唑类抗真菌药物耐药机制的研究进展
抗真菌药物耐药机制的研究进展_毛琼蕾
・综述・ 抗真菌药物耐药机制的研究进展毛琼蕾陈小清房月近年来，随着抗真菌药、广谱抗生素、抗肿瘤药物、免疫抑制剂在临床上的广泛应用，条件致病菌感染发生率急剧增加，真菌的耐药性也在不断加重。
耐药真菌所致的深部感染，已成为临床治疗失败的一个重要原因，抗真菌研究面临克服真菌耐药性的问题。
本文按耐药机制发生的频率，综述相关耐药机制的研究进展。
目前研究认为，真菌耐药性的产生机制主要有以下几种：（1）真菌细胞内药物累积减少；（2）药物靶酶产生增多或靶酶结构改变；（3）靶酶的缺失，导致细胞代谢途径的改变；（4）生物被膜形成；（5）细胞壁的合成障碍；（6）细胞应激反应[1-2]。
耐药菌株的各种耐药机制既可以单独起作用，也可以两种或多种机制同时起作用。
一般情况下，参与耐药的机制越多，耐药程度越重[3]。
一、耐药真菌细胞内药物浓度的降低研究发现敏感念珠菌细胞内唑类药物的浓度约是细胞外药物的浓度的3倍，而耐药菌株胞内唑类药物的浓度反而约为胞外的一半[4]。
目前多从两个方面来解释耐药真菌细胞内药物浓度降低的现象：（1）真菌膜通透性减低，使可进入胞内的药物减少。
（2）细胞膜上参与药物外排有关的运载蛋白的表达上调，是现在认为许多耐药真菌细胞内药物浓度降低的主要原因。
目前比较明确的与外排泵有关的运载蛋白有两大类，一类是含ATP结合区的ABC转运蛋白超家族（ATP-binding cassette transporters，ABCT），其中Cdr1p（candida drug resistance protein）和Cdr2p是对唑类药物产生耐药最主要的ABCT[2]。
CDR1为白色念珠菌中最先发现的外排泵基因。
大多数对氟康唑耐药的白色念珠菌株中均发现CDR1超表达[5]。
Cdr1p的表达使白色念珠菌产生对氟康唑耐药性比Cdr2p的表达影响更大[6]。
Cdr2单独破坏株并未显示对唑类药物高度敏感，Cdr1和Cdr2同时破坏株显示对唑类药物高度敏感[7]。
曲霉菌对唑类抗真菌药物的耐药机制研究进展
摘要 ：侵袭性 曲霉病是 由致病 曲霉菌 引起 的危及生命 的真菌感染，主要致病菌为烟 曲霉 ，而唑类抗真菌药物是 临床 治疗 的 首选 。 目前 已上市 的唑类抗真菌药物包括伊 曲康 唑，伏立康唑 ，泊 沙康 唑和伊沙康唑 。然 而，流行病学研究发现 曲霉 菌对 唑类 抗真菌药物 的耐药率呈逐年上升趋势 ，给临床治疗造成 了威胁 。其 中，Ｃｙｐ５１Ａ蛋 白突变 、外排系统高表达 以及环境耐药机制等 多种 因素 都参与唑类抗 真菌药物的耐药 。因此 ，本文 综述近年来有关 曲霉菌对唑类抗真菌药物 的耐药机制 ，以期为耐药监测 、 耐药菌控制和新 药研 发提供 理论依据 。
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｕｎｇｉ；Ａｚｏｌｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ；Ｃｙｐ５ １Ａ：ＣｄｒｌＢ；Ｔａｎｄｅｍ ｒｅｐｅａｔｓ
近 ３０年 来 ， 真 菌 感 染 的发 病 率 呈 逐 年 上 升 趋 势 ， 造 成 的临床 危 害 日益增 大 ，这 主 要 与 接 受 造 血 干 细 胞 和 实 体 器 官移 植及 免疫 抑 制 治 疗 的患 者 数 量 增 加 有 关 …。在 丝 状 真 菌 感 染 中 ， 曲霉 菌 是 最 常 见 的病 原 菌 。 目前 可用 于 治疗 曲霉 菌 感 染 的抗 真 菌 药 物分为唑类 、多烯类 、棘 白菌素类和嘧啶类４类 。其
３１０００３；２ Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ，Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ ｆ ｏ ｒ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａ ｎ ｄ
