前列腺癌方面免疫组化基础知识
前列腺疾病的免疫组化诊断
前列腺疾病的免疫组化诊断余英豪;李慧明【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2014(000)012【总页数】4页(P1329-1332)【关键词】前列腺疾病;病理;诊断;免疫组织化学【作者】余英豪;李慧明【作者单位】南京军区福州总医院病理科，福州 350025;南京军区福州总医院病理科，福州 350025【正文语种】中文【中图分类】R737.25前列腺疾病的诊断在很大程度上依赖穿刺标本的病理学检查，而免疫组化染色在其病理辅助诊断中占有重要地位，病理医师对免疫组化的依赖性很高。
近年来前列腺肿瘤的生物学标志物不断涌现，如何选择合适标志物、合理应用鸡尾酒抗体(双标、三标)以及应用免疫组化检查解决前列腺疾病诊断中的难题，是日常病理工作经常遇到的问题，本文现对这些问题逐一进行讨论。
前列腺疾病诊断中，需选用的免疫组化标志物包括上皮标志物、基底细胞标志物以及在前列腺腺癌中过表达的标志物。
1.1 前列腺上皮标志物前列腺上皮标志物主要有前列腺特异性抗原(prostate specific antigen, PSA)、前列腺特异性膜抗原(prostate specific membraneantigen, PSMA)、前列腺特异性酸性磷酸酶(prostate specific acid phosphatase, PSAP)和P501s(prostein)，这些标志物作用相似，均可表达于前列腺良性和肿瘤性上皮细胞。
PSA虽应用最为广泛，但其在高级别前列腺癌中的反应性不够稳定；PSMA特异性较高，从良性上皮→高级别上皮内瘤变(prostatic intraepith elial neoplasia, PIN)→高级别前列腺癌，阳性细胞逐渐增加，染色也趋于加深；PSAP特异性较低，但能维持前列腺癌放疗后的免疫反应性；P501s是位于高尔基体中的一种跨膜蛋白，对前列腺的特异性很高。
免疫组化染色显示特征性的顶端核周颗粒状染色。
免疫组化标记物
免疫组化常用抗体标记物（一）上皮源性标记物1、一般性标记物（1）CK（角蛋白）CK亚型：CK5/6、CK7、CK8、CK10/13、CK18、CK19、CK20（2）EMA（上皮膜抗原）2、特异性和（或）相对特异性上皮标记物（1）CEA（癌胚抗原，标记胃肠道癌、肺腺癌等）（2）CA242（肿瘤相关粘液抗原、标记胰腺癌、结、直肠癌等）（3）TG（甲状腺球蛋白，标记甲状腺癌）（4）PSA（前列腺特异性抗原，主要用于前列腺癌和转移性前列腺癌的诊断）（5）PSAP（前列腺特异性酸性磷酸酶，主要用于前列腺癌和转移性前列腺癌的诊断）（6）34βE12（高分子量细胞角蛋白，标记前列腺基底细胞）（7）AFP（甲胎蛋白，标记肝癌、内胚窦癌等）（8）Hepatocyte（标记肝细胞癌）（9）β-HCG（β绒毛膜促性腺激素，标记胎盘滋养叶细胞肿瘤、生殖细胞肿瘤）（10）CA125（卵巢癌抗原）（二）间叶源性标记物肌源性标记物1、Desmin（Des，结蛋白）2、Actin（肌动蛋白）3、SMA（平滑肌肌动蛋白）4、MSA（肌特异性肌动蛋白）5、Myosin（肌球蛋白）6、Myoglobin（MG，肌红蛋白）7、Myogen（肌浆蛋白）8、MyoD1（肌调节蛋白）（三）血管源性标记物1、FVⅧRAg（第8因子相关抗原）2、CD314、UEA-15、BNH9（四）组织细胞源性标记物1、CD68/KP-12、Lysozyme（溶菌酶）3、α-AT（α1-抗胰蛋白酶）4、α1-ACT（α1-抗胰糜蛋白酶）5、Mac387（五）淋巴造血组织源性标记物1、全淋巴细胞（1）CD45/LCA（白细胞共同抗原）（2）TdT（末端脱氧核苷酸转移酶）（3）CD30/ki-12、全B细胞（1）Igκ（2）Igλ（3）CD20/L26（4）CD79α（5）BLA36（B淋巴细胞抗原）（6）Pax-5（B细胞系特异性激活蛋白）3、B细胞亚型（1）CD10（2）CD21（标记滤泡性树突状细胞）（3）CD23（4）CD35（标记滤泡性树突状细胞）（5）CD384、全T细胞（1）CD3（2）CD5（4）CD45RO/UCHL-15、T细胞亚型（1）CD1α（2）CD4（3）CD86、NK细胞（1）CD56（2）CD57/Leu-7（3）CD16/Leu-117、粒细胞和单核细胞（1）CD11c/LeuM5（2）CD15/LeuM5（3）Lysozyme（溶菌酶）（4）α-AT（α1-抗胰蛋白酶）（5）α1-ACT（α1-抗胰糜蛋白酶）（6）CD68（7）S-100蛋白（8）Mac3878、其他（1）EMA（上皮细胞膜抗原）（2）CD99（尤因肉瘤标记物）（3）ALK-1（间变性淋巴瘤激酶）（4）HLA-DR（5）Bcl-2（6）Bcl-6（7）Bcl-10（8）Ki-67（9）CyclinD1（周期素D1）（10）CD25（六）神经源性标记物1、S-1002、NSE（神经原特异性烯醇化酶）3、Leu-74、Neurofilament（NF，神经微细蛋白）5、GFAP（胶质纤维酸性蛋白）（七）神经内分泌源性标记物1、激素标记