荧光分光光度计的应用ppt课件

3.4 荧光强度的稳定性
取酚标准溶液及空白溶液，依实验方法进行荧光强度稳定性试验。测 定了2.5小 时内荧光 强度变化情况，发现荧光强度在 1小时内基本不变。
3.5 样品分析
用流动注射在线富集分离荧光分光光度计测定垃圾渗 出液中的苯胺
实验部分
1.1 仪器和主要试剂
（1）流动注射仪, 自装配, 附具有富集作用的自填装微型柱; 荧光分光光度计 R F- 540( 日本岛津公司) , 附有自行研制的流通管;721 可见分光光度计( 上海第三分析仪器厂) 。 （2）苯胺标准贮备液( 10 g/ L) : 称取 2. 500 g 新蒸馏的无色分析纯苯胺, 用 25 mL 的 1 mo L/ L 盐酸溶解后, 移至 250 mL 容量瓶中, 用蒸馏水稀释至刻 度, 置于冰箱中保存。 （3）苯胺工作溶液( 10 mg/ L) : 用移液管移取 1. 0 mL 的 10 g/ L 苯胺标准贮备液于 1 000 mL 容量瓶中, 用蒸馏水稀释至刻度, 使用时配制。盐酸溶液( 0. 5 mo l / L) ; N H 3 H20- N H4Cl 缓冲溶 液( pH= 10) 。
H P L C - R F 法快速测定水中苯并( a ) 芘
—利用高效液相色谱仪( HP LC ) , 将样品中苯并( a) 芘与其他 有机物分离, 并同 荧 光分光光 度计( R F) 的微 流动池相联, 作荧光测定, 组成了 HPL C - RF 测定体系, 进 行饮用 水检测。该 方法相 对标准 差为 4.5 % ~ 7.2% , 回收 率为8 6 .5%~ 93.5% , 检测限为 0. 0009μg/ L 。
荧光分光光度计的应用
一、 荧光分光光度计
荧光分光光度计既可用于定量分析， 也可用于测绘激发光谱和荧光光谱。
第一单色器选择激发光波长（＞ 250nm的紫外光），故称为激发单色 器。第二单色器（荧光单色器）与 激发光入射方向垂直，并选择荧光 波长，可提高方法的选择性和准确
度。
荧光分光光度法直接测定天然水中的酚
实验部分
1.仪器和主要试剂 日立 F一3000荧光分光光度计、标准酚溶液、0.200mol/L KH2PO4—0.275mol/L
KHPO4缓冲溶液、饱和Na2C2O4溶液. 2.实验方法
3.结果与讨论
3.2 Na2C2O4的用量
天然水中含Ca2+，Mg2+较多，特别是海水，加入缓冲溶液会出现白色浑浊，使回收 率偏低，加入1-2滴Na2C2O4可消除浑浊.（见表1）
V 1 ( B) 、V 2 ( B) 。首先用盐酸溶液再生树脂; 然后进样, 在 p H< 3 的条件下, 苯胺主要以
C6 H5 N H3+正离子形态存在,பைடு நூலகம்被树脂吸附; 然后快速冲洗掉树脂颗粒间的残留样品; 最后进
行洗脱, 在 p H = 10 的条件下, 苯胺主要以 C 6H5N H2 分子形态存在, 吸附的C6 H5 N H3+
0.1s，延迟时间按0.1s，激发波长狭缝宽度5.0nm，发射波长狭缝宽度
5.0nm，光电倍增管电压250V.
2 结果与讨论 2.1 方法的检出限 标准曲线和相关系数 连续11次进空白样品，根据3倍标准偏差计算得出本方法VC检出限为 0.95mg/kg 回归方程为Y=0.0073X－0.029，相关系数为0.9996。可见本方 法检出限较低，在测量浓度0～20mg /L范围内线性良好。
1.2 实验方法
流动注射仪附填装有阳离子型大孔吸附树脂的微型柱, 流动注射分析过程由时序电路控制, 分为再生、 进样、冲洗、洗脱 4 步, 图 1 是流动注射分析的流程图, 旋转阀有 2 个工作状态, 图中所示为 A 状态, 箭 头所示为 B 状态。 各步的阀位置为: 再生 V 1 ( A) 、V 2( A ) , 进样 V 1 ( B) 、 V 2 ( A) , 冲洗 V 1 ( A) 、 V 2 ( A) , 洗脱
2.2样品的测定及回收率
按本方法测定腊肉中VC，同时在待测样品中加入已知量抗坏血酸标准溶液，按 测定步骤进行加标回收实验，结果见表2 方法的回收率在87.2%～94.3%之间，测 定结果满足分析要求。
2.3荧光分光光度计法与2，4－二硝基苯肼比色法比较
肉类中VC测定常采用传统的2，4－二硝基苯肼比色法，荧光分光光度计法则很 少见报道。肉制品中VC含量都很低，2，4－二硝基苯肼法的检出限较高 、重复 性也较差，而荧光分光光度计法检出限低 精密度较高 故将荧光分光光度计法与 2，4－二硝基苯肼比色法对腊肉中VC的测定结果相比较，结果见表3 。从表3可 知，这两种方法测定腊肉中VC含量，其结果无显著差且荧光分光光度计法精密 度更好。 可见，荧光分光光度计法测定肉制类样品中VC具有快速准确 精密度高 等优点。
1.2实验方法
1.2.1样品前处理 精确称取匀浆后的腊肉2～5g置于烧杯中，加入20mL50g/ l偏磷酸，超声20min后，过 滤至100mL棕色容量瓶中，用50g/ L偏磷酸定容吸取滤液1.00mL于试管中,加入0.1ml 2g/l二氯靛酚( 使VC氧化成脱氢VC) ，混匀( 此时溶液呈微红色) 再加入0.10ml 30g/ l 硫脲钠摇匀，使红色褪去( 还原过量的二氯靛酚).向试管中加入1.00mL3%硼酸50%乙酸 摇匀,室温下静置15min 在暗室中迅速向试管中加入5.00mL0.2g/ l盐酸邻苯二胺，摇匀, 在室温下反应30min 同时做试剂空白.
1.2.2抗坏血酸标准溶液 准确称取60℃真空干燥2h的0.0500g抗坏血酸，用50g/L偏磷酸溶解并定
至50mL棕色容量瓶中，即为1mg /L的抗坏血酸标准储备液.用偏磷酸逐级
稀释，配置成0 0.2 1 5 10 20mg /L标准溶液，其余步骤同样品前处理.
1.2.3荧光光度计参数条件
测量模式: 光度测量法，激发波长350nm，发射波长430nm，积分时间
转变为C 6H 5 N H 2 后被洗脱至荧光分光光度计内的流通管中, 用时间扫描动态检测洗脱液 荧光强度。
1.3结果与讨论
荧光分光光度计法测定腊肉中维生素C
1 实验部分
1.1仪器与试剂
荧光分光光度计［F－7000 ( 日立公司) ］；DHG－9241A恒温培养箱；抗坏血酸、 偏磷酸 、乙酸钠 、硫脲 、硼酸; 2，6 二氯靛酚、盐酸邻苯二胺。