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，ｔｈｅ ＦｉｒｓｔＡｆ ｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｚｈ￣ｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎ ｇｚｈｏｕ ３１０００３）
唑类抗真菌药物的药理学和毒理学研究进展
(上接第127页)进行LC A白细胞共同抗体、角蛋白CK的抗体一步法[122]。
对鉴别淋巴瘤及分化差的癌、肉瘤,应用微波的方法对冰冻切片进行了免疫组织化学染色,得到了满意效果。
我们使用DAK O EPOS G FAP抗体,采用微波辐射技术进行石蜡切片的免疫组织化学染色目前文献中尚未见报道。
从微波法与标准法两种方法在组织形态学的免疫组织化学染色结果看,胶质肉瘤、胶质母细胞瘤及星形细胞瘤G FAP均出现了阳性表达,而且阳性程度一致,阳性对照组的脑组织中星形细胞阳性,阴性对照组脑膜瘤细胞为阴性表达,这说明微波法与标准法同样准确、清晰度高,而在时间上微波法比标准法大大节省了时间,占有优势,染色仅需20min,而常规染色则需要80min。
由此看出,使用微波的方法为快速的病理鉴别诊断工作提供了可靠的依据,值得推广应用。
参考文献:[1] Chiosi M,Lestani M,Pedron S,et al.A rapid immunostainingMethod for frozen section.Biotech Histochem,1994,69:2352239.[2] 马大烈,郑青渝,李全华.微波En vision免疫组织化学技术及其应用.中华病理杂志,1998,27:1532154.(收稿日期:2005-09-14)中图分类号:R99 文献标识码:B 文章编号:1002-3127(2006)02-0128-03・药物毒理・唑类抗真菌药物的药理学和毒理学研究进展曹安民,施畅,廖明阳(军事医学科学院毒物药物研究所,北京100850)关键词:唑类抗真菌药物;药理学;毒理学 唑类抗真菌药在临床上广泛用于治疗深部真菌和浅表真菌感染,早期开发的咪唑类药物以克霉唑和酮康唑为代表,是治疗浅表性真菌感染的首选药物。
此类药物可与人体细胞色素P450(CY P450)蛋白血红素辅基Fe原子配位结合,因而具有一定的肝毒性,并对肾上腺和性腺有一定的抑制作用,致使其临床应用受到限制。
真菌对抗真菌药物耐药机制的研究进展
廛睦痘生挂痘２Ｑ！Ｑ堡≥旦筮！兰鲞箜！期』旦！婴！１２１２赶塑堕！！望曼！塑！垒碰：丛型２Ｑ！Ｑ：！堂：丝：堕垒！・综述・２３Ｒｅｔｒｕｖｉｒｕｓｅｓ，２００８，２４（５）：７３３—７４２．［２１］ＴｕＹＱ，ＷａｎｇｈＩＪ，ＹａｏＪ，ｅｔａ１．Ｈｕｎｕｍｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｅｉｅｎｃｙｖｉｒｕｓ一１ｇｅｎｏｔｙｐｉｅｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｍｏｎｇｖｏｌｕｎｔｅｅｒｂｌｏｏｄｄｏｎｏｒｓｉｎＹｕｎｎａｎ，Ｃｈｉｎａ【Ｊ］．Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，２００９，４９（９）：１８６５－１８７３。
［２２］ＧｕｎＤ，ＤｉｎｇＮ，ＸｕＹ，ｅｔａ１．Ｎｅａｒ柚卜ｌｅｎｇｔｈｇｅｎｏｍｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａ－ｔｉｏｎｏｆａｎＨＩＶ—ｌＣＲＦ０ｌ—ＡＥ６ｔｌ＇，ａｉｎｉｎＪｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ：ｅｖｉｄｅｎｃｅｏｆｔｗｏｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎｓｆｒｏｍＦｕｊｉａｎ［Ｊ］。
ＡＩＤＳＲａｓＨｕｍＲｅｔｒｏｖｉｔｕｓｅｓ，２００９，２５（６）：６１９－６２３．［２３］冯铁建。
赵广录，陈琳，等．深圳市ＨＩＶ一１毒株的流行状况［Ｊ］．中国医学科学院学报，２００６，２８（５）：６３７－６４１．［２４］ＧｕｎＨ。