物（1）CA（儿茶酚胺）（2）5-HT（5-羟色胺）（3）垂体激素GH（促生长素）PRL（催乳素）ACTH（促肾上腺皮质激素）TSH（促甲状腺素）FSH（促滤泡素）LH（促黄体素）（4）甲状腺TG（甲状腺球蛋白）CT（降钙素）（5）甲状旁腺PTH（甲状旁腺素）（6）胰岛Insulin（胰岛素）Glucagon（胰高糖素）VIP（舒血管肠肽）PP（胰多肽）Someitostatin（生长抑素）Gastrin（胃泌素）2、非激素标记物（1）NSE（神经原特异性烯醇化酶）（2）CgA（嗜铬素A）（3）SY（突触素）3、激素受体（1）ER（雌激素受体）（2）AR（雄激素受体）（3）PR（孕激素受体）（八）细胞增殖标记物1、PCNA（细胞增殖核抗原）2、Ki-67（九）黑色素标记物1、S-100蛋白2、HMB453、Melanoma（十）癌基因和（或）抑癌基因1、Bcl-22、C-erbB-23、P534、P16（多肿瘤抑制基因）5、nm23（十一）病原体标记物1、Myocobacterium Bovis（分枝杆菌，抗卡介苗）2、HBsAg（乙型肝炎病毒表面抗原）3、HBcAg（乙型肝炎病毒核心抗原）4、HPV（人乳头状瘤病毒）5、HTLV-1（人类T细胞白血病病毒）免疫组化套餐泌尿与男性生殖系统肿瘤1.前列腺癌：CK、P63、34ßE12、PSA、P504S(9AMAC)、AR2.前列腺增生/腺瘤：CK、P63、34BE12、P504S3.肾癌：CK、EMA、Inhibin、Melan-A、CK7、Vimentin、PAX2、CD104.肾母细胞瘤：WT-1、CK、P53、Ki-675.膀胱尿路上皮癌：CK7、CK20、P53、Ki-67、P636.精原细胞瘤：CK、PLAP、CD117、LCA、OCT3/4淋巴造血系统肿瘤7.胸腺肿瘤：CK、CD3、CD5、CD20、TdT、EBV*8.霍奇金淋巴瘤：CD30、CD15、ALK-1、EMA、CD3、CD20、EBV*、PAX-59.非霍奇金淋巴瘤：CD3、CD20、CD45RO、CD79α、TdT、CD4310.间变大细胞淋巴瘤：CD30、CD15、ALK-1、EMA、CD3、CD20、EBV*11.弥漫性大B细胞淋巴瘤：CD3、CD20、CD45RO、CD79α、CD43、CD30、Ki-6712.小B细胞淋巴瘤：CD3、CD5、CD10、CD20、CD23、CD79α、CyclinD1、TdT13.T细胞淋巴瘤：CD3、CD20、CD43、CD45RO、CD79α、TdT、TiA-1、Perforin14.套细胞淋巴瘤：CD3、CD5、CD20、CD79α、CyclinD1、TdT、Bcl-2、Ki-6715.T/NK细胞淋巴瘤：CD3、CD20、CD45RO、CD79α、CD56、TiA-1、Perforin、粒酶B16.淋巴上皮病变/癌：CK、EMA、S-100、Ki-67、P53、EBV*、P63、CD30、CD2017.Burkitt淋巴瘤：CD3、CD20、CD79α、CD10、Bcl-2、Bcl-6、Ki-67、EBV*、TdT18滤泡性淋巴瘤：CD3、CD20、CD45RO、CD79α、CD10、Bcl-2、Bcl-6、Ki6719.脂膜炎样T细胞淋巴瘤:CD2、CD3、CD7、CD20、CD43、Perforin、TiA-1、EBV *20.浆细胞瘤：CD3、CD20、CD38、CD138、CD79α、EMA、κ*、λ*21.坏死性淋巴结炎：CD3、CD20、CD45RO、CD79α、CD43、CD68、Mac387、C D16322.粘膜相关淋巴瘤：CK、CD3、CD5、CD10、CD20、CD23、CD43、CD79a、Cy clinD123.血管免疫母细胞性淋巴瘤：CD3、CD20、CD45RO、CD43、CD79α24.组织细胞肉瘤：S100、CD10、CD21、CD35、CD68、Lysozyme、MPO、CD33、CD34、CD11c、CD14、CD45RO25.朗格罕氏细胞增生症/肉瘤：S100、CD1α、CD68、CD35、HMB45、CK、EMA、Ki67、CD4526.指状突树突细胞肉瘤/肿瘤：S100、CD1α、CD68、CD21、CD35、CD3、CD20、CD30、CK、EMA、Ki67、CD4527.滤泡树突细胞肉瘤/肿瘤：CD21、CD35、S100、CD1α、CD68、CD3、CD23、E MA、VIM、MPO、CD34、CD79α、CK、HMB4528.肥大细胞肿瘤：CD117、CD45、CD33、CD68、CD15、CD3、CD20消化系统肿瘤29.胃癌：CK7、CK20、Villin、CEA、P53、Ki-67、CDX-2、GST-π、AB/PAS**30.肠癌：CK7、CK20、Villin、CEA、P53、Ki-67、CDX-2、GST-π、AB/PAS**31.肝细胞癌：AFP、CD34、CEA、CK8/18、CK19、Ki-67、P53、HbsAg、Hepatoc yte32.肝胆管细胞癌：CK7、CK20、Villin、AFP、CD34、CEA、CK8/18、CK19、Ki-67、Hepatocyte、HbsAg33.