光检测器：激发波长365nm，发射波长455nm；光化学柱后衍生法流速：0.8ml/min进样量：20ul（2）陈皮色谱图541（十）分析结果一览表结论：药典中关于黄曲霉毒素的测定法，步骤比较简单。
黄曲霉毒素检测方法有什么
黄曲霉毒素检测方法有什么现如今，人们的生活水平提高了，黄曲霉毒素在我们日常的生活中非常的常见，它是一组化学构造相似的化合物，黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时可导致肝癌甚至死亡。
那么，黄曲霉毒素检测方法有什么？黄曲霉毒素的检测方法：1.生物鉴定法其特点是待检样品不需很纯，主要用于定性，共有10种:(1)抑菌试验;(2)对微生物遗传因子影响试验;(3)细菌发光试验;(4)荧光反应;(5)组织培养检测法;(6)鸡胚试验;(7)鸭胚试验;(8)鳟鱼试验;(9)植物试验;(10)饲喂实验动物试验。
生物鉴定法是利用AFT能影响微生物、水生动物、家禽等生物体的细胞代谢，来鉴定AFT的存在。
其方法专一性差，灵敏度低，一般只作为化学分析法的佐证。
2.化学分析法最常用的为薄层层析法(TLC)，适用于粮食及其制品、调味品等AFB 1 的检测，主要是半定量。
利用AFB 1 具有荧光性的特点，提取和浓缩样品中的AFB 1 ，用单向或双向展开法在薄层上分离后，在365nm紫外光照射下产生蓝紫色荧光，根据在薄层上显示荧光的最低检出量定量，其灵敏度为5μg/kg。
由于薄层层析法测定AFB 1 不是很专一，因此样品中其他荧光物质的干扰造成测定误差。
可以用以下方法进行确定:一是用多种溶剂系统展开，可将AFB 1 、G 1 及各种AFT类似物分开;二是采用层析斑点的化学试验，将样品提取物用甲酸亚硫酰氨或三氟醋酸处理，用衍生化的方法将AFB 1 与其类似物分开;三是层析斑点的物理试验，可根据紫外吸收光谱，红外吸收光谱和荧光屏光谱的差别，将非黄曲霉毒素和AFT分开。
3.仪器分析法高效液相色谱法(HPLC)是20世纪70年代初发展起来的一种以液体为流行相的新型色谱技术。
是分离分析各种AFT的好方法，如配以荧光检测器，则该法具有灵敏度高、分离能力强、特异性好、测定结果准确可靠等优点。
在国外己广泛地用于食品中AFT的测定。
金标免疫层析法检测黄曲霉毒素b1的方法
金标免疫层析法检测黄曲霉毒素B1的方法1.引言黄曲霉毒素B1是一种广泛存在于食品、饲料中的毒素，对人体和动物健康造成严重威胁。
对黄曲霉毒素B1进行有效的检测至关重要。
金标免疫层析法作为一种快速、准确并且易于使用的检测方法，被广泛应用于食品安全和质量控制领域。
本文将就金标免疫层析法检测黄曲霉毒素B1的方法进行探讨，并提供深度和广度兼具的分析，以期帮助您更全面地了解这一检测技术。
2.金标免疫层析法的原理金标免疫层析法是一种基于抗体和抗原之间特异性识别和结合原理的检测方法。
简单来说，它利用了抗体对特定分子的高度特异性识别能力，通过在复杂样品中将目标分子与标记有金纳米颗粒的抗体结合，从而实现对目标分子的定量和定性检测。
金标免疫层析法具有操作简便、快速灵敏、不需要仪器设备等特点，因此在食品安全领域得到了广泛的应用。
3.黄曲霉毒素B1的特性和对人体健康的危害黄曲霉毒素B1是一种热稳定性很强的毒素，它容易在食品和饲料中积累。
长期摄入受污染的食品或饲料会导致人类和动物出现急性或慢性中毒，表现为呕吐、腹泻、免疫抑制等严重症状，甚至可能导致肝癌等疾病的发生。
对黄曲霉毒素B1的检测至关重要，金标免疫层析法作为一种快速、敏感的检测方法，能够有效地帮助人们及时发现并控制食品中的黄曲霉毒素B1污染。
4.金标免疫层析法检测黄曲霉毒素B1的步骤金标免疫层析法检测黄曲霉毒素B1的步骤通常包括样品制备、抗体标记金纳米颗粒、检测纸条制备和数据读取等。
将样品进行处理，提取其中的黄曲霉毒素B1，并将其与标记有金纳米颗粒的抗体结合。
将混合物加载到检测纸条上，金标免疫层析法会在纸条上形成不同程度的色带，根据色带浓度的变化可以判断出样品中黄曲霉毒素B1的含量。
通过专门的读取设备或者肉眼观察检测纸条上色带的变化来获得测试结果。
5.金标免疫层析法的优势金标免疫层析法作为一种快速、准确、便捷的检测方法，具有以下几点优势。
它无需昂贵的仪器设备，操作简便，使用者无需专业的技术背景即可进行检测。
黄曲霉毒素检测标准方法汇总
流动相的梯度变化表（GBT 5009.23-2006 食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定）
标准方法检出限（GBT 23212-2008）
次氯酸钠溶液（消毒用）：
取100g漂白粉，加入500ml水，搅拌均匀。
另将80g工业用碳酸钠（Na2CO3·10H2O）溶于500ml温水中，再将两液混合、搅拌、澄清后过滤。
此滤液含次氯酸浓度约为25g/L。