Ｗｅｉ．ＩＦ，ＹａｎｇＨ，ｅｔａ１．ＲａｐｉｄｌｙｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｐｒｅｖａｌｅｎｃｅｏｆＨＩＶａｎｄｓｙｐｈｉｌｉｓａｎｄＨＩＶ一１ｓｕｂｔｙｐｅｃｈａｒａｅｔｅｒｉｚａｌｉｏｎａｍｏｎｇｍｅｎｗｈｏｈａｖｅｓｎｗｉｔｈｍｅｎｉｎＪｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．ＳｅｘＴｒａｎｍＤｉｓ，２００９，３６（２）：１２０一１２５．［２５］刘翌．艾滋病病毒分子‘哑型流行病学研究进展［Ｊ］．中国国境卫生检疫杂志，２００６，２９：１４６—１５０．［２６］ＧｕｎＨ，ＧｕｎＤ，ＷｅｉＪＦ，ｅｔａ１．ＦｉｒｓｔｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆａｎｏｖｅｌＨⅣｔｙｐｅｌＣＲＦ０７＿ＡＥ／０７＿ＢＣｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔａｍｏｎｇ卸ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｎｇｉｅａｌｌｙｌｉｎｋｅｄｃｏｈｏｒｔｏｆＩＤＵｓｉｎＪｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｒｍ［Ｊ］．ＡＩＤＳＲｅｓＨｕｍＲｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅａ，２００９，２５（４）：４６３－４６７．［２７］黄海龙，刑辉，马鹏飞，等．中国ＨⅣ一ｌ主要流行重组株Ｂ／ＣＴａｔ基因第一外显子序列特征分析ＣＪ］．中华实验和临床病毒学杂志，２００６，２０（４）：３９０－３９２．【２８］ＷａｎｇＬ，ＺｈｅｎｇＸＷ，ＱｉａｎＨＺ。
白念珠菌对唑类抗真菌药物分子耐药机制的研究进展
ＣＤＲ２．Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ伽２００４；３（６）：１６３９—１６５２．
１２ Ｃｏｓｔｅ Ａ，Ｔｕｒｎｅｒ Ｖ，ｌｓｃｈｅｒ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ａ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ｉｎ ＴＡＣＩｐ，ａ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｌｏｓｓ ｏｆ
ｔａｎｃｅ
２００４；４８（６）：２１２４—２１３１． ＪＬ，Ｋｉｒｋｐａｔｒｉｃｋ ＷＲ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ
ｈ）为芽孢增殖形成富含碳水化合物的细胞外基质，成 熟期（３ｌ～７２ ｈ）菌细胞被完全包被于厚厚的细胞外基 质中。白念珠菌生物膜引起耐药的机制尚未完全明
菌株敏感性显著增加。其他同系物还有ＣＤＲ３、ＣＤＲ４
等，但它们的过度表达和敲除不影响白念珠菌的药物 敏感性。
２．２
了，可能是由于生物膜基质使得药物渗透受限，营养 受限而生长缓慢，耐药相关基因ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２和ＭＤＲＩ
了这种杂合现象的消失。Ｃｈａｕ等３发现受试白念珠
菌耐药菌株的ＥＲＧＩ １均发生一个以上的点突变，将挑 选的ＥＲＧｌｌ在酿酒酵母中表达，菌株的敏感性降低。 目前发现的ＥＲＧｌｌ点突变有６０多个，在氟康唑耐药 株中发现的至少有３０个。４。７有的点突变单独存在于 耐药株，有的需和其它突变点同时存在才会影响药物 敏感性。其中Ｙ１３２Ｈ、￥４０５Ｆ、Ｇ４６４Ｓ、Ｒ４６７Ｋ、Ｇ４５０Ｅ和 Ｇ３０７Ｓ等６种点突变和耐药的关系比较明确，可单独 出现于耐药菌株中。另外Ｇ１２９Ａ，Ｑ４７４Ｋ，Ｆ１４５Ｌ， Ｄ１１６Ｅ，Ｖ４８８Ｉ也可能和耐药有关。ＥＲＧｌｌ的过度表 达对敏感性的影响报道不一。有研究报道ＥＲ． Ｇ１ＩｍＲＮＡ水平在耐药株中增高，但ＥＲＧｌｌ的过度表 达总是伴随着其他和耐药有关的改变，如调节流出泵 基因的过度表达，因此ＥＲＧｌｌ的过度表达对耐药的影 响很，Ｊ、。 １．２固醇合成途径中其他酶的改变也会引起耐药。 ＥＲＧ３编码△５’６去饱和酶，此酶作用于麦角固醇生物 合成的后期阶段。Ｅｒ９３ｐ负责转换耐药的１４一甲基中 间物（由于唑类对１４ａ脱甲基酶的抑制可堆积）至有 毒性的１４一ｍｅｔｈｙｌｅｒｇｏｓｔａ一８，２４（２８）一ｄｉｅｎ一３，６一ｄｉ－ ｏｌ，后者抑制白念珠菌生长。因此ＥＲＧ３失活引起唑 类耐药。ＥＲＧ３两个等位基因的缺失引起高度耐药， 表明Ｅｒ９３ｐ引起的ｄｉｏｌ生成在白念珠菌中同样受到抑 制。８ ２编码药物流出泵基因的过度表达 白念珠菌对唑类药物的耐药主要是通过编码多 药流出转运蛋白的基因的过度表达，这些蛋白主要属 于两个超家族，ＡＢＣ（ＡＴＰ—ｂｉｎｄｉｎｇ ｃａｓｓｅｔｔｅ）转运蛋白 和主要易化子超家族（ｍａｊｏｒ ＭＦＳ）。
三唑类抗深部真菌药的临床药学进展
１概述为适应临床抗深部真菌感染的需要，抗深部真菌药逐渐向低毒、广谱和高效的方向发展。
如通过改进两性霉素Ｂ的剂型而研制出３种脂质型制剂，减少了肾毒性和发热等即刻反应。
在筛选新的化学结构寻求新靶点方面开发出β－Ｄ－葡聚糖合成酶抑制剂棘白菌素类抗真菌药。
而三唑类抗真菌药物的开发在优化氟康唑等化学结构，研制出第二代三唑类伏立康唑和开发β－环糊精包合型新制剂等两方面都获得了显著的成就（见表１）。
本文仅对抗深部真菌感染的三唑类的临床药学进展进行简介。
２三唑类抗深部真菌药概况唑类（吡咯类）按化学结构可分为咪唑类和三唑类，按其抗真菌作用可分为３代，而三唑类（第三代唑类）按抗真菌作用分为两代（见表２、表３）。
２．１咪唑类咪唑类抗深部真菌药已逐渐被三唑类所取代。
①咪唑类抗真菌药咪康唑由于抗菌活性低，美国等国家只有局部外用剂型用于浅部真菌病，不再作为全身给药。
全身用药已从２００２版我国基本药物中删除。
②由于不良反应严重酮康唑已很少作为全身用药。
酮康唑片剂已从２０００版我国基本药物名单中删除。
２．２三唑类唑类抗真菌药是作用于真菌细胞膜的麦角固醇合成酶抑制剂，即通过抑制细胞色素Ｐ４５０１４α－脱甲基酶而引起羊毛固醇的堆积和麦角固醇的缺乏，导致真菌细胞膜结构和功能障碍而发挥抗真菌作用。
由于人体内普遍存在细胞色素Ｐ４５０酶系，三唑类对Ｐ４５０１４α－脱甲基酶的选择性较咪唑类强，所以对肝脏等不良反应较低。
三唑类以氟康唑临床应用最为广泛，在最多见的白色念珠菌感染的防治中发挥了十分重要的治疗作用，是全身白色念珠菌感染的首选药物，而且对热带念珠菌、近平滑念珠菌、葡萄牙念珠菌等有极好的抗菌活性。
为了适应近年非白色念珠菌感染和侵袭性曲霉菌病呈增多趋势，对第一代三唑类进行了结构改造，研制出伏立康唑、雷伏康唑、泊沙康三唑类抗深部真菌药的临床药学进展文章编号：１６７２－３３８４（２００７）－０１－０００１－０７【作者】王汝龙首都医科大学附属北京友谊医院（北京１０００５０）【中图分类号】Ｒ９７８．５【文献标识码】Ｂ作用机理分类代表性类别代表性品种作用于细胞膜作用于细胞壁作用于细胞膜作用于细胞核两性霉素Ｂ卡泊芬净米卡芬净氟康唑伏立康唑伊曲康唑５－氟胞嘧啶麦角固醇结合剂β－１，３－葡聚糖合成酶抑制剂固醇１４－α－去甲基酶抑制剂抑制ＲＮＡ、ＤＮＡ合成多烯类棘白菌素类唑类氟胞嘧啶类表１抗深部真菌药的分类代表性品种咪唑类三唑类第一代第二代第三代咪康唑（ｍｉｃｏｎａｚｏｌｅ）酮康唑（ｋｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ）氟康唑（ｆｌｕｃｏｎａｚｏｌｅ）伏立康唑（ｖｏｒｉｃｏｎａｚｏｌｅ）伊曲康唑（ｉｔｒａｃｏｎａｚｏｌｅ）化学分类分代表２唑类抗深部真菌药第二代氟康唑类伊曲康唑类氟康唑伊曲康唑伏立康唑雷伏康唑泊沙康唑化学分类第一代表３三唑类抗深部真菌感染药的分类芳环唑等，且研制出环糊精包合型的伊曲康唑注射剂和口服剂型以及伏立康唑的注射剂。
白念珠菌唑类药物耐药机制研究进展