食道癌：P53、Ki-67、CDX-2、GST-π、P6334.胰腺癌：CEA、P53、Ki-67、CDX-2、GST-π、Villin、CK7、CK20、35.胰岛细胞瘤：CD56、Syn、CgA、Ki-67、Insulin、CK8/18、CK1939.肝炎病毒：HbsAg、HbcAg、HCV涎腺肿瘤37.涎腺粘液性囊腺癌：CK、P63、SMA、Vimentin、Myosin-heavy chain38.上皮肌上皮癌：CK、P63、SMA、Vimentin、S-100、Myosin-heavy chain39.导管腺癌：CK、P63、SMA、AR、HER2、Myosin-heavy chain40.多形性腺瘤：CK、P63、SMA、S-100、GFAP、Myosin-heavy chain神经内分泌肿瘤41.神经内分泌癌：CD56、CD57、Syn、CgA、CK、CK8/1842.肺神经内分泌癌：CD56、CD57、Syn、CgA、CK、CK8/18、CD99、TTF-1、P6 3、Sp-B43.甲状腺乳头状癌：Tg、TTF-1、CK19、HMBE-1、Gelactin-3、Ki-67、TPO44.甲状腺髓样癌：Tg、CT、CD56、CD57、Syn、CgA、CEA45.肾上腺皮质癌：CK、CEA、Inhibin、Melan-A、CD10、CgA、Syn、S10046.肾上腺嗜铬细胞瘤：Syn、CgA、S-100、CK、EMA、Inhibin、Melan-A、47.肾上腺外副神经节瘤：Syn、CgA、S-100、CK、EMA、Inhibin、Melan-A、GFAP48.Merkel细胞癌：CK7、CK20、Syn、CgA、CK、CD99软组织肿瘤49.促纤维增生性小圆细胞肿瘤：CK、EMA、CD99、S-100、Des、Syn、CgA、50.尤文/PNET/视/嗅/髓母细胞瘤：CD99、S-100、Syn、CgA、CD56、CD57、GFAP、Vimentin51.上皮样血管平滑肌脂肪瘤：HMB45、S-100、Melan-A、CD34、CK、SMA、Vime ntin52.上皮样血管瘤：CK、CD34、CD31、CD68、EMA53.孤立性纤维性肿瘤：CD34、Bcl-2、CD99、S-100、CK、Vimentin、SMA54.间皮瘤：CK5/6、HMBE-1、Calretinin、TTF-1、D2-40、CK、WT155.横纹肌（肉）瘤：MyoD1、Myogenin、Desmin、SMA、CK、S100、CD9956.滑膜肉瘤：EMA、CK、CD34、CD99、CD68、S-100、Bcl-2、Vimentin57.皮隆突/恶纤组：CD34、CD68、S-100、SMA、Vimentin58.血管球瘤：EMA、CK、CD34、SMA、S-10059.血管周肌细胞瘤：EMA、CK、CD34、SMA、S-100、Desmin60.梭形/多形性脂肪：CD34、SMA、S-100、HMB45、CK、CD31、CD6861.脊索/副脊索瘤：SMA、S-100、EMA、CK、GFAP、CD6862.腱鞘巨细胞瘤：SMA、MSA、Desmin、CK、Vimentin63.平滑肌（肉）瘤：SMA、MSA、Desmin、CK、S-100、CD34、Vimentin64.软骨母细胞瘤：CD99、S-100、CK、Vimentin65.结节性筋膜炎：CK、SMA、MSA、DES、CD68、S100、Vimentin66.缺血性筋膜炎：VIM、SMA、CD68、DES、S100、CD34、Vimentin67.肌纤维瘤/肌纤维瘤病：VIM、SMA、Actin、S100、EMA、CK、Vimentin68.硬化性纤维母细胞瘤：VIM、SMA、CK、DES、EMA、S100、CD3469.乳腺型肌纤维母细胞瘤：DES、CD34、EMA70.钙化性腱膜纤维瘤：VIM、SMA、MSA、CD99、S10071.血管肌纤维母细胞瘤：DES、SMA、Actin、ER、PR、CD34、S100、CK、fast myosin72.富于细胞性血管纤维瘤：VIM、CD34、DES、Actin、SMA、MSA73.项型纤维瘤：VIM、CD34、CD99、DES、Actin74.Gardner纤维瘤：VIM、CD34、SMA、MSA、DES、ER、PR75.钙化性纤维性肿瘤：Vim、VⅢ因子、XⅢa因子、Des、Actin、S100、CD31、CD 34、CK76.巨细胞血管纤维瘤：CD34、CD99、Bcl-277.韧带样型纤维瘤：Vim、SMA、Des、S10078．脂肪纤维瘤病：CD34、Bcl-2、S100、Actin、EMA、CK、Des、CD9979.炎症性肌纤维母细胞性肿瘤：Vim、SMA、Des、CK、S100、ALK、CD11780.低度恶性肌纤维母细胞瘤：Actin、Des、CD34、CD99、S100、CK81.黏液炎症性肌纤维母细胞瘤：Vim、CD34、CD68、SMA、CK、LCA、CD30、T and B转移性肿瘤鉴别82.转移性肺/肝癌：CK7、CK20、Villin、CEA、TTF-1、CK、AFP、CD34、Hepatoc yte83.