N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)测定试剂盒(MPT底物法)产品技术要求sainuopu
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)试剂盒使用说明书.
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)试剂盒使用说明书(酶法·液体双试剂)用途本试剂盒用以测定尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)的活力。
原理在第一反应中用己糖激酶(HK)消去血清中内源性葡萄糖的影响，在第二反应中，NAG作用于基质P-硝基苯酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(PNP-NAG)，生成N-乙酰氨基葡萄糖，此N-乙酰氨基葡萄糖在N-乙酰氨基葡萄糖氧化酶(NAGOD)的作用下生成H2O2。
此H2O2在过氧化物酶(POD)的作用下与高灵敏的发色剂双〔3-双(4-氯酚)甲基-4-•二甲氨苯基〕胺(BCMA)反应，生成绿色色素。
通过测定此色素可求得NAG的活力。
第一反应：HK葡萄糖+ A TP ─────────→葡萄糖-6-磷酸+ ADP第二反应：NAGPNP-NAG + H2O ──────→N-乙酰氨基葡萄糖+ p-硝基苯酚NAGODN-乙酰氨基葡萄糖+ O2 + H2O ───→N-乙酰氨基葡萄糖酸+ H2O2PODH2O2 + BCMA + H+────→绿色色素+ 2H2O试剂━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━试剂成份含量──────────────────────────────────R-1A1(冻干) NAGOD ≥3000U/LPOD ≥12500U/LHK ≥8000U/LA TP·2Na ≥5mg/mlR-1A2(冻干) PNP-NAG 10.5mmol/LR-1B 2-吗啉乙烷磺酸(MES) 30mmol/L──────────────────────────────────R-2A(冻干) BCMA 0.17mmol/LR-2B MES 30mmol/L──────────────────────────────────标准酶NAG 约为50U/L标准酶溶解液MES 30mmol/L ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━标本尿液试剂配制R-1：以一瓶R-1B溶解一瓶R-1A2，再以此溶液溶解一瓶R-1A1。
人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)酶联免疫试剂盒使用说明书
氨基葡萄糖苷酶(NAG)酶联免疫试剂盒【试剂配制】洗液工作液：洗液需提前配制，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制。
取出洗液浓缩液，浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
浓洗涤液按1:20倍进行稀释。
例如用量筒量取285ml去离子水，倒入烧杯或其他洁净容器中，再量取15ml浓洗涤液，均匀加入，搅拌混匀。
【注意事项】1.实验开始前，请提前配置好所有试剂。
试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。
2.用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
3.如样品浓度过高时，用合适的溶液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
【操作步骤】1.将各种试剂移至室温（18-25℃）平衡至少30分钟，按前述方法配制试剂，备用。
2.将酶标板取出，设一个空白对照孔、不加任何液体；每个标准点依次各设两孔，每孔加入相应标准品50μl；其余每个检测孔直接加待测标本50μl。
3.每孔加入酶结合物50μl（空白对照孔除外），充分混匀，贴上不干胶封片，置37℃温育1小时。
4.手工洗板，弃去孔内液体。
洗涤液注满各孔，静置10秒甩干，重复三次后拍干；洗板机洗板，选择洗涤三次程序，洗板后拍干。
5.每孔加显色剂A液50μl，显色剂B液50μl，振荡混匀后，37℃避光显色15分钟，每孔加终止液50μl。
6.用酶标仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。
在反应终止后10分钟内进行检测。
【操作要点】1.为保证检测结果的准确性，建议标准品及样品均设双孔测定。
每次检测均需做标准曲线。
2.如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时再乘以相应的稀释倍数。
3.加样时，请使用一次性的洁净吸头，避免交叉污染。
加样时应尽量轻缓，避免起泡，将样品加于酶标板孔底部，切勿沿孔壁加样。
4.为防止样品蒸发，温育过程中酶标板必须覆上板贴，任何时候都应避免酶标板处于干燥的状态。
5.洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性，在每次洗涤过程中，需要将孔内液体完全甩干，并在吸水纸上拍干，切勿将吸水纸直接放入反应孔中吸水，或用枪在孔中吸取液体。
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)测定试剂盒(MPT法)产品技术要求利德曼