·综述·白念珠菌唑类药物耐药机制研究进展纪凌云， 周爱萍， 马 俊， 金 宁， 谭光坤， 吴文娟关键词： 白念珠菌； 抗真菌药物，唑类； 耐药机制中图分类号：R379.4；R978.5 文献标识码：A 文章编号：1009-7708 ( 2019 ) 02-0218-06DOI: 10.16718/j.1009-7708.2019.02.018Research updates on the mechanism of azole resistance in Candida albicansJI Lingyun, ZHOU Aiping, MA Jun, JIN Ning, TAN Guangkun, WU Wenjuan. （Department of Laboratory Medicine, Shanghai East Hospital, Tongji University, Shanghai 200123, China ）基金项目： 国家自然科学基金（81472032）；浦东新区卫生系统重点学科建设资助（P W Z x k 2017-09）；上海市市级医疗卫生优秀学科带头人培养计划资助（2017BR032）。
作者单位：同济大学附属东方医院医学检验科，上海 200123。
第一作者简介： 纪凌云（1991—），女，医学硕士，检验技师，主要从事微生物学研究。
通信作者：吴文娟，E-mail ：wwj1210@ 。
近年来，随着广谱抗菌药物、糖皮质激素、免疫抑制剂的广泛应用，以及各种介入诊疗、器官移植的大量开展，念珠菌病的发病率逐渐升高。
据相关统计，发生侵袭性念珠菌感染的患者达25万例/年，死亡病例超过5万例，年发病率在（2～14）/100 000[1-2]。
白念珠菌是一种定植在正常人群口腔黏膜、上呼吸道、肠道及阴道等部位的酵母样真菌，为条件致病性真菌。
近十年来，越来越多的其他念珠菌种被发现或成为重要的病原菌，使得菌种分布发生了变化，但白念珠菌占比达50%，仍占主要地位[3]。
真菌对唑类抗真菌药物相关耐药基因的研究进展
Ｅｎ缸 ｌｅｕｓ ｍｕｓｃｌｅ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｈｉｇｈ—ｆａｔ ｄｉｅｔｓ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ
ｅｒｉｎｏＩ Ｍｅｔａｂ，２０００。２７９（６）：１３７４．１３８２．
Ｍａｓａｋｉ Ｔ，Ｙｏｓｈｉｍａｔｓｕ Ｈ，Ｃｈｉｂａ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆｈｉｓ－ ｔａｍｉｎｅ Ｈｌ—ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｌｅｐｔｉｎ ｏｎ ｆｅｅｄ．
ｉｎｇ，ａｄｉｐｏｓｉｔｙ，ａｎｄ ＵＣＰ ｆａｍｉｌｙ ｉｎ ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ａｍ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ａｓｓｅｔ，
２００ｌ。５０（２）：３８５－３９１．
收稿１１期：２００９－０４－１４修回Ｉｔ期：２００９－１２－２９
真菌对唑类抗真菌药物相关耐药基因的研究进展
姚婉玉△（综述），梁伶※（审校）
（广西氏科大学第一附属医院皮肤科，南宁５３００２１）
中图分类号：Ｒ７５６．６
文献标识码：Ａ
文章编号：１００６－２．０８４（２０１０）０５－０６６５－０５
匿：兰绽姿！Ｑ！Ｑ生！旦筮！垒鲞筮§期丛鲤ｉ型基墼！唑！！丝！：丛璺！垫！Ｑ：！丛：！垒：丛！：！
［１２］ ［１３］ ［１４］
［１５】 ［１６］ ［１７］ ［１８】
Ｂｏａｄｏ砌．Ｇｏｌｄｅｎ ＰＬ．Ｌｅｖｉｎ Ｎ，ｅｔ以．Ｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｌｏｏｄ—ｂｒａｉｎ ｂａｌＴｉｅｒ ｓｈｏｒｔ—ｆｏｒｍ ｌｅｐｔｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｇｅｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｉｎ ｒａｔｓ ｆｅｄ ａ ｈｉｓｈ ｆａｔ ｄｉｅｔ［Ｊ］．Ｊ Ｎｅｕｒ，１９９８，７１（４）：１７６１．１７６３． Ｌｕｈｅｓｈｉ ＧＮ．Ｇａｒｄｎｅｒ ＪＯ．Ｒｕｓｈｆｏｒｔｈ ＤＡ，ｄ以．