转移性肺/胃肠癌：CK7、CK20、Villin、CEA、TTF-1、Sp-B、CDX-284. 转移性肺/前列腺癌：CK7、CK20、Villin、TTF-1、CK、Sp-B、PSA、PSAP85. 转移性肺/甲状腺癌：CK7、CK20、Villin、TTF-1、CK、Sp-B、TG86. 转移性腺/鳞癌：CKAE1、CKAE3、CK8/18、CK5/6、EMA、CD15、P6387. 转移性肺/鼻咽癌：CK7、CK20、Villin、TTF-1、CK、Sp-B、EMA、EBV*88.食道低分化癌/神经内分泌癌：Syn、P63、CgA、CD56、CD99、CKAE3、CK5/689.转移性卵巢粘液/浆液性癌：CK7、CK20、Villin、CEA、TTF-1、CA125、CDX-2神经系统肿瘤90.垂体瘤：TSH、FSH、GH、LH、ACTH、PrL、P5391.胶质瘤：GFAP、MBP、Vim、EMA、S-10092.少突胶质细胞瘤：Pax-5、GFAP、MBP、Vim、EMA、S-100、CD5793.胶质肉瘤：GFAP、CD68、Vim、S-100、Ki-6794.节细胞胶质瘤：Syn、CgA、GFAP、S-100、CD68、Vim、Ki-6795.神经束膜瘤：S-100、EMA、GFAP、CK、Vim96.恶性外周神经鞘瘤：S-100、CK、HMB45、Desmin、SMA、MyoD1、CD57、MB P97.脑膜瘤：GFAP、EMA、Vim、S-10098.神经纤维/神经鞘瘤：GFAP、EMA、Vim、S-100、CK99.中枢神经细胞瘤：GFAP、S-100、Syn、CD57、MBP、EMA、CgA、Calretinin100.室管膜瘤：EMA、CK、S-100、GFAP、Syn、CD57、MBP、101.脉络丛乳头状瘤：GFAP、CK、S-100、Syn、EMA、Ki-67、CgA102.颅咽管瘤：CKAE1、EMA、GFAP、CKAE3、Ki-67103.颅内血管母细胞瘤：CD34、CD31、EGFR、CK、EMA、VEGF乳腺及女性生殖器官104.浸润性乳腺癌：P53、Bcl-2、ER、PR、HER2、E-Cadherin、Ki-67、CK7、GC DFP-15105.浸润性筛状癌/腺样囊性癌：ER、PR、HER2、P63、Laminin106.实性神经内分泌癌：ER、PR、HER2、GCDFP-15、CK7、CK20、CgA、Syn 107.子宫内膜样肿瘤/宫颈腺癌：Vim、CK、ER、PR、Inhibin、P16、CEA108.子宫内膜间质肿瘤：Vim、CD10、SMA、Inhibin109.移行细胞癌:CA125、CK7、CK20、P63110.颗粒细胞瘤：CD99、Inhibin、Vim、S100、SMA、CK、CK7、EMA111.卵泡膜瘤-纤维瘤：Vim、Inhibin112.硬化性的间质瘤：Vim、Des、SMA、Inhibin113.Sertoli-间质细胞瘤：Vim、Inhibin、EMA、Ker、ER、PR114.无性细胞瘤：Vim、CD117、PLAP、CK、Des、CEA、S100115.卵黄囊瘤：AFP、CK、CD30、ER、PR116.胚胎性癌：AFP、CD30、CK117.非妊娠绒毛膜癌：CK、hPL、ß-Hcg恶性肿瘤预后与耐药监测指标P53、Bcl-2、PCNA、Ki67、P-gp、TOPOⅡα、GSTπ宫颈CIN病变分级检测指标P16、P53、Ki-67、CD68、Pro-EXC1.前列腺癌：CK、P63、34ßE12、PSA、P504S(AMACR)、AR25.朗格罕氏细胞增生症/肉瘤：S100、CD1α、CD68、CD35、HMB45、CK、EMA、Ki67、CD45、CD20750.尤文/PNET/视/嗅/髓母细胞瘤：CD99、S-100、Syn、CgA、CD56、CD57、GFAP、Vimentin、Fli-1104.浸润性乳腺癌：P53、Bcl-2、ER、PR、HER2、E-Cadherin、Ki-67、CK7、GC DFP-15、P120-catenin108.子宫内膜间质肿瘤：Vim、CD10、SMA、Inhibin-α109.移行细胞癌:CA125、CK7、CK20、P63、uroplakin III110.颗粒细胞瘤：CD99、Inhibin-α、Vim、S100、SMA、CK、CK7、EMA111.卵泡膜瘤-纤维瘤：Vim、Inhibin-α112.硬化性的间质瘤：Vim、Des、SMA、Inhibin-α113.Sertoli-间质细胞瘤：Vim、Inhibin-α、EMA、Ker、ER、PR114.无性细胞瘤：Vim、CD117、PLAP、CK、Des、CEA、S100、OCT3/4115.卵黄囊瘤：AFP、CK、CD30、ER、PR116.胚胎性癌：AFP、CD30、CK、OCT3/4。
免疫组化名称及各指标染色的意义
免疫组化名称及各指标染色的意义ACTH 促肾上腺皮质激素。
可用于垂体腺瘤的功能性分类，有助于区分原发性和转移性垂体肿瘤。
某些神经内分泌肿瘤也可出现阳性反应。
Actin 肌动蛋白。