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）测定试剂盒（MPT法）适用范围：本产品用于体外定量测定人尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的含量。
1.1 规格试剂1（R1):2×45mL、试剂2（R2): 2×15mL；校准品（选配）：1×2mL；质控品（选配）：1×2mL。
1.2 组成试剂盒由试剂、质控品（选配）和校准品（选配）组成。
试剂1(R1)：柠檬酸缓冲液（PH=4.5），200mmol/L。
试剂2(R2)：6－甲基－2吡啶－N－乙酰－1－硫代－β－D－氨基葡萄糖苷，6mg/dl。
校准品：冻干品，含NAG：（100～200）IU/L、磷酸盐缓冲液：50mM、乳糖：5％、酶稳定剂：1％。
质控品：冻干品，含NAG：（5～25）IU/L、磷酸盐缓冲液：50mM、乳糖：5％、酶稳定剂：1％。
2.1 外观液体双试剂：R1：无色澄清液体；R2：无色或淡黄色液体。
校准品：冻干品，溶解后为无色液体。
质控品：冻干品，溶解后呈黄色匀质液体。
2.2 装量:不得低于标示体积。
2.3 溯源性：根据GB/T 21415及有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，该校准品溯源至Inner standard。
＜1.5ABS ( 1cm；340nm；37℃)。
2.4 空白吸光度： A（空白）2.5 灵敏度：浓度为100IU/L时，吸光度变化△A/min＞0.01 ABS。
2.6 线性：测定结果在(0,200]IU/L范围内r≥0.996；测定结果(5,200] IU/L 时相对偏差应≤15%，测定结果(0,5] IU/L时绝对偏差应<0.75 IU/L。
2.7 精密度：用（5～12）IU/L和（15～25）IU/L的样本各重复检测10次，其变异系数CV<5%。
2.8 批间差：取三个批号试剂，分别测定浓度接近正常值上限的样本，每个批号测3次，不同批号之间测定结果的相对极差应<10%。
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定标准操作程序
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定标准操作程序1.摘要N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶检测主要用于肾脏疾病、肝硬化和慢性活动性肝炎的诊断。
2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测尿液中NAG的浓度。
3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定NAG浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）试剂盒采用的是速率法。
5.原理26N---O---β−+−→−DN NAG-H-氨基葡萄糖苷乙酰硫代吡啶甲基巯基吡啶氨基葡萄糖-甲基-乙酰62--2--N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)催化底物6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)水解产生6-甲基-2-巯基吡啶(MPT)和N-乙酰-氨基葡萄糖，MPT在340nm附近有吸收峰，所以，可以通过监测340nm附近的吸光度变化值计算样本中的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力。
6.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：柠檬酸缓冲液、Tris6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷、防腐剂7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。
试剂不可冰冻。
7.4试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用上海科华公司提供的K校准因子对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品：上海科华公司提供的生化质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
06 NAG
复星长征体外诊断试剂标准操作规程试剂名称：N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定试剂盒（MPT 底物法）上海复星长征医学科学有限公司目录1 试剂盒概况2 方法学原理3 试剂主要组分4 样本准备5 试剂准备6 校准要求7 质量控制8 计算方法9 参数设定10 参考范围11 试剂性能概要12 超出可报告范围的处理13 其他必须说明的内容14 参考文献1 试剂盒概况1．1 货号：1.02.5001/1.02.5002/1.02.5003/1.02.5005。
1．2 包装规格：试剂1（R1）：4×45mL 试剂2（R2）：2×30mL。
试剂1（R1）：2×60mL 试剂2（R2）：2×20mL。
1．3 医疗器械注册证编号/产品技术要求编号沪械注准20172400274/沪械注准201724002742 方法学原理试剂采用6-甲基-2硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（MPT-NAG）为底物。