Ｌｅｐｔｉｎ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｎ ｆｏｏｄ ｉｎｔａｋｅ ａｎｄ ｂｏｄｙ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｒｅ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ＩＬｌ［Ｊ］．Ｐｒｏｅ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．１９９９．９６（１２）：７０４７－７０５２． Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ Ｅ．Ｂａｎｋｓ Ｗ．Ｋａｓｔｉｎ Ａ．Ｂｌｏｏｄ－ｂｏｒｎｅ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１ ｒｅｃｅｐ－ ｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ｃｒｏｓｓｅｓ ｔｈｅ ｂｌｏｏｄ－ｂｒａｉｎ ｂａｒｒｉｅｒ［Ｊ］．Ｊ Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ，
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ＧｕａｎｇｄｏｎｇＭｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ
Ａｐｒ，２０１６，Ｖ０１．３７，Ｎｏ．８
・１２４９・
于５号染色体左臂的ＥＲＧｌｌ基因可有两个拷贝甚至整条染 色体发生了复制”…。其次，调控ＥＲＧｌｌ基因表达的Ｕｐｃ２ｐ 转录因子表达量也有所升高，敲除白色念珠菌的ＵＰＣ２基 因，该菌对唑类药物的敏感性增加¨…：其他唑类耐药株如 近平滑念珠菌、热带念珠菌及克柔念珠茵，ＥＲＧｌｌ基因表达 量也有所升高“２ｉ。但目前仍不清楚这些菌株ＥＲＧｌｌ基因高 调的机制及其与耐药性的关系。烟曲霉唑类耐药株Ｃｙｐ５１Ａ 蛋白（与Ｅｒｇｌｌ同源）含量也有所增加，与ＨａｐＥ转录因子 （可结合ｃ，声，４基因的ＣＣＡＡＴ序列）发生了Ｐ８８Ｌ置换密切
麦角固醇合成酶过度表达临床分离的对唑类耐药的白
色念珠菌ＥＲＧＩＩ基因常出现过度表达．引起编码产物１４ａ一去 甲基化酶升高，相应地需要更高的唑类药物浓度才能抑制该 酶的活性，从而降低了茵株对唑类药物的敏感性。多种机制 参与了白色念珠菌唑类耐药株ＥＲＧｌｌ基因高调：首先，存在
万方数据
广东医学２０１６年４月第３７卷第８期
［２８］Ｇｉｕｎｔａ
Ｓ，Ｂｅｌｏｔｓｅｒｋｏｖｓｋａｙａ
ｔｏ
ｐｅｎｄｅｎｔ ＣＣＮＥＩ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃｉｓｐｌａｔｉｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｉｓ
ｌｉｎｇ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｃｅｌｌ
ｄｏｕｂｌｅ—ｓｔｒａｎｄ ｂｒｅａｋｓ ｄｕｒｉｎｇ
ｍｉｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ
ｇａｉｎ
Ｂｉｏｌ，２０１０，１９０（２）：１９７～２０７．
１．１
麦角固醇合成酶基因ＥＲＧｌｌ（ｃｙｐ５１Ａ）突变
研究发
现，念殊菌对唑类药物的耐药常与药靶麦角固醇合成酶 Ｅｒｇｌｌ基因突变有关；念珠菌唑类耐药茵存在１４０种ＥＲＧｌｌ 基因突变，分别引起麦角固醇合成酶发生氨基酸置换，引起 菌株对唑类药物耐药，并均有累加效应。白色念珠菌中，麦 角固醇合成酶Ｅｒｇｌｌ靠近亚铁血红素位点的Ｒ４６７Ｋ和 Ｇ４６４Ｓ突变．使此酶与唑类药物的亲和力大大下降，导致该 茵对唑类药物耐药。４’。另外，新型隐球菌耐药株ＥＲＧｌｌ基 因Ｙ１４５Ｆ和Ｇ４８４Ｓ突变，也与唑类耐药密切相关ｐ ｏ。目前 发现，烟曲霉唑类耐药株也存在麦角固醇合成酶基因ｃｙｐ５１Ａ 突变，其中ｃｙｐ５１Ａ第５４位密码子和第２２０位密码子改变最 为常见。