用于标记骨骼肌、心肌、平滑肌及其来源的肿瘤。
AFP 甲胎蛋白。
用于标记肝癌、卵黄囊瘤和某些生殖细胞肿瘤。
Bcl-2 主要用于滤泡性淋巴瘤、毛细胞性白血病的辅助诊断及细胞凋亡方面的研究。
CerbB-2 主要作为判断乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌及消化道肿瘤预后的参考指标，并用于赫赛汀治疗乳腺癌的药物治疗的筛选。
CD3 目前是T细胞标记物的首选。
95%以上的T细胞或NK细胞淋巴瘤阳性表达。
CD4 辅助T细胞。
与CD8联合使用，对于某些疾病的诊断、疗效观察及预后有一定意义。
CD8 细胞毒T细胞。
一般与CD4联合使用。
CD10 为滤泡中心细胞的标记。
Burkitt淋巴瘤/生发中心母细胞/生发中心滤泡性淋巴瘤可阳性CD15 是成熟粒细胞、R-S细胞的标志之一。
主要用于标记霍奇金淋巴瘤。
CD20 B细胞的标记。
主要用于B细胞淋巴瘤的诊断。
CD21 主要用于B细胞、滤泡树突状细胞及其来源的肿瘤。
CD30 主要用于R-S细胞和大多数间变性大细胞淋巴瘤的标记。
CD31 内皮细胞标记。
主要用于良、恶性血管源性肿瘤和鉴别诊断以及肿瘤中血管分布的研究。
CD34 内皮细胞标记。
主要用于良、恶性血管源性肿瘤和鉴别诊断以及肿瘤中血管分布的研究。
与CD117联合用于诊断间质瘤。
CD56 是NK细胞淋巴瘤比较好的标记物。
还可用于神经源性肿瘤的辅助诊断。
CD57 自然杀伤细胞。
主要用于NK细胞介导的细胞毒、NK细胞及T细胞亚群的功能方面的研究。
CD68 巨噬细胞。
可作为组织细胞标记物及骨髓白血病的的鉴别。
CD99 有助于尤文肉瘤、原始神经外胚叶肿瘤、小圆细胞肿瘤进行鉴别。
也可用于鉴别胸腺上皮性肿瘤。
CD117 是胃肠道间质瘤的特异性标记物，可用于指导格列卫药物治疗。
免疫组化意义
免疫组化常用标记物一、常用标志物1. 15(1)（阳性部位：细胞膜）。
是一种由半乳糖、岩藻糖和乙酰葡萄糖组成的碳水化合物抗原，又称半抗原χ，是粒/单核细胞相关抗原。
免疫组织化学表达：成熟粒细胞、激活的淋巴细胞（主要是T淋巴细胞）、细胞、大多数腺癌等。
2. 癌胚抗原（，）(66e)（阳性部位：细胞膜/浆）。
癌胚抗原是表达于胎儿上皮细胞的一种糖蛋白，分子量为180。
存于某些恶性肿瘤组织尤其是内胚层来源发肿瘤中，大多数胃肠道（包括胰腺）和肺腺癌均有表达，少量成人上皮细胞和良性肿瘤亦可表达。
主要用于标记上皮性肿瘤，尤其是腺上皮来源的腺癌。
3.嗜铬素A（ A，）（阳性部位：细胞浆）。
嗜铬素是位于神经分泌颗粒内的酸性糖蛋白家族，是一组可溶性酸性蛋白，分子量为76～120 ，分布广泛。
含量最丰富的是嗜铬素A，另两个是嗜铬素B和嗜铬素C。
几乎所有的神经内分泌肿瘤中均可检测到嗜铬素。
嗜铬素A不仅存在于神经内分泌细胞的分泌颗粒中，也广泛分布于所有含有颗粒的内分泌细胞和神经内分泌细胞来源的肿瘤细胞。
此抗体可以识别嗜铬素A抗原羧基末端的片段，而不与氨基末端的片段反应，主要用于标记神经内分泌细胞及其来源的肿瘤。
对小细胞癌进行抗原修复可提高检测的敏感性。
4.细胞角蛋白（，广谱） 1/ 3（阳性部位：细胞浆）。
此抗体可以识别绝大部分酸性细胞角蛋白（Ⅰ型/低分子量）和碱性细胞角蛋白（Ⅱ型/高分子量）。
用于标记上皮及上皮来源的肿瘤，特别是对鉴别和判断转移性肿瘤是否为上皮源性具有一定的意义。
5.细胞角蛋白5/6（ 5/6，5/6）（阳性部位：细胞浆）。
在正常组织中，鳞状上皮和导管上皮的基底细胞以及部分的鳞状上皮生发层细胞、肌上皮细胞和间皮细胞阳性，腺上皮细胞阴性。
因此，可用于鳞癌和腺癌、间皮瘤和腺癌的鉴别诊断。
支气管上皮基底细胞、间皮；鳞癌、大细胞癌、移行细胞癌、间皮瘤阳性。
大多数腺癌为阴性。
6. 细胞角蛋白7（ 7，7）（阳性部位：细胞浆）。
免疫组化
SP法：采用生物素标记的第二抗体
SABC法：使复合物与生物素产生亲和力
ABC法：使抗生素和生物素加第二抗体产生亲和力
所有浆膜
基底膜标志
层粘蛋白
laminin
血管基底膜
嗜铬细胞
铬粒素
CgA
嗜铬细胞瘤
神经内分泌肿瘤
HMB45和S-100
黑色素瘤
三，淋巴造血肿瘤标志
白细胞共同抗原
LCA
B、T、组织、巨噬细胞
B淋巴细胞标志
CD21、CD45RA、BLA
T淋巴细胞标志
CD3、CD45RO、ALK
免疫组织化学的特点：对于疾病诊断的特异性强，敏感性高，最大优点是将形态学改变与功能和代谢结合起来。
免疫组化抗体
一，上皮源性肿瘤标志
广谱上皮细胞标志
细胞角蛋白
上皮细胞膜抗原
EMA
腺癌
上皮特异性抗原
ESA
鳞癌
癌胚抗原
CEA
腺癌
选择性上皮标志
甲胎蛋白
AFP
肝细胞癌
乳腺癌抗原
BRCA1
乳腺癌
前列腺特异抗原
PSA
前列腺癌
卵巢浆液腺抗原
CA125
卵巢浆液性囊腺癌
甲状腺球蛋白
TG
甲状腺癌
二，间叶源性肿瘤标志
广谱间叶肿瘤标志
波形蛋白
vimentin
癌与肉瘤鉴别
肌源性肿瘤标志
结蛋白
desmin
横纹肌和平滑肌
横纹肌肿瘤标志
Mg
横纹肌
平滑肌肿瘤标志
SMA
平滑肌
纤维组织肿瘤标志