MPT-NAG在N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（NAG）的作用下分解生产6-甲基-2-巯基吡啶（MPT）,使波长340nm处的吸光度值的上升速率进行监测，即可测得样本中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（NAG）的活性。
NAGMPT-NAG+H2O N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷+MPT3 试剂主要组分3．1 试剂1（R1）柠檬酸盐缓冲液200mmol/L3．2 试剂2（R2）6-甲基-2硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷15mmol/L3．3 储存条件3．3 . 1 在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起效期12个月。
3．3 . 2 试剂启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定20 天。
4 样本准备样本要求：血清或者尿液标本新鲜，应不溶血，避光保存。
5 试剂准备试剂为液体双试剂形式，无须特别准备，可直接上机使用。
6 校准要求6．1 校准品：使用与试剂配套使用的复星长征N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶校准血清对测定进行校。
β-N-乙酰葡萄糖苷酶(NAG)检测试剂盒(PNP比色法)
β-N-乙酰葡萄糖苷酶检测试剂盒(PNP 比色法)简介：β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)可水解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷，也能水解β-N-乙酰氨基半乳糖苷，该酶广泛存在于多种组织、体液、细胞，是溶酶体中的一种酸性水解酶，其测定方法有比色法和荧光光度法。
Leagene β-N-乙酰葡萄糖苷酶检测试剂盒(PNP 比色法)(NAG Colorimetric Assay Kit)检测原理是在酸性条件下NAG 可使底物对硝基酚-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷水解，释放出游离的对硝基酚(p -nitrophenol ，PNP)，在碱性条件下p -nitrophenol 呈黄色产物，产物黄色越深，说明β-N-乙酰葡萄糖苷酶活性越高，反之则酶活性越低，通过分光光度比色法测定吸光值，据此通过比色分析就可以计算出酸性磷酸酶活性水平。
该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中的β-N-乙酰葡萄糖苷酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、 离心管2、 恒温箱3、 比色杯4、 分光光度计或生化分析仪操作步骤(仅供参考)：1、 配制检测工作液：① 配制显色工作液： 取出1支4-NAG ，恢复至室温后溶解于2 ml NAG Assaybuffer ，混匀，冰上预冷备用。
新配制的显色工作液应在10天内用完。
② 配制标准品工作液：取出p -nitrophenol(10mM) 恢复至室温后，取10μl 溶解于编号 名称TE0063 50T Storage试剂(A): NAG Assay buffer 150ml 4℃ 试剂(B): 4-NAG 1支 -20℃ 避光 试剂(C): Alkaline buffer 1ml 4℃ 试剂(D): p -nitrophenol(10mM) 1ml -20℃ 避光 试剂(E): ddH 2O 10mlRT 使用说明书1份ACP Assay buffer，使p-nitrophenol达到3mM。
MPT-NAG测定N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的应用价值
Ｉ， 他 条 件 不 变 。 对 ４ Ｌ ＮＡＧ 标 准 酶 进 行 测 定 ， ｐ 其 ５Ｕ／ 在 Ｈ
４６ 酶促反应速率最大 。 ．时
取 浓 度 为 ５Ｕ／ 的质 控 品 作 为样 品 ， 复 Ｌ 重
测 定 １ 次 ， 出 标 准 差 Ｓ 以 ３ 为 最 低 检 测 限 ， 果 为 Ｏ 求 ， 结
・
２ １ ・ ０２
堕 医学与临床 ２ １ 年 ８ ０１ 月第 ８ 卷第 １ 期 Ｉ ｂＭｅ ｌ ， ｕｕｔ ０ １Ｖ １ ， ｏ１ ｄＣｉ Ａ ｇ ｓ ２１ ，ｏ． Ｎ ．６ ６ ａ ｎ ８ 最 大 吸 收峰 ， 定 样 本 在 ３ ０ｎ ｌ 成 ， 受 尿液 颜 色 干 扰 。 该 测 ４ ｉ 完 Ｔ 不 测 定 １ Ｏ名 体 检 健 康 者 尿 液 样 本 ， ６ ０ 男 Ｏ名 ，
４ ８ ５ ０ ５ ２和 ５ ４的柠 檬 酸 一 酸 氢 二 钠 缓 冲 液 ２ ０ ｍｍｏ／ ． 、． 、． ． 磷 ０ ｌ
上 皮细胞受损 时 ， 中 Ｎ 尿 ＡＧ 活 性 将 显 著 升 高 且 早 于 其 他 尿
酶 ， 肾小 管 损 害 的 早 期 诊 断 有 较 大 价 值 ｌ ， ＮＡＧ 上 升 程 对 １且 ］
Ｎ 乙 酰一— Ｉ 基 葡 萄 糖 苷 酶 （ 一 ＢＩ 氨 ） ＮＡＧ） 一 种 位 于 溶 酶 体 内 是
的 酸 性 水 解 酶 ， 对 分 子 质 量 为 １０× １。 存 在 于 所 有 组 织 相 ４ ０， 中 。尿 中 ＮＡＧ主 要 来 源 于 肾近 曲小 管 上 皮 细胞 ， 近 曲小 管 当
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)测定试剂盒(MPT法)产品技术要求百奥泰康