这两种突变会使ｃｙｐ５ｌＡ靠近亚铁血红素位点的氨 基酸改变，导致Ｃｙｐ５１Ａ蛋白酶的空间构型发生变化，严重削 弱了该酶与唑类药物的亲和力，参与烟曲霉多重耐药悖』。迄 今，烟曲霉所有的ｃｙｐ５１Ａ位点突变均参与该茵对伊曲康唑 的耐药性，但对伏立康唑和泊沙康唑的耐药性则只依赖于 ｃ？ｐ５１Ａ特定位点改变…Ｊ：另外，在一些无唑类药物治疗史的 烟曲霉感染患者体内，也存在烟曲霉唑类耐药茵，说明这是 在环境中产生的，与农业中唑类药物的大量使用有关。研究 发现，这类环境耐药株的ｃｙｐ５１Ａ基因存在Ｌ９８Ａ突变，并且 启动子中插入了３４碱基串联序列ＴＲ。８】。另外，这类耐药株 还可与敏感菌株异位杂交，说明此耐药性可通过有性生殖进
３生物被膜形成
生物被膜形成是近年来与真菌耐药相关的一个新发现， 目前认为生物被膜引起的真菌耐药是临床上许多系统性感 染难以根除的重要因素。真菌可在体内植入的人工器官或 导管以及多种生物表面形成生物被膜，将自身包裹其中，造 成患者感染，相比其他酵母茵和丝状真菌，念珠茵最常见。 生物被膜是一种由融合的芽生抱子层、茵丝成分和细胞外多 聚基质三部分组成的三维结构。形成生物被膜的念珠菌对 唑类药物敏感性大大下降，耐药机制可能与下列因素有关： （１）高度表达药物外排转运蛋白，促进药物外排；（２）细胞外 聚合物基质形成生物膜屏障，阻止药物进入生物膜内层细 胞‘２…。与白色念珠茵游离细胞一致，生物被膜细胞中编码 外排转运蛋白的ＣＤＲ和ＭＤＲ基因也出现了高调，引起唑类 药物大量外排忙“。相比而言，细胞外聚合物基质形成的生 物膜屏障可能是菌株出现多重耐药的主要因素。Ｂ一１，３一 葡聚糖是生物膜的主要组成部分，由位于细胞膜中的Ｂ一１， ３一葡聚糖合成酶催化合成。酵母中Ｂ一１，３一葡聚糖的合 成及生物膜基质的产生均受ＰＫＣ信号通路下游蛋白Ｓｍｉｌ、 Ｒｌｍｌ、Ｒｈｏｌ和Ｆｓｋｌ的调控’２…。细胞内其他蛋白如转录因 子Ｚａｐｌ、乙醇脱氢酶（Ａｄｈ５、Ｃｓｈｌ和Ｉｆｄ６）和葡糖淀粉酶 （ＣａＧｃａｌ和ＣａＧｃａ２）也参与了生物膜基质的生成‘２４１。以上 研究表明病原真菌生物被膜的形成是真菌产生耐药性的重 要因素之一。
Ｍｏｌ
ｍａ［Ｊ］．ＩｎｌＪ ［３１］Ｓｍｉｔｈ
Ｓｃｉ，２０１４，１５（１０）：１８１４８—１８１６１． ＮＪ，ｅｔ ａ１．２０ｑ１１．１ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ＬＴ，Ｍａｙｅｒｓｏｎ Ｊ，Ｎｏｗａｋ
（收稿日期：２０１５—１０—０９编辑：罗劲娜）
唑类抗真菌药物耐药机制的研究进展
刘潇，龙腾腾，郭春丽
（１２ＴＭＤ）和ＤＨＡ２家族即药物：Ｈ＋逆向转运子（１４ ＴＭＤ）。 白色念珠茵有９５种ＭＦＳ蛋白，但只有ＭＤＲｌＰ蛋白（属 ＤＨＡｌ家族）参与唑类耐药。白色念珠菌中ＭＤＲｌ基因高表 达．可促进胞内多种唑类药物外排，引起菌株对多种唑类药 物的广泛耐受性，相比而言，在裂殖酵母中高表达白色念珠 菌的ＭＤＲｌ，只表现出对氟康唑的耐药性”…。烟曲霉伊曲康 唑耐药株中，编码ＭＦＳ转运蛋白的ａｆｕＭＯｎ３基因表达量也 出现了明显上调。２０ Ｊ。以上研究说明，药物外排转运蛋白在 真菌对唑类药物耐药的形成过程中也发挥了一定作用。
・１２４８・
８’７ｌ一８７９．
广东医学２０１６年４月第３７卷第８期
ｉｎ ＳＰ．Ｇｉｖｅ
ｍｅ
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ＧｕａｎｇｄｏｎｇＭｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ
Ａｐｒ．２０１６，Ｖ０１．３７，Ｎｏ．８
ｇｉａｎｔ—ｃｅｌｌ ｔｕｍｏｒ ｏｆ ｂｏｎｅ：Ａｒｒａｙ ＣＧＨ，ＦＩＳＨ，ａｎｄ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ
［２７］Ｇｉｕｎｔａ Ｓ，Ｊａｃｋｓｏｎ