CD68
肿瘤相关临床常见免疫组化指标
E-Ca：E钙粘附蛋白，介导细胞间粘连作用的跨膜糖蛋白，其功能丧失引细胞之间连接的破坏，主要用于肿侵袭和转移方面的研究。
CK19：分布于单层上皮和间皮，常用于腺癌诊断，肝细胞不表达，胆管上皮阳性。
CK20：标记胃肠上皮移行上皮Merkel细胞，用于胃肠道腺癌。
上皮膜抗原（EMA）：低/未分化上皮高表达；常存在于间变大细胞/恶横纹肌样瘤。
P504：前列腺癌的敏感性为97，特异性为100％。
HMB45：存在于恶性黑色素瘤。
CD68：用于粒细胞白血病、各种单核细胞来源肿瘤、括恶性维组织细胞瘤诊断。
CD44：是一种分布广泛的跨膜糖蛋白分子，分CD44s和CD44v两大类。CD44s主要作为透明质酸受体，结合透明质酸后影响肿瘤的生长和转移。而C44v则主要表达于转移的肿瘤细胞。
免疫组化（IHC）是免疫学与组织化学两种技术的结合，基本原理是应用抗原与抗体的特异性结合，再用显色剂显色以达到标记细胞的某种抗原物质的定性/定位检测技术。
一、上皮源性肿瘤标记
细胞角蛋白（K）
CK7/CK18：标记腺上皮通常在腺癌中表达。
CK14：标记肌上皮，用于鉴别肿瘤基底细胞上皮和肌上皮。
CK5/6：鳞状上皮和导管上皮的基底细胞以及部分鳞状上皮生发层细胞、肌上皮细胞和间皮细胞阳性，腺上皮细胞阴性。
二、间叶源性肿瘤标记
波纹蛋白（Vimentin, Vim）：细胞中间死蛋白抗体，多数软组织肿瘤均可表达，但肌纤维较明显，在一些上皮性肿瘤也有阳性反应，作为间叶与上皮源性鉴别一线抗体。
【看懂病理报告】肿瘤病理结果免疫组化指标意义（全面）
【看懂病理报告】肿瘤病理结果免疫组化指标意义（全面）34BE12: 角收白抗体，阳性提示良性病变。
前列腺抗基底细胞特异抗体(34BE12)是一种高分子量细胞角蛋白抗体,它标记前列腺基底细胞阳性率高,而恶性分泌上皮细胞阴性,前列腺基底细胞存在与否是判断癌与非癌的一个重要标志, 34BE12明确阳性者都应诊断良性,侵润性前列腺癌34BE12阴性.P63:抑癌基因，阳性提示良性病变。
是一种新近认识的基底细胞标记物,与P53具有同源性,染基底细胞比34BE12更敏感,因P53在良性增生、萎缩、腺病和不典型增生中可有假阴性,而P63几乎均呈阳性,在疑难的前列腺病变中应用P63或P63加34BE12的混合试剂检测对诊断更有帮助。
P504S一前列腺癌的新标记,即使在小的针刺活检中癌的P504S阳性率仍为95%,而良性腺体(萎缩、腺病、硬化性腺病和基底细胞增生)均阴性,与34BE12及P63染色结果正相反,三者联合应用对比明显,对前列腺良恶性病变的诊断很有帮助。
Ki-67为细胞增值的一种标记，在细胞周期G1、S、G2、M期均有表达，G0期缺如，其和许多肿瘤分化程度、浸润、转移、预后密切相关。
PCNA(增埴细胞核抗原)CEA:多数腺癌表达Rb (retinoblastoma视网膜母细胞瘤) 基因是肿瘤抑制基因，调节细胞周期。
P53在免疫组化中均为突变型，阳性率越高，预后约差。
野生型半衰期很短Nm23是转移抑制基因，其阳性表达和肿瘤转移呈负相关。
E-Ca，E钙粘附蛋白，介导细胞间粘连作用的跨膜糖蛋白，其功能丧失引起细胞之间连接的破坏，主要用于肿瘤侵袭和转移方面的研究。
PS2（雌激素调节蛋白），其表达和ER表达有关，可作为内分泌治疗和预后判断的指标之一。
CK18，低分子量角蛋白，主要标记各种单层上皮包括腺上皮，而复层鳞状上皮常阴性，主要用于腺癌诊断。
CK19，分布于单层上皮和间皮，常用于腺癌诊断，肝细胞不表达，而胆管为阳性反应Hep par 1,肝细胞抗原，正常肝细胞和高分化肝细胞癌阳性，低分化肝细胞癌多弱阳性或阴性。
免疫组化在前列腺癌病理诊断中作用
敏感 和特异 的… 。许多情 况下低级 别前列 腺癌 和诸 多 良性
结合 Ｃ ３ １ １ Ｋ ４３ ２在鉴别低 分化前列 腺癌 和高级别 泌尿上 皮 Ｅ
癌 中的作用。
１ 前 列 腺 基 底 细 胞 标 志
１１ 高分 子 量细 胞 角 蛋 白 高 分 子 量细 胞 角 蛋 白 （ ． ＨＭ—
几乎所有 Ｇｅｓｎｓｏｅ５６的前列 腺癌 阴性 ，０ 的高级 别 ｌ ｏ ｃｒ － ａ ２％
阳性表达 ， 定位于基底细胞 的胞 质和胞核 ， 前列 腺分泌 细 而 胞不表达 。高级 别 ＰＮ的 阳性率 为 ３ ％ （ ／ ０ ， 前列 腺 Ｉ ０ ３１ ）而 癌组织 ， 无论 Ｇｅｓｎ评分 如何 ， ｌ ｏ ａ 均不 表达 。此外 ， ５例 转 在 移性前列腺癌 中亦呈 阴性表达 。研究认 为 Ａ１Ｃ ｌ ｃｉ ２， ａ ｙｌ ｃ ｎ的 表达缺失源 自于 Ｃ ｌ ｃ ｎ基 因启动子 Ｃ Ｇ位点 超 甲基化 ， ａ ｙｌ ｃ ｉ ｐ 发生在前列腺肿瘤 发生 的早 期阶段 ， 并持续 于肿瘤 的进 展过 程 中。Ｃ ｌ ｃ ｎ在 前 列 腺 癌 中 的 表 达 缺 失 率 与 ｐ３ ａ ｙｌ ｃ ｉ ６ （５ 。相似 ， ９ ％） 。 因此 Ｃ ｌ ｃ ｎ作为 一种新 的前列 腺基底 细 ａｃ ｌ ｙｉ
中 图分 类 号 ： ３． ５ Ｒ ７ ７２ 文献 标 识 码 ： Ａ 文章 编号 ：０ １ ３９ ２ ０ ）３— ３ ４— ４ １０ —７９ （０ ７ ０ ０ ５ ０