N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)测定试剂盒（MPT法）适用范围：该产品用于体外定量测定人尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的活性。
1.1 产品规格1.2 组成成分1.2.1 试剂组成试剂1：柠檬酸缓冲液（PH=4.5），200mmol/L试剂2：6－甲基－2吡啶－N－乙酰－1－硫代－β－D－氨基葡萄糖苷，6mg/dL。
1.2.2 校准品的组成冻干品，含NAG（30IU/L）、磷酸盐缓冲液（50mM）、乳糖（50g/L）。
定值范围为：20-50U/L。
1.2.3质控品的组成冻干品，含NAG（10IU/L）、磷酸盐缓冲液（50mM）、乳糖（50g/L）。
定值范围为：5-25U/L。
2.1 外观液体双试剂：试剂1：无色至淡黄色液体；试剂2：无色至淡黄色液体。
校准品：冻干品，溶解后为无色至淡黄色液体。
质控品：冻干品，溶解后呈黄色匀质液体。
2.2 装量不得低于标示体积。
2.3 空白吸光度空白吸光度应≤1.02.4 空白吸光度变化率空白吸光度变化率应≤0.05。
2.5 灵敏度浓度为100IU/L时，吸光度变化（△A/min）应≥0.01 。
2.6 线性：在(0,200.0]IU/L线性范围内，线性相关系数r 应≥0.990；在(0,50]IU/L范围内绝对偏差不超过5IU/L；在(50,200]U/L范围内的相对偏差不超过±10%。
2.7 精密度：变异系数CV应≤5%。
2.8 批间差：不同批号之间测定结果的相对极差应≤10%。
2.9 准确度回收试验：回收率在90%-110%之间。
2.10 质控品赋值有效性测定值在质控靶值范围内。
2.11瓶间重复性（均一性）校准品、质控品瓶间重复性CV≤5%。
2.12校准品溯源性根据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品控制物质赋值的计量学溯源性》及有关规定提供 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容。
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N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）测定试剂盒（MPT底物法）
适用范围：用于体外定量测定人体尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的活性。
1.1试剂盒包装规格
试剂1：1×15ml，试剂2：1×5ml；试剂1：2×54ml，试剂2：2×18ml；
试剂1：3×39ml，试剂2：3×13ml；试剂1：4×54ml，试剂2：4×18ml；
试剂1：2×300ml，试剂2：1×200ml；试剂1：2×30ml，试剂2：2×10ml。
校准品（选配，冻干品）：1×1ml；1×2ml。
质控品（选配，冻干品）：1×1ml；1×2ml。
1.2试剂盒主要组成成分
2.1 外观
试剂1：无色澄清液体；试剂2：无色或淡黄色液体。
校准品：冻干品，溶解后为无色至黄色液体。
质控品：冻干品，溶解后为无色至黄色液体。
2.2 净含量
液体试剂的净含量不得低于标示体积。
2.3试剂空白
2.3.1试剂空白吸光度
在37℃、340nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应不大于1.5。
2.3.2试剂空白吸光度变化率
在37℃、340 nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度变化率（△A/min）应不大于0.05。
2.4 分析灵敏度
测定活性为100U/L样本时，吸光度变化率（ΔA/min）应不小于0.01。
2.5 线性范围
在（0，200）U/L线性范围内，线性相关系数r应不小于0.996。
在（20，200）U/L范围内的线性相对偏差应不大于±15%；在（0，20] U/L范围内的线性绝对偏差应不大于±3U/L。
2.6 重复性
重复测试两份高低浓度的样本，所得结果的变异系数（CV%）应不大于5%。
2.7 批间差
不同批号试剂测试同一份样本，测定结果的批间相对极差应不大于10%。
2.8 准确度
与已上市产品进行比对试验：在（0，200）U/L线性范围内，与参比试剂的相关系数r应不小于0.975。
在（20，200）U/L范围内与参比试剂的相对偏差不大于±15%；在（0，20] U/L范围内与参比试剂的绝对偏差不大于±3U/L。
2.9 质控品赋值有效性
测定结果在靶值范围内。
2.10瓶间差（均一性）
校准品和质控品的瓶间变异系数（CV%）应不大于5%。
2.11含水量（冻干品）
校准品和质控品的水分含量应不大于8%。
2.12校准品溯源性
依据GB/T 21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求，校准品溯源至企业工作校准品。
2.13稳定性
2.1
3.1复溶稳定性
校准品和质控品开瓶复溶后，复溶物在室温10℃～30℃密封避光保存，可以稳定4小时，在第5小时检测，校准品测量结果与靶值的相对偏差应在±10%以内，质控品测量结果应在其靶值范围内；复溶物在2℃～8℃密封避光保存，可以稳定24小时，在第25小时内检测，校准品测量结果与靶值的相对偏差应在±10%以内，质控品测量结果应在其靶值范围内。
2.1
3.2效期稳定性
试剂盒在2℃～8℃下有效期为12个月，取失效期的试剂盒进行检测，试验结果应满足2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.8、2.9的要求。