山东省青岛市青岛黄海学院（２６６４２７） 近年来，随着免疫抑制治疗、化疗、实体器官移植的增 加，病原真菌的感染率呈急剧上升趋势。对人类有致病作用 的真菌主要有念殊茵、新型隐球菌和曲霉菌等，可引起念珠 茵阴道炎、新型隐球茵病、侵袭性曲霉病等各种真菌感染。１１。 抗真菌药物特别是唑类药物如氟康唑和伊曲康唑的问世，开 辟了真菌病药物治疗的新时代。但目前用于临床的抗真菌 药物比较有限，主要包括：（１）唑类：抑制真菌细胞膜的麦角 固醇合成，如氟康唑、伏立康唑及泊沙康唑，具有广谱的抗真 菌活性且毒性小，是目前应用最广的抗真菌药物；（２）多烯 类：与麦角固醇结合，在细胞膜上形成水性孔道，引起膜通透 性增加，如两性霉素Ｂ，但不良反应大，尤其是严重的肾毒性 限制了其应用范围；（３）氟胞嘧啶类：抑制胸苷酸合成酶干 扰真菌ＤＮＡ的合成，如５一氟胞嘧啶；（４）棘白霉素类：抑制 真菌细胞壁的主要组分Ｂ一１，３一葡聚糖合成，如卡泊芬净、 阿尼芬净及米卡芬净‘２ Ｊ。随着抗真菌药物的广泛应用，真菌 耐药问题日趋严重，尤其对唑类药物耐药更为突出，给抗真 菌治疗带来了严峻的挑战。临床耐药导致的真菌感染治疗 失败已不容忽视，探讨其耐药机制对于预防耐药性的发生及 寻找更有效的抗真菌药物具有重要意义，本文从遗传学方面 就真菌对唑类药物的耐药机制分述如下。 甲基过程，抑制麦角固醇的合成¨Ｊ。但随着唑类药物的广泛 应用，真菌对唑类药物的耐药问题日趋严重，其耐药机制与 药靶麦角固醇合成酶Ｅｒｇｌｌ（Ｃｙｐ５ｌＡ）改变密切相关。
２药物外排增加
很多生物通过膜结合的外排转运蛋白将有害物质主动泵 出，以减少胞内积聚量，从而对毒性物质产生耐受。目前已知 的与唑类耐药相关的真菌外排转运蛋白，主要包括ＡＴＰ一结 合盒（ＡＢＣ）转运蛋白和主要易化子超家族（ＭＦＳ）两大类。
２．１
ＡＢＣ转运蛋白
ＡＢＣ转运蛋白是ＡＴＰ能量依赖性的
外排泵转运蛋白，由两个相同的亚单位聚合而成，每个亚单 位各含有１个高度疏水的跨膜结构域（ＴＭＤ）和１个催化 ＡＴＰ水解的核苷酸结合域（ＮＢＤ）。对病原真菌基因序列进 行分析，发现存在多个不同拓扑结构的ＡＢＣ转运蛋白。其 中，白色念珠菌至少含有２８种，光滑念珠茵可能存在１８种， 烟曲霉和新型隐球菌的种类更多。１５ｊ。这些ＡＢＣ转运蛋白 中，有３大家族参与药物外排，分别是多药耐药家族 （ＭＤＲ）、多药耐药相关蛋白家族（ＭＲＰ）以及多效性耐药家 族（ＰＤＲ）；以下主要对多效性耐药家族（ＰＤＲ）进行阐述。白 念珠菌中，多效性耐药家族（ＰＤＲ）包括ＣＤＲＩ、ＣＤＲ２及其他 ＰＤＲ型转运蛋白，均参与白色念珠菌对唑类药物的耐药。研 究发现，白色念珠茵中ＣＤＲＩ和ＣＤＲ２高表达可引起药物外 排增强，胞内唑类药物积累量减少，进而药效作用减弱¨…。 另外，白色念珠茵中ＣＤＲ３、ＣＤＲ４、ＣＤＲｌｌ、ＳＮＱ２这些基因虽 与ＣＤＲＩ和ＣＤＲ２同源，但至今仍未发现它们与耐药的相关 性。光滑念珠菌与唑类耐药相关的ＡＢＣ转运蛋白为 ＣｇＣｄｒｌ、ＣｇＣｄｒ２和ＣｇＳｎｑ２，新生隐球菌中为Ｍｒｌ蛋白…。。 实验室诱导突变或临床分离的烟曲霉伊曲康唑耐药株，胞内 的伊曲康唑积累量也大大下降，这与编码ＡＢＣ转运蛋白的
９５７—９６６．
ｅｖｅｎｔｓ［】］．Ｃｅｌｌ Ｃｙｃｌｅ，２０１１，１０（８）：１２１５～１２２１．
Ｒ，Ｊａｃｋｓｏｎ ＳＰ．ＤＮＡ ｄａｍａｇｅ ｓｉｇｎａ—
［３２］Ｅｔｅｍａｄｍｏｇｈａｄａｍ
Ｄ，Ｇｅｏｒｇｅ Ｊ，Ｃｏｗｉｎ ＰＡ，ｅｔ ａ１．Ａｍｐｌｉｅｏｎ—ｄｅ— ｉｓ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｏｒ ｃｌｏｎｏｇｅｎｉｃ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ２０ｑｌ １ ｓｕｒｖｉｖａｌ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｏｆ ｃｏｌｏｎ ２０１３，１１：３１３．
ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｊ
ａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏ］ｉｆｅｒａｔｉｏｎ，Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ａｎｄ Ｄｉｇ Ｄｉｓ
ＥＭＴ［Ｊ］
Ｓｃｉ，２０１５，６０（８）：２３６０—２３７２．
［３０］Ｈｕａｎｇ Ｙ，Ｇｕｏ Ｗ，Ｋａｎ