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• Cumming（1980）报告，不固定的组织切片ICC 染色时，环鸟苷酸含量丢失80%以上。固定的目 的是使构成组织细胞成分的蛋白等物质不溶于水 和有机溶剂，并迅速使组织细胞中各种酶降解、 失活，防止组织自溶和抗原弥散，保持组织细胞 的完整性和所要检测物质的抗原性。因此迅速充 分固定是ICC染色成功的关键一步。用于ICC的固 定剂种类较多，选择时应根据所要检测物质的抗 原性质和切片方法以及所用抗体特征等做最佳筛 选。制片及固定方法见第一章 ，下面介绍两种 近年报道的新方法。
• 综上所述，免疫组化在前列腺癌诊断中的 应用具有重要价值，但决不能完全依靠免 疫组化去诊断前列腺癌，单独的P504s(或 基底细胞标志物)阳性或阴性均不能确诊前 列腺癌。只有将组织病理形态与免疫组化 染色结果结合起来，全面分析，综合判断， 才能有效地避免误诊。
免疫酶细胞化学实验技术---实用免 疫细胞与核酸技术（周德山）
二、切片
• 光镜ICC染色，常用的有冰冻切片和石蜡切 片两种，二者各有其优缺点，应根据抗原 的性质、实验室条件，合理选择之。对未 知抗原显示时，最好同时应用。冰冻切片 为ICC研究所首选。
• Shi（1991）等报告：微波炉照射的切片， 能够激活部分核内抗原活性。其机制不清， 可能与高温、高热的作用，使核内DNA双 链解开，DNA、RNA解离，抗原暴露有关。 其步骤为：将切片脱蜡水洗后，置染色瓶 中，加入去离子水或缓冲液至瓶颈处，反 复多次照射，每次1min，照射5～10次， 每次照射后，补充瓶中蒸发掉的液体，照 射温度不超过90～95℃为宜。此处理后， 细胞核染色以苏木精为佳
• 基底细胞消失是前列腺癌的重要诊断依据， 但局部的基底细胞缺失却不能作为诊断前 列腺癌的唯一标准。由于前列腺癌可有残 留的基底细胞，而且浸润性癌在管腔内扩 散及良性腺体陷入癌组织中[11],因此个别 前列腺癌中CK34βEl2与P63亦有阳性表达。 少数前列腺增生病变基底细胞标记亦呈阴 性表达，说明少数前列腺良性腺体基底细 胞可以不连续或不能被证实存在，这也提 示基底细胞免疫标志物阴性不能单独作为 确诊恶性的指标。
CK34βEl2
• 1984年，Gown等[7]首先报道了CK34βEl2，它 是一种高分子量57000～66000的细胞角蛋白。 CK34βEl2标记良性前列腺组织，仅在前列腺基 底细胞的细胞膜以及细胞质中表达，而不在前列 腺分泌上皮细胞表达，故CK34βEl2可作为对前 列腺的基底细胞层进行选择性的标记[8]。由于基 底细胞消失是诊断前列腺癌的重要形态学依据， 而苏木素-伊红染色切片判断基底细胞是否存在常 十分困难，因此用CK34βEl2标记基底细胞就成 为前列腺良恶性鉴别诊断的重要手段之一。
• [5]Harvey AM, Grice B, Hamilton C, et a1. Diagnostic utility of p504s/p63 cocktail, prostate-specific antigen, and prostatic acid phosphatase in Verifying prostatic carcinoma involvement in seminal Vesicles: a study of 57 cases of radical prostatectomy, speciments of pathologic stage pT3b[J]. Arch Pathol Lab Med,2010,134(7):983-988. • [6]Bostwick D G, Qian J, Ramnani D M. Immunohistochemistry of the prostate and bladder, testis and renal tumors. In: Dabbs D J, ed. Diagnostic Immunohistochemistry. Philadelphia: Churchill Livingstone, 2002.407-33
ห้องสมุดไป่ตู้
P63
• 1998年，Okada等[9]分离出新基因P63，P63是 P53抑癌基因家族的成员，位于人类染色体3q2729。P63能特异性地标记前列腺基底细胞，呈胞 核阳性，棕黄色颗粒状，故而可以显示基底细胞 的存在，而前列腺的分泌上皮细胞则呈阴性[10]。 绝大多数的前列腺良性增生及低级别上皮内瘤的 腺体的周围呈现连续性的P63分布；而高级别上 皮内瘤可见P63不同程度的间断消失，而前列腺 癌中腺体周围P63为阴性，显示基底细胞已经完 全的消失。因此，P63也可用于前列腺癌的鉴别 诊断。
微波固定（Microwave fixation）