若用漂粉精制备，则碳酸钠的量可以加倍。
所得溶液的浓度约为50g/L。
污染的玻璃仪器用10g/L次氯酸钠溶液浸泡半天或用50g/L次氯酸钠溶液浸泡片刻后，即可达到去毒效果。
（GBT 5009.22-2003 食品中黄曲霉毒素B1的测定）
AFT B1标准溶液配制
1 仪器校正，测定重铬酸钾溶液的摩尔消光系数，以求出使用仪器的校正因素f
2 标准溶液配制，配制AFT B1标准溶液，用紫外分光光度计测此溶液最大吸收峰的波长及该波长的吸光度值，计算AFT B1标准液浓度，后用苯-乙腈混合液调到标准液为10.0ug/ml，并用分光光度计核对浓度。
（GBT 5009.22-2003 食品中黄曲霉毒素B1的测定）。
黄曲霉毒素测定法
黄曲霉毒素测定法第一法本法系用高效液相色谱法（附录8）测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素（以黄曲霉毒素B1黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2总量计），除另有规定外，按下列方法测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（40:18:42）为流动相，采用柱后衍生法检测，①碘衍生法：衍生溶液为0.05%的碘溶液（取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀释至1000ml制成），衍生化泵流速每分钟0.3ml，衍生化温度70℃；②以光化学衍生法：光化学衍生器（254nm）；以荧光检测器检测，激发波长λex=360nm （或365nm），发射波长λem=450nm。
两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。
混合对照品溶液的制备精密量取黄曲霉毒素混合标准品（黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2标示浓度分别为1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。
精密量取储备液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。
供试品溶液的制备取供试品粉末约15g(过二号筛)，精密称定，置于均质瓶中，加入氯化钠3g，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速搅拌2分钟（搅拌速度1100转/分钟），离心5分钟（离心速度2500转/分钟），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，量取续滤液20.0ml，通过免疫亲合柱（AflaT-est@P）,流速每分钟3ml，用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，并用水稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取上述混合对照品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
黄曲霉毒素检测方法
一、黄曲霉毒素检测方法二、黄曲霉毒素的临床特征三、黄曲霉毒素中毒的急救措施
黄曲霉毒素检测方法1、生物鉴定法可检测黄曲霉素
其特点是待检样品不需很纯,主要用于定性,共有10种:抑菌试验;对微生物遗传因子影响试验;细菌发光试验;荧光反应;组织培养检测法;鸡胚试验;鸭胚试验;鳟鱼试验;植物试验;饲喂实验动物试验。
生物鉴定法是利用AFT能影响微生物、水生动物、家禽等生物体的细胞代谢,来鉴定AFT的存在。
其方法专一性差,灵敏度低,一般只作为化学分析法的佐证。
2、化学分析法可检测黄曲霉素
最常用的为薄层层析法(TLC),适用于粮食及其制品、调味品等AFB1的检测,主要是半定量。
利用AFB1具有荧光性的特点,提取和浓缩样品中的AFB1,用单向或双向展开法在薄层上分离后,在365nm紫外光照射下产生蓝紫色荧光,根据在薄层上显示荧光的最低检出量定量,其灵敏度为5μg/kg。
由于薄层层析法测定AFB1不是很专一,因此样品中其他荧光物质的干扰造成测定误差。
3、仪器分析法可检测黄曲霉素
高效液相色谱法(HPLC)是20世纪70年代初发展起来的一种以液体为流行相的新型色谱技术。
是分离分析各种AFT的好方法,如配以荧光检测器,则该法具有灵敏度高、分离能力强、特异性好、测定结果准确可靠等优点。
在国外己广泛地用于食品中AFT的测定。
但由于食物样品成分复杂,在进行液相色谱分离分析前,需对样品作彻底有效的净化处理。
常用的净化方法是柱色谱法,该法操作繁琐,且需使用大量有机溶剂。