• 为近几年所注目的问题之一。该方法能保持良好 的组织结构和抗原性，适于各种切片的酶组化、 ICC以及免疫电镜等材料固定。其固定机理可能 与微波（频率1000～3000MHz）具有被水分吸收 的性质（通常所用的微波是频率2450MHz，波长 12cm）；生物材料含有大量水份，照射后，温度 升高，分子运动加快，促进固定液向组织内渗透， 加速与组织成分的反应，短时间内达到固定的效 果等有关。经微波照射固定的组织，需置相同固 定液中，继续固定2～6h，室温。
• CK34βE12、P63均可用于标记基底细胞， 而作为诊断前列腺癌的有力手段。P63与 CK34βEl2相比，具有以下优点：①部分 CK34βE12标记阴性的基底细胞，P63标记 可呈阳性；②对有烧灼的经尿道电切的前 列腺标本，P63标记结果比较稳定。③P63 标记基底细胞呈核阳性，结果容易判断， 背景比较清晰。缺点则是其阳性表达是间 断的，当可疑腺泡少时，判断其基底细胞 是否消失有时比较困难。在实际应用中， 两者具有互补作用。
• 1．AMEX（Acetone Meth Enzoate Xylene ） 法 • 是改良的冰冻置换法（freeze substitution）的 简称，主要用于石蜡包埋标本。Sato(1986)报告， 该法具有同新鲜（未固定）组织冰冻切片同样的 抗原保持性和石蜡切片的良好组织结构保存。其 机制为：组织在丙酮中固定（脱水），组织细胞 内水份逐渐被丙酮取代，继之，用苯甲酸酯取代 组织内丙酮，经二甲苯置换后，石蜡包埋。组织 在-20℃丙酮内过夜亦形成冰晶，所以原方法将组 织先置4℃丙酮20～30min，再移入-20℃丙酮过 夜。实际上组织在4℃丙酮内过夜亦可得到同样效 果。如在该固定液内加入少量蛋白酶活性阻断剂， 并采用低溶点石蜡包埋等，可获得更佳染色结果。
• P504s阳性，CK34βEl2和p63阴性，能从正反两 面支持前列腺癌诊断，从而大大提高前列腺癌的 诊断正确率[13]。然而，临床上并非所有的前列 腺癌都是P504s阳性，CK34βEl2及p63阴性，也 并非所有的前列腺良性病变都是P504s阴性， CK34βEl2及p63完整阳性。杨京哲[14]等人的试 验中，P504s不仅在前列腺癌中有高表达，而且 在前列腺上皮内瘤中也高表达，这表明P504s不 但对前列腺癌敏感，并且对PIN也非常敏感，故 用P504s只能区别前列腺良性增生，而不能把前 列腺癌和PIN鉴别开来。
• 2004版 WHO中， P504s在前列腺癌的阳 性率为80%以上，但在某些前列腺癌如泡 沫状腺癌、萎缩性癌、假增生性癌和治疗 后前列腺癌中阳性率比较低。而且P504s在 12%的良性增生，17.5%的前列腺腺病，萎 缩型腺体以及90%以上的高级别PIN中呈阳 性反应。此外，P504s在前列腺以外的肿瘤 如尿路上皮癌、结肠癌、肾癌以及良性肾 源性腺瘤也可阳性。这表明P504s没有组织 特异性，不是前列腺癌的特异性标志物。
• 免疫酶细胞化学是免疫细胞化学 （Immunocytochemistry,ICC）中最常用 的方法之一，它是在抗原抗体特异反应存 在的前提条件下，借助于酶细胞化学的手 段，检测某种物质（抗原/抗体）在组织细 胞内存在部位的一门新技术：即预先将抗 体与酶连结，再使其与组织内特异抗原反 应，经细胞化学染色后，于光镜或电子显 微镜下观察分析的形态学研究方法。
• 在正常和良性增生以及上皮内瘤的前列腺腺体， 导管周围形成连续或断续的CK34βE12分布。而 前列腺癌的腺体的基底细胞层完全消失，所以最 终表现为CK34βE12不表达。但CK34βE12标记 基底细胞可部分阴性，对经尿道电切的标本，常 因标本经人为烧灼而受影响，因此可靠性和稳定 性欠佳。有20%～30%的前列腺癌导管腺癌和筛 状癌周围有连续或间断的基底细胞，而部分良性 前列腺病变,如腺病和不完全性萎缩的腺泡周围基 底细胞可部分甚至完全消失。说明基底细胞消失 并非诊断前列腺癌的绝对指标。而免疫组化操作 不当，则有可能出现假阴性结果而误诊。故免疫 组化结果应结合HE切片中的其他形态学特征综合 判断。
• 为克服荧光抗体法的不足、并能在超微结 构水平定位抗原物质的存在部位， Nakane(1966)等成功地引入了酶代替荧光 色素标记抗体，进行组织细胞内抗原或半 抗原的定位，开辟了酶标抗体技术免疫酶 细胞化学之路。 • 结合笔者经验，介绍ICC染色中的主要程序： 组织标本的固定、切片、染色原理及步骤、 结果判定及一些进展、特殊应用等供读者 参考。
α-甲基-辅酶A-消旋酶 (P504s)
• 2001年Jiang等[12]首次将P504s抗体应用 于前列腺癌的诊断。P504s即α-甲基-辅酶 A-消旋酶((alpha-methylacyl-CoA racemase)，其基因定位于染色体5P13， 它所编码的蛋白由382个氨基酸组成，在支 链脂肪酸的β-氧化和衍生过程中起作用。 P504s在前列腺癌中高表达，而在正常中前 列腺组织中则呈阴性或灶性弱阳性。Jiang 等在所检测的137例前列腺癌中阳性率高达 100%，并提出P504s是前列腺癌高度敏感 性和特异性的标记物。
第二节 染色方法
• 一、本科标抗体法 • 酶标抗体技术是通过共价键将酶连结在抗 体上，制成酶标抗体，再借酶对底物的特 异催化作用，生成有色的不溶性产物或具 有一定电子密度的颗粒，于光镜或电镜下 进行细胞表面及细胞内各种抗原成